浮小麥配方顆粒特征圖譜及4種核苷類成分定量研究

王曉亞 杜微波 馬智玲 張志強(qiáng) 沈建梅

摘?要：?為了實(shí)現(xiàn)浮小麥配方顆粒的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)，采用高效液相色譜法，以Waters XSelect HSS T3（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱，在甲醇-水為流動(dòng)相、梯度洗脫、柱溫為30 ℃、流速為1.0 mL/min、檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm的條件下，建立了浮小麥配方顆粒的特征圖譜及4種核苷類成分的含量測(cè)定方法。共確定了13批浮小麥配方顆粒特征圖譜中的8個(gè)共有峰，并全部獲得指認(rèn)，分別為尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷、色氨酸、腺苷，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于2.0%。尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷分別在0.001 9～0.047 3 mg/mL、0.003 9～0.098 2 mg/mL、0.002 8～0.070 1 mg/mL、0.002 9～0.073 0 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=1.000 0），平均加樣回收率分別為99.0%、100.7%、101.2%、101.8%。所建立的核苷類成分含量測(cè)定方法準(zhǔn)確、高效、重復(fù)性好，可用于浮小麥配方顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：

中藥化學(xué)；浮小麥；配方顆粒；高效液相色譜法；特征圖譜；核苷；含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R284.1??文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI： 10.7535/hbgykj.2024yx01007

Characteristic chromatogram of Fructus Tritici Levis formula granules and quantitative study of four nucleosides

WANG Xiaoya1，2，3， DU Weibo1，2，3， MA Zhiling1，2，3，4， ZHANG Zhiqiang1，2，3， SHEN Jianmei1，2，3

（1Beijing Tcmages Pharmaceutical Company Limited， Beijing 101300，China; 2Traditional Chinese Medicine Formula Particles Key Technology National United Engineering Research Center， Beijing 101300，China; 3Beijing Chinese Medicine Formula Particles Engineering Technology Research Center， Beijing 101300，China; 4Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

Abstract：

In order to realize quality control and evaluation of Fructus Tritici Levis formula granules， a method of characteristic chromatogram of Fructus Tritici Levis formula granules and determination of four nucleosides was established by HPLC. The analysis was performed on Waters XSelect HSS T3 （4.6 mm×250 mm，5 μm） column with mobile phase consisted of methanol-water （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃，and detection wavelength was set at 260 nm. The results show that there are 8 common peaks in 13 batches of Fructus Tritici Levis formula granules， and all of them were identified as uracil， cytidine， hypoxanthine， uridine， adenine， guanosine， tryptophan and adenosine. The RSD value of relative retention time of each common peak is less than 2.0%. Uracil， uridine， guanosine and adenosine show good linearity （r = 1.000 0） in the ranges of 0.001 9 ～ 0.047 3 mg/mL，0.003 9 ～ 0.098 2 mg/mL，0.002 8 ～ 0.070 1 mg/mL and 0.002 9 ～ 0.073 0 mg/mL respectively. The average recoveries were 99.0%， 100.7%， 101.2% and 101.8%. The established method for the determination of nucleoside components is accurate， efficient and reproducible. It can be used for the quality control of Fructus Tritici Levis formula granules.

Keywords：

chemistry of Chinese materia medica;Fructus Tritici Levis; formula granules; HPLC; characteristic chromatogram; nucleosides; determination

浮小麥為禾本科植物小麥Triticum aestivum L.的干燥輕浮癟瘦果實(shí)，原植物在全國(guó)各地均作為農(nóng)作物栽培，于夏季采收[1]。浮小麥味甘、性涼，具有止汗、退虛熱的功效，用于陰虛發(fā)熱、盜汗、自汗的治療[2]。目前，關(guān)于浮小麥化學(xué)成分的研究較少，且主要集中在對(duì)其中的5-二十一烷基間苯二酚、亞油酸、棉籽糖、葡萄糖等成分的研究[1，3-5]；此外，陳湘月等[6]從浮小麥中分離鑒定出鳥(niǎo)嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、2′-脫氧腺嘌呤核苷等化合物。核苷是一類糖苷的總稱，它的基本骨架由核糖或脫氧核糖與嘧啶堿或嘌呤堿縮合而成，天然來(lái)源的核苷根據(jù)堿基的不同，可分為嘧啶核苷、嘌呤核苷和其他核苷衍生物。核苷類是具有廣泛生理活性的一類水溶性成分，是生物細(xì)胞維持生命活動(dòng)的重要物質(zhì)，參與DNA代謝過(guò)程，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、改善腦細(xì)胞代謝、鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)等多種藥理作用[6-10]，其價(jià)值高、應(yīng)用廣泛，在藥品、保健品和食品的開(kāi)發(fā)中均發(fā)揮著顯著作用[9-10]。植物來(lái)源核苷因其植物種類、產(chǎn)地等的不同，其組成及含量也存在顯著差異。目前，已有較多文獻(xiàn)報(bào)道了不同中藥中核苷類成分的含量測(cè)定方法，但尚未見(jiàn)針對(duì)浮小麥中核苷類成分含量測(cè)定的研究報(bào)道。

特征圖譜是一種多指標(biāo)質(zhì)量控制模式[11]，能夠較全面地反映中藥化學(xué)成分信息，評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性[12-14]。浮小麥配方顆粒是用符合炮制規(guī)范的浮小麥飲片為原料，以水為溶媒經(jīng)現(xiàn)代工藝加工制成，因此建立以水溶性成分為指標(biāo)的質(zhì)量控制體系更符合其水提取的特性[15-16]。目前，浮小麥配方顆粒尚無(wú)統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?；诖?，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定浮小麥配方顆粒中尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷和腺苷4種成分的含量，并同時(shí)建立特征圖譜，為浮小麥配方顆粒的核苷類成分研究及整體質(zhì)量控制提供技術(shù)支持。

1?儀器與試藥

1.1?儀?器

Waters e2695高效液相色譜儀、2489 UV/Vis Detector檢測(cè)器、Empower 色譜工作站，均由沃特世科技（上海）有限公司提供；ME104E電子天平、XP26電子天平，均由梅特勒-托利多科技（中國(guó)）有限公司提供；JY2002電子天平，由上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司提供；BSA124S電子天平、BT25S電子天平，均由北京賽多利斯科技儀器有限公司提供；KQ-500DB超聲波清洗器，由昆山市超聲儀器有限公司提供。

1.2?試藥及試劑

尿苷對(duì)照品（批號(hào)為110887-202104）、鳥(niǎo)苷對(duì)照品（批號(hào)為111977-201501）、腺苷對(duì)照品（批號(hào)為110879-201703）、色氨酸對(duì)照品（批號(hào)為140686-202205）、腺嘌呤對(duì)照品（批號(hào)為110886-201102）、次黃嘌呤對(duì)照品（批號(hào)為140661-202005），均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；浮小麥對(duì)照藥材（批號(hào)為DST201125-025），由德思特生物科技有限公司提供；胞嘧啶核苷（簡(jiǎn)稱胞苷）對(duì)照品（批號(hào)為AF21041451），由成都埃法生物科技有限公司提供；浮小麥配方顆粒（批號(hào)為K386CP01、K386CP02、K386CP03、19033122、19033091、21027452、21029211、2007134、20042581、20016541、20039812、21029201、21011651，依次用S1—S13表示），由北京康仁堂藥業(yè)有限公司提供。甲醇，色譜純，由德國(guó)默克公司提供；蒸餾水，由廣州屈臣氏食品飲料有限公司提供；甲醇，分析純，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。

2?特征圖譜建立

2.1?色譜條件

色譜柱為Waters XSelect HSS T3（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以甲醇為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按表1中所示進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相比例按照體積分?jǐn)?shù)計(jì)算；柱溫為30 ℃；流速為1mL/min；進(jìn)樣量為5～10 μL。

利用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)供試品溶液進(jìn)行3D全掃描，結(jié)果顯示波長(zhǎng)為260 nm左右時(shí)供試品的特征圖譜信息較豐富，各色譜峰吸收較強(qiáng)，優(yōu)于其他波長(zhǎng)，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm，見(jiàn)圖1。

2.2?對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液的制備

取浮小麥對(duì)照藥材粉末約1.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入10%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇20 mL，密塞，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為對(duì)照藥材參照物溶液。

另取尿苷、鳥(niǎo)苷對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1 mL含尿苷10 μg、鳥(niǎo)苷7 μg的混合溶液，作為對(duì)照品參照物溶液。

另取尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、腺嘌呤、色氨酸、腺苷對(duì)照品適量，精密稱定，分別加10%甲醇，制成每1 mL分別含尿嘧啶5 μg、胞苷55 μg、次黃嘌呤55 μg、腺嘌呤55 μg、色氨酸5 μg、腺苷7 μg的溶液，即得各自對(duì)照品溶液。

2.3?供試品溶液的制備

2.3.1?提取溶劑考察

取浮小麥配方顆粒（批號(hào)為K386CP02）適量，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入10%、50%、70%、100%的甲醇和20 mL水，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用相應(yīng)的溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按“2.1”項(xiàng)的色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明，除甲醇外，其他提取溶劑的提取效率相差不大，結(jié)合含量測(cè)定結(jié)果，水、10%甲醇和50%甲醇的提取效果最好，但以水做溶劑，溶液穩(wěn)定性較差，且對(duì)色譜柱損害較大，從低毒性方面考慮，故最終選擇10%甲醇作為提取溶劑。結(jié)果詳見(jiàn)表2和圖2。

2.3.2?提取濃度考察

分別取浮小麥配方顆粒（批號(hào)為K386CP02）約1.0、0.5、1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入10%甲醇20、20、15 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，分別用10%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。按“2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并測(cè)定各峰峰面積，考察不同濃度對(duì)特征圖譜的影響。結(jié)果表明，不同提取濃度的提取效率差異不大。為保證溶液提取完全，峰面積大小適中，選擇0.050 g/mL作為提取質(zhì)量濃度。具體結(jié)果見(jiàn)表3、表4和圖3。

2.3.3?提取時(shí)間考察

取浮小麥配方顆粒6份（批號(hào)為K386CP02），每份約1.0 g，分為3組，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入10%甲醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，分別超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20、30、40 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，分別用10%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。按“2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并考察不同提取時(shí)間對(duì)于特征圖譜的影響。結(jié)果表明，超聲提取20 min即可提取完全，為節(jié)約能耗，選擇超聲20 min作為提取時(shí)間。具體結(jié)果見(jiàn)表5和圖4。

綜上，可確定供試品溶液的制備方法：取浮小麥配方顆粒適量，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入10%甲醇20 mL，密塞，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用10%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4?方法學(xué)考察

2.4.1?精密度考察

取同一供試品溶液，連續(xù)6次進(jìn)樣測(cè)定，以峰4（尿苷）為S1峰，計(jì)算峰1、峰2、峰3與S1的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積；以峰6（鳥(niǎo)苷）為S2峰，計(jì)算峰5、峰7、峰8與S2的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積;并分別計(jì)算RSD。各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.0%～0.1%、相對(duì)峰面積RSD為1.5%～3.8%時(shí)，表明該儀器精密度良好。

2.4.2?重復(fù)性試驗(yàn)

取浮小麥配方顆粒6份，按照“2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液并測(cè)定，獲得特征圖譜，以峰4（尿苷）為S1峰，計(jì)算峰1、峰2、峰3與S1的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積；以峰6（鳥(niǎo)苷）為S2峰，計(jì)算峰5、峰7、峰8與S2的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積；并分別計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.0%～0.4%，相對(duì)峰面積RSD為0.3%～5.4%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.3?穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、18、24 h進(jìn)樣測(cè)定，獲得特征圖譜，以峰4（尿苷）為S1峰，計(jì)算峰1、峰2、峰3與S1的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積；以峰6（鳥(niǎo)苷）為S2峰，計(jì)算峰5、峰7、峰8與S2的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積；并分別計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.0%～0.6%，相對(duì)峰面積RSD為4.1%～7.7%，說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5?特征圖譜的建立

分別制備13批浮小麥配方顆粒的供試品溶液，將供試品溶液與依據(jù)“2.2”項(xiàng)制備的各對(duì)照品溶液按“2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并記錄色譜圖，將所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）”軟件，采用多點(diǎn)校正對(duì)色譜峰自動(dòng)匹配，結(jié)果見(jiàn)圖5。采用中位數(shù)法計(jì)算得出樣品特征圖譜的共有模式，共確定8個(gè)共有峰，詳見(jiàn)圖6。利用對(duì)照品確定峰1為尿嘧啶、峰2為胞苷、峰3為次黃嘌呤、峰4為尿苷、峰5為腺嘌呤、峰6為鳥(niǎo)苷、峰7為色氨酸、峰8為腺苷，見(jiàn)圖7。與尿苷參照物峰相對(duì)應(yīng)的峰為S1峰，計(jì)算峰1、峰2、峰3與S1的相對(duì)保留時(shí)間；與鳥(niǎo)苷參照物峰相對(duì)應(yīng)的峰為S2峰，計(jì)算峰5、峰7、峰8與S2的相對(duì)保留時(shí)間。各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.1%～0.6%，且波動(dòng)較?。ň诰档?1.2% ～ 1.6%）。因此，可將各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的均值作為浮小麥配方顆粒特征圖譜的規(guī)定值，規(guī)定值為0.42（峰1）、0.63（峰2）、0.71（峰3）、0.78（峰5）、1.20（峰7）、1.49（峰8）。其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±10%之內(nèi)。

3?含量測(cè)定

3.1?對(duì)照品溶液的制備

取尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1 mL含尿嘧啶5 μg、尿苷10 μg、鳥(niǎo)苷7 μg、腺苷7 μg的混合溶液，即得。

3.2?色譜條件

同“2.1”項(xiàng)的色譜條件。

利用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行3D全掃描，結(jié)果如圖8—圖11所示。

圖中顯示尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷分別在258.0、262.0、253.0、260.0 nm左右有最大吸收，綜合考慮選擇260.0 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3?供試品溶液的制備

3.3.1?提取溶劑考察

取浮小麥配方顆粒（批號(hào)為K386CP02）適量，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入10%、50%、70%、100%的甲醇和20 mL水，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用相應(yīng)的溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按“3.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，除100%甲醇外，不同提取溶劑對(duì)4種成分的提取效果差異不大，水和10%甲醇的提取效果最好，但以水做溶劑進(jìn)行考察時(shí)，發(fā)現(xiàn)溶液久置易產(chǎn)生沉淀，穩(wěn)定性、重復(fù)性難以達(dá)到要求，且對(duì)色譜柱損害較大，故最終選擇10%甲醇作為提取溶劑。具體結(jié)果見(jiàn)表6。

3.3.2?提取質(zhì)量濃度考察

取浮小麥配方顆粒（批號(hào)為K386CP02）6份，分為3組，分別取約1.0、0.5、1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，3組分別精密加入10%甲醇20、20、15 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，分別用10%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。按“3.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，不同提取濃度下測(cè)得4種成分含量的結(jié)果差異不大。為保證溶液提取完全，峰面積大小適中，選擇0.050 g/mL作為提取質(zhì)量濃度。結(jié)果見(jiàn)表7。

3.3.3?提取時(shí)間考察

取浮小麥配方顆粒（批號(hào)為K386CP02）6份，每份約1.0 g，分為3組，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入10%甲醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，分別超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20、30、40 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，分別用10%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。按“3.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，不同提取時(shí)間的含量測(cè)定結(jié)果差異不大，故選擇超聲20 min作為提取時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表8。

綜上，可確定供試品溶液的制備方法：取浮小麥配方顆粒適量，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入10%甲醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用10%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.4?方法學(xué)考察

3.4.1?線性關(guān)系考察

分別取尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1 mL含尿嘧啶5.13 μg、尿苷9.79 μg、鳥(niǎo)苷6.62 μg、腺苷7.03 μg的混合對(duì)照品母液，作為線性1；分別精密吸取母液1 mL，置于2、5、10、25 mL容量瓶中，加10%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，依次作為線性2—線性5的對(duì)照品溶液。精密吸取上述線性1—線性5的續(xù)濾液10 μL，注入高效液相色譜儀，按“3.2”項(xiàng)的色譜條件測(cè)定。以尿嘧啶色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得尿嘧啶的回歸方程為y=42 211 713.873 3x+2 602.991 0，r=1.000 0，其線性范圍為0.001 9～0.047 3 mg/mL；尿苷的回歸方程為y= 22 752 686.126 6x-3 822.758 9，r=1.000 0，線性范圍為0.003 9～0.098 2 mg/mL；鳥(niǎo)苷的回歸方程為y=24 523 494.167 4x -4 176.090 7，r=1.000 0，線性范圍為0.002 8～0.070 1 mg/mL；腺苷的回歸方程為y=31 375 692.877 0x - 5 674.739 2，r=1.000 0，其線性范圍為0.002 9～0.073 0 mg/mL。

3.4.2?重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品（批號(hào)為K386CP02），按“3.3”項(xiàng)的方法平行制備6份供試品溶液，并按“3.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到尿嘧啶平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.089 mg/g，RSD為0.9%；尿苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.189 mg/g，RSD為0.7%；鳥(niǎo)苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.125 mg/g，RSD為1.3%；腺苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.146 mg/g，RSD為1.1%。表明該方法重復(fù)性良好。

3.4.3?穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按“3.2”項(xiàng)的色譜條件，分別于0、2、4、8、12、18、24 h進(jìn)樣測(cè)定，并記錄尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷和腺苷峰面積的變化情況，24 h內(nèi)尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷和腺苷峰面積的RSD分別為1.3%、1.6%、1.9%和1.8%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.4.4?加樣回收率試驗(yàn)

分別取尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1 mL含尿嘧啶5.13 μg、尿苷9.79 μg、鳥(niǎo)苷6.62 μg、腺苷7.03 μg的對(duì)照品混合溶液。取已知含量的供試品（批號(hào)為K386CP02）9份，每份約0.5 g，精密稱定，分為3組，分別加入對(duì)照品溶液5、10、15 mL，用10%甲醇補(bǔ)足至20 mL，余下操作同“3.3”項(xiàng)的供試品溶液制備方法，并進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷和腺苷的平均回收率分別為99.0%、100.7%、101.2%、101.8%，RSD分別為2.8%、2.7%、2.9%、2.9%，表明方法的準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見(jiàn)表9。

3.5?檢測(cè)限和定量限

基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法，按照公式檢測(cè)限LOD=3.3δ/S和定量限LOQ=10δ/S（式中：S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；δ為標(biāo)準(zhǔn)曲線截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差），計(jì)算得到尿嘧啶的檢測(cè)限和定量限分別為199.6 ng/mL和604.9 ng/mL，尿苷的檢測(cè)限和定量限分別為272.3 ng/mL和825.0 ng/mL，鳥(niǎo)苷的檢測(cè)限和定量限分別為187.3 ng/mL和567.6 ng/mL，腺苷的檢測(cè)限和定量限分別為215.0 ng/mL和651.6 ng/mL。

3.6?樣品含量測(cè)定

取13批浮小麥配方顆粒，按“3.3”項(xiàng)的方法制備供試品溶液，并按“3.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表10。

4?結(jié)?語(yǔ)

鑒于中藥成分復(fù)雜、作用靶點(diǎn)多樣的特性，用單一有效成分的定性或定量方式來(lái)表征中藥的質(zhì)量信息存在較大的局限性，運(yùn)用“整體觀”思想創(chuàng)建適宜的中藥體系評(píng)價(jià)方法尤為重要[17-18]?；诟⌒←溑浞筋w粒水提的特性，本研究以其中水溶性成分的檢出為目的，以多成分檢出為導(dǎo)向，運(yùn)用同一梯度洗脫程序，首次建立了對(duì)浮小麥配方顆粒中尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷4種成分同時(shí)定量的方法，同時(shí)建立了其特征圖譜分析方法，指認(rèn)了色氨酸及7個(gè)核苷類成分。該方法穩(wěn)定高效、重復(fù)性良好，可為浮小麥配方顆粒多指標(biāo)體系研究提供新的方法和依據(jù)，能夠較全面地評(píng)價(jià)浮小麥配方顆粒的質(zhì)量。

不同中藥中核苷類成分穩(wěn)定性差異較大，有些中藥在水提取過(guò)程中核苷類成分穩(wěn)定性較差，如錢正明等[19]發(fā)現(xiàn)冬蟲(chóng)夏草在室溫水提取條件下存在腺苷酸向腺苷轉(zhuǎn)化、腺苷向肌苷轉(zhuǎn)化的情況，焦森等[20]發(fā)現(xiàn)石菖蒲在水提取過(guò)程中亦存在核苷類成分間的轉(zhuǎn)化。浮小麥在制備過(guò)程中核苷類成分間是否存在相互轉(zhuǎn)化及其轉(zhuǎn)化途徑，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

核苷類成分價(jià)值廣泛，主要應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域，如抗癌核苷類似物、核苷類抗病毒藥等，其研究成果具有廣闊的應(yīng)用前景，研究者也可從中藥中分離有效的核苷類成分作為先導(dǎo)化合物以研發(fā)更為有效的藥物。

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收稿日期：2023-08-01;修回日期：2023-12-22；責(zé)任編輯：王海云

第一作者簡(jiǎn)介：

王曉亞（1992—），女，河北石家莊人，工程師，碩士，主要從事中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的研究。

通信作者：

沈建梅高級(jí)工程師。E-mail： shenjianmei@tcmages.com

王曉亞，杜微波，馬智玲，等.

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