神經(jīng)母細(xì)胞瘤化療耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展

林梅珍,李志杰,2*

0 引言

神經(jīng)母細(xì)胞瘤(Neuroblastoma,NB)是起源于交感神經(jīng)嵴的兒童常見(jiàn)顱外惡性實(shí)體腫瘤。1999-2007年,歐洲NB發(fā)病率約為1.2/10萬(wàn),在兒童腫瘤患者中約占7%,死亡率在兒童腫瘤中占15%[1]。根據(jù)國(guó)際神經(jīng)母細(xì)胞瘤風(fēng)險(xiǎn)分層 (International Neuroblastoma Risk Group,INRG),將NB患者分為低危、中危和高危型。目前,治療NB的標(biāo)準(zhǔn)治療方案包括手術(shù)切除、化療、放療、靶向治療、免疫治療等。治療后,低危和中危NB患者5年生存率可達(dá)到90%,高?；颊卟捎枚喾N模式的綜合治療后,5年總生存率約為50%[2-6]。盡管免疫治療、靶向治療等是目前的研究熱點(diǎn),但化療依然是臨床上控制腫瘤生長(zhǎng)的主要手段之一,手術(shù)前后合并化療是治療NB的首選方案。手術(shù)前化療能縮小瘤體、減少術(shù)中出血量、加大手術(shù)成功率,術(shù)后化療可以減少腫瘤殘余量。化療耐藥是所有腫瘤治療失敗的最重要原因之一,其中也包括NB,患者對(duì)化療藥物的敏感性直接影響預(yù)后[7]。本文就NB化療耐藥機(jī)制進(jìn)行闡述,旨在為臨床NB患者的治療提供相關(guān)參考。

1 細(xì)胞凋亡受阻

1.1 凋亡蛋白 細(xì)胞凋亡(程序性細(xì)胞死亡)是細(xì)胞死亡的一種重要機(jī)制,是維持機(jī)體正常生理功能和機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡所必需的。細(xì)胞凋亡通路有兩條主要途徑,即外源性和內(nèi)源性途徑。外源性凋亡途徑又稱死亡受體途徑,是由細(xì)胞表面的死亡受體如凋亡誘導(dǎo)配體受體1(Fas cell surface death receptor 1,Fas1)和腫瘤壞死因子受體家族(Tumor necrosis factor receptor family,TNF-R)介導(dǎo),從而激活凋亡程序。內(nèi)源性凋亡途徑又稱線粒體途徑,通常是由應(yīng)激條件、化療試劑、藥物等引起,其中涉及BCL-2家族引起的線粒體外膜通透性改變,從而激活了凋亡程序。根據(jù)功能的差異,BCL-2蛋白家族可分為兩大類:促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白,兩者之間的平衡被破壞是腫瘤細(xì)胞獲得凋亡抗性的主要原因[8]。幾乎所有臨床上使用的常規(guī)化療藥物都能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,腫瘤細(xì)胞一旦成功避開凋亡途徑,則會(huì)發(fā)生化療和放療耐藥性[9-10]。有研究表明,高遷移率族蛋白1(High mobility group box 1,HMGB1)通過(guò)ROS/ERK1/2途徑抑制順鉑和依托泊苷誘導(dǎo)的細(xì)胞焦亡,從而增加NB細(xì)胞體外和體內(nèi)的凋亡和化療敏感性[11]。Shmakova等[12]發(fā)現(xiàn),在NB細(xì)胞系Neuro2a中下調(diào)尿激酶型纖溶酶原激活物受體(Urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)會(huì)抑制細(xì)胞凋亡激活,且出現(xiàn)細(xì)胞休眠表型和p53水平下降。研究顯示,BCL-2家族抑制劑GX15-070能引起細(xì)胞凋亡和自噬,從而提高化療敏感性[13]。研究細(xì)胞凋亡通路的調(diào)控機(jī)制以及導(dǎo)致凋亡抗性的因素對(duì)于開發(fā)更有效的治療策略至關(guān)重要。同時(shí),應(yīng)該加強(qiáng)針對(duì)細(xì)胞凋亡通路的抗凋亡治療策略的研究,以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性,減少化療耐藥性的發(fā)展。繼續(xù)深入研究細(xì)胞凋亡機(jī)制,尋找新的治療靶點(diǎn),將有助于提高腫瘤治療的成功率。

1.2 剪接因子 剪接因子是參與調(diào)節(jié)可變剪接的蛋白質(zhì),在這個(gè)過(guò)程中,內(nèi)含子從初級(jí)轉(zhuǎn)錄物中去除,而外顯子被選擇性地連接,以產(chǎn)生不同的mRNA。參與凋亡調(diào)節(jié)的基因的可變剪接通常會(huì)導(dǎo)致合成相反作用的蛋白質(zhì)變體,這些變體可以激活或抑制程序性細(xì)胞死亡。剪接因子的2個(gè)關(guān)鍵家族分別是富含絲氨酸/精氨酸蛋白 (Serine/arginine-rich proteins,SR蛋白)和核不均一性核糖核蛋白(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)。SR蛋白和hnRNP家族的典型成員分別是富含絲氨酸/精氨酸的剪接因子1(Serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)和hnRNPA1,能促進(jìn)Bcl-x和Mcl-1抗凋亡剪接變體的合成。剪接因子既可以減少藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,也可以增強(qiáng)化療藥物的促細(xì)胞凋亡作用[14]。Shi等[15]研究顯示,藥物抑制剪接體可以誘導(dǎo)NB細(xì)胞凋亡并消除體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。有研究表明,MYCN是MYCN-hnRNPA1/PTBP1-PKM2通路中Warburg效應(yīng)的上游參與者[16]。在NB中MYCN過(guò)表達(dá),可引起剪接因子hnRNPA1和PTBP1上調(diào),這2種剪接因子能促進(jìn)NB細(xì)胞增殖和下游分子PKM2的差異剪接。其中,致癌異構(gòu)體PKM2主要在胎兒發(fā)育過(guò)程中表達(dá),能促進(jìn)NB細(xì)胞生長(zhǎng)的Warburg效應(yīng)[17]。剪接因子在NB中對(duì)細(xì)胞凋亡和腫瘤生長(zhǎng)起著重要的調(diào)節(jié)作用。研究剪接因子及其調(diào)控的通路,可能為NB的治療提供新的靶點(diǎn)和策略。

1.3 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(Ubiquitin-proteasome system,UPS) UPS負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的降解,其調(diào)節(jié)功能主要由E3泛素連接酶和去泛素化酶(Deubiquitinating enzyme,DUB)發(fā)揮作用,同時(shí)參與了細(xì)胞凋亡[18-19]。Caspase是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白酶家族,負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞凋亡的執(zhí)行步驟。E3泛素連接酶可以介導(dǎo)Caspase的泛素化,并促使其被降解。這種降解調(diào)控可以影響Caspase的穩(wěn)態(tài)水平,從而影響細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。同時(shí),抑制UPS可以恢復(fù)腫瘤細(xì)胞對(duì)常規(guī)化療藥物的敏感性[20-21]。有研究顯示,UPS參與了線粒體釋放細(xì)胞色素c,且沉默E3泛素連接酶可以降低NB細(xì)胞中的細(xì)胞色素c[22]。腫瘤抑制基因p53的突變是NB復(fù)發(fā)耐藥的主要原因之一。研究表明,通過(guò)沉默E3泛素連接酶ITCH可以減少TP73的泛素化修飾,提高其在NB中的穩(wěn)定性和表達(dá)水平,這種負(fù)調(diào)控機(jī)制可能增強(qiáng)TP73的活性,從而提高NB細(xì)胞對(duì)化療的敏感性[23]。泛素連接酶E4B(Ubiquitin-conjugating enzyme E4B,UBE4B)是一種參與EGFR降解的E3/E4泛素連接酶。在化療耐藥NB細(xì)胞系中,UBE4B表達(dá)水平下降會(huì)增強(qiáng)其對(duì)西妥昔單抗的敏感性[24]。UPS在調(diào)控細(xì)胞凋亡和腫瘤治療中發(fā)揮重要作用,深入研究UPS的調(diào)控機(jī)制和相關(guān)的分子信號(hào)通路,可能為開發(fā)新的腫瘤治療策略和增強(qiáng)化療藥物的療效提供新的思路。

2 藥物外排

藥物外排是腫瘤細(xì)胞耐藥最常見(jiàn)的機(jī)制之一,通常是細(xì)胞毒性藥物通過(guò)細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體外排所致。由于許多抗癌藥物的靶點(diǎn)在細(xì)胞內(nèi),所以,細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體在化療耐藥中起重要作用。ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette,ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是具有重要臨床意義的膜蛋白,利用ATP水解釋放的能量來(lái)排出化療藥物[25]。迄今為止,在人類基因組中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了49種不同的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因。轉(zhuǎn)運(yùn)體由2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(Transmembrane domain,TMD)和2個(gè)核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Nucleotide-binding domain,NBD)組成,前者識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)質(zhì)膜上的底物,后者通過(guò)水解ATP產(chǎn)生運(yùn)輸所需的能量。其中,ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體包括ABCA2、ABCA3、ABCB1、ABCB4(MDR2/MDR3)、ABCB5、ABCC1、ABCC2(MRP2/cMOAT)、ABCC3(MRP3)、ABCC10(MRP7)和ABCG2。與其他轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相比,糖蛋白ABCB1 (MDR1/P-gp)、多藥耐藥蛋白ABCC1 (MRP1)在多藥耐藥中最為重要[26]。

2.1 ABCB1 ABCB1也稱為多藥耐藥基因(Multi-drug resistance 1,MDR1),主要編碼一種細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì),即P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。P-gp作為一種能量依賴的外排泵,在細(xì)胞毒性作用發(fā)生前,將與MDR相關(guān)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞,從而誘導(dǎo)了化療耐藥性[27]。R?sch等[28]研究表明,P-gp抑制劑和ERBB家族抑制劑能有效地逆轉(zhuǎn)NB對(duì)長(zhǎng)春新堿的耐藥性。P-gp和其他MDR轉(zhuǎn)運(yùn)體可以通過(guò)各種類型的細(xì)胞外囊泡(即外泌體和微泡),將耐藥腫瘤細(xì)胞(供體)轉(zhuǎn)移到藥敏腫瘤細(xì)胞(受體),從而導(dǎo)致受體細(xì)胞在體內(nèi)外均出現(xiàn)獲得性耐藥,以逃避藥物帶來(lái)的細(xì)胞毒性[29-30]。Sousa等[31]研究顯示,細(xì)胞外囊泡可能會(huì)轉(zhuǎn)移微小RNA(MicroRNA,miRNA)、長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)、蛋白質(zhì)(如藥物外排泵)和其他負(fù)責(zé)耐藥性的相關(guān)因子,從而將腫瘤耐藥性特征擴(kuò)散到受體細(xì)胞。有研究表明,TP53突變可能在化療和NB的惡性進(jìn)展過(guò)程中獲得[32-33]。當(dāng)腫瘤暴露于DNA損傷類的化療藥物后,腫瘤細(xì)胞中的p53會(huì)過(guò)度表達(dá),當(dāng)p53基因不能阻止帶有受損DNA的細(xì)胞進(jìn)入復(fù)制周期,便出現(xiàn)耐藥性,本質(zhì)上是p53基因發(fā)生突變[34]。突變型p53(mutp53)是賦予腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的關(guān)鍵分子,可能與耐藥性相關(guān),MDR1是mutp53靶基因。組織蛋白酶L(Cathepsin L,CTSL)通過(guò)上調(diào)ABCB1和ABCG2的表達(dá)水平,同時(shí)抑制細(xì)胞自噬和凋亡途徑,從而降低NB細(xì)胞對(duì)順鉑和阿霉素的敏感性[35]。研究ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體、細(xì)胞外囊泡、TP53突變等對(duì)于理解NB細(xì)胞耐藥性的機(jī)制以及尋找逆轉(zhuǎn)耐藥性的治療方法具有重要意義。

2.2 ABCC1 ABCC1也稱多藥耐藥相關(guān)蛋白1(Multi-drug resistant associate protein 1,MRP1),ABCC1基因的上調(diào)與NB患者的預(yù)后密切相關(guān)。此外,ABCC1受MYCN基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,MYCN是神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生的驅(qū)動(dòng)因素。MYCN基因的擴(kuò)增發(fā)生在大約20%～30%的原發(fā)性NB中,并且始終與不良臨床結(jié)果相關(guān)。NB治療中使用的許多一線藥物是MRP1底物,包括依托泊苷、多柔比星、長(zhǎng)春新堿和拓?fù)涮婵礫36]。有研究顯示,MRP1缺失增強(qiáng)了長(zhǎng)春新堿和依托泊苷的藥物敏感性,顯著延緩腫瘤生長(zhǎng),表明MRP1在體內(nèi)介導(dǎo)化學(xué)抗性[37-38]。Lucianò等[39]發(fā)現(xiàn),在NB中,M2受體激動(dòng)劑,可以減少藥物射流泵的表達(dá),有助于化療藥物進(jìn)入細(xì)胞,并停留在細(xì)胞內(nèi)部,從而增加藥物在細(xì)胞內(nèi)的積累并增強(qiáng)其毒性作用,即使在低劑量下也可以實(shí)現(xiàn)這種效果。MRP1在NB中的高表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān),通過(guò)干擾MRP1蛋白功能或利用M2受體激動(dòng)劑,可以增加化療藥物的療效,減少化療藥物的泵出,從而提高藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的積累并增強(qiáng)其治療效果。這也為開發(fā)針對(duì)MRP1的治療策略提供了指導(dǎo)和依據(jù)。

3 DNA修復(fù)增強(qiáng)

化療藥物可直接或間接引起腫瘤細(xì)胞的DNA損傷,進(jìn)而殺死腫瘤細(xì)胞。當(dāng)基因組內(nèi)出現(xiàn)各種損傷時(shí),DNA損傷修復(fù)能力是決定腫瘤細(xì)胞對(duì)化療敏感性的重要因素[40]。其中,DNA修復(fù)的途徑包括堿基切除修復(fù)(Base excision repair,BER)、核苷酸切除修復(fù)(Nucleotide excision repair,NER)、錯(cuò)配修復(fù)(Mismatch repair,MMR)、DNA雙鏈斷裂修復(fù)(DNA double-strand break repair,DSBs)等[40]。通常情況下,DNA修復(fù)不完全后,細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡。鉑類藥物(如順鉑、奧沙利鉑和卡鉑)通過(guò)與DNA分子交聯(lián)而導(dǎo)致DNA損傷,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡。負(fù)責(zé)DNA修復(fù)的基因中的遺傳缺陷,如MSH2和MLH1,可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)DNA損傷類藥物(如拓?fù)涮婵?、環(huán)磷酰胺、順鉑等)產(chǎn)生耐藥性[26]。研究顯示,在營(yíng)養(yǎng)缺乏的MYCN非擴(kuò)增NB細(xì)胞系中,耐藥性主要是通過(guò)增加DNA修復(fù)和膽固醇介導(dǎo)的拓?fù)涮婵低饬饕鸬?然而,在營(yíng)養(yǎng)缺乏的MYCN擴(kuò)增NB細(xì)胞系中,耐藥性主要是由膽固醇介導(dǎo)的拓?fù)涮婵低饬饕鸬摹＝Y(jié)果顯示,在不同類型的NB細(xì)胞系中,耐藥機(jī)制可能存在差異[41]。DNA損傷修復(fù)能力是影響腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的重要因素。化療藥物引起DNA損傷后,如果細(xì)胞的DNA修復(fù)能力完整,則細(xì)胞可能適應(yīng)損傷并存活,從而降低化療的效果。相反,如果細(xì)胞的DNA修復(fù)能力受損,藥物引起的DNA損傷則無(wú)法修復(fù),進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和死亡,增強(qiáng)化療的效果。

DNA損傷反應(yīng)(DNA damage response,DDR)是一種保護(hù)機(jī)制,通過(guò)細(xì)胞對(duì)多種內(nèi)源性和外源性因子的反應(yīng)來(lái)適應(yīng)DNA損傷。更多情況下,DNA損傷的積累會(huì)導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定和致癌。盡管DDR對(duì)正常細(xì)胞的存活很重要,但也能通過(guò)克服化療藥物誘導(dǎo)的DNA損傷而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的DNA損傷在癌變過(guò)程中最常見(jiàn)[42]。有研究表明,在NB細(xì)胞系SH-SYSY中,沉默著絲粒蛋白A(Centromere protein A,CENPA)可以提高NB細(xì)胞對(duì)阿霉素和順鉑的藥物敏感性,并且抑制細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移[43]。研究顯示,抑制組蛋白去乙酰化酶10(Histone deacetylase 10,HDAC10)與多柔比星聯(lián)合使用,可以通過(guò)阻礙藥物外排和增強(qiáng)DNA損傷來(lái)殺死NB,這為靶向化療耐藥性提供了一個(gè)新的機(jī)會(huì)[44]。此外,DDR作為一種保護(hù)機(jī)制,幫助細(xì)胞應(yīng)對(duì)DNA損傷,對(duì)于維持正常細(xì)胞的穩(wěn)定和避免致癌起重要作用。然而,腫瘤細(xì)胞也可以通過(guò)克服化療藥物誘導(dǎo)的DNA損傷并啟動(dòng)DDR來(lái)產(chǎn)生治療耐藥性。因此,深入研究DDR的調(diào)控機(jī)制,特別是在腫瘤細(xì)胞中的作用,可能有助于開發(fā)更有效的治療策略,提高化療效果。

4 腫瘤微環(huán)境

腫瘤微環(huán)境(Tumor microenvironment,TME)由多種細(xì)胞組成,其中包括腫瘤細(xì)胞、腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells,CSCs)、骨髓源性細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM),這些細(xì)胞成分都會(huì)推動(dòng)腫瘤的發(fā)展。在腫瘤微環(huán)境中的各種細(xì)胞中,CAF是TME的主要細(xì)胞成分,在獲得腫瘤化療耐藥性中起到關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。CAF介導(dǎo)的耐藥性可大致分為細(xì)胞黏附介導(dǎo)的耐藥性(Cell adhesion-mediated drug resistance,CAM-DR)和可溶性分泌因子介導(dǎo)的耐藥性(Soluble factor-mediated drug resistance,SFM-DR)。CAF衍生的ECM蛋白作為腫瘤化療耐藥細(xì)胞外基質(zhì),腫瘤組織中的ECM比正常組織中的ECM密度更高、硬度更高,密集而堅(jiān)硬的ECM過(guò)度積聚通常會(huì)成為藥物滲透到腫瘤環(huán)境的物理屏障[42]。同時(shí),與正?；|(zhì)細(xì)胞相比,CAF的p53表達(dá)水平較低,甚至缺失[45]。其中,腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophages,TAM)是TME中最豐富的浸潤(rùn)基質(zhì)成分[46]。有研究表明,NB中端粒酶抑制劑TERF1能夠逆轉(zhuǎn)由TAM衍生的外泌體miR-155誘導(dǎo)的耐藥[47]。TME是由多種細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)組成的復(fù)雜環(huán)境,不同細(xì)胞成分之間的相互作用影響著腫瘤的發(fā)展和化療耐藥性。CAF、ECM、TAM、CSCs和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)等成分在腫瘤的治療中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其中,CSCs和EMT表型是TME驅(qū)動(dòng)的化療耐藥性的核心。了解這些成分之間的相互作用和調(diào)控機(jī)制,有助于發(fā)展新的治療策略,克服化療耐藥性,并提高腫瘤治療的效果。此外,深入研究CSCs和EMT的機(jī)制,有望為針對(duì)這些細(xì)胞亞群的治療提供新的方向和策略。

4.1 CSCs CSCs是一種特殊類型的腫瘤細(xì)胞,其具有干細(xì)胞特征,包括自我更新、分化和腫瘤永生化的特性。CSCs的增殖水平較低,藥物外流增加,DNA損傷修復(fù)活性高,會(huì)導(dǎo)致固有的化療耐藥性[45]。同時(shí),CSCs細(xì)胞周期常處于靜止?fàn)顟B(tài),能有效避免化療藥物對(duì)快速分裂的靶細(xì)胞的殺傷作用,從而產(chǎn)生耐藥性[40]。CSCs介導(dǎo)化療抵抗和藥物治療后腫瘤細(xì)胞的重新增殖,使其具有高致瘤特性。CSCs在TME中獲得耐藥性可能導(dǎo)致化療藥物治療效果不佳。研究表明,依托泊苷與磺胺嘧啶或PKCα抑制劑C2-4的兩種組合治療方案可以通過(guò)阻止EMT轉(zhuǎn)變和下調(diào)GPX4活性觸發(fā)鐵死亡,從而增強(qiáng)NB干細(xì)胞對(duì)依托泊苷的敏感性[48]。研究表明,下調(diào)JARID1B通過(guò)抑制Notch通路抑制腫瘤球形成,逆轉(zhuǎn)CSCs的EMT,提高NB細(xì)胞對(duì)順鉑的化學(xué)敏感性[49]。CSCs作為一種特殊亞群,具有自我更新和耐藥性能力,對(duì)于腫瘤的治療具有挑戰(zhàn)性。通過(guò)有針對(duì)性地攻擊CSCs,可能會(huì)更有效地消滅腫瘤細(xì)胞,并提高治療的成功率。

4.2 EMT 隨著治療后化療耐藥性的發(fā)展,腫瘤表現(xiàn)出微環(huán)境變化,并在具有間充質(zhì)特征的腫瘤細(xì)胞亞群中富集,這些變化與EMT相關(guān)。TME衍生的白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)可以誘導(dǎo)EMT,這是一種促進(jìn)化療耐藥性的表型開關(guān)[45]。Yogev等[50]建立了NB耐藥模型,從而發(fā)現(xiàn)獲得性耐藥與轉(zhuǎn)移到骨髓并產(chǎn)生彌散性轉(zhuǎn)移的細(xì)胞亞群中的EMT有關(guān)。有研究表明,uPAR能促進(jìn)NB細(xì)胞中EMT,同時(shí)抑制了EGFR/ERK信號(hào)通路,并激活A(yù)KT信號(hào)通路,從而導(dǎo)致化療藥物耐藥[12]。研究表明,EMT轉(zhuǎn)錄因子在NB順鉑耐藥的形成過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[51]。EMT作為一種細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程,可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)變和耐藥性的增強(qiáng),從而限制了化療效果。探索如何抑制或逆轉(zhuǎn)EMT過(guò)程,有可能為治療耐藥性提供新的目標(biāo)和方法,提高治療效果,增加患者的生存率。

5 影響自噬

自噬是一種細(xì)胞內(nèi)環(huán)境平衡機(jī)制,負(fù)責(zé)細(xì)胞器、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的分解代謝循環(huán),從而為能量生產(chǎn)和維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)提供底物[50]。自噬在腫瘤中具有雙重作用。一方面,自噬作為一種保護(hù)機(jī)制被激活時(shí),抑制自噬可以提高化療對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞的敏感性[40];另一方面,化療引起的持續(xù)自噬可刺激“自噬性細(xì)胞死亡”,這是一種獨(dú)立的細(xì)胞死亡方式,不涉及細(xì)胞凋亡,但可能伴隨細(xì)胞凋亡[52]。在大多數(shù)情況下,自噬抑制細(xì)胞凋亡,說(shuō)明自噬傾向于抑制細(xì)胞凋亡而不是促進(jìn)細(xì)胞凋亡[53]。在接受化療和放療的腫瘤細(xì)胞中,首先的反應(yīng)之一是自噬,這是一種去除受損蛋白質(zhì)和細(xì)胞器并產(chǎn)生能量和代謝中間產(chǎn)物的細(xì)胞過(guò)程。自噬可以促進(jìn)或減弱腫瘤抵抗力,這取決于自噬本質(zhì)上是細(xì)胞保護(hù)還是細(xì)胞毒性。當(dāng)耐藥細(xì)胞缺乏凋亡能力或表現(xiàn)出抗凋亡能力時(shí),誘導(dǎo)細(xì)胞毒性自噬的藥物也可以通過(guò)誘導(dǎo)自噬治療腫瘤和阻止化療藥物耐藥性。此外,p53依賴的保護(hù)性自噬誘導(dǎo)的耐藥性可能與高水平溶酶體的誘導(dǎo)有關(guān)[54]。研究表明,P2X7是一種受體蛋白,能夠與細(xì)胞外的ATP結(jié)合并傳遞信號(hào),P2X7受體B亞型可以通過(guò)抑制自噬、增加MRP型轉(zhuǎn)運(yùn)體的藥物外流、對(duì)維甲酸產(chǎn)生抵抗、增加干細(xì)胞樣表型、誘導(dǎo)EMT等使NB細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性,而P2X7受體A亞型則具有相反和互補(bǔ)的作用[55]。研究表明,下調(diào)自噬相關(guān)分子Beclin-1蛋白表達(dá)水平,可以提高NB對(duì)化療藥物的敏感性[56]。自噬在腫瘤中的雙重作用為腫瘤治療提供了復(fù)雜的挑戰(zhàn)。對(duì)于耐藥腫瘤細(xì)胞,抑制自噬可能是提高化療敏感性的有效策略。然而,對(duì)于一些化療引起的自噬性細(xì)胞死亡,需要深入了解其機(jī)制和潛在的療效。

6 總結(jié)與展望

目前,化療仍然是治療NB的主要手段之一,化療耐藥性一直是NB治療的主要挑戰(zhàn)。近年來(lái),針對(duì)NB化療耐藥機(jī)制的研究取得了一些重要進(jìn)展。NB細(xì)胞的化療耐藥性形成與多個(gè)因素相關(guān),包括細(xì)胞凋亡途徑異常、DNA修復(fù)能力增強(qiáng)、細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)泵的過(guò)度表達(dá)、腫瘤干細(xì)胞以及細(xì)胞外耐藥信號(hào)通路的激活等。但臨床上仍然存在內(nèi)源性或獲得性耐藥的問(wèn)題,導(dǎo)致部分高危NB患者緩解后仍復(fù)發(fā)。因此,需要進(jìn)一步探索NB化療耐藥形成的機(jī)制,尋找可以逆轉(zhuǎn)NB細(xì)胞化療耐藥的新治療靶點(diǎn)。