類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清ASC NLRP3水平及意義

姜永森, 趙春楠, 張澤智, 劉艷伶, 丁佩劍, 耿學(xué)麗

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科, 河北 承德 067000)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性炎癥性關(guān)節(jié)疾病,可導(dǎo)致軟骨和骨損傷以及殘疾。RA的全球平均患病率范圍為0.5%～1.0%,好發(fā)于60歲以上的老年人[1]。RA的病因尚不清楚,可能與多種因素有關(guān),早期診斷是獲得最佳治療成功的關(guān)鍵。目前認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制與體內(nèi)免疫細(xì)胞和炎性小體激活有關(guān)。ASC參與炎癥小體的激活,其中炎性小體NLRP3的激活受到ASC調(diào)控。有研究指出,血清NLRP3參與了RA的發(fā)生發(fā)展,同時ASC也參與了RA的發(fā)生發(fā)展,兩者聯(lián)合研究較少[2]。故而本研究選取88例RA患者作為研究對象,深入探討RA與ASC、NLRP3的相關(guān)性。結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2021年11月至2023年6月于承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的88例RA患者、男74例,女14例,年齡(53.88±12.33)歲,范圍18～ 80 歲,體質(zhì)指數(shù)(25.04±2.76) kg/m2;88例健康體檢者,男73例,女15例,年齡(54.34±11.43)歲,范圍18～ 80歲;體質(zhì)指數(shù)(25.64±3.70)kg/m2,范圍18.05～30.64kg/m2。納入排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn):①RA患者符合美國風(fēng)濕學(xué)會《類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3];②年齡≥18歲;③無急性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn):①患有其他關(guān)節(jié)炎或關(guān)節(jié)疾病;②肝腎功能損害或代謝性疾病(如甲狀腺、甲狀旁腺疾病影響骨代謝);③嚴(yán)重心腦血管疾病;④腫瘤及骨轉(zhuǎn)移;⑤服用抗癌藥物或其他影響骨代謝的藥物;⑥懷孕或哺乳期婦女;⑦其他自身免疫性疾病。兩組一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2儀器、試劑和方法:血清ASC、NLRP3水平檢測:采集患者晨起空腹4mL靜脈血,室溫下于無抗凝劑的真空管中靜置30min自然凝血,3500r/min離心15min,取三份上清500μL放入EP管中,置于-80℃超低溫冰箱冷凍保存。并在收集充足病例數(shù)后解凍后統(tǒng)一采用武漢紀(jì)寧生物ELISA試劑盒(編號:EH1511;JN17614)測量表達(dá)水平。RA患者的關(guān)節(jié)腫脹和壓痛由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的風(fēng)濕免疫學(xué)專家記錄。采用DAS28方法評估RA患者的疾病活動度,計算DAS28評分。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清ASC、NLRP3水平比較:RA組血清ASC、NLRP3水平高于健康對照組。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者血清ASC NLRP3水平比較

2.2兩組患者一般資料比較:兩組性別、年齡,體質(zhì)指數(shù)、吸煙史、飲酒史等資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組患者一般資料比較

2.3RA患者血清ASC、NLRP3水平與DAS28評分的相關(guān)性:Spearman相關(guān)性分析:顯示,RA患者血清ASC、NLRP3水平與DAS28評分呈正相關(guān)(rs=0.714;rs=0.254,P<0.05)。見圖1。

圖1 RA患者血清ASC、NLRP3水平與DAS28評分的線性散點(diǎn)圖

2.4二元Logistic回歸分析:以是否為RA患者為因變量(1=是,0=否),以“ASC、NLRP3、年齡、性別”為協(xié)變量,納入Logistic回歸中分析,結(jié)果顯示ASC、NLRP3水平升高是影響RA患者的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。年齡、性別不是影響RA患者的獨(dú)立危險因素。見表3。

表3 RA患者Logistic回歸分析

3 討 論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種全身性多關(guān)節(jié)慢性自身免疫疾病,易導(dǎo)致關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍結(jié)構(gòu)損傷以及全身炎癥,主要導(dǎo)致手足畸形[4]。RA病情呈慢性進(jìn)行發(fā)展,關(guān)節(jié)畸形使患者活動受限,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。雖然風(fēng)濕藥物(DMARD)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療方面有著緩解作用[5],但目前臨床對于RA發(fā)病機(jī)制尚不能完全闡明。其中免疫細(xì)胞和炎性小體在RA的發(fā)生發(fā)展起至關(guān)重要的作用。因此,發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)志物對治療RA患者和闡明RA發(fā)病機(jī)制具有非常重要的意義。

含有半胱天冬酶募集結(jié)構(gòu)域(ASC)的凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白由PYCARD基因編碼構(gòu)成,是一種22kDa小分子,ASC斑點(diǎn)存在于慢性炎癥性疾病患者的體循環(huán),被認(rèn)為是炎癥的相關(guān)血液生物標(biāo)志物,其主要參與炎癥、細(xì)胞焦亡和細(xì)胞凋亡[6]。本研究結(jié)果顯示,血清ASC水平升高是RA的獨(dú)立危險因素,在RA中ASC可能參與炎性小體的活化。

NLRP3炎性小體是一種多聚蛋白復(fù)合物是NLR家族成員之一,在NLR家族復(fù)合物中,NLRP3炎癥小體是迄今為止研究最多的炎癥小體。NLRP3炎性體是調(diào)節(jié)宿主免疫防御以抵抗感染性微生物和細(xì)胞損傷的關(guān)鍵因素,NLRP3炎癥小體在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用[7],本研究結(jié)果顯示,血清NLRP3水平升高是RA的獨(dú)立危險因素。

ASC與NLRP3存在復(fù)雜關(guān)系,ASC的聚合過程中需要吡啶N端子同源域PYD,NLRP3通過PYD結(jié)構(gòu)域結(jié)合銜接蛋白ASC,ASC泛素化,能促進(jìn)炎癥小體NLRP3激活,還能介導(dǎo)NLRP3的信號傳遞,并有助于誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞增生[8-9]。

本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),ASC、NLRP3與DAS28評分呈正相關(guān),提示ASC、NLRP3可能共同參與RA的發(fā)生發(fā)展,ASC在RA的進(jìn)展中激活了NLRP3,促進(jìn)了RA的發(fā)病。Logistic回歸分析結(jié)果顯示ASC、NLRP3水平升高是影響RA患者的獨(dú)立危險因素。年齡、性別不是影響RA患者的獨(dú)立危險因素,提示血清ASC、NLRP3水平兩項(xiàng)指標(biāo)對RA患者有潛在的診斷價值。

綜上所述,RA患者血清ASC、NLRP3水平明顯升高,二者可能共同參與RA發(fā)生發(fā)展,可能成為RA診斷的新標(biāo)志物,其對RA及其疾病活動度的診斷價值有待進(jìn)一步評價。