斯鈣素2在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

鄧潤(rùn)叨, 付霞霏

(1.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院, 廣東 廣州 510220 2.廣東省東莞市人民醫(yī)院, 廣東 東莞 523018)

作為臨床常見(jiàn)腫瘤疾病,宮頸癌指的是起源于子宮頸的上皮惡性腫瘤,發(fā)病率及死亡率位居全球女性惡性腫瘤第四。流行病學(xué)調(diào)查研究表明,我國(guó)每年宮頸癌新發(fā)病例多達(dá)13萬(wàn),31～60歲中老年女性是高發(fā)群體,近年來(lái)該疾病有年輕化趨勢(shì)[1]。宮頸癌早期癥狀不典型,多數(shù)無(wú)任何癥狀,一般通過(guò)體檢發(fā)現(xiàn)。宮頸癌發(fā)展至中晚期會(huì)出現(xiàn)陰道流血、接觸性出血等,甚至對(duì)周圍組織、器官產(chǎn)生侵犯,壓迫直腸、盆腔神經(jīng),出現(xiàn)尿頻、尿急以及腹脹等,早期診斷及及時(shí)手術(shù)治療是提升患者生存質(zhì)量、增強(qiáng)預(yù)后的關(guān)鍵。相關(guān)研究報(bào)道,宮頸癌的發(fā)生與基因蛋白異常表達(dá)密切相關(guān),作為一種分泌性糖蛋白激素,斯鈣素2(stanniocalcin 2,STC2)在機(jī)體各組織均有一定的分布,能夠?qū)︹}、磷平衡起到調(diào)節(jié)作用,并被證實(shí)參與了消化道惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[2],但關(guān)于其在宮頸癌中的作用尚未得到證實(shí)?；诖?本研究收集 88例宮頸癌患者的臨床資料,觀察STC2在宮頸癌組織的表達(dá)情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析,病例均來(lái)源于東莞市人民醫(yī)院于2022年1月至2023年5月收治的宮頸癌患者,共計(jì)88例,年齡36～67歲,平均年齡(52.28±5.78)歲;BMI(23.52±2.15)kg/m2(18.52～27.43kg/m2)。研究經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者對(duì)研究知情、同意,并簽訂知情同意書(shū)。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn):入組標(biāo)準(zhǔn):①宮頸癌診斷參照《子宮頸癌診斷與治療指南(2021年版)》[3]。②年齡18～70歲;③具備正常的聽(tīng)、說(shuō)能力,溝通順暢,可完成檢查配合及隨訪觀察;④資料完整無(wú)缺失。排除標(biāo)準(zhǔn):①危重癥患者或臟器衰竭、損傷嚴(yán)重者;②合并其他類型惡性腫瘤疾病;③接受放化療治療或其他抗腫瘤治療;④存在意識(shí)模糊或神志不清、精神障礙者;⑤合并凝血功能障礙、自身免疫系統(tǒng)障礙者;⑥預(yù)計(jì)生存期<6個(gè)月;⑦嚴(yán)重肝腎功能不全;⑧處于妊娠及哺乳階段女性。

1.3方 法

1.3.1試劑與儀器:研究所用萊洛特 JC-10光學(xué)顯微鏡由萊州萊洛特試驗(yàn)儀器有限公司提供;湖南湘儀臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)TGL-20M購(gòu)自鄭州今時(shí)邁科技有限公司;BC-J250 CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司;FBS試劑廠家為沃卡威(北京)生物技術(shù)有限公司;4%多聚甲醛溶液由武漢安道麥新能源有限公司提供;朗基Q2000C型實(shí)時(shí)熒光定量PCR由南京烔創(chuàng)科技有限公司提供。免疫組化試劑二甲苯購(gòu)自上海博爾森生物科技有限公司;PBS沖洗液購(gòu)自山東思科捷生物技術(shù)有限公司;封閉山羊血清(原液)SL038由北京索萊寶科技有限公司提供;一抗購(gòu)自愛(ài)必信(上海)生物科技有限公司;DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

1.3.2斯鈣素STC2 mRNA檢測(cè):收集所有入組研究對(duì)象宮頸組織標(biāo)本、癌旁組織(距病灶2cm的組織,經(jīng)免疫組化ABC法染色)。以4%多聚甲醛溶液予以固定處理,通過(guò)石蠟包埋,對(duì)其中的總RNA進(jìn)行提取,STC2 mRNA以實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè),GAPDH作為內(nèi)參基因,檢測(cè)前對(duì)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行仔細(xì)閱讀,嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行,保障檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。STC2、GAPDH電泳條帶灰度值采用Lab Works軟件計(jì)算。

1.3.3免疫組織化學(xué)法檢測(cè)STC2蛋白:在4% 多聚甲醛中固定宮頸組織標(biāo)本,然后實(shí)施脫水、透明處理,浸蠟后予以石蠟包埋,制作為蠟塊留作備用。選取4 μm蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片處理,以二甲苯實(shí)施脫蠟處理,并采用梯度乙醇實(shí)施水化,以PBS進(jìn)行充分清洗,對(duì)抗原予以修復(fù),以山羊血清進(jìn)行封閉。將一抗滴加其中,溫度設(shè)置為4℃,過(guò)夜后,予以PBS沖洗3次,將二抗加入,室溫下孵育,再次予以2～3次PBS沖洗。進(jìn)行DAB顯色,以蘇木素進(jìn)行復(fù)染,脫水后,采用中性樹(shù)膠封片,在顯微鏡下對(duì)結(jié)果予以觀察,拍片。

1.3.4結(jié)果判斷:STC2陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn):可見(jiàn)細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)有棕黃或黃褐色顆粒。染色強(qiáng)度以0～3分進(jìn)行評(píng)估,0分表示無(wú)色,1分～3分分別表示淺黃、棕黃與棕褐色。隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野,對(duì)STC2陽(yáng)性細(xì)胞百分比予以計(jì)算。分值為0分(<1%)、1分(<1%～10%)、2分(11%～50%)、3分(51%～80%)、4分(>80%)。總分為染色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞百分比積分,>4分表示陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.1實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)宮頸癌組織與癌旁組織STC2 mRNA比較:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,宮頸癌組織STC2 mRNA明顯高于癌旁組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)宮頸癌組織與癌旁組織STC2 mRNA比較

2.2不同臨床特征宮頸癌患者癌組織STC2蛋白表達(dá)情況:宮頸癌組織中STC2陽(yáng)性表達(dá)在年齡、腫瘤直徑、病理分型、不同浸潤(rùn)深度、分化程度、TNM分期中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床特征宮頸癌患者癌組織STC2蛋白表達(dá)情況 n(%)

2.3宮頸癌患者癌組織中STC2蛋白陽(yáng)性表達(dá)多因素Logistic回歸分析:以宮頸癌患者癌組織中STC2蛋白表達(dá)是否為陽(yáng)性(1=是,0=否)為因變量,將單因素分析結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量納入多因素Logistic回歸分析模型,變量賦值如表3所示,結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是STC2陽(yáng)性的獨(dú)立影響因素。見(jiàn)表4。

表3 變量賦值

表4 宮頸癌患者STC2陽(yáng)性表達(dá)多因素Logistic回歸分析

2.4宮頸癌患者癌組織標(biāo)本中STC2蛋白表達(dá)與OS、PFS相關(guān)性分析:STC2蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者OS、PFS分別為(12.44±2.21)個(gè)月、(6.42±1.03)個(gè)月,低于 STC2表達(dá)陰性患者的(22.15±2.72)個(gè)月、(13.59±1.21)個(gè)月,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=13.701,21.884,P<0.05)。經(jīng)過(guò)Pearson法分析顯示,STC2蛋白表達(dá)與OS、PFS均為負(fù)相關(guān)(r=-0.747,-0.683,P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 宮頸癌患者STC2表達(dá)與OS、PFS相關(guān)性分析

3 討 論

作為女性常見(jiàn)惡性腫瘤,宮頸癌病因明確,據(jù)統(tǒng)計(jì)約有90%以上由人乳頭瘤病毒感染引起[4],另外,多孕多產(chǎn)、免疫功能缺陷也會(huì)增加宮頸癌疾病風(fēng)險(xiǎn)[5]。目前,臨床關(guān)于宮頸癌的治療方案諸多,且較為成熟,多結(jié)合患者臨床分期、基礎(chǔ)情況,給予個(gè)體化、多學(xué)科治療,大部分患者尤其是早期患者經(jīng)規(guī)范化治療能夠獲得滿意的療效。但仍有部分患者在確診時(shí)已發(fā)展至中晚期,甚至出現(xiàn)了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,即便經(jīng)過(guò)放化療也難免會(huì)存在病灶殘留、復(fù)發(fā)。為提升宮頸癌診療水平,醫(yī)學(xué)界將目光投向?qū)m頸癌腫瘤標(biāo)志物研究,以求獲得新的突破。

作為一種新型腫瘤標(biāo)記物,STC2最早由國(guó)外學(xué)者在硬骨魚(yú)中發(fā)現(xiàn),屬于斯鈣素糖蛋白分泌激素家族的成員,人STC家族包括STC1、STC2,既往研究發(fā)現(xiàn)其在人體組織中廣泛存在[6],在機(jī)體多項(xiàng)生理功能中有一定的參與作用。STC2對(duì)炎癥、氧化應(yīng)激及神經(jīng)分化等病理進(jìn)程具有一定的調(diào)控作用,近年來(lái)學(xué)者開(kāi)始傾向于對(duì)STC2與腫瘤關(guān)系的研究,并證實(shí)其能夠?qū)δ[瘤惡性程度予以反映,與腫瘤患者治療過(guò)程中的耐藥也具有相關(guān)性[7-8],但其在宮頸癌中的表達(dá)研究較少。本研究宮頸癌組STC2 mRNA明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示STC2 mRNA在宮頸癌中表達(dá)量高。

作為斯鈣素亞型的一種,STC2基因主要在染色體5q35上表達(dá),STC2在C4-1、MS751等宮頸癌細(xì)胞中為高表達(dá),過(guò)表達(dá)會(huì)對(duì)癌細(xì)胞增殖起到促進(jìn)作用,STC2低表達(dá)則會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖起到抑制作用。STC2對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡是通過(guò)MAPK信號(hào)通路活動(dòng)實(shí)現(xiàn)的[9]。本研究檢測(cè)了宮頸癌組織中STC2 mRNA,顯示均較癌旁組織高,表明STC2在宮頸癌組織中表達(dá)量明顯較高。STC2在內(nèi)臟及骨骼肌中均有一定的表達(dá),但含量較低,當(dāng)發(fā)生惡性腫瘤后STC2表達(dá)會(huì)呈現(xiàn)出異常升高。

本研究經(jīng)過(guò)多因素Logistic回歸分析,顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是STC2陽(yáng)性的獨(dú)立影響因素。提示STC2陽(yáng)性表達(dá)可能是宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的重要分子事件,會(huì)導(dǎo)致宮頸癌惡性腫瘤的增加,當(dāng)STC2表達(dá)水平升高應(yīng)警惕細(xì)胞分化程度降低、增殖,可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤的進(jìn)展或轉(zhuǎn)移[10-11]。另外,患者預(yù)后評(píng)估也是腫瘤標(biāo)志物重要的功能之一,本研究隨訪患者預(yù)后情況,并分析了STC2與患者生存情況的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)STC2陽(yáng)性組5年OS、PFS低于STC2陰性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Pearson分析顯示STC2表達(dá)與OS、PFS均為負(fù)相關(guān)(r=-0.747,-0.683,P<0.05)。提示STC2表達(dá)可作為宮頸癌患者預(yù)后評(píng)估及預(yù)測(cè)的重要指標(biāo)。但由于研究時(shí)間有限,收集樣本過(guò)少,且未能針對(duì)STC2在宮頸癌效應(yīng)中機(jī)制進(jìn)行深入分析,需要進(jìn)一步探討。

綜上所述,STC2在宮頸癌組織中表達(dá)量高于癌旁組織,并且與年齡、腫瘤直徑、病理分型、浸潤(rùn)深度、分化程度、TNM分期無(wú)關(guān),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),應(yīng)予以高度重視。