金貝散結顆粒制粒工藝研究

余利珊，袁偉彬，吳涵

廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院藥學部，廣東 廣州 510378

中藥顆粒劑是在中醫(yī)理論指導下，遵循傳統(tǒng)用藥經驗，以臨床療效為向導，結合現(xiàn)代制藥技術對中藥材及飲片進行特殊加工的一種新劑型，其具有質量穩(wěn)定、用藥依從性高，攜帶、保存方便等優(yōu)點。金貝散結顆粒處方是根據廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院婦科李坤寅教授的臨床經驗方擬定，方由生牡蠣、荔枝核、雞內金、青皮等組成，有行氣散結、活血化瘀、軟堅化結的功效。目前，廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院婦科臨床多用其治療寒凝血瘀、痰瘀互結、阻滯經絡所致子宮肌瘤、乳腺增生、卵巢囊腫等疾病，療效突出，患者用藥后反饋良好。本研究為了服藥方便，提高患者服藥依從性，便于攜帶和保存，考慮將湯劑制成顆粒劑。當前，顆粒劑通常采用干法制粒、濕法制粒等方法制備，因濕法制粒的產物具有外形美觀、流動性好、耐磨性較強等優(yōu)點，在中藥制劑制備中被廣泛應用[1-2]。另外，根據需求不同，顆粒劑可加入不同種類的多種或單一輔料，如稀釋劑、粘合劑、分散劑、著色劑以及矯味劑等[3]。故本研究對金貝散結顆粒制備工藝進行研究，篩選出最佳輔料種類和用量，確保質量穩(wěn)定、療效確切，從而更好地服務于臨床。

1 材料與儀器

1.1 材料生牡蠣（生產批號201101）、荔枝核（生產批號210101）、青皮（生產批號201101）、雞內金（生產批號210101）、醋鱉甲（生產批號201001）、化橘紅（生產批號200301）、浙貝母（生產批號201201）、黃芪（生產批號201101）、續(xù)斷（生產批號2010001）均購自廣州至信中藥飲片有限公司，醋莪術（生產批號2103001）、烏藥（生產批號2012001）購自嶺南中藥飲片有限公司。糊精（生產批號20201201，湖南九典宏陽制藥有限公司）、可溶性淀粉（生產批號201101，安徽山河藥用輔料股份有限公司）和糖粉（生產批號20201105，廣州市耀宏食品有限公司），95%乙醇（生產批號20210104，天津市大茂化學試劑廠）。

1.2 儀器設備千分之一分析天平（JA1103，上海民橋電子儀器廠），恒溫烘箱（DHG-9140，上?？普苌萍加邢薰荆D蒸發(fā)儀冷卻循環(huán)系統(tǒng)（RC 2B SO25，IKA 集團），標準樣篩（浙江上虞市道墟五四儀器沙篩廠）。

2 方法與結果

2.1 中藥清膏的制備處方：生牡蠣30 g，荔枝核20 g，醋莪術、浙貝母、黃芪、醋鱉甲、續(xù)斷、烏藥各15 g，雞內金、化橘紅、青皮各10 g。根據處方準確稱?。荷迪? g，荔枝核2 g，醋莪術、浙貝母、黃芪、醋鱉甲、續(xù)斷、烏藥各1.5 g，雞內金、化橘紅、青皮各1 g。置圓底燒瓶，每次加5 倍水，加熱回流提取3 次，時間分別為1 h、45 min、45 min，合并提取液，置蒸發(fā)皿中濃縮至相對密度約為1.10，停止加熱，放冷，加入適量95%乙醇，快速攪拌，使含醇量達到55%，置陰涼間靜置48 h，取上清液，至旋轉蒸發(fā)儀回收乙醇至提取液無醇味，提取液繼續(xù)濃縮至相對密度1.30～1.35（測定溫度50～60 ℃），待用。

2.2 濕法制粒根據實驗設計，取2.1 項下的清膏與輔料糊精、淀粉和糖粉混合均勻，以乙醇作為濕潤劑，適量噴灑，直至軟材達到“手握成團，輕觸即散”的狀態(tài)，用14 目篩手動擠壓制粒，置恒溫烘箱65 ℃干燥2.5 h，用于指標測定。

2.3 測定指標參考文獻[4-5]，通過成型率、堆密度、休止角3 項指標來評價成型顆粒的質量，運用加權評分法分析實驗結果，定義成型率加權系數(shù)為0.4，休止角、堆密度加權系數(shù)分別為0.3，加權總評分值=（成型率/最大成型率×0.4+最小休止角/休止角×0.3+堆密度/最大堆密度×0.3）×100。

2.3.1 成型率測定依據中國藥典，采用雙篩分法[6]，將干燥后的顆粒收集稱重，記m1；先過一號篩，將全部通過一號篩的顆粒再過五號篩，收集能過一號篩不能過五號篩的顆粒，稱重，記為m2。顆粒的成型率（%）=m1/m2×100%。

2.3.2 堆密度測定參考文獻[7]，準確稱取樣品顆粒10 g，置于干燥的25 mL 量筒中，輕敲震動一定時間，使顆粒體積不再變化，讀出其體積毫升數(shù)（mL），記為v。堆密度（g/mL）=10/v。

2.3.3 休止角測定采用固定漏斗法[8]測定休止角。利用鐵架臺，將3 只相同干燥玻璃漏斗串聯(lián)固定，前兩個漏斗的出口端口要接觸到下一個漏斗的壁上，使顆?？梢赃B續(xù)滑落，最下面漏斗的出口設置離桌面2 cm，桌面上鋪好畫有刻度的坐標紙，將試驗制備好的顆粒緩慢勻速從最上面的漏斗加入，觀察下面顆粒的堆積高度，直到顆粒的頂部接觸到最下面的漏斗口時停止。測量坐標紙上圓錐形顆粒的底部直徑，計為L。休止角α 按公式計算，tanα=4/L。

2.4 輔料用量篩選輔料的用量，應根據清膏的相對密度、黏性強弱相應作出調整。選擇清膏與輔料配比分別為1∶1、1∶2、1∶3，用2.2 項下方法制粒，并進行評價。結果顯示，當輔料為單一品種時，不管是以糊精還是糖粉做輔料，清膏與輔料比例小于1∶3 時，軟材都有相似狀態(tài)：濕度大，黏性大，制粒時粘連篩網，難以制粒。當比例達到1∶3 時，軟材濕度達到“手握成團，輕觸即散”要求，易通過篩網、制粒容易、顆粒成型率較高。見表1。

表1 輔料用量考察

2.5 輔料種類考察參考文獻[9]，水溶性顆粒成型工藝常用的輔料有糊精、糖粉、可溶性淀粉。按照2.4 項下清膏與輔料的比例，改變任意2 種輔料的用量配比，用2.2 項下方法制粒，進行成型狀態(tài)考察。結果顯示，輔料糊精用量配比大時，制得軟材硬度大、黏性大、結塊、制粒困難、顆粒成型率低。隨著糊精用量減少，硬度和黏性均有改善，故選擇糖粉和可溶性淀粉作為輔料。見表2。

表2 輔料種類篩選

2.6 正交試驗

2.6.1 正交設計根據2.4、2.5 項下結果，以清膏∶輔料、輔料A（可溶性淀粉）∶輔料B（糖粉）、乙醇濃度、乙醇用量（乙醇重量∶輔料重量）為考察因素，進行四因素三水平L9（43）正交試驗，設計表見表3。

表3 正交設計表

2.6.2 正交試驗結果見表4。按正交設計工藝依次進行試驗，計算綜合得分。

2.6.3 正交數(shù)據處理正交試驗的結果采用SPSS17.0軟件處理數(shù)據，對正交結果進行直觀分析和方差分析，直觀分析見表5～8。通過直觀分析，可見A3＞A2＞A1、 B1＞B3＞B2、 C3＞C1＞C2、 D3＞D1＞D2。方差分析顯示，因素A、B、C、D 的P值均小于0.05，故最佳組合是A3B1C3D3。因為A2 與A3均值分別是87.332 與88.571，差異不大，從含藥量角度考慮，要求盡可能提高含藥量，保證療效，故考慮將浸膏與輔料比例設定為1∶3，即最優(yōu)工藝組合為A2B1C3D3，即清膏∶輔料為1∶3，輔料A∶輔料B 為1∶1，95%乙醇用量5%。

表6 輔料A∶輔料B（B）

表7 乙醇用量（C）

表8 乙醇濃度（D）

2.7 驗證實驗見表9。對所確定的制粒工藝參數(shù)即清膏∶輔料為1∶3；輔料A∶輔料B 為1∶1；95%乙醇用量為5%的可靠性與重現(xiàn)性進行驗證，計算得分，并與正交9 組試驗進行比較。驗證實驗平行制備3 份。結果可見，優(yōu)選工藝驗證試驗3 組制得顆粒評價綜合得分均高于正交9 組試驗，故而優(yōu)選制粒工藝可靠，且重現(xiàn)性好。

表9 驗證試驗

2.8 溶化性考察參照2020 年版《中華人民共和國藥典》[6]可溶性顆粒檢查法，取2.7 項下顆粒3 份，每份10 g，加熱水200 mL，攪拌5 min，立即觀察，可溶性顆粒全部溶化。

3 討論

顆粒劑制備工藝直接影響顆粒的成型質量，實驗結果表明，金貝散結顆粒工藝為清膏∶輔料為1∶3、輔料A∶輔料B 為1∶1、95%乙醇用量為5%。在此工藝項下制得的顆粒成型率、流動性都是正交各組實驗中得分最佳，且溶化性考察符合藥典要求，并且通過3 組驗證實驗，重現(xiàn)性和穩(wěn)定性都好，故實驗所得工藝穩(wěn)定可靠。

影響顆粒成型的眾多因素中，輔料的種類是顆粒劑制粒工藝的關鍵因素之一。目前，顆粒劑最常用的輔料為糖粉和糊精。本實驗中，由表2 直觀可得，選取糊精與淀粉或糊精與糖粉作混合輔料時，糊精在輔料中占比越大，制得軟材硬度越大，黏性也越大，更易結塊，制粒越困難，顆粒成型率越低；隨著糊精用量減少，硬度和黏性均有改善。這是因為實驗中水提醇沉工藝下，醇沉乙醇濃度低，所得清膏中仍然含有大部分的多糖和鞣質、蛋白質等物質，黏性非常大，而糊精是淀粉的水解產物，黏性比其他輔料都大很多，故而導致制得軟材黏、硬結，達不到制粒要求，因此不選擇糊精作為本實驗的輔料。而可溶性淀粉的流動性較好、粘性較小，故而用可溶性淀粉為輔料之一。中藥顆粒劑的制備中，輔料的用量和種類可根據清膏的相對密度、黏性強弱做適當調整，一般清膏、輔料比例為1∶4，輔料總量一般不超過清膏量的5 倍。本實驗結果表明，從含藥量角度考慮，在顆粒成型性好的前提下，輔料用量越少，含藥量越高。當實驗中清膏∶輔料為1∶3 時，制粒成型率高，選擇清膏與輔料的比例在1∶3 左右進行正交試驗。

水提醇沉是顆粒劑制備過程中純化的關鍵步驟，所用醇沉的乙醇濃度極大地影響有效成分的含量。因金貝散結顆粒處方中有牡蠣、鱉甲、雞內金，其有效成分無機鹽和蛋白質與療效密切相關。有實驗表明，當含醇量為50%～60%時可除去淀粉等雜質；含醇達60%時，無機鹽開始被沉淀[10]。故本實驗醇沉工藝乙醇濃度設定為55%，既能沉淀大量淀粉提高含藥量，又能盡可能保存無機鹽、蛋白質等有效成分，保證療效。醇沉操作時，應將乙醇緩慢加入清膏中，并快速攪拌，避免有效成分被雜質顆粒包裹而被一起沉出，影響藥效。在生產中，水提醇沉操作時，調整清膏乙醇含量時，常規(guī)操作是將一定濃度的乙醇加入清膏中，攪拌均勻靜止后用乙醇計測定乙醇濃度。但是，因為乙醇計的使用標準溫度為20 ℃，測量藥液乙醇濃度時，如果溫度不是20 ℃，就必須作溫度校正[11]。因而用乙醇計直接在含醇的藥液中直接測量的方法不太方便且有誤差。同時考慮到實際生產中對清膏和濃乙醇體積的用量取法很不方便，因而本實驗基于生產操作便利，乙醇用量改以重量計，以乙醇與輔料總重的比例設置正交試驗。

因實驗室條件限制，未對現(xiàn)有的不同的制粒方法進行考究，只選取了最常用的濕法制粒來研究。金貝散結顆粒濕法制粒的最佳工藝為清膏∶輔料為1∶3、輔料A∶輔料B 為1∶1、95%乙醇用量為5%。后期應繼續(xù)完善干法制粒、噴霧制粒等制粒方法的工藝篩選，進行對比實驗。