β‐1，3‐葡聚糖內(nèi)切酶合成、制備及應(yīng)用研究進展

方炯浩，劉瑜，吳宇簫，段濤，陳杰，肖湲，周林

（1.廣東藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院/廣東省藥物新劑型重點實驗室與廣東省局部精準藥物遞藥制劑工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510006；2.廣東丸美生物技術(shù)股份有限公司，廣東 廣州 510700）

β-葡聚糖是一種非淀粉多糖，由D-葡萄糖通過β‐糖苷鍵連接形成。β-葡聚糖包括熱凝膠多糖、裂褶多糖、大麥β-葡聚糖以及酵母β-葡聚糖等，廣泛存在于酵母、真菌、細菌、海藻和谷物中，不同來源的β-葡聚糖的線性結(jié)構(gòu)和分支組成存在差異[1]。β-葡聚糖一般由β‐1，3 糖苷鍵構(gòu)成，并含有不同數(shù)量的β-1，4 和β-1，6 糖苷鍵；而纖維素僅由β-1，4 糖苷鍵形成，因此β-葡聚糖一般不包括纖維素[2]。研究表明，β-葡聚糖能夠改善身體的健康狀況和預(yù)防慢性疾病，對糖尿病、肥胖、癌癥、高膽固醇血癥等都具有一定的預(yù)防和治療作用[3]，但目前大多數(shù)的β-葡聚糖因為分子量過大導(dǎo)致水溶性低，影響其生產(chǎn)工藝和生物活性，限制了β-葡聚糖在食品醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用[4?6]。

β-葡聚糖酶是一類能降解β-葡聚糖的水解酶的總稱，根據(jù)其水解多糖中糖苷鍵的位置，可以分為內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶。主要包括內(nèi)切和外切β‐1，3‐葡聚糖酶、β‐1，3（4）-葡聚糖酶、內(nèi)切和外切β-1，4-葡聚糖酶。其中β‐1，3-葡聚糖酶是負責β-葡聚糖分解的主要酶。內(nèi)切β‐1，3‐葡聚糖酶隨機對β-1-3糖苷鍵進行切割，最終產(chǎn)物主要為低聚β-葡聚糖，而外切β‐1，3‐葡聚糖酶則從多糖的非還原端進行切割，最終產(chǎn)物主要為葡萄糖[7]。目前已發(fā)現(xiàn)的β-葡聚糖主要通過β‐1，3 糖苷鍵構(gòu)成主鏈，利用β-1，3-葡聚糖內(nèi)切酶能夠大量制備低分子量葡聚糖，因此β-1-3葡聚糖內(nèi)切酶是制備低分子量葡聚糖的關(guān)鍵酶。β‐1，3-葡聚糖內(nèi)切酶的生產(chǎn)方法主要有微生物發(fā)酵法與提取分離法。提取分離法是直接從動物或植物中提取，但效率較低，且酶學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，難以進行分離純化，因此目前較為常用的方法是微生物發(fā)酵法。該方法能夠?qū)ξ⑸镞M行基因修飾，從而提高酶活性及穩(wěn)定性，且制備的β-葡聚糖酶的純度高，有利于大規(guī)模生產(chǎn)[8]。但目前β‐1，3‐葡聚糖內(nèi)切酶仍存在酶活性不高、表達量低等問題，生產(chǎn)成本居高不下，限制了其大規(guī)模的應(yīng)用。如何通過β-葡聚糖酶高效制備低分子量β-葡聚糖及其生物活性的研究成為解決問題的關(guān)鍵。因此，以下主要針對β‐1，3-葡聚糖內(nèi)切酶的相關(guān)研究及其進展進行介紹。

1 β-1,3-葡聚糖內(nèi)切酶的合成調(diào)節(jié)

在通常情況下，β-葡聚糖酶的產(chǎn)量受到相應(yīng)的合成機制的調(diào)控，如果要大幅度提高酶產(chǎn)量，可以利用基因改造等手段進行高產(chǎn)菌株的構(gòu)建，或是在酶的發(fā)酵生產(chǎn)過程中，通過添加誘導(dǎo)物、控制阻遏物濃度、添加產(chǎn)酶促進劑等，其中控制阻遏物濃度和添加誘導(dǎo)劑可以通過抑制阻遏蛋白的表達，最終提高β-葡聚糖酶的產(chǎn)量（圖1）。具體來說，研究人員通過對核糖體結(jié)合位點（ribosomebinding site，RBS）序列進行優(yōu)化后，獲得了β‐1，3‐葡聚糖內(nèi)切酶表達水平較高的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），這是因為RBS 是翻譯起始和蛋白質(zhì)表達的關(guān)鍵控制元件，RBS 序列的優(yōu)化能夠提高β-葡聚糖酶的產(chǎn)量[9?10]。此外，添加某些碳源或金屬離子作為誘導(dǎo)劑或調(diào)節(jié)劑能夠調(diào)節(jié)酶的合成，提高酶的產(chǎn)量[11]，Adeoyo 等[12]研究了鈉、鉀、鋅、錳、鈷等金屬離子對真菌產(chǎn)內(nèi)切葡聚糖酶的影響，發(fā)現(xiàn)添加鈉離子和鉀離子的培養(yǎng)基能有效提高內(nèi)切葡聚糖酶的分泌，而鈷離子則會顯著降低其分泌，這表明添加金屬離子將對代謝調(diào)控的作用機制產(chǎn)生影響，其中部分金屬離子能夠作為提高內(nèi)切葡聚糖酶分泌的產(chǎn)酶促進劑，但具體的機制尚不明確。

圖1 提高β‐葡聚糖酶產(chǎn)量的措施Figure 1 Measures for increase of β-glucanase yield

2 β-1,3-葡聚糖內(nèi)切酶的制備

目前，通過從自然界中大量篩選的方法獲得更多具有高酶活性和穩(wěn)定性的β-葡聚糖酶以及高產(chǎn)的菌株是一種有效的辦法，但因其低產(chǎn)率、低酶活性等原因，具有一定的局限性，利用基因修飾、異源表達以及固定化方法能夠獲得高穩(wěn)定性、高酶活性的β-1，3-葡聚糖內(nèi)切酶，也是目前科研人員較為常用的方法。結(jié)合現(xiàn)有研究歸納，圖2 列出了目前β-葡聚糖酶的主要研究方向[13?39]。

圖2 β‐葡聚糖酶的主要研究方向Figure 2 Main research directions of endo-β-1，3 glucanase

2.1 β-1,3葡聚糖內(nèi)切酶的來源及篩選

通過對大分子葡聚糖的降解或修飾，能夠明顯改善葡聚糖的溶解性和提高生物活性[40]。傳統(tǒng)的低分子量β-葡聚糖生產(chǎn)方法主要是對葡聚糖β-糖苷鍵進行物理、化學(xué)和酶降解。通過降解的方法得到的產(chǎn)物，其基本結(jié)構(gòu)單元并未發(fā)生改變，只是聚合度發(fā)生了變化，因而生物活性也未被破壞[41]。利用β-葡聚糖的酶法生物降解具有較高的專一性，能夠選擇性地切斷糖苷鍵，反應(yīng)條件較為溫和，是一種較為理想的生產(chǎn)低分子量葡聚糖的方法，具有較高的研究和應(yīng)用價值。表1列舉了10種不同微生物來源的β-1，3-葡聚糖內(nèi)切酶，介紹了其分子量大小、切割的糖苷鍵類型、不同底物以及對應(yīng)的酶活性。目前，通過從自然界中篩選性能優(yōu)良的生物菌株是獲得具有高產(chǎn)量、高活性和熱穩(wěn)定性β-1，3-葡聚糖內(nèi)切酶的一種重要手段。在大自然這種獨特而復(fù)雜的進化環(huán)境中，野生菌株的篩選始終是不可或缺的。

表1 不同微生物來源的β-葡聚糖酶的酶學(xué)特性Table 1 Enzyme properties of β-glucanase from different sources

2.2 β-1,3-葡聚糖內(nèi)切酶的修飾

基因修飾和化學(xué)修飾是目前較為有效的酶改造方法，通過改變β-葡聚糖酶的編碼序列或在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中引入不同的基團，在一定程度上能提高β-葡聚糖酶的活性、pH 穩(wěn)定性和耐熱性，從而提高其利用率，降低酶的使用成本。Gao 等[23]利用易錯PCR 方法對β‐1，3‐葡聚糖酶基因BGN13.1a進行突變，并將突變后的基因?qū)胨拗骶?。篩選出的突變酶具有更高的pH 穩(wěn)定性和耐熱性，以熱凝膠多糖為底物時，其酶活性提高了1.15 倍。Miao 等[24]利用從極端嗜熱古細菌（Hyperthermophile）得到的C2模塊插入到內(nèi)切β-1，4-葡聚糖酶CMCase-I 蛋白的N 端或C 端，產(chǎn)生C2-CMCase-I，CMCase-I-C2 和C2-CMCase-I-C2。研究發(fā)現(xiàn)，C2-CMCase-I在50°C時活性減少一半所需時間是野生型CMCase-I 的1.53 倍，這是因為C2-CMCase-I 產(chǎn)生了一個新的β折疊結(jié)構(gòu)，從而增強了酶的耐熱性。Lee JM 等[25]則通過將堿基序列上特定的氨基酸替換為疏水基團，實現(xiàn)β-葡聚糖酶活性和熱穩(wěn)定性的提高。研究人員將賴氨酸（Lys）和丙氨酸（Ala）或亮氨酸（Leu）進行替換后，經(jīng)過熱力學(xué)和動力學(xué)參數(shù)的比較，發(fā)現(xiàn)突變型酶相比野生型酶在酶活性和熱穩(wěn)定性都有不同程度的提高（圖2）。

2.3 β-1,3-葡聚糖內(nèi)切酶的異源表達

天然途徑獲得β-葡聚糖酶，產(chǎn)量通常較低。通過在合適的微生物宿主中進行異源表達β-葡聚糖酶，可以顯著提高其產(chǎn)量，有利于降低生產(chǎn)成本，并推動其工業(yè)化應(yīng)用。 例如，Borshchevskaya 等[26]從短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus Meyer and Gottheil）提取了一個內(nèi)切β-l，3（4）-葡聚糖酶的基因bgl1，并以畢赤酵母為宿主進行表達。不僅提高了產(chǎn)量，還使重組蛋白bgl1 的活性和穩(wěn)定性都有較大提高。Gao 等[27]在綿羊瘤胃微生物群中分離出2 個新的葡聚糖酶基因IDSGluc5-26 和IDSGluc5-37，通過大腸桿菌進行異源表達后，其中IDSGLUC5-26在酸性條件下表現(xiàn)出相當大的穩(wěn)定性，IDSGLUC5-37 對大麥β-葡聚糖表現(xiàn)出比原菌株更高的活性。Zhou 等[28]同樣以畢赤酵母（Pichia pastoris）為異源宿主，將從炭疽桿菌（Bacillus anthracis）分離得到的β-葡聚糖酶基因CoCel5A進行異源表達。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)切葡聚糖酶CoCel5A在55°C 溫度下具有更高的熱穩(wěn)定性。上述研究表明，通過異源宿主的代謝表達后，不僅能夠提高β-葡聚糖的產(chǎn)量，還能在一定程度上提高酶的活性和熱穩(wěn)定性，因此宿主菌株的選擇也十分重要（圖2）。

目前，常用的異源宿主細胞包括大腸桿菌（Escherichia coli）和畢赤酵母，其中畢赤酵母是目前最為成功的真核蛋白表達系統(tǒng)之一，具備高效啟動子、翻譯后的修飾能力、高分泌效率、低培養(yǎng)成本、成熟的發(fā)酵工藝和易于擴大培養(yǎng)等優(yōu)點，適合用于工業(yè)化生產(chǎn)[29]。然而，構(gòu)建高效的底盤宿主細胞仍存在4 個主要的挑戰(zhàn)，包括基因生產(chǎn)模塊的識別，如何選擇最合適的宿主細胞進行改造，重建和優(yōu)化復(fù)雜的代謝網(wǎng)絡(luò)以及如何高效分泌所需產(chǎn)品[30]。因此，今后的研究重點將集中在如何篩選和優(yōu)化異源表達宿主及其培養(yǎng)條件，構(gòu)建高效的β-葡聚糖酶表達系統(tǒng)也將會是研究的重點?？傊?，隨著對異源表達機制的研究深入，人們必將找到更加有效的方法來提高β-葡聚糖酶的產(chǎn)量，優(yōu)化其催化性能，從而實現(xiàn)β-葡聚糖酶產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。

2.4 β-1,3-葡聚糖內(nèi)切酶的固定化

酶的固定化技術(shù)是指通過物理或化學(xué)的方法將游離酶束縛在一定空間或固定在不溶性載體上，從而限制游離酶自由流動并使其能長時間發(fā)揮催化作用，同時可以進行回收利用的一種生物技術(shù)[31]。而酶降解方法具有一些不利的缺點，包括對苛刻的環(huán)境條件敏感、再生以及再循環(huán)過程中的困難。固定化能夠幫助酶克服惡劣條件，并在工業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域發(fā)揮重要的作用[32?33]。固定化β-葡聚糖酶，可以提高其穩(wěn)定性、催化效率和可重復(fù)使用性。此外，固定化β-葡聚糖酶還能在不同反應(yīng)條件下的應(yīng)用，并以高催化活性工作，減少酶促降解過程的預(yù)算，從而提高其應(yīng)用范圍和效率[34?35]。華承偉等[36]利用環(huán)氧型SEPABEADS EC 載體對β‐1，3‐葡聚糖酶進行共價固定化后，與游離酶相比，熱穩(wěn)定性和pH值穩(wěn)定性均有明顯提高。El-Shora等[37]則使用卡拉膠和殼聚糖進行交聯(lián)固定化，不僅穩(wěn)定性有了提高，而且便于回收重復(fù)利用。研究人員還利用固定化的β-葡聚糖酶制備低分子量的大麥β-葡聚糖，而且在重復(fù)利用10次之后，其酶活性仍具有初始酶活的42%[38]。以上實驗證明，固定化β-葡聚糖酶在低分子量葡聚糖的生產(chǎn)上有著巨大的優(yōu)勢，能夠有效解決β-葡聚糖酶的重復(fù)利用的問題，產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟效益（圖2）。此外，隨著酶固定化的納米載體、金屬有機骨架材料以及定向修飾固定技術(shù)的發(fā)展[39]，β-葡聚糖酶的工業(yè)化應(yīng)用獲得了巨大的機會，也成為當前科學(xué)家研究的熱點領(lǐng)域。

3 β-1,3-葡聚糖內(nèi)切酶在低分子量葡聚糖制備中的應(yīng)用

目前，β‐1，3‐葡聚糖內(nèi)切酶已經(jīng)在食品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域都有了較為廣泛的應(yīng)用，包括對果蔬進行抗真菌處理、制備酵母原生質(zhì)體、清除生物被膜以及制備低分子量葡聚糖[42]。低分子量葡聚糖因其具有抗氧化及抗腫瘤等生物活性，而受到各國科研學(xué)者的廣泛關(guān)注。

3.1 低分子量β-葡聚糖的研究現(xiàn)狀

目前尚無關(guān)于低分子量葡聚糖的明確定義。根據(jù)現(xiàn)有文獻報道，與分子量達到十萬、百萬級別的葡聚糖相比，低分子量葡聚糖的分子量通常在幾百或幾千Da之間[43?44]。根據(jù)我國2016版《戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)重點產(chǎn)品和服務(wù)指導(dǎo)目錄》指出，微生物多糖是生物行業(yè)中重要的開發(fā)產(chǎn)品。低分子量葡聚糖的生物活性目前是研究的熱點，不同分子量的β-葡聚糖具有不同的生物活性，在許多領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。圖3總結(jié)了低分子量葡聚糖的多種生物活性及其在不同領(lǐng)域的應(yīng)用。例如裂褶多糖（schizo‐phyllan，SPG）是一種非離子型的水溶性高聚葡萄糖，以1，3-β-D‐吡喃葡萄糖單元為主鏈，β-1，6 糖苷鍵為支鏈。 在高分子量時，SPG 具有極高的黏度，抑制了其生物活性，而低分子量的SPG 具有明顯的免疫調(diào)節(jié)活性，相較于高分子量SPG，低分子量的SPG 能更顯著地促進人體特異性免疫反應(yīng)和相關(guān)細胞因子的釋放[45?46]。此外，不同分子量的葡聚糖對人體健康狀態(tài)產(chǎn)生不同的影響[47]。例如，不同分子量的燕麥β-葡聚糖會導(dǎo)致糞便中膽汁酸含量的變化，高分子量的燕麥β-葡聚糖會增加糞便中膽汁酸的含量，而低分子量的則相反。糞便中膽汁酸過多是腹瀉型腸易激綜合征（diarrhea-predominant irritable bowel syndrome，IBS-D）的發(fā)病機制之一，顯然，低分子量的燕麥β-葡聚糖對于維護腸道健康具有積極意義[48?49]。此外，低分子量β-葡聚糖還具有抗氧化性、保濕、抗腫瘤、抗菌等[50?51]生物活性，已經(jīng)逐步應(yīng)用于日用品、化妝品、生物醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)肥料等領(lǐng)域，成為研究的熱點領(lǐng)域。通過降解法得到的低分子量β‐1，3‐葡聚糖具有獨特的生理生化活性而吸引了各國研究人員的廣泛關(guān)注。

圖3 低分子量葡聚糖在不同領(lǐng)域的應(yīng)用Figure 3 Application of low molecular weight glucan in different fields

3.2 低分子量葡聚糖的制備方法

目前，國內(nèi)外制備低分子量葡聚糖的研究主要集中在物理、化學(xué)和酶降解方面。物理降解一般通過超聲或其他物理條件對高分子的葡聚糖溶液進行處理，從而獲得低分子量的葡聚糖。例如，Liang等[52]通過超聲的方式獲得了較低分子量的熱凝膠多糖，并顯著提高了其溶解度。但物理降解法產(chǎn)率相對較低，生產(chǎn)成本較高，難以進行大規(guī)模生產(chǎn)[4]?；瘜W(xué)降解則使用鹽酸、硫酸以及過氧化氫等試劑[53?54]，通過斷裂糖苷鍵的方式得到低分子量葡聚糖。研究人員將酵母β-葡聚糖溶于45%的硫酸溶液中，經(jīng)過3 h 的酸處理后，得到了低分子量的酵母β-葡聚糖，并提高了其水溶性[55]。由于化學(xué)降解通常需加入強酸、強堿或強氧化性的化學(xué)溶劑使分子間的糖苷鍵斷裂，在過程中會產(chǎn)生大量的有機廢液，造成環(huán)境污染，也不利于工業(yè)化生產(chǎn)。在另一項研究中，Duan 等[56]則利用酶降解的方法將海帶多糖進行水解，獲得了分子量在360～900 Dal 的低分子量海帶多糖。酶降解是利用發(fā)酵獲得的多糖或直接使用多糖粉末制成水溶液，然后加入β-葡聚糖進行水解，經(jīng)過分離提純等一系列步驟后，最終完成低分子量葡聚糖的制備（圖4）。酶解法具有溫和高效及低污染的特點，但其制備的工藝還有待進一步優(yōu)化，產(chǎn)生更大的經(jīng)濟效益。

圖4 低分子量葡聚糖制備的一般流程Figure 4 General procedures for the preparation of low molecular weight glucan

3.3 低分子量葡聚糖的酶解法制備工藝優(yōu)化

酶解反應(yīng)是現(xiàn)階段制備低分子量葡聚糖的較為理想方法。但通過單一菌株發(fā)酵產(chǎn)生多糖后，再利用β-葡聚糖解進行酶解制備寡糖的方法往往效率低。由于葡聚糖的水不溶性，水解酶無法充分發(fā)揮作用然而，微生物共培養(yǎng)的出現(xiàn)很大程度上為這些問題提供了解決方案。共培養(yǎng)是指2 個或2 個以上不同有機體在自然或合成培養(yǎng)基中共同生長的一種生物系統(tǒng)[58]。通過共培養(yǎng)發(fā)酵，能在產(chǎn)生高分子β-葡聚糖的體系中，同時由另一種微生物產(chǎn)生β-葡聚糖酶來對前者進行酶解，這既能夠有效克服直接利用酶水解多糖時效率不高的問題，同時還能在一定程度上降低生產(chǎn)成本、簡化操作和縮短生產(chǎn)周期等。 例如，Wu 等[59]將能夠分泌內(nèi)切β‐1，3-葡聚糖酶的哈茨木霉（Trichoderma ha.zianum）分別與分泌硬葡聚糖的齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）以及分泌裂褶多糖的裂褶菌（Schizophyllum commune Fr.）進行共培養(yǎng)，成功建立了利用哈茨木霉的共培養(yǎng)體系，最終得到了分子量為850～2 000 Da 的低分子量硬葡聚糖和分子量為850～2 500 Dal 的低分子量裂褶多糖。Gao 等[60]則將來自哈茨木霉的內(nèi)切β‐1，3‐葡聚糖酶基因通過畢赤酵母進行表達，然后與能產(chǎn)生熱凝膠多糖的農(nóng)桿菌（Agrobacterium）建立共培養(yǎng)體系，當畢赤酵母和農(nóng)桿菌的接種比（菌種含量或濃度）為2∶1 時，在7 L 發(fā)酵罐中達到的最高產(chǎn)率達到了18.77 g/L，并且得到了分子量為500～1 700 Da的低分子量熱凝膠多糖。

與傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝相比，共培養(yǎng)發(fā)酵步驟相對簡單且效率更高，有望能夠取代傳統(tǒng)的生產(chǎn)步驟。然而，目前共培養(yǎng)發(fā)酵還存在一些問題，例如兩種微生物的接種比例、接種時間以及底物是否適合多種微生物的生長共培養(yǎng)等[61?62]。而且系統(tǒng)的微小變化可能會改變整個微生物系統(tǒng)的行為，破壞協(xié)同平衡的穩(wěn)定狀態(tài)，導(dǎo)致產(chǎn)品損失[63]。這需要更加靈敏的實時監(jiān)控設(shè)備，例如嘗試使用拉曼光譜生物過程分析系統(tǒng)監(jiān)控發(fā)酵進程。另外，可以利用合成生物學(xué)和代謝工程的方法對所需要的共培養(yǎng)菌株進行修飾，以提高它們個體的能力以及對底物的利用[61]。

4 展望

綜上所述，低分子量的β-葡聚糖因其獨特的生理活性，受到了越來越多科研人員的關(guān)注。然而，生產(chǎn)過程中存在的各種問題嚴重限制了其工業(yè)化生產(chǎn)和商業(yè)化。在低分子量葡聚糖的工業(yè)化生產(chǎn)中，酶解法具有溫和、高效以及不污染環(huán)境等特點，展現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢。因此，開發(fā)具有高酶活性、高熱穩(wěn)定性和高pH 耐受性的β-葡聚糖酶成為解決問題的關(guān)鍵。目前，β-葡聚糖酶的產(chǎn)酶菌株的篩選和β-葡聚糖酶基因的修飾和異源表達都取得了一定的進展。采用酶的理性設(shè)計和定向進化能夠為高活性的β‐1，3-葡聚糖酶的制備奠定基礎(chǔ)，因為催化口袋中氨基酸的結(jié)構(gòu)改變可能增強酶與底物的相互作用，從而間接提高了β‐1，3‐葡聚糖酶的活性。此外，Cas9 技術(shù)與合成生物學(xué)的結(jié)合為β‐1，3-葡聚糖酶在宿主菌中增強表達提供了強大的助力。由于酵母、枯草芽孢桿菌等表達系統(tǒng)可使β‐1，3-葡聚糖酶胞外分泌，將更利于β‐1，3-葡聚糖酶分離純化，提高葡聚糖酶的產(chǎn)量。然而，這仍然不能滿足醫(yī)藥化工等多個領(lǐng)域應(yīng)用的需求?？梢灶A(yù)期，隨著合成生物學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)、基因組學(xué)以及代謝工程等技術(shù)的發(fā)展，對β-葡聚糖酶代謝調(diào)控機制的研究將進一步深入，低分子量葡聚糖的生產(chǎn)技術(shù)將取得實質(zhì)性突破。