基于UHPLC-Q-TOF/MS 技術(shù)分析腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物促進巨核細(xì)胞分化的效應(yīng)成分

張鐘康，盧曉南，盧震，胡佳，劉慧珍，盧婷，尚廣彬（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)基礎(chǔ)理論分化發(fā)展中心，江西 南昌 000；2.江西省中醫(yī)病因生物學(xué)重點實驗室，江西 南昌 000；.江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 000；.江西中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 000）

免疫性血小板減少癥（Immune thrombocytopenia，ITP）是一種因血小板自身抗原免疫耐受性丟失，導(dǎo)致巨核細(xì)胞分化成熟障礙和血小板破壞增多的自身免疫性疾病[1]，近年來其發(fā)病率逐漸上升，約占臨床出血性疾病的1/3[2]。目前ITP 的主要治療藥物及措施是腎上腺皮質(zhì)激素、免疫抑制劑以及脾臟切除術(shù)等[3]，但存在藥物依賴性及不良反應(yīng)，容易形成難治性ITP[4]。中醫(yī)藥在治療ITP 方面具有一定優(yōu)勢[5-7]，多種中藥或復(fù)方對ITP具有較好的治療效果[8-10]。

ITP 屬于中醫(yī)學(xué)的“紫癜”[11]范疇，主要病機為臟腑功能失調(diào)、氣血運行紊亂，以出血為主要癥候表現(xiàn)[12]。金粟蘭科草珊瑚屬植物腫節(jié)風(fēng)具有活血化瘀、涼血止血的功效，可用于治療紫癜[13]。本課題組前期研究[14]通過體外實驗證明腫節(jié)風(fēng)及其提取物具有促進血小板生成的作用。臨床研究[15]發(fā)現(xiàn)，腫節(jié)風(fēng)聯(lián)合小劑量強的松治療ITP 能更有效地提高血小板計數(shù)及T-淋巴細(xì)胞亞群水平，還可降低強的松引起的毒副作用。但腫節(jié)風(fēng)治療ITP 的藥效物質(zhì)仍不清晰，是限制其臨床使用的主要原因之一。

傳統(tǒng)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究通常采取先分離后篩選的方式，但無法從整體上體現(xiàn)中藥“多成分、多靶點”的特性[16]。而近年來興起的中藥血清藥物化學(xué)是一種對含藥血清或血漿進行分析的研究方法，能直觀反映中藥被吸收入血的成分，在簡化中藥分析體系的同時能維持中藥的整體性[17-19]。同時，采用不同時間點采集含藥血漿的方式，能夠全面體現(xiàn)中藥成分在體內(nèi)的動態(tài)變化過程[20]。因此，本研究擬首先采用超高效液相色譜-四極桿串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜法（UHPLC-Q-TOF/MS）對腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿進行峰值提??；然后，以人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞（Dami）與人骨髓基質(zhì)細(xì)胞（HS-5）共培養(yǎng)的方式建立巨核細(xì)胞分化障礙模型，并以此作為評價體系；最后，通過量效關(guān)系以偏最小二乘法（Partial least squares，PLS）計算分析出主要效應(yīng)成分，并通過回歸評價體系驗證其藥效，以期闡明腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物治療ITP的主要效應(yīng)成分。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞（Dami）、人骨髓基質(zhì)細(xì)胞（HS-5），均購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。

1.2 動物8周齡雄性SD 大鼠49只，SPF級，體質(zhì)量（180±20）g，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2019-0004。本動物實驗經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會審批，批準(zhǔn)文號：JZLLSC20220843。

1.3 藥物及試劑佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA，批號：SLCL5743），美國Sigma公司；兔抗大鼠血小板血清（APS）以及腫節(jié)風(fēng)總黃酮均為實驗室前期制備[21]，腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物以蘆丁作為對照檢測總黃酮含量為78.53%[22]。迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖（Ros，批號：wkq22082607）、胡蘿卜苷（Dau，批號：wkq22082503），均購于四川維克奇生物科技有限公司； RPMI Medium 1640 培養(yǎng)基（批號：8121738），美國Gibco 公司；胎牛血清（批號：22010701），浙江天杭生物科技有限公司；CD41a-PE（批號：E14074-104）、CD61-FITC（批號：2301151）抗體，均購于美國eBioscience 公司；二甲基亞砜（DMSO，批號：1209MO34），北京索萊寶生物科技公司。

1.4 主要儀器Waters Acquity UPLC 液相色譜系統(tǒng)、Q-TOF SYNAPT G2 HDMS 質(zhì)譜儀，美國Waters 公司；SL8R 型臺式冷凍離心機、SPD131DDA-P1-230型離心濃縮系統(tǒng)、Forma 3111 型恒溫CO2培養(yǎng)箱，美國Thermo Fisher 科技公司；Moflo XDP 流式細(xì)胞儀，美國Beckman Coulter公司。

1.5 建立Dami＋HS-5 細(xì)胞共培養(yǎng)體系的巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型分別取處于對數(shù)生長期的Dami細(xì)胞5×104個與HS-5 細(xì)胞2×105個；將HS-5 細(xì)胞混懸于2 mL 培養(yǎng)基并接種于Transwell 共培養(yǎng)板下層；將Dami細(xì)胞混懸于1 mL 培養(yǎng)基并接種于共培養(yǎng)板上層。利用終濃度為5 ng·mL-1的PMA 和體積分?jǐn)?shù)為1%的APS 聯(lián)合作用于共培養(yǎng)模型，藥物在接種的同時混入下層培養(yǎng)基。實驗分組：Dami 組（Dami）、對照組（Dami+HS-5）、PMA 組（Dami+HS-5+5 ng·mL-1PMA）、模型組（Dami+HS-5+1% APS+5 ng·mL-1PMA），接種后置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測共培養(yǎng)細(xì)胞模型相關(guān)表面分子的表達(dá)水平“1.5”項下細(xì)胞模型建立48 h 后，將Dami 細(xì)胞收集至2 mL離心管，PBS離心清洗2次。用500 μL PBS 重懸細(xì)胞，再加入5 μL CD41a-PE、CD61-FITC 染液，混勻后室溫下避光染色30 min。離心去除多余染液，重懸后使用200目細(xì)胞篩網(wǎng)進行過濾。采用Moflo XDP 流式細(xì)胞儀檢測巨核細(xì)胞分化成熟表面標(biāo)記分子CD41a、CD61 的表達(dá)情況。采用FlowJo vX軟件對結(jié)果進行分析，實驗重復(fù)3次。

1.7 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿的制備取49 只SD 雄性大鼠，隨機分為空白血漿組、15 min組、30 min 組、60 min 組、90 min 組、120 min 組、240 min 組，每組7 只。給藥前禁食不禁水12 h，各給藥組大鼠灌胃腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物1.26 g·kg-1，空白血漿組給予等劑量生理鹽水灌胃。給藥后，在6個設(shè)定時間點（15、30、60、90、120、240 min）采用戊巴比妥鈉（20 mg·kg-1）腹腔注射麻醉大鼠，進行腹主動脈取血；置于肝素鈉抗凝試管中，室溫下靜置2 h；然后以4 ℃、2 800×g離心15 min；取上清液于56 ℃滅活30 min，0.22 μm 濾膜過濾除菌，-80 ℃保存、備用。

1.8 血漿樣品前處理取100 μL 血漿樣品，加入300 μL 甲醇，渦旋混勻30 s，4 ℃下恒溫靜置3 h后，以4 ℃、14 000×g離心15 min；取200 μL 上清液于離心管中，進行真空離心濃縮2 h；濃縮后加200 μL 水-甲醇溶液（水∶甲醇=85∶15）復(fù)溶，渦旋混勻30 s，再以相同條件離心15 min；取100 μL 上清液于進樣小瓶，待測。

1.9 色譜條件色譜柱：Waters-UPLC-T3柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm），柱溫：40 ℃，流動相為0.1%甲酸-水溶液（A）-乙腈（B）；采用梯度洗脫方式（洗脫條件：0～2 min，1% B；2～26 min，1%～99% B；26～28 min，99% B；28～30 min，99%～90% B；30～30.1 min，90%～1% B；30.1～32 min，1% B），正、負(fù)離子模式下相同；流速：0.1 mL·min-1；進樣量：3 μL。

1.10 質(zhì)譜條件電離源（ESI）溫度：100 ℃；錐孔氣流速：50 L·h-1；去溶劑氣溫度：400 ℃；流速：800 L·h-1。正、負(fù)離子模式下，毛細(xì)管電壓分別為3.0、2.5 kV，錐孔電壓為40 V，質(zhì)量數(shù)采集范圍：50～1 000 Da。為確保質(zhì)量的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，采集過程通過亮氨酸腦啡肽進行實時質(zhì)量校正。串聯(lián)質(zhì)譜碰撞氣為氬氣，低碰撞能：4 eV，高碰撞能：20～40 eV。為保證整個分析系統(tǒng)的穩(wěn)定性，實驗過程中使用質(zhì)控（Quality control，QC）樣品進行方法學(xué)驗證，QC 樣品由每個樣品各取10 μL 混合而得，每檢測6個樣品后穿插采集1次QC樣品。

1.11 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿中的化學(xué)成分隨時間變化量矩陣（X 矩陣）的建立采用MassLynx V4.1 軟件對樣品進行數(shù)據(jù)信號采集，通過Progenesis QI 軟件對所采集的數(shù)據(jù)進行峰提取處理，生成化合物統(tǒng)一候選列表。以空白血漿組所采集的信號變量為空值，其他組該變量（不為空值的變量）作為效應(yīng)成分進行研究，并以m/z@保留時間（例如：373.722 5@11.32）表示變量化合物，以其峰面積構(gòu)建量矩陣（X矩陣）。

1.12 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿效應(yīng)矩陣（Y矩陣）的建立基于“1.5”項下所建立的巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型，將所采集的6個不同時間點的腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿進行稀釋后加藥干預(yù)，設(shè)置對照組、PMA 組、模型組、空白血漿組、15 min 組、30 min 組、60 min 組、90 min 組、120 min 組以及240 min 組。按組別設(shè)置添加相應(yīng)試劑以及經(jīng)時含藥血漿，其中經(jīng)時含藥血漿與空白血漿占比為15%；接種后置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h；同“1.6”項下方法，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子CD41a、CD61的表達(dá)水平。

1.13 數(shù)據(jù)采集與處理通過檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP，http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）、中國知網(wǎng)（https：//www.cnki.net）、Scifinder（https：//scifinder-n.cas.org）、Pubmed（https：//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov）、Web of Science（https：//www.webof?science.com）等數(shù)據(jù)庫及相關(guān)文獻，建立腫節(jié)風(fēng)化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫。對X 矩陣和Y 矩陣數(shù)據(jù)進行標(biāo)準(zhǔn)化處理，導(dǎo)入SIMCA-P 軟件進行PLS 建模。以變量重要性投影（Variable importance for projection，VIP）＞1為閾值，篩選與細(xì)胞表面分子CD41a、CD61 變化相關(guān)的效應(yīng)成分。將VIP＞1 的效應(yīng)成分通過Progen?esis QI 軟件及自建腫節(jié)風(fēng)化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫進行化學(xué)成分鑒定，作為腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物中促進巨核細(xì)胞分化的潛在效應(yīng)成分。

1.14 流式細(xì)胞術(shù)檢測潛在效應(yīng)成分對共培養(yǎng)模型中巨核細(xì)胞分化相關(guān)表面分子的影響將適量迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖（Ros）、胡蘿卜苷（Dau）分別使用DMSO配制為母液，再用超純水配至適合濃度。基于“1.5”項下所建立的巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型，將ROS、Dau 分別按低、中、高劑量（40、60、80 μg·mL-1）分組干預(yù)；置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h；同“1.6”項下方法，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子CD41a、CD61的表達(dá)量。

1.15 統(tǒng)計學(xué)處理方法采用GraphPad Prism 8.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析；計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 檢驗；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 共培養(yǎng)體系下巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型表面標(biāo)記分子CD41a、CD61 的表達(dá)情況結(jié)果見圖1。與Dami 組比較，對照組Dami 細(xì)胞表面的CD41a 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與對照組比較，PMA 組Dami 細(xì)胞表面的CD41a、CD61 表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）。與PMA 組比較，模型組Dami 細(xì)胞表面的CD41a、CD61 表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，Dami、HS-5 兩種細(xì)胞共培養(yǎng)能夠模擬骨髓微環(huán)境以促進巨核細(xì)胞分化，并且在共培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上利用PMA、APS 誘導(dǎo)可成功建立巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型。

圖1 PMA 及APS 對巨核細(xì)胞表面分子CD41a、CD61 表達(dá)的影響（±s，n=3）Figure 1 Effects of PMA and APS on the expression of surface molecules CD41a and CD61 in megakaryocytes（±s，n=3）

2.2 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿中的化學(xué)成分隨時間變化量矩陣（X 矩陣）的建立通過峰面積反映腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿中各化學(xué)成分的含量，總離子流圖見圖2。正、負(fù)離子模式下不同時間點的腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿中的化學(xué)成分隨時間變化量矩陣（X矩陣）見表1、表2。

表1 正離子模式下腫節(jié)風(fēng)總黃酮經(jīng)時含藥血漿中的化學(xué)成分隨時間變化量矩陣（X 矩陣）Table 1 The time-dependent change matrix（X matrix）of chemical constituents in time-dependent plasma containing total flavonoids extracts of Sarcandra glabra in the positive ion mode

表2 負(fù)離子模式下腫節(jié)風(fēng)總黃酮經(jīng)時含藥血漿中的化學(xué)成分隨時間變化量矩陣（X 矩陣）Table 2 The time-dependent change matrix（X matrix）of chemical constituents in time-dependent plasma containing total flavonoids extracts of Sarcandra glabra in the negative ion mode

圖2 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿總離子流圖Figure 2 Total ion chromatogram of time-dependent plasma containing total flavonoids extracts of Sarcandra glabra

2.3 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿隨時間變化效應(yīng)矩陣（Y 矩陣）的建立結(jié)果見圖3。巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型細(xì)胞經(jīng)腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿干預(yù)后，與空白血漿組比較，15、30、60、90、120、240 min 各時間點Dami 細(xì)胞表面分子CD41a、CD61 表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01），且CD41a、CD61 均在30 min 組表達(dá)水平最高。結(jié)果表明，腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物促進巨核細(xì)胞分化成熟的作用會隨著入血時間變化而波動，存在消長過程，并且在30 min的相關(guān)性最強。

圖3 腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿對巨核細(xì)胞表面分子CD41a、CD61 表達(dá)的影響（±s，n=3）Figure 3 Effects of time-dependent plasma containing total flavonoids extracts of Sarcandra glabra on the expression of surface molecules CD41a and CD61 in megakaryocytes（±s，n=3）

2.4 X 矩陣與Y 矩陣數(shù)據(jù)的PLS 相關(guān)分析將X 矩陣和Y 矩陣數(shù)據(jù)進行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，導(dǎo)入SIMCA-P軟件進行PLS建模，得出正、負(fù)離子模式下腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿中化學(xué)成分的VIP值，結(jié)果見圖4。通過Progenesis QI 軟件對VIP＞1 的信號采集數(shù)據(jù)進行處理，根據(jù)各化合物的保留時間及一、二級質(zhì)譜碎片信息，結(jié)合HMDB 5.0 等在線數(shù)據(jù)庫，參考相關(guān)文獻和自建腫節(jié)風(fēng)化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫，推測出可能的化合物。根據(jù)VIP值大小以及參考相關(guān)文獻綜合篩選，選取540.363 8@12.25 與559.299 1@11.53 兩個成分進行藥效學(xué)驗證。其中，559.299 1@11.53 被鑒定為胡蘿卜苷（Daucosterol，Dau），對應(yīng)在正離子模式下[M+H-H2O]+加合形式值；540.363 8@12.25 被鑒定為迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖（Rosmarinic acid 4-O-β-D-glucoside，Ros），對應(yīng)在正離子模式下[M+NH4]+加合形式值[23-25]。

圖4 正、負(fù)離子模式下腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿中化學(xué)成分的VIP 值Figure 4 VIP value of chemical constituents of time-dependent plasma containing total flavonoids extracts of Sarcandra glabra under positive and negative ion modes

2.5 Dau、Ros 對巨核細(xì)胞表面分子CD41a、CD61表達(dá)的影響結(jié)果見圖5。巨核細(xì)胞分化成熟障礙模型經(jīng)Ros、Dau 分別干預(yù)后，與模型組比較，Ros 及Dau低、中、高劑量組Dami細(xì)胞表面的CD41a、CD61表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，Ros、Dau兩種活性成分都能夠有效促進巨核細(xì)胞分化。

圖5 胡蘿卜苷（Dau）、迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖（Ros）對巨核細(xì)胞表面分子CD41a、CD61 表達(dá)的影響（±s，n=3）Figure 5 Effects of Daucosterol（Dau）and Rosmarinic acid 4-O-β-D-glucoside（Ros）on the expression of surface molecules CD41a and CD61 in megakaryocytes（±s，n=3）

3 討論

巨核細(xì)胞分化障礙是免疫性血小板減少癥（ITP）的特征性改變，也是其發(fā)病和治療的關(guān)鍵[26]。巨核細(xì)胞分化必須在特定的骨髓微環(huán)境中有序進行，而這個過程與微環(huán)境中的骨髓基質(zhì)細(xì)胞密切相關(guān)。骨髓基質(zhì)細(xì)胞是構(gòu)成骨髓微環(huán)境網(wǎng)架結(jié)構(gòu)的重要組成部分，能夠支持、保護以及調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞的增殖與分化[27]，在巨核細(xì)胞分化成血小板過程中發(fā)揮重要作用。過往關(guān)于ITP 的藥效學(xué)研究中，巨核細(xì)胞分化障礙模型通常僅由單一細(xì)胞構(gòu)成[28-29]，未能體現(xiàn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞及微環(huán)境對巨核細(xì)胞分化的影響[30]。因此，本研究采用骨髓基質(zhì)細(xì)胞HS-5與巨核細(xì)胞Dami共培養(yǎng)以模擬體內(nèi)骨髓微環(huán)境。結(jié)果顯示，與Dami 細(xì)胞單獨培養(yǎng)相比，HS-5+Dami 共培養(yǎng)體系中巨核細(xì)胞表面分子CD41a 的表達(dá)水平明顯升高，說明骨髓基質(zhì)細(xì)胞對巨核細(xì)胞分化有較強促進作用。由于抗血小板自身抗體與骨髓中巨核細(xì)胞結(jié)合能導(dǎo)致其分化成熟受阻[31]，故本研究通過在HS-5+Dami 共培養(yǎng)體系中添加含抗血小板抗體血清（APS）來建立體外巨核細(xì)胞分化障礙模型[32]。結(jié)果顯示，與PMA 組比較，模型組共培養(yǎng)體系中巨核細(xì)胞表面分子CD41a、CD61的表達(dá)水平顯著降低，表明成功構(gòu)建了體外巨核細(xì)胞分化障礙模型。該模型可為巨核細(xì)胞分化障礙相關(guān)藥效學(xué)研究及效應(yīng)成分篩選提供更加合理的評價體系。

中藥效應(yīng)成分篩選一直是中藥研究的關(guān)鍵步驟，然而傳統(tǒng)的中藥效應(yīng)成分研究多采用先化學(xué)分離后藥理驗證的模式，存在耗時長、工作量巨大、效率低的缺陷，也未能關(guān)注中藥效應(yīng)成分在體內(nèi)的動態(tài)變化過程，該篩選方式亟待優(yōu)化升級[33]。本研究采用經(jīng)時含藥血漿的方式代替以往中藥提取物進行化學(xué)成分分析，能夠體現(xiàn)中藥成分在血液中隨時間的移行變化。利用UHPLC-Q-TOF/MS 技術(shù)將不同時間點動態(tài)變化的腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物各入血成分的“量”與其促巨核細(xì)胞分化的“效”進行關(guān)聯(lián)，并通過PLS 模型進行量效關(guān)系分析，對效應(yīng)成分進行VIP值計算。VIP 值＞1 可認(rèn)為相應(yīng)成分對模型有顯著貢獻，可以作為潛在效應(yīng)成分進行化學(xué)成分鑒定。最后，將潛在效應(yīng)成分中VIP 值最高的Dau 以及為驗證自建數(shù)據(jù)庫準(zhǔn)確性而選擇的Ros作用于巨核細(xì)胞分化障礙模型，驗證實驗結(jié)果表明兩種化學(xué)成分都能顯著促進巨核細(xì)胞的分化，初步揭示了腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物促進巨核細(xì)胞分化的效應(yīng)成分。但相關(guān)效應(yīng)成分對共培養(yǎng)體系中巨核細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的影響及具體分子機制還有待深入探索。

綜上所述，本研究建立了Dami與HS-5共培養(yǎng)的巨核細(xì)胞分化障礙模型，采用UHPLC-Q-TOF/MS 技術(shù)對腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物經(jīng)時含藥血漿進行分析，通過PLS模型進行量效關(guān)系分析，篩選得到與細(xì)胞表面分子CD41a、CD61 變化相關(guān)的迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖（Ros）與胡蘿卜苷（Dau），其可能為腫節(jié)風(fēng)總黃酮提取物促進巨核細(xì)胞分化的效應(yīng)成分。