QuEChERS-LC-MS/MS法測(cè)定櫻桃中63種農(nóng)藥殘留量

于曉慧,李俏,魏愛(ài)云

(1.山東特檢科技有限公司,山東 濟(jì)南 250000;2.方圓標(biāo)志檢驗(yàn)檢測(cè)(山東)有限公司,山東 濟(jì)南 250100)

近幾年來(lái),隨著休閑農(nóng)業(yè)發(fā)展,種植櫻桃的農(nóng)戶數(shù)量增加、種植面積單位擴(kuò)大,當(dāng)前市面流通買賣的櫻桃質(zhì)量也隨之下降,并且櫻桃特別容易發(fā)生病害,農(nóng)藥的不合理使用,給農(nóng)藥殘留帶來(lái)超標(biāo)風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)在對(duì)于農(nóng)業(yè)質(zhì)量的要求越來(lái)越嚴(yán)格,對(duì)水果中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)工作也越來(lái)越重視。目前現(xiàn)有的農(nóng)藥殘留分析包括樣品前處理和儀器數(shù)據(jù)檢測(cè)兩部分,農(nóng)藥的殘留分析是一項(xiàng)對(duì)復(fù)雜混合物中痕量組分進(jìn)行分析的手段。目前常見(jiàn)的樣品前處理新技術(shù)有加速溶劑萃取法[1-3]、微波萃取法[4-5]、固相微萃取[6-7]、分子印跡萃取技術(shù)[8-9]、QuEChERS法[10-12]等。農(nóng)藥殘留檢測(cè)常用的分析技術(shù)有HPLC法[13]、GC[14]、LC-MS/MS[15-16]、GC-MS法[15]。本研究前處理參照QuEChERS前處理技術(shù)的分散固相萃取法,使用山東美正生物科技有限公司的SpeedTest-QuEChERS凈化包,對(duì)樣品進(jìn)行凈化后上機(jī)操作,該前處理操作簡(jiǎn)單便捷、省時(shí)間、經(jīng)濟(jì)廉價(jià)、準(zhǔn)確度高,結(jié)合HPLC-MS/MS的高選擇性、高靈敏度和強(qiáng)抗干擾能力等特點(diǎn),建立QuEChERS-HPLC-MS/MS快速測(cè)定櫻桃中63種農(nóng)藥殘留的分析方法。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、重現(xiàn)性好、分析速度快,適用于櫻桃中農(nóng)藥多殘留的同時(shí)檢測(cè),為櫻桃農(nóng)藥殘留的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供了技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器設(shè)備:SHIMADZU LC-MS/MS 8045三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀,上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;JA31002型電子天平,博科BK-180J型超聲波清洗器,北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司;UMV-1型多管旋渦混合器,湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司;KL04A型離心機(jī)。

試劑和耗材:山東美正生物科技有限公司SpeedTest-QuEChERS凈化包,甲醇、乙腈(色譜純、fisher),一級(jí)水(屈臣氏),甲酸(色譜級(jí)、fisher),櫻桃(超市購(gòu)買),63種農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)品100 μg/mL(壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心),50 mL聚乙烯離心管。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液配制:分別精確移取63種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用乙腈稀釋成質(zhì)量濃度為2 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液,于-18 ℃冰箱保存,待用(有效期為3個(gè)月)。

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:用空白基質(zhì)溶液將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液逐級(jí)稀釋為1,5,10,20,30,50,100,200 μg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品的制備及提取

檢測(cè)樣品制備:取櫻桃樣品食用部分,搗碎,最后搗成勻漿,保存條件為零下20 ℃到零下16 ℃,待用。在進(jìn)行前處理稱取樣品時(shí),需要對(duì)已經(jīng)冷凍好的樣品進(jìn)行完全解凍,待櫻桃樣品放置常溫后,使櫻桃樣品混勻后取樣。

檢測(cè)樣品提取:準(zhǔn)確稱取櫻桃樣品20 g(精確至0.01 g)于聚乙烯的50 mL帶蓋離心管中,精確加入20 mL乙腈試劑,擰好離心管蓋,在旋渦機(jī)上,渦旋3 min,在離心管中加入5 g氯化鈉,擰好離心管蓋,渦旋混勻,放置超聲機(jī)中,超聲提取,提取時(shí)間為30 min,超聲完成后,以8 000 r/min的轉(zhuǎn)速,離心5 min,用一次性塑料吸管吸取上層提取液5～10 mL,置于SpeedTest-QuEChERS管中,混勻,4 000 r/min離心3 min,取上層清液,過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣小瓶中,待測(cè)。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 色譜條件

色譜柱:Shim-pack GIST C1-AQ HP (100 mm×2.1 mm,1.9 μm);儀器柱溫:40 ℃;流動(dòng)相流速:0.25 mL/min;儀器進(jìn)樣量:2 μL;流動(dòng)相:A=2 mmol/L甲酸銨0.01%甲酸水;B=2 mmol/L甲酸銨甲醇;梯度洗脫條件:0.01～0.4 min:6%(2 mmol/L甲酸銨甲醇);0.41～1.3 min:6%～45%(甲酸銨甲醇);1.31～3.0 min:45%～85%(甲酸銨甲醇); 3.01～6.0 min:86%～96%(甲酸銨甲醇);6.01～8.0 min:96%(甲酸銨甲醇);8.01～9.00 min:6%(甲酸銨甲醇)。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子源:電噴霧離子源;掃描方式:正負(fù)離子同時(shí)掃描;采集方式:MRM;離子源接口電壓:+4.5 kV;-3.5 kV;碰撞氣:氬氣;離子傳輸管溫度:200 ℃;接口溫度:250 ℃;加熱模塊溫度:350 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、回歸方程、相關(guān)系數(shù)與方法檢出限

用1.4所述的檢測(cè)方法測(cè)定基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(現(xiàn)用現(xiàn)配),進(jìn)行線性回歸處理,測(cè)定的63種農(nóng)藥在1.0～200 μg/L范圍內(nèi)展現(xiàn)出很好的線性關(guān)系,綜合63種物質(zhì)相關(guān)系數(shù)均在0.996 1～0.999 9,儀器所測(cè)得到63種物質(zhì)方法定量限,定量限低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的限量值,見(jiàn)表1。

2.2 回收率和精密度

本試驗(yàn)采用在空白櫻桃樣品(不含有63種目標(biāo)物質(zhì))中加標(biāo)的方法進(jìn)行此方法的精密度和回收率的驗(yàn)證。準(zhǔn)確稱取18個(gè)空白櫻桃樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),以3水平濃度進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),測(cè)試樣品含量為20,50,100 μg/kg的,每個(gè)水平做6組加標(biāo)試驗(yàn),按照上述的1.3和1.4進(jìn)行前處理和儀器分析測(cè)定,結(jié)果表明,在20,50,100 μg/kg的3水平濃度下,櫻桃中63種化合物的回收率分別為76.9%～106.7%,63種物質(zhì)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.76%～4.52%,回收率達(dá)到較高且穩(wěn)定的效果。

表1 63種農(nóng)藥的線性關(guān)系和定量限

2.3 實(shí)際樣品測(cè)定

隨機(jī)購(gòu)買附近市場(chǎng)或者超市的櫻桃樣品10份,按照該試驗(yàn)的方法進(jìn)行63種農(nóng)藥物質(zhì)殘留的測(cè)定,檢測(cè)得到的結(jié)果均符合農(nóng)藥殘留限量規(guī)定。本次檢測(cè)櫻桃樣品的63個(gè)農(nóng)殘參數(shù)中有32個(gè)農(nóng)藥品種殘留限量不作判定。31種物質(zhì)有殘留限量判定,其中腈菌唑、克百威的檢出率最高,有兩批櫻桃樣品接近限量值規(guī)定;多菌靈在10份櫻桃樣品中檢出率為40%;樂(lè)果、甲胺磷和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽這三種物質(zhì)檢出率為30%;甲霜靈、氧樂(lè)果兩種化合物檢出率為20%;吡唑嘧菌酯在櫻桃樣品中的檢出率為10%;10份櫻桃樣品均為合格樣品,其他農(nóng)藥參數(shù)均未測(cè)出數(shù)值。結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表2 10批櫻桃樣品的檢驗(yàn)結(jié)果及63種農(nóng)藥的最大殘留限量MRL

3 結(jié)論

本研究采用 QuEChERS 前處理結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)櫻桃中63種農(nóng)藥殘留,前處理參照QuEChERS前處理技術(shù)的分散固相萃取法,使用山東美正生物科技有限公司的SpeedTest-QuEChERS凈化包,63種農(nóng)藥在1.0～200 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.996,方法的定量限為 0.12～16.0 μg/kg。20,50和100 μg/kg三個(gè)添加水平的回收率在76.9%～106.7%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.76%～4.52%(n=6),本研究建立的方法具有前處理快速、目標(biāo)物提取效率高、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用到有機(jī)溶劑用量少、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、實(shí)驗(yàn)耗材少、成本低的優(yōu)點(diǎn),可以很好地應(yīng)用于大批量櫻桃樣品中多種農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)。