血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平對急性心肌梗死后心律失常的預(yù)測價(jià)值

馬姣,劉萍,李紅梅,李翀,王璞,肖懿慧

急性心肌梗死是由于冠狀動脈急性持續(xù)供血不足從而導(dǎo)致心肌缺血壞死,是一種臨床危重疾病[1-2]。大多數(shù)急性心肌梗死后,由于心臟交感神經(jīng)重構(gòu)和異常興奮,容易出現(xiàn)心律失常,其中超過10%的患者表現(xiàn)出嚴(yán)重的心律失常,進(jìn)一步可能引起致殘性腦卒中和心源性猝死[3-4]。因此,找到急性心肌梗死后心律失常的早期預(yù)測生物標(biāo)志物,有助于患者臨床治療策略的制定和預(yù)后改善。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)通過與DNA、mRNA、蛋白質(zhì)等互相作用,在各種生物過程中發(fā)揮重要功能[5]。lncRNA賴氨酰氧化酶樣1-反義RNA1(lysine oxidase like protein 1-antisense RNA1,LOXL1-AS1)參與細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡等多種生物學(xué)行為[6]。miRNA是一類在真核細(xì)胞中的內(nèi)源性小非編碼RNA,在血清中以高度穩(wěn)定的形式存在,可作為多種疾病的重要生物標(biāo)志物[7]。miR-3614-5p具有多種功能,可調(diào)節(jié)廣泛的生理活動,在不同類型的癌癥中均具有抗腫瘤作用[8]。本研究前期通過Target Scan Human網(wǎng)站預(yù)測,lncRNA LOXL1-AS1與miR-3614-5p存在靶向結(jié)合位點(diǎn),然而目前l(fā)ncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p在急性心肌梗死患者血清中的表達(dá)水平,以及對心律失常的預(yù)測價(jià)值仍未可知。因此,本研究通過qRT-PCR法檢測急性心肌梗死患者血清中l(wèi)ncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p的表達(dá)水平,分析二者聯(lián)合對急性心肌梗死后心律失常的預(yù)測價(jià)值,報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2021年1月—2023年1月西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院治療急性心肌梗死患者148例(急性心肌梗死組)作為研究對象,根據(jù)患者心電監(jiān)護(hù)結(jié)果,參照《室性心律失常中國專家共識》[9]中心律失常的判斷標(biāo)準(zhǔn),將患者再分為非心律失常亞組(n=96)和心律失常亞組(n=52)。急性心肌梗死患者心律失常亞組雙支/多支病變高于非心律失常亞組,左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)水平低于非心律失常亞組(P<0.01)。2亞組性別、年齡、冠心病、糖尿病、高血壓病、高脂血癥、左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。另選取同期與急性心肌梗死患者一般資料相匹配的健康體檢者148例為健康對照組。本研究經(jīng)醫(yī)院理論委員會批準(zhǔn)(2020-12-071),受試者及其家屬知情同意并簽署知情同意書。

表1 非心律失常亞組和心律失常亞組急性心肌梗死患者臨床資料比較Tab.1 Comparison of clinical data between non arrhythmic subgroups and arrhythmic subgroups in patients with acute myocardial infarction

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合急性心肌梗死相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[10];②心律失常患者經(jīng)過心電圖檢查確診。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①先天性心臟病患者;②惡性腫瘤患者;③近期有使用抗心律失常藥物患者;④既往存在心律失常史患者。

1.3 觀測指標(biāo)與方法

1.3.1 樣本收集:急性心肌梗死患者入院次日、健康對照組體檢當(dāng)日清晨,采集空腹肘靜脈血8～10 ml,離心留取血清后-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平檢測:采用TRIzol法提取上述血清總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)熒光定量試劑盒,在ABI 7500 Fast系統(tǒng)上進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR),擴(kuò)增條件為95℃ 10 min 1個(gè)循環(huán),95℃ 15 s、60℃60 s,共進(jìn)行40個(gè)循環(huán),檢測血清中l(wèi)ncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p的相對表達(dá)量。以GAPDH、U6作為內(nèi)參,根據(jù)2-△△Ct法計(jì)算lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p基因的相對表達(dá)量?；蛞镉缮虾Ｉど锕こ逃邢薰竞铣?序列見表2。

表2 血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p引物序列Tab.2 Serum lncRNA LOXL1-AS1, miR-3614-5p primer sequences

2 結(jié) 果

2.1 2組血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p表達(dá)水平比較 與健康對照組比較,急性心肌梗死組lncRNA LOXL1-AS1水平升高,miR-3614-5p水平降低(P<0.01),見表3。

表3 健康對照組與急性心肌梗死組血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p表達(dá)水平比較Tab.3 Comparison of serum lncRNA LOXL1-AS1 and miR-3614-5p expression levels between healthy control group and acute myocardial infarction group

2.2 急性心肌梗死患者2亞組血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p表達(dá)水平比較 急性心肌梗死患者心律失常亞組血清lncRNA LOXL1-AS1水平高于非心律失常亞組,miR-3614-5p水平低于非心律失常亞組(P<0.01),見表4。

表4 非心律失常亞組和心律失常亞組血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p表達(dá)水平比較Tab.4 Comparison of serum lncRNA LOXL1-AS1 and miR-3614-5p expression levels between non arrhythmia subgroups and arrhythmia subgroups

2.3 lncRNA LOXL1-AS1靶向miR-3614-5p的生物信息學(xué)分析 Target Scan Human網(wǎng)站預(yù)測結(jié)果顯示,lncRNA LOXL1-AS1與miR-3614-5p有靶向結(jié)合位點(diǎn),見圖1。

圖1 lncRNA LOXL1-AS1靶向miR-3614-5p的生物信息學(xué)分析Fig.1 Bioinformatics analysis of lncRNA LOXL1-AS1 targeting miR-3614-5p

2.4 多因素Logistic回歸分析急性心肌梗死后心律失常的影響因素 以急性心肌梗死后心律失常為因變量(心律失常=1,非心律失常=0),以lncRNA LOXL1-AS1(連續(xù)變量)、miR-3614-5p(連續(xù)變量)、病變血管支數(shù)(雙支/多支病變=1,單支病變=0)、LVEF(連續(xù)變量) 為自變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,lncRNA LOXL1-AS1高表達(dá)、病變血管支數(shù)多是急性心肌梗死后心律失常的危險(xiǎn)因素,而miR-3614-5p高、LVEF高是保護(hù)因素(P<0.05),見表5。

表5 多因素Logistic回歸分析急性心肌梗死后心律失常的影響因素Tab.5 Multivariate logistic regression analysis of the influencing factors of arrhythmia after acute myocardial infarction

2.5 血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p對急性心肌梗死后心律失常的預(yù)測價(jià)值 ROC曲線結(jié)果顯示:血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p及二者聯(lián)合的AUC分別為0.820、0.890、0.932,二者聯(lián)合預(yù)測急性心肌梗死后心律失常的AUC優(yōu)于血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p各自單獨(dú)預(yù)測(Z/P=3.470/0.001、 2.293/0.022),見表6、圖2。

圖2 血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p預(yù)測急性心肌梗死后心律失常的ROC曲線Fig.2 ROC curves of serum lncRNA LOXL1-AS1 and miR-3614-5p predicting arrhythmia after acute myocardial infarction

表6 血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p對急性心肌梗死后心律失常的預(yù)測價(jià)值Tab.6 Predictive value of serum lncRNA LOXL1-AS1 and miR-3614-5p for arrhythmia after acute myocardial infarction

3 討 論

急性心肌梗死是一種常見的心臟急癥,發(fā)病率逐年上升,患病人群呈年輕化趨勢,在中國每年超過100萬人由于心肌梗死導(dǎo)致死亡[11]。急性心肌梗死引起的室性心律失常是嚴(yán)重的并發(fā)癥,如果得不到有效的治療和護(hù)理,將嚴(yán)重影響心肌和其他臟器的血液供應(yīng),導(dǎo)致惡心嘔吐、休克等臨床癥狀,嚴(yán)重威脅患者的生活質(zhì)量和生命安全[12]。

目前關(guān)于lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p的研究比較少,且多集中在癌癥方面。lncRNA LOXL1-AS1是一種促癌基因,可以通過多種機(jī)制調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[13]。Gao等[14]發(fā)現(xiàn)lncRNA LOXL1-AS1在髓母細(xì)胞瘤組織中顯著過表達(dá),敲除lncRNA LOXL1-AS1可顯著抑制癌細(xì)胞增殖、遷移、細(xì)胞活力和集落形成能力,導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡。He等[15]發(fā)現(xiàn)缺氧/復(fù)氧處理后,lncRNA LOXL1-AS1高表達(dá),抑制lncRNA LOXL1-AS1的表達(dá)可以減少炎性細(xì)胞因子的釋放,下調(diào)細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白水平,抑制細(xì)胞焦亡,為心肌缺血和再灌注損傷的治療提供新的替代靶點(diǎn)。本研究顯示,急性心肌梗死患者血清lncRNA LOXL1-AS1水平顯著升高,lncRNA LOXL1-AS1在心律失常亞組患者血清中的表達(dá)水平顯著高于非心律失常亞組,提示lncRNA LOXL1-AS1可能通過增加炎性因子的釋放,導(dǎo)致細(xì)胞焦亡,促進(jìn)急性心肌梗死和心律失常的發(fā)生。

miR-3614-5p是一種抑癌基因,可調(diào)節(jié)廣泛的生理活動[16]。Han等[17]發(fā)現(xiàn)miR-3614-5p在結(jié)直腸癌中低表達(dá),miR-3614-5p的高表達(dá)增強(qiáng)了NKT細(xì)胞活化、負(fù)性T細(xì)胞選擇、對白介素2的反應(yīng)以及對腫瘤細(xì)胞的反應(yīng),是結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。Vuillier等[18]發(fā)現(xiàn)miR-3614-5p下調(diào)炎性細(xì)胞因子的表達(dá),在自身免疫中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn),血清miR-3614-5p在急性心肌梗死患者中表達(dá)水平顯著升高,且與非心律失常亞組比較,心律失常亞組miR-3614-5p表達(dá)水平顯著升高,提示其可能具有抑制炎性反應(yīng)的作用,可作為急性心肌梗死和心律失常的生物標(biāo)志物。

研究表明,lncRNAs可以作為miRNAs的負(fù)調(diào)節(jié)因子阻斷miRNAs與靶mRNAs的結(jié)合,并作為miRNAs的競爭性內(nèi)源性RNAs(ceRNAs)[19]。Huang等[20]發(fā)現(xiàn),lncRNAs可以與mRNAs廣泛連鎖并形成共表達(dá)網(wǎng)絡(luò),lncRNAs可能通過調(diào)控相應(yīng)的mRNAs調(diào)節(jié)炎性反應(yīng),影響2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展。Feng等[21]發(fā)現(xiàn)lncRNA LOXL1-AS1在肝細(xì)胞癌的癌細(xì)胞中高表達(dá),可以通過海綿化miR-3614-5p在調(diào)節(jié)肝細(xì)胞癌惡性行為中發(fā)揮重要作用。Zhang等[22]發(fā)現(xiàn),lncRNA LOXL1-AS1通過海綿化miR-3614-5p減輕冠狀動脈疾病心外膜脂肪組織的炎性反應(yīng)。本研究通過Target Scan Human網(wǎng)站預(yù)測結(jié)果顯示,lncRNA LOXL1-AS1與miR-3614-5p可能存在靶向關(guān)系;ROC曲線顯示lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p二者聯(lián)合預(yù)測急性心肌梗死后心律失常的AUC優(yōu)于單獨(dú)預(yù)測,提示lncRNA LOXL1-AS1可能靶向miR-3614-5p,通過海綿化miR-3614-5p進(jìn)一步加重炎性發(fā)應(yīng),導(dǎo)致急性心肌梗死患者發(fā)生心律失常。進(jìn)一步多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p、病變血管支數(shù)、LVEF是急性心肌梗死后心律失常的影響因素,提示lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p可能通過影響心臟功能,進(jìn)而影響疾病發(fā)展。

綜上所述,急性心肌梗死后心律失?；颊哐錶ncRNA LOXL1-AS1水平顯著升高,miR-3614-5p水平顯著降低,兩者聯(lián)合對急性心肌梗死后心律失常有較高的預(yù)測價(jià)值。然而lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p參與急性心肌梗死發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

馬姣、劉萍:設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過程,論文撰寫;李紅梅、王璞:提出研究思路,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),論文審核;李翀:實(shí)施研究過程,資料搜集整理,論文修改;肖懿慧:進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,課題設(shè)計(jì),論文撰寫