兒童上呼吸道感染咽拭子標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果及耐藥性分析＊

王銳杰 李璐璐

河南黃河科技學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 (河南 鄭州 450000)

上呼吸道感染(upper respiratory tract infection，URTI)是兒科常見且高發(fā)病，占兒科疾病的80%，5歲以下兒童更易反復(fù)發(fā)作，因低齡兒童呼吸系統(tǒng)發(fā)育不全，對(duì)外界刺激抵抗力較弱，相比于成年人更易受到病毒、細(xì)菌及微生物等感染。因URTI病因與發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床診治難度較大[1]。隨著制藥技術(shù)的提高抗菌藥物不斷推陳出新，抗生素藥物品類不斷增多，造成耐藥菌株種類頻增，加之抗生素濫用，抗菌藥物耐藥情況增多，影響臨床治療效果。咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)是URTI常規(guī)檢查項(xiàng)目，可盡早查出細(xì)菌定植，結(jié)合藥敏實(shí)驗(yàn)可為臨床診斷與后續(xù)治療抗生素選擇提供有力依據(jù)[2]。本研究對(duì)1053例URTI患兒進(jìn)行咽拭子標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)，分析其培養(yǎng)結(jié)果及耐藥性。

1 資料與方法

1.1 一般資料將2019年8月至2022年9月河南黃河科技學(xué)院附屬醫(yī)院收治的上呼吸道感染患兒1053例納入研究，男性患兒562例，女性患兒491例，年齡最小1月，最大10歲，平均(5.63±3.20)歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集、涂片與鏡檢 首先，使用接種環(huán)挑取患兒咽部膿性或帶血部分的分泌物制成涂片，革蘭染色，并在顯微鏡下觀察標(biāo)本質(zhì)量，根據(jù)白細(xì)胞及鱗狀上皮細(xì)胞的出現(xiàn)情況，評(píng)估咽拭子標(biāo)本合格與否。

1.2.2 咽拭子細(xì)菌培養(yǎng) 樣本培養(yǎng)嚴(yán)格按照檢驗(yàn)流程進(jìn)行：挑取咽拭子標(biāo)本接種于哥倫比亞血瓊脂平板(普通培養(yǎng)箱)、麥康凱平板(普通培養(yǎng)箱)、GC巧克力平板(5%～10% CO2培養(yǎng)箱，38℃)，經(jīng)過18～24 h培養(yǎng)。

1.2.3 細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn) 使用珠海迪爾生物工程有限公司自動(dòng)微生物鑒定儀及藥敏分析系統(tǒng)鑒定菌株，藥敏試劑條與上述鑒定試劑相配套，藥敏結(jié)果根據(jù)最小抑菌濃度及美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)判斷。

1.2.4 質(zhì)控菌株選擇為金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.3 觀察指標(biāo)分析咽拭子標(biāo)本涂片質(zhì)量、細(xì)菌分布、主要病原菌耐藥率情況。咽拭子標(biāo)本涂片質(zhì)量根據(jù)《臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作》將采集的咽拭子分為A、B、C、D共4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如下：白細(xì)胞>25n/LP，鱗狀上皮細(xì)胞<10n/LP為A級(jí)；白細(xì)胞>25n/LP，鱗狀上皮細(xì)胞<25n/LP為B級(jí)；白細(xì)胞處于10-25n/LP之間，鱗狀上皮細(xì)胞<25n/LP為C級(jí)；白細(xì)胞<10n/LP，鱗狀上皮細(xì)胞>25n/LP為D級(jí)。

2 結(jié) 果

2.1 咽拭子標(biāo)本涂片質(zhì)量咽拭子標(biāo)本涂片質(zhì)量中，A級(jí)共125例，陽性率49.6%；B級(jí)共531例，陽性率16.01%；C級(jí)共305例，陽性率6.23%；D級(jí)92例，陽性率1.09%。如下表1所示：

表1 咽拭子標(biāo)本涂片質(zhì)量

2.2 URTI患兒咽拭子細(xì)菌分布情況1053例咽拭子標(biāo)本檢出陽性167例，檢出率為15.86%(167/1053)，其中革蘭陽性菌檢出121株，檢出率為72.46%(121/167)，革蘭陰性菌檢出46株，檢出率為27.54%(46/167)。本次無真菌檢出。革蘭陽性菌中金黃色葡萄球菌檢出率最高，為88.43%、革蘭陰性菌中大腸埃希菌檢出率最高，為43.48%。見表2。

表2 URTI患兒咽拭子細(xì)菌分布情況[n(%)]

表3 病原菌耐藥情況

2.3 病原菌耐藥情況金黃色葡萄球菌對(duì)紅霉素耐藥性最高，為74.77%，對(duì)萬古霉素、替考拉寧的敏感性均為100%；銅綠假單胞菌對(duì)氨芐西林耐藥性最高，為100%，對(duì)環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、美洛培南敏感性均為100%。大腸埃希菌對(duì)左氧氟沙星耐藥性最高，為50%。

2.4 病原菌耐藥菌種年度趨勢(shì)表病原菌耐藥菌種的年度趨勢(shì)分析中，以金黃色葡萄球菌為主，趨勢(shì)為先增后降，2021年檢出率最高(2019年:2[1.87%] vs 2020年:26[24.30%] vs 2021年：51[47.66%]vs 2022年:28[26.17%])；其次為大腸埃希菌，2019年～2021年間分布較為平均，呈現(xiàn)逐年散發(fā)態(tài)勢(shì)(2019年:4[20.00%] vs 2020年:4[20.00%] vs 2021年：6[30.00%]vs 2022年:6[30.00%]，P<0.05)。肺炎鏈球菌、溶血葡萄球菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血菌為年度無序點(diǎn)狀發(fā)散(P>0.05)。

圖1 病原菌耐藥菌種年度趨勢(shì)表

3 討 論

人體在正常情況下，上呼吸道中會(huì)散布著金黃色葡萄球菌及肺炎鏈球菌等正常菌群，通常情況下以上菌群對(duì)機(jī)體并無致病危險(xiǎn)，但如果碰到機(jī)體抵抗力下降或受其他外部因素影響致病時(shí)，身體正常菌群的平衡會(huì)被打破，發(fā)生改變，病原菌侵襲并感染上呼吸道，影響機(jī)體健康水平，而相比于成年人，兒童因?yàn)楹粑腊l(fā)育尚不成熟，抵抗力弱，更容易發(fā)生上呼吸道感染[3]。URTI患兒抗生素處方不當(dāng)是臨床常見現(xiàn)象，臨床中常出現(xiàn)未經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)，直接使用廣譜抗生素的情況[4]，導(dǎo)致耐藥株增加，抗生素正常效力減損進(jìn)而增大臨床診治難度。為了有效改善這一情況，目前臨床多實(shí)施咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)，在明確致病菌株后展開藥敏試驗(yàn)，以藥敏結(jié)果為依據(jù)選取敏感性最高的抗生素進(jìn)行抗菌治療，提高治療效果，并降低耐藥株的產(chǎn)生[5]。

本研究中結(jié)果顯示，1053例咽拭子標(biāo)本檢出陽性167例，檢出率為15.86%(167/1053)，其中革蘭陽性菌檢出121株，檢出率為72.46%(121/167)，革蘭陰性菌檢出46株，檢出率為27.54%(46/167)。結(jié)果數(shù)據(jù)說明革蘭陰性菌是誘發(fā)URTI的主要病原菌，分析原因可能因?yàn)榛純涸谌朐呵伴L(zhǎng)時(shí)間大量應(yīng)用抗生素，導(dǎo)致體內(nèi)菌群失衡。藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌對(duì)紅霉素耐藥性最強(qiáng)，為74.77%，不推薦作為經(jīng)驗(yàn)性用藥；銅綠假單胞菌對(duì)氨芐西林耐藥性最強(qiáng)，為100%，不推薦作為經(jīng)驗(yàn)性用藥?？赡苁且蚺R床長(zhǎng)期使用紅霉素及氨芐西林抗菌治療而提高了菌株的耐藥性。生物膜是一種三維結(jié)構(gòu)的微生物細(xì)胞群落，是抗菌劑的屏障，被包裹在生物膜中的細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性約是浮游生物的1000倍，常導(dǎo)致抗生素治療無效[6-8]。本研究中銅綠假單胞菌對(duì)OFLX的敏感性為100%?？赡軝C(jī)制為OFLX抑制新的糖萼形成、釋放或激活胞外多糖分解酶，以及靜電干擾細(xì)菌粘附。故早期附著細(xì)胞上的OFLX活性可阻止進(jìn)一步的生物膜發(fā)育。銅綠假單胞菌可粘附在患者呼吸道表面并形成生物膜，因不同研究中的藥物濃度、治療時(shí)間和生物膜的年齡不同，OFLX對(duì)銅綠假單胞菌生物膜的抑制作用仍然存在不少爭(zhēng)議[9-10]。She P等[11]研究指出，OFLX能以劑量依賴性的方式顯著抑制銅綠假單胞菌呼吸道分離物的生物膜合成，但對(duì)已形成的生物膜抑制作用有限，但該研究發(fā)現(xiàn)1μg/ml的OFLX顯著改變了代謝過程、細(xì)胞過程、單生物過程、分子結(jié)合和催化活性相關(guān)的銅綠假單胞菌基因的表達(dá)。說明根除銅綠假單胞菌感染所需的最佳OFLX濃度為1μg/mL，臨床可進(jìn)一步驗(yàn)證，以提高治療效果。病原菌耐藥菌種的年度趨勢(shì)分析中，以金黃色葡萄球菌為主，趨勢(shì)為先增后降，2021年檢出率最高，2022年檢出率下降，可能是由于本院當(dāng)年執(zhí)行嚴(yán)格院感政策有關(guān)。大腸埃希菌呈現(xiàn)逐年均勻散發(fā)態(tài)勢(shì)，肺炎鏈球菌、溶血葡萄球菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血菌為年度無序點(diǎn)狀發(fā)散(P>0.05)，該項(xiàng)結(jié)果提示，仍需堅(jiān)持手衛(wèi)生及院感知識(shí)培訓(xùn)，不可忽視醫(yī)院常見菌種日常消殺。

本次研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，咽拭子標(biāo)本涂片質(zhì)量中，A級(jí)共125例，陽性率49.6%；B級(jí)共531例，陽性率16.01%；C級(jí)共305例，陽性率6.23%；D級(jí)92例，陽性率1.09%。分析咽拭子標(biāo)本涂片不合格的主要因素包括以下兩方面：第一，致病菌與污染菌可能產(chǎn)生相互影響；第二，咽拭子取材步驟不夠標(biāo)準(zhǔn)，容易出現(xiàn)漏檢。由此可以看出，質(zhì)量合格的標(biāo)本是保證細(xì)菌鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵，因此在培養(yǎng)前進(jìn)行適當(dāng)?shù)耐科R檢具有一定的必要性。

綜上所述，對(duì)URTI患兒咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)，可明確敏感抗生素，提高抗菌藥物臨床用藥合理性及安全性。但本研究尚存一定不足，如研究樣本量較少，抗菌藥物的選取有限，未來可增加樣本量數(shù)量，擴(kuò)大抗菌藥物的研究范圍，為臨床治療，抗菌藥臨床合理選用提供有力依據(jù)。