基于JAK2/STAT3 信號(hào)通路探討升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)多發(fā)性抽動(dòng)癥模型大鼠的作用及機(jī)制*

王素亭，彭琰琰，韓雪，任燕，葛國(guó)嵐，潘丹萍，高國(guó)財(cái)

（1.鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院兒科，鄭州 450001；2.鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院中醫(yī)科，鄭州 450000）

多發(fā)性抽動(dòng)癥（TS）是兒童中最常見的精神和運(yùn)動(dòng)障礙疾病。其臨床表現(xiàn)為多發(fā)性運(yùn)動(dòng)和語(yǔ)音抽動(dòng)，常伴有注意缺陷多動(dòng)障礙、情緒障礙和強(qiáng)迫癥，部分癥狀可持續(xù)至成年[1]。TS 的病因和發(fā)病機(jī)制仍不清楚。既往研究表明，TS 的病因與遺傳因素、環(huán)境因素、神經(jīng)炎癥、多巴胺系統(tǒng)、神經(jīng)元凋亡等因素密切相關(guān)[2-4]。雖然近年來TS 的治療范圍不斷擴(kuò)大，但目前的治療策略往往不盡如人意，且不良反應(yīng)較多[5]。因此，有必要尋求新的治療方法和藥物。升清降濁制動(dòng)顆粒是由酒大黃、生白芍、生甘草、僵蠶、蟬蛻、片姜黃組成的中藥顆粒，已有研究報(bào)道，升清降濁制動(dòng)顆?？擅黠@提高TS 患兒臨床癥狀及體征的改善效果，且藥物不良反應(yīng)明顯減少[6]。以上研究表明，升清降濁制動(dòng)顆?？捎糜谥委烼S。但具體機(jī)制尚不完全明確。相關(guān)研究顯示，抑制Janus 激酶2（JAK2）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子3（STAT3）通路可減輕TS 大鼠的神經(jīng)炎癥[7]。而升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)TS 大鼠的保護(hù)作用是否與調(diào)控JAK2/STAT3 信號(hào)通路有關(guān)尚不可知。因此，本研究主要探究升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)TS 大鼠神經(jīng)炎癥、多巴胺系統(tǒng)相關(guān)因子及神經(jīng)元凋亡的影響以及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 84 只，6 周齡體質(zhì)量為200～210 g的雄性SD 大鼠購(gòu)自廣東萊迪生物醫(yī)藥研究院有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（粵）2022-0064。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得本院動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑 升清降濁制動(dòng)顆粒由僵蠶、蟬蛻、片姜黃、酒大黃、全蝎、生白芍、生甘草。按照7 種藥物30∶12∶9∶6∶6∶30∶15 的比例配制而成。亞氨基二丙腈（貨號(hào)：111-94-4）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；氟哌啶醇（貨號(hào)：14202011317）購(gòu)自寧波大紅鷹藥業(yè)股份有限公司；JAK2 通路激活劑Coumermycin A1（貨號(hào)：C9451）購(gòu)自翌圣生物科技（上海）股份有限公司；大鼠白細(xì)胞介素（IL）-1β（貨號(hào)：E-UNEL-R0028）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α，貨號(hào)：E-EL-M3063）、IL-6 （貨號(hào)：E-EL-M0044c）、大鼠多巴胺（DA，貨號(hào)：E-EL-0046c）、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（DAT，貨號(hào)：E-EL-0052c） 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 試劑盒及DNA 缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：E-CK-A320）購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；多巴胺D2 受體（DRD2）ELISA 試劑盒（貨號(hào)：SEA673Ra）購(gòu)自武漢云克隆科技股份有限公司；兔源一抗p-JAK2 （貨號(hào)：ab32101）、p-STAT3（貨號(hào)：ab267373）、JAK2（貨號(hào)：ab108596）、STAT3（貨號(hào)：ab68153）、GAPDH（貨號(hào)：ab9485）及辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔二抗（貨號(hào)：ab172730）均購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 TS 大鼠模型的構(gòu)建及分組 采用連續(xù)7 d腹腔注射150 mg/（kg·d） 亞氨基二丙腈的方式構(gòu)建TS 大鼠模型[8]，對(duì)照組大鼠則連續(xù)7 d 腹腔注射等量的生理鹽水。從造模開始第4 天起，若大鼠出現(xiàn)頭動(dòng)、急速旋轉(zhuǎn)、跳躍、挖洞等刻板行為，則視為造模成功。按照隨機(jī)數(shù)字表法將SD 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、TS 組、升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組（SQJZZDL 組）、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組（SQJZZD-H 組）、氟哌啶醇組、Coumermycin A1 （JAK2 通路激活劑）組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1 組（SQJZZD-H+Coumermycin A1 組），每組12 只。除對(duì)照組外，其他組大鼠均需構(gòu)建TS 模型。建模成功后，升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組[9]、氟哌啶醇組[10]大鼠分別需灌胃0.645 mg/kg 升清降濁制動(dòng)顆粒、2.58 mg/kg 升清降濁制動(dòng)顆粒、200 μg/kg 氟哌啶醇，且均需尾靜脈注射等量的生理鹽水；Coumermycin A1 組[11]大鼠需尾靜脈注射4 mg/kg Coumermycin A1 且需灌胃等量的生理鹽水；升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1 組大鼠需灌胃2.58 mg/kg 升清降濁制動(dòng)顆粒且尾靜脈注射4 mg/kg Coumermycin A1；對(duì)照組、TS 組大鼠均需灌胃等量的生理鹽水和尾靜脈注射等體積的生理鹽水，給藥每日1 次，持續(xù)21 d。

1.3.2 標(biāo)本收集 末次處理24 h 后，每組選取所有大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分；行為評(píng)分結(jié)束后，2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min 離心15 min（離心半徑10 cm），收集血清，用于IL-1β、TNF-α、IL-6 水平的檢測(cè)；血清收集后，解剖大鼠分離紋狀體，將紋狀體分為2 部分（每部分包含每組6 只大鼠的紋狀體），一部分固定于4%多聚甲醛中用于TUNEL 染色，另一部分凍存于-80 ℃中用于DA、DAT、DRD2 含量及p-JAK2、p-STAT3蛋白水平的檢測(cè)。

1.3.3 大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分檢測(cè) 運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0 分表示正?；顒?dòng)；1 分表示過度興奮；2 分表示存在探究行為和不連續(xù)的吸鼻聲；3 分表示跑動(dòng)不間斷；4 分表示不間斷跑動(dòng)且伴有驚跳。

1.3.4 大鼠刻板行為評(píng)分檢測(cè) 刻板行為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0 分表示無刻板運(yùn)動(dòng)；1 分表示軀體存在旋轉(zhuǎn)行為；2 分表示頭頸部運(yùn)動(dòng)過多；3 分表示頭頸部運(yùn)動(dòng)過多且伴有旋轉(zhuǎn)行為；4 分表示頭向側(cè)擺，并伴有頭頸部運(yùn)動(dòng)過多。

1.3.5 ELISA 檢測(cè)血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平及紋狀體中DA、DAT、DRD2 含量 嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測(cè)大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平及紋狀體中DA、DAT、DRD2 含量。

1.3.6 TUNEL 染色檢測(cè)大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡取4%多聚甲醛固定紋狀體進(jìn)行包埋，切片，切片脫蠟，水化，蛋白酶K 消化，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT 酶）孵育，4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染核，封片后，用熒光顯微鏡觀察神經(jīng)元凋亡情況并拍照。

1.3.7 蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá) 取紋狀體，加入RIPA 裂解液經(jīng)組織研磨儀勻漿研磨紋狀體提取總蛋白。采用2，2-聯(lián)喹啉-4，4-二甲酸二鈉法測(cè)定總蛋白濃度，經(jīng)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉液封閉，一抗p-JAK2（1∶2 000）、p-STAT3（1∶2 000）、JAK2（1∶1 000）、STAT3（1∶2 000）、GAPDH（1∶1 000）在4 ℃下孵育過夜。然后與二抗（1∶2 000）在室溫下孵育1 h 后PBST 緩沖液洗膜3 次。加入ECL 發(fā)光試劑后在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)中成像拍照，使用Image Lab 5.0 軟件分析蛋白質(zhì)條帶灰度值，以目的蛋白與GAPDH 的比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。多組間的差異比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩差異比較采用SNK-q 檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)各組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分的影響 與對(duì)照組比較，TS 組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分升高（P＜0.05）；與TS 組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組、氟哌啶醇組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分降低（P＜0.05）；與TS 組比較，Coumermycin A1 組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分升高（P＜0.05）；與升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1 組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分升高（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分比較（±s）Tab.1 Comparison of motor behavior score and stereotyped behavior score of rats in each group（±s）分

表1 各組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分比較（±s）Tab.1 Comparison of motor behavior score and stereotyped behavior score of rats in each group（±s）分

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與TS 組比較，#P＜0.05；與SQJZZDL 組比較，△P＜0.05；與SQJZZD-H 組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分 刻板行為評(píng)分對(duì)照組 12 0.43±0.06 0.12±0.01 TS 組 12 3.15±0.14* 3.23±0.11*SQJZZD-L 組 12 2.42±0.12# 1.88±0.14#SQJZZD-H 組 12 0.96±0.08#△ 0.79±0.06#△氟哌啶醇組 12 0.97±0.09#△ 0.77±0.05#△Coumermycin A1 組 12 3.83±0.14# 3.92±0.07#SQJZZD-H+Coumermycin A1 組 12 1.75±0.12▲ 1.45±0.11▲

2.2 升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)各組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平的影響 與對(duì)照組比較，TS 組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平升高（P＜0.05）；與TS 組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組、氟哌啶醇組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平降低（P＜0.05）；與TS 組比較，Coumermycin A1 組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高（P＜0.05）；與升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平升高（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平比較（±s）Tab.2 Comparison of IL-1β，TNF-α and IL-6 in serum of rats in each group（±s） pg/mL

表2 各組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6 水平比較（±s）Tab.2 Comparison of IL-1β，TNF-α and IL-6 in serum of rats in each group（±s） pg/mL

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與TS 組比較，#P＜0.05；與SQJZZD-L組比較，△P＜0.05；與SQJZZD-H 組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) IL-1β TNF-α IL-6對(duì)照組 12 94.45± 3.77 35.54± 1.34 46.63± 1.89 TS 組 12 373.68±15.59* 219.23±10.66* 178.85± 8.45*SQJZZD-L 組 12 302.25±11.41# 168.82± 7.37# 132.29± 5.67#SQJZZD-H 組 12 123.35± 5.06#△ 72.25± 3.41#△ 69.68± 3.23#△氟哌啶醇組 12 120.86± 4.98#△ 70.88± 3.39#△ 68.81± 3.14#△Coumermycin A1 組 12 423.26±18.86# 255.46±11.32# 229.36±10.05#SQJZZD-H+Coumermycin A1 組12 295.57±12.28▲143.34± 6.18▲108.54± 4.16▲

2.3 升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)各組大鼠紋狀體中DA、DAT、DRD2 含量的影響 與對(duì)照組比較，TS 組大鼠紋狀體中DA、DAT 含量降低，DRD2 含量升高（P＜0.05）；與TS 組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組、氟哌啶醇組大鼠紋狀體中DA、DAT 含量升高，DRD2 含量降低（P＜0.05）；與TS 組比較，Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中DA、DAT 含量降低，DRD2 含量升高（P＜0.05）；與升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中DA、DAT含量降低，DRD2 含量升高（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠紋狀體中DA、DAT、DRD2 含量比較（±s）Tab.3 Comparison of DA，DAT and DRD2 contents in striatum of rats in each group（±s） pg/mL

表3 各組大鼠紋狀體中DA、DAT、DRD2 含量比較（±s）Tab.3 Comparison of DA，DAT and DRD2 contents in striatum of rats in each group（±s） pg/mL

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與TS 組比較，#P＜0.05；與SQJZZDL 組比較，△P＜0.05；與SQJZZD-H 組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) DA DAT DRD2對(duì)照組 6 108.82±4.31 145.58±6.12 325.56±14.43 TS 組 6 52.26±2.37* 46.67±2.11* 465.54±21.14*SQJZZD-L 組 6 69.73±3.15# 79.93±3.76# 403.32±18.85#SQJZZD-H 組 6 94.46±4.78#△ 128.85±5.84#△342.45±15.56#△氟哌啶醇組 6 95.58±4.83#△ 130.05±5.79#△340.17±14.89#△CoumermycinA1 組 6 41.17±1.92# 35.85±1.67# 514.25±19.78#SQJZZD-H+CoumermycinA1 組6 78.82±3.34▲ 95.56±4.22▲ 386.67±17.14▲

2.4 升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)各組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡的影響 與對(duì)照組比較，TS 組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡率升高（P＜0.05）；與TS 組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組、氟哌啶醇組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡率降低（P＜0.05）；與TS 組比較，Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡率升高（P＜0.05）；與升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡率升高（P＜0.05）。見表4。TUNEL 染色圖見OSID 二維碼。

表4 各組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡率比較（±s）Tab.4 Comparison of neuronal apoptosis rate in striatum of rats in each group（±s） %

表4 各組大鼠紋狀體中神經(jīng)元凋亡率比較（±s）Tab.4 Comparison of neuronal apoptosis rate in striatum of rats in each group（±s） %

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與TS 組比較，#P＜0.05；與SQJZZDL 組比較，△P＜0.05；與SQJZZD-H 組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 凋亡率對(duì)照組 6 3.23±0.14 TS 組 6 15.52±0.61*SQJZZD-L 組 6 11.35±0.48#SQJZZD-H 組 6 6.52±0.32#△氟哌啶醇組 6 6.48±0.30#△Coumermycin A1 組 6 19.85±1.02#SQJZZD-H+Coumermycin A1 組 6 9.25±0.31▲

2.5 升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)各組大鼠紋狀體中JAK2/STAT3 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，TS 組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與TS 組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒低劑量組、升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組、氟哌啶醇組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與TS 組比較，Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組比較，升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量+Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。見圖1 和表5。

圖1 Western blot 檢測(cè)大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)Fig.1 Western blot detection of p-JAK2 and p-STAT3 protein expression in rat striatum

表5 各組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)比較（±s）Tab.5 Comparison of p-JAK2 and p-STAT3 protein expression in striatum of rats in each group（±s）

表5 各組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)比較（±s）Tab.5 Comparison of p-JAK2 and p-STAT3 protein expression in striatum of rats in each group（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與TS 組比較，#P＜0.05；與SQJZZDL 組比較，△P＜0.05；與SQJZZD-H 組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) p-JAK2/JAK2 p-STAT3/STAT3對(duì)照組 6 0.34±0.02 0.18±0.01 TS 組 6 0.84±0.08* 0.75±0.07*SQJZZD-L 組 6 0.72±0.08# 0.61±0.05#SQJZZD-H 組 6 0.45±0.02#△ 0.32±0.02#△氟哌啶醇組 6 0.43±0.03#△ 0.30±0.03#△Coumermycin A1 組 6 0.96±0.02# 0.88±0.07#SQJZZD-H+Coumermycin A1 組6 0.63±0.05▲ 0.43±0.04▲

3 討論

細(xì)胞因子是細(xì)胞通訊的重要介質(zhì)，在神經(jīng)炎癥中起著重要作用。在TS 大鼠中觀察到腦組織中TNF-α、IL-6 水平明顯高于正常大鼠[12]。亞氨基二丙腈會(huì)導(dǎo)致DA 濃度持續(xù)下降，導(dǎo)致生長(zhǎng)發(fā)育過程中的DRD2 超敏反應(yīng)，這可能導(dǎo)致動(dòng)物的刻板行為[13]；DAT作為一種專門定位于DA 神經(jīng)元突觸前膜的傳遞糖蛋白，其負(fù)責(zé)通過神經(jīng)元再攝取調(diào)節(jié)突觸外DA 的濃度。因此，DAT 在維持DA 釋放的階段性平衡中起著重要作用[14]。先前的研究表明，與健康對(duì)照相比，TS 大鼠中DAT 的表達(dá)較低[15]。亞氨基二丙腈模型是TS 的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物模型，能夠全面再現(xiàn)TS 的行為特征[16]。本研究利用亞氨基二丙腈成功誘導(dǎo)了TS 大鼠模型，結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，TS 組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分、刻板行為評(píng)分、IL-1β、TNF-α、IL-6 水平、DRD2含量、神經(jīng)元凋亡率升高，DA、DAT 含量降低，表明神經(jīng)炎癥可誘導(dǎo)TS 大鼠神經(jīng)元凋亡，進(jìn)而引起DA代謝紊亂。提示抑制神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡進(jìn)而促進(jìn)DA 平衡可能是開發(fā)新藥治療TS 的有效途徑之一。

中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為TS 主要病機(jī)是脾虛痰聚、氣血陰虛。因此，應(yīng)堅(jiān)持健脾補(bǔ)肝、益氣活血、化痰祛風(fēng)等原則來治療TS。升清降濁制動(dòng)顆粒中，僵蠶有化痰熄風(fēng)之功效；蟬蛻有祛風(fēng)止痙之功效；片姜黃有理氣之等功效；酒大黃有蕩滌瘀濁之功效。4 種藥物聯(lián)用，可降陰中之濁陰，可升陽(yáng)中之清陽(yáng)，陰陽(yáng)相配，調(diào)暢氣機(jī)，內(nèi)外通和，契合TS 的病機(jī)。全蝎、生白芍、生甘草配合使用，共奏升清降濁、通絡(luò)止痙等功效[6]。此外，升清降濁制動(dòng)顆粒的核心在升降散，其升清降濁，調(diào)暢氣機(jī)，為控制抽動(dòng)之關(guān)鍵[9]。據(jù)報(bào)道，升清降濁制動(dòng)顆粒可明顯改善TS 患兒的抽動(dòng)癥狀[17]。本研究結(jié)果與其是一致的，本研究顯示，升清降濁制動(dòng)顆?？梢种芓S 大鼠神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡，促進(jìn)DA 表達(dá)，且升清降濁制動(dòng)顆粒劑量越高，對(duì)應(yīng)指標(biāo)的變化趨勢(shì)越明顯。氟哌啶醇是DRD2 的阻斷劑，可有效改善抽動(dòng)癥狀[18]。本研究選取該藥物作為陽(yáng)性藥物，結(jié)果顯示，升清降濁制動(dòng)顆粒高劑量組與氟哌啶醇組對(duì)應(yīng)指標(biāo)變化趨勢(shì)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示升清降濁制動(dòng)顆?？赡苁侵委烼S 的潛在有效藥物。

JAK2/STAT3 是多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、遷移等過程[19]。目前關(guān)于JAK2/STAT3 通路在TS 中的研究較少，僅僅有研究顯示，抑制JAK2/STAT3 通路可改善TS 大鼠神經(jīng)炎癥[7]。本研究結(jié)果顯示，與TS組比較，Coumermycin A1 組大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)升高，TS 大鼠神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡及DA 代謝紊亂現(xiàn)象明顯，提示JAK2/STAT3通路確實(shí)參與了TS 大鼠神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡及DA代謝紊亂過程。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，升清降濁制動(dòng)顆?？梢种芓S 大鼠紋狀體中p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)，且升清降濁制動(dòng)顆粒劑量越高，對(duì)應(yīng)的蛋白表達(dá)水平越低，推測(cè)升清降濁制動(dòng)顆?？赡芡ㄟ^抑制JAK2/STAT3 通路對(duì)TS 大鼠發(fā)揮保護(hù)作用。為了驗(yàn)證該推測(cè)，本研究在高劑量升清降濁制動(dòng)顆粒作用的基礎(chǔ)上給予JAK2 通路激活劑Coumermycin A1 干預(yù)TS 大鼠，結(jié)果顯示，Coumermycin A1 減弱了高劑量升清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)TS 大鼠神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡的抑制作用以及對(duì)DA 表達(dá)水平的促進(jìn)作用。證實(shí)了猜想的正確性，即升清降濁制動(dòng)顆粒可能通過抑制JAK2/STAT3 通路對(duì)TS 大鼠發(fā)揮保護(hù)作用。

綜上所述，升清降濁制動(dòng)顆?？梢种芓S 大鼠神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡及促進(jìn)DA 平衡，該機(jī)制可能與抑制JAK2/STAT3 信號(hào)通路有關(guān)。升清清降濁制動(dòng)顆粒對(duì)TS 大鼠保護(hù)作用的機(jī)制可能還涉及其他通路，這將是本研究下一步研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一。