探討MGMT和ERCC1在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義

唐 靜,折 虹,楊治花,王艷陽(yáng)

腦膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤,手術(shù)切除及術(shù)后放、化療是其主要的治療方式[1]。腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)特點(diǎn)為侵襲性生長(zhǎng),部分腫瘤組織生長(zhǎng)在功能區(qū),極易造成手術(shù)不能完全切除。另外由于存在放、化療耐受等原因,使腦膠質(zhì)瘤患者普遍存在治療失敗、復(fù)發(fā)、臨床預(yù)后差等特點(diǎn)[2]。烷化劑是目前腦膠質(zhì)瘤化療的首選治療藥物。O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)是一種DNA修復(fù)酶,能夠保護(hù)細(xì)胞免受烷化劑類抗腫瘤藥物的損傷及形成耐藥性[3-4]。通過(guò)對(duì)放射線或者化療藥物的DNA損傷進(jìn)行修復(fù)導(dǎo)致治療失敗,同樣能達(dá)到耐藥的效果[5]。目前MGMT和ERCC1在肺癌、胃癌、乳腺癌等[6-7]表達(dá)中的研究國(guó)內(nèi)外有大量文獻(xiàn)的報(bào)道,但是關(guān)于MGMT和ERCC1在膠質(zhì)瘤中表達(dá)的關(guān)系及其療效和預(yù)后報(bào)道較少。本研究收集在我院行腦膠質(zhì)瘤根治性手術(shù)治療的55例患者,所有患者術(shù)后病理確診為腦膠質(zhì)瘤(WHO分級(jí)為Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)),對(duì)膠質(zhì)瘤組織行免疫組化,分析MGMT、ERCC1在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系及對(duì)預(yù)后的影響,探討影響預(yù)后的相關(guān)因素,為膠質(zhì)瘤的個(gè)體化治療提供一定的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集2013年1月至2020年12月在我院行手術(shù)治療,確診為腦膠質(zhì)瘤的55例患者標(biāo)本。其中女性26例,男性29例;年齡26～68歲,平均年齡40.5歲;年齡<40歲有24例,年齡≥40歲有31例。根據(jù)2008年WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),將其分為Ⅱ級(jí)(20例)、Ⅲ級(jí)(16例)、Ⅳ級(jí)(19例)。所有患者臨床資料完整。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化方法:所有組織標(biāo)本制成4 μm厚的切片,二甲苯脫蠟,SP法行免疫組織化學(xué)染色,中性樹(shù)脂封片后觀片。常規(guī)PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,MGMT以肝臟組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照,ERCC1以扁桃體組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判定:MGMT為細(xì)胞核/漿著色,ERCC1為細(xì)胞核著色,染色結(jié)果按照Krajewska法進(jìn)行半定量分析,在高倍鏡視野下選取10個(gè)具有代表性的視野,分析免疫組化表達(dá)水平,具體標(biāo)準(zhǔn)如下。為染色強(qiáng)度打分,棕褐色為3分、棕黃色為2分、淡黃色為1分、無(wú)色為0分。陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比打分標(biāo)準(zhǔn)為高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為0或占比≤5%,計(jì)0分;高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為6%～25%,計(jì)1分;高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為26%～50%,計(jì)2分;高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為51%～75%,計(jì)3分;高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)﹥75%,計(jì)4分。將染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積作評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)、4～8分為中度陽(yáng)性(++)、1～3分為弱陽(yáng)性(+)、0～1分為陰性,其中陰性及弱陽(yáng)性視為不表達(dá)。

1.2.3 隨訪和觀察指標(biāo):所有患者全程隨訪。每3個(gè)月隨訪1次,隨訪內(nèi)容包括影像學(xué)情況、腫瘤有無(wú)進(jìn)展或復(fù)發(fā)、是否死亡及死亡時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件,數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析;采用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率、局部控制率,繪制生存曲線,多因素分析采用Cox模型。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MGMT、ERCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá):MGMT、ERCC1在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。MGMT、ERCC1均陽(yáng)性表達(dá)18例,均陰性表達(dá)12例,二者無(wú)相關(guān)性(r=0.215,P>0.05),見(jiàn)表2。

表1 MGMT和ERCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[n(%)]

表2 MGMT和ERCC1在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的相關(guān)性

2.2 MGMT、ERCC1與不同臨床病理特征之間的關(guān)系:腦膠質(zhì)瘤中MGMT和ERCC1的表達(dá)與不同性別、年齡、腫瘤大小及KPS評(píng)分無(wú)相關(guān)性(P>0.05),見(jiàn)表3。

表3 MGMT、ERCC1與不同臨床病理特征之間的關(guān)系[n(%)]

2.3 生存情況:55例腦膠質(zhì)瘤患者中,WHO分級(jí)為Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)患者總生存率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),局部控制率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腦膠質(zhì)瘤患者中,MGMT不同表達(dá)情況的生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),局部控制率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。55例腦膠質(zhì)瘤患者中,ERCC1不同表達(dá)情況生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);局部控制率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4 影響腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的多因素分析:單因素及多因素分析均顯示W(wǎng)HO分級(jí)、年齡、KPS評(píng)分是影響腦膠質(zhì)瘤總生存的預(yù)后因素。即年齡越大(≥40歲)、WHO級(jí)別越高、KPS評(píng)分越低(≤70分),預(yù)后越差,見(jiàn)表4。

表4 影響腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的多因素分析

3 討論

膠質(zhì)瘤在WHO分級(jí)中以Ⅳ級(jí)惡性度最高,預(yù)后最差,5年生存率僅為9.8%[8]。放射治療目前多選擇調(diào)強(qiáng)放射治療,化療藥物的選擇以替莫唑胺口服治療為主[9]。但由于腦膠質(zhì)瘤患者對(duì)化療藥物耐藥、放療敏感性差等因素,膠質(zhì)瘤的治療效果欠佳。

腫瘤組織中MGMT表達(dá)可影響烷化劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。Esteller[10]發(fā)現(xiàn)MGMT在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與其病理級(jí)別無(wú)明顯關(guān)聯(lián),與病理級(jí)別無(wú)關(guān)。本研究表明MGMT在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MGMT在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)的差異主要與腫瘤組織的異質(zhì)性有關(guān),即不同腫瘤部位MGMT表達(dá)水平存在差異。本研究對(duì)腦膠質(zhì)瘤組織進(jìn)行免疫組化分析,MGMT陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Bellmunt等[11]報(bào)道進(jìn)展期膀胱癌患者以順鉑為主的治療中,ERCC1 mRNA低水平比ERCC1 mRNA高水平的患者有更好的預(yù)后。本研究發(fā)現(xiàn)ERCC1的表達(dá)在1年、2年、5年生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,不能作為腦膠質(zhì)瘤預(yù)后的評(píng)判標(biāo)志。

MGMT和ERCC1表達(dá)在腦膠質(zhì)瘤中相關(guān)性的研究較少。本研究顯示MGMT和ERCC1在腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)無(wú)相關(guān)性,說(shuō)明其耐藥可能通過(guò)不同途徑發(fā)揮作用。本研究中腦膠質(zhì)瘤MGMT、ERCC1的表達(dá)與不同性別、年齡、腫瘤大小的KPS評(píng)分無(wú)關(guān),與Esteller等[10]學(xué)者的研究結(jié)果一致。WHO分級(jí)、年齡和KPS評(píng)分是影響腦膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響因素[12]。腦膠質(zhì)瘤以高級(jí)別居多,間變性星形細(xì)胞瘤(WHO分級(jí)為Ⅲ級(jí))和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(WHO分級(jí)為Ⅳ級(jí))分別占6%和54%[13]。本研究表明病理級(jí)別越高,生存率越低。本研究的55例腦膠質(zhì)瘤患者根據(jù)NCCN指南針對(duì)膠質(zhì)瘤高危因素進(jìn)行分級(jí),年齡≥40歲、腫瘤最大直徑≥6 cm為危險(xiǎn)因素,本研究顯示W(wǎng)HO分級(jí)、年齡、KPS評(píng)分是影響腦膠質(zhì)瘤總生存的預(yù)后因素。與EORTC Ⅲ期臨床研究及阮士玉等所得結(jié)果一致[14]。尋找臨床更有效的治療方案,盡可能延長(zhǎng)患者生存期及提升其生活質(zhì)量,是亟待解決的問(wèn)題[15]。

綜上所述,腦膠質(zhì)瘤中MGMT和ERCC1的表達(dá)與不同臨床病理特征無(wú)關(guān),二者無(wú)相關(guān)性,并且不能預(yù)測(cè)患者預(yù)后,說(shuō)明MGMT和ERCC1蛋白的檢測(cè)不能作為指導(dǎo)治療、評(píng)價(jià)療效、預(yù)測(cè)預(yù)后的有效指標(biāo)。而WHO分級(jí)、年齡、KPS評(píng)分是影響腦膠質(zhì)瘤總生存的預(yù)后因素。