原子吸收分光光度儀測定蔬菜維生素C 含量的研究

包蔚 朱曉蕓 徐樺 何鍇 余海芬

（上海市嘉定區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201800）

維生素C 又叫抗壞血酸，廣泛存在于植物組織中，尤其是在新鮮的水果、蔬菜中含量較多。同時(shí)，維生素C 是一種水溶性維生素，是人體需要量最大的一種維生素[1]。目前，國家標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于維生素C含量的測定方法有2,6-二氯靛酚滴定法（以下簡稱滴定法）和2,4-二硝基苯肼比色法[2]，但是2,4-二硝基苯肼比色法操作復(fù)雜，且萃取液二甲苯為有機(jī)溶劑，具有較強(qiáng)的毒性，不利于操作人員的健康，故不推薦使用該方法。滴定法是根據(jù)維生素C 的氧化還原性質(zhì)，通過樣品溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色來辨別其滴定終點(diǎn)的到達(dá)，從而計(jì)算樣品中還原型抗壞血酸的含量[2]。由于多數(shù)水果、蔬菜樣品的提取液中含有一定的色素，導(dǎo)致采用滴定法滴定時(shí)，其終點(diǎn)不易辨認(rèn)，影響了該方法的準(zhǔn)確性。然而，原子吸收法（以下簡稱原吸法）是利用維生素C 在酸性介質(zhì)中可將Cu2+定量地還原為Cu+，而Cu+與SCN-反應(yīng)后可生成CuSCN 沉淀，沉淀經(jīng)高速離心機(jī)有效分離出來后，可用原子吸收分光光度計(jì)測定含銅量，這樣即可推知樣品中維生素C 的含量[3]。在此背景下，筆者以滴定法為對照，以黃瓜、卷心菜、青椒、青菜4 種蔬菜為實(shí)驗(yàn)材料，從實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、精密度、準(zhǔn)確度4個(gè)維度，驗(yàn)證了原吸法測定蔬菜中維生素C 含量的可行性?，F(xiàn)將相關(guān)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 供試材料

選取新鮮、色澤正常、無腐爛變質(zhì)的黃瓜、卷心菜、青菜、青椒4種蔬菜，每種蔬菜取不同可食部位若干混合作為蔬菜樣品。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 滴定法

樣品提取液用質(zhì)量濃度為2% 的草酸溶液。另外，稱取100 mg 維生素C 標(biāo)準(zhǔn)樣品，溶于草酸提取液中并稀釋至100 mL，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的維生素C 標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

滴定液的配制方法：稱取碳酸氫鈉52 mg 溶解在200 mL 熱蒸餾水中，然后稱取2,6-二氯靛酚溶液50 mg 溶解在上述碳酸氫鈉溶液中，冷卻后定容至250 mL，過濾至棕色瓶內(nèi)，放在冰箱中保存。每次使用前，用標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸標(biāo)定其滴定度。

1.2.2 原吸法

稱取草酸20 g，加冰醋酸80 mL，溶解后轉(zhuǎn)移到1 000 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容后搖勻，作為樣品提取液備用。

準(zhǔn)確稱取維生素C 標(biāo)準(zhǔn)樣品0.1 g，置于100 mL 棕色容量瓶中，用提取液稀釋至刻度線，即得到質(zhì)量濃度為1 mg/mL 的維生素C 標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后分別吸取5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液置于100 mL 容量瓶中，再分別定容至刻度線，即得到質(zhì)量濃度為50、100、200、300、400、500 μg/mL 的維生素C 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

稱取硫氰酸銨2 g，溶解后轉(zhuǎn)移到100 mL 容量瓶中定容，即得到質(zhì)量濃度為2% 的硫氰酸銨溶液。量取1 mol/L 鹽酸50 mL、1 mol/L 醋酸鈉溶液50 mL，混合后移入250 mL 容量瓶中定容，即得到鹽酸-醋酸鈉緩沖液（pH 為1.99）。

實(shí)驗(yàn)用的其他試劑和儀器：飽和氯化鉀溶液、飽和硫酸銅溶液、AAnalyst 800 型原子吸收分光光度儀、5 000 r/min 組織粉碎機(jī)等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 滴定法

稱取新鮮的蔬菜樣品10 g 放入研缽中，碾碎后加5 mL 樣品提取液，然后將樣品移入l00 mL 容量瓶，并稀釋至刻度后搖勻過濾。然后，吸取10 mL濾液放入蒸發(fā)皿中，用已標(biāo)定過的2，6-二氯靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉紅色30 s 不褪色為止。同時(shí)，做空白實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 原吸法

稱取新鮮的蔬菜樣品5 g，用組織粉碎機(jī)碎成糊狀，加入少許樣品提取液浸泡后過濾，將濾液轉(zhuǎn)移至250 mL 容量瓶中，用樣品提取液定容至刻度線。然后，分別吸取維生素C 標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL 和樣品提取液1 mL 于離心管中，再各加入飽和硫酸銅溶液1 mL、2% 硫氰酸銨溶液1 mL、緩沖液0.5 mL和飽和KCl 溶液0.5 mL，充分混合，稍后離心分離，去除上層清液，并用少量水洗滌沉淀2～3 次，加入硝酸0.5 mL 溶解后，轉(zhuǎn)移至100 mL 的容量瓶中加水定容至刻度線，搖勻。用原子吸收分光光度計(jì)測定其含銅量，根據(jù)所得的維生素C 含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到樣品的測定結(jié)果。

1.3.3 精密度與準(zhǔn)確度分析

實(shí)驗(yàn)通過5次平行測定，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，來衡量實(shí)驗(yàn)的精密度。同時(shí)，采用加標(biāo)回收的方式，通過回收率的比較，來判定實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)步驟比較

筆者在應(yīng)用滴定法測定含有色素較多的茄子時(shí)發(fā)現(xiàn)，茄子樣品中含有花青素，濾液顯現(xiàn)出大紅色，較滴定后的標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色深，無法判斷滴定終點(diǎn)。由此說明，不宜用滴定法測定含有可溶性色素的蔬菜。

筆者在應(yīng)用原吸法測定時(shí)，在樣品提取液中加入飽和硫酸銅溶液和2%硫氰酸銨溶液后，待反應(yīng)液變成綠色渾濁液體，離心，經(jīng)沉淀后多次洗滌，再用濃硝酸溶解，最后上機(jī)測定。由此說明，原吸法需要反復(fù)離心、洗滌、沉淀，步驟較滴定法多。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

由圖1可知，兩種方法的測定結(jié)果相差不大，且原吸法測得4 種蔬菜樣品的維生素C 含量均高于滴定法，其中，結(jié)果差異最大的為青椒，兩種方法每100 g 樣品相差5.84 mg；其次為青菜，兩種方法每100 g 樣品相差3.82 mg；第3 為黃瓜，兩種方法每100 g 樣品相差2.22 mg；差異最小的是卷心菜，兩種方法每100 g 樣品相差1.48 mg。分析其原因，可能是青椒、青菜、黃瓜含有較多的葉綠素，色素含量較多，干擾了滴定結(jié)果的判斷，導(dǎo)致這3種蔬菜樣品的維生素C 含量差異比卷心菜大。

圖1 兩種檢測方法測定維生素C 含量結(jié)果比較

2.3 實(shí)驗(yàn)精密度比較

采用兩種方法測定4種蔬菜樣品，其5次平行測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表1。由表1可知，滴定法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.59%～4.67%，原吸法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%～2.53%；精密度的要求都在標(biāo)準(zhǔn)要求的范圍內(nèi)，且原吸法的精密度比滴定法高。分析其原因，可能是滴定法的終點(diǎn)判斷要滿足保持出現(xiàn)粉紅色30 s 內(nèi)不褪色這一條件，主觀因素較強(qiáng)，而原吸法的測定結(jié)果由儀器讀取，人為誤差較小，且原吸法測定銅離子比較穩(wěn)定。

表1 兩種檢測方法精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

2.4 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度比較

由表2可知，原吸法的回收率為93.06%～105.29%，滴定法的回收率為97.38%～105.68%，回收率均在80%～120%的范圍內(nèi)。從回收率的數(shù)值看，滴定法的準(zhǔn)確度要優(yōu)于原吸法，分析其原因，原吸法需經(jīng)過多次離心和洗滌，其測定步驟較滴定法多，這對結(jié)果的準(zhǔn)確性造成了一定影響。由表2還可知，在測定葉綠素含量較高的黃瓜、青菜、青椒等蔬菜時(shí)，滴定法的準(zhǔn)確度不如原吸法。

表2 兩種檢測方法加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

3 結(jié)論與討論

采用原吸法測定蔬菜中的維生素C 含量，其準(zhǔn)確度和精確度均符合標(biāo)準(zhǔn)，故采用該方法測定蔬菜中維生素C含量具有一定的可行性。與滴定法相比，原吸法測定蔬菜中維生素C 含量的操作步驟較多，但是，在測定色素較多的蔬菜時(shí)，原吸法的準(zhǔn)確性高于滴定法。因此，原吸法可作為測定蔬菜維生素C 含量的一種補(bǔ)充方法。