全基因轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析雙氫青蒿素改善脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷機(jī)制

楊魯霞，張孝昌，李擎宇，魏振橋，黃曼瓊，焦園園，邢雅玲，王升啟

（1.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046；2.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院生物信息中心，北京 100850）

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是一種以肺彌散功能障礙為特征的由多種非心源性因素引起的急性進(jìn)行性呼吸衰竭，其加重期為急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS），可發(fā)展為多器官功能衰竭，嚴(yán)重威脅人體健康［1-2］，其特征性臨床表現(xiàn)為低氧性呼吸衰竭、功能殘氣量降低、肺順應(yīng)性降低、非靜液性雙側(cè)肺浸潤(rùn)、富含蛋白質(zhì)滲出物和中性粒細(xì)胞引起的血管通透性增加等［3］。多種炎癥介質(zhì)引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，中性粒細(xì)胞在肺部積聚，是肺組織損傷的重要因素，而炎癥反應(yīng)的過(guò)度放大或失控是ALI 發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制［4］。ALI 死亡率高，有效治療方法少，迫切需要探索更有效的ALI治療策略。

青蒿素是一種從中草藥青蒿中分離出來(lái)的倍半萜內(nèi)酯，被用于治療瘧疾等寄生蟲(chóng)?。?］。雙氫青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）是青蒿素的主要活性代謝產(chǎn)物，具有較強(qiáng)的抗瘧活性和較高的生物利用度［6］，在免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和抗腫瘤方面具有重要作用［7-12］。研究表明，DHA 具有抗炎作用［13-14］，可減輕脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性腎損傷的炎癥反應(yīng)、抑制NF-κB 信號(hào)通路激活和氧化應(yīng)激［15］，通過(guò)磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidyloinositol-3 kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）信號(hào)通路促進(jìn)自噬［16］。但DHA在急性肺損傷中的抗炎作用機(jī)制尚不清楚。

全基因轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)通過(guò)同時(shí)檢測(cè)信使RNA（mRNA）、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）、環(huán)形RNA（circRNA）、微RNA（microRNA）等表達(dá)，結(jié)合多種生物信息學(xué)分析，得到差異表達(dá)基因，并進(jìn)行功能通路富集，從而分析在確定表型中起主要作用的基因，探究其潛在的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與機(jī)制［17-18］，為研究疾病機(jī)制提供新角度，為藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)提供新方法。

本研究制備LPS 誘導(dǎo)的ALI 小鼠模型，ip 給予DHA 干預(yù)，通過(guò)對(duì)比模型組和DHA 組小鼠的病理變化、ALI 相關(guān)炎癥因子分泌等，探討DHA 對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI 小鼠的干預(yù)作用，并通過(guò)全基因組轉(zhuǎn)錄組測(cè)序策略，探索DHA 發(fā)揮作用的潛在靶標(biāo)及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物、主要試劑和儀器

DHA（用1%吐溫80和10%聚乙二醇400溶液配制為混懸液）和LPS（溶于生理鹽水）（美國(guó)Sigma公司）；吐溫80 和聚乙二醇400（macrogol 400，PEG-400）（大連美侖生物技術(shù)有限公司）；小鼠白細(xì)胞介素6（interleukin 6，IL-6），IL-β和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；4%多聚甲醛固定液（碧云天生物技術(shù)研究所）；RNA Easy Fast 動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒（離心柱型）、FastKing一步法除基因組cDNA 第一鏈合成預(yù)混試劑和SYBR Green I PCR（real time-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒（天根生化科技有限公司）。實(shí)時(shí)定量PCR 儀（型號(hào)：7500 Real-Time PCR System，美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）；PCR 儀（型號(hào)：C1000 Touch Thermal Cycler，美國(guó)Bio-Rad Laboratories公司）；酶標(biāo)儀（型號(hào)：Epoch，美國(guó)BioTek 公司）；化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（型號(hào)：MP180，北京泰格科信生物科技有限公司）；Qubit熒光儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）。

1.2 動(dòng)物、分組和給藥

30只C57BL/6J雄性小鼠，7周齡，體重20～22 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2021-0006，飼養(yǎng)于SPF 級(jí)動(dòng)物房，采用12 h間歇光照，環(huán)境溫度為22～26 ℃，相對(duì)濕度為60%～70%，動(dòng)物攝食、飲水自由。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院倫理委員會(huì)審批，編號(hào)：IACUC-DWZX-2021-748。

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、模型+DHA 組，每組10 只。ip 給予LPS 10 mg·kg-1制備ALI模型，正常對(duì)照組小鼠給予等體積生理鹽水，模型+DHA 20 mg·kg-1組ip 給予DHA 20 mg·kg-1，給藥體積為0.01 mL·g-1。

1.3 樣本制備

肺組織制備：給藥后24 h 處死小鼠，分別取出左肺葉、右肺上葉、右肺中葉和右肺下葉。

肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）制備：給藥后24 h 處死小鼠，體表消毒后剪開(kāi)小鼠皮膚使胸腔暴露，分離氣管，將預(yù)冷的1 mL PBS經(jīng)主氣管注入肺部，灌洗3次，每次停留1 min，灌洗后回收BALF。

1.4 肺組織濕/干重比的測(cè)定

取1.3 制備的左肺葉，用4 ℃預(yù)冷的生理鹽水洗凈，濾紙吸干水分，稱(chēng)取質(zhì)量記作濕重（wet weight，W）。將肺組織置于60 ℃烘箱中，干燥48 h至恒重后，稱(chēng)取質(zhì)量記作干重（dry weight，D），計(jì)算W/D比值。

1.5 HE染色觀察肺組織病理改變

取1.3 制備的右肺上葉置于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋，切成5 μm 切片，進(jìn)行HE 染色，置于顯微鏡下觀察病理變化。

1.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分類(lèi)計(jì)數(shù)BALF中炎癥細(xì)胞

取1.3 制備的BALF，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定白細(xì)胞總數(shù)。將BALF 4 ℃下500×g離心10 min，棄上清液；取細(xì)胞沉淀制成細(xì)胞重懸液，取20 μL涂片，進(jìn)行瑞士吉姆薩染色，進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)。

1.7 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELlSA）檢測(cè)BALF中TNF-α，lL-1β和lL-6水平

取1.3 制備的BALF，將BALF 4 ℃下500×g離心10 min，取上清液用ELISA 試劑盒檢測(cè)BALF 中TNF-α，IL-1β和IL-6水平。

1.8 RT-qPCR 法檢測(cè)小鼠肺組織中IL-1β，IL-6，TNF-α，胎盤(pán)特異蛋白8（placenta-specific protein 8，Plac8）和Toll 樣受體7（Toll-like receptor 7，TLR7）mRNA表達(dá)

取1.3 制備的右肺中葉應(yīng)用RNA Easy Fast 動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA 提取試劑盒（離心柱型）提取小鼠肺組織RNA。測(cè)定RNA 濃度后，應(yīng)用FastKing一步法除基因組cDNA第一鏈合成預(yù)混試劑盒將提取的RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，應(yīng)用Talent 熒光定量檢測(cè)試劑盒（SYBR Green）進(jìn)行相關(guān)基因的定量檢測(cè)，以β肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參基因，由2-ΔΔCt法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)水平。相關(guān)引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。

Tab.1 Primers for real-time quantitative polymerase chain reaction（RT-qPCR）

1.9 小鼠肺組織全基因轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及生物信息學(xué)分析

取1.3 制備的右肺下葉，快速置于液氮罐中待轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，小鼠肺組織全基因轉(zhuǎn)錄組測(cè)序由聯(lián)川生物公司進(jìn)行。對(duì)原始測(cè)序結(jié)果進(jìn)行過(guò)濾，去除接頭污染、低質(zhì)量、含N 比例＞5%的Reads，得到高質(zhì)量序列（clean data）。應(yīng)用Ensembl 平臺(tái)小鼠GRCm38 基因組及v100 注釋文件構(gòu)建參考基因組文件，Hisat2（V2.2.1）軟件將高質(zhì)量序列比對(duì)到參考基因組上，featureCounts（V2.0.0）軟件統(tǒng)計(jì)比對(duì)到每個(gè)基因上的Reads 個(gè)數(shù)，得到基因的表達(dá)水平。應(yīng)用DEseq2V1.32.0 軟件對(duì)樣本進(jìn)行差異表達(dá)分析。先分別選取正常對(duì)照組、DHA 干預(yù)組（20 mg·kg-1）相對(duì)于對(duì)模型組的差異基因〔logFC＞1且FDR（false discovery rate）＜0.05〕；然后，選取二者變化趨勢(shì)相反的差異基因作為顯著差異表達(dá)基因。根據(jù)差異基因檢測(cè)結(jié)果，對(duì)顯著差異表達(dá)基因進(jìn)行GO和KEGG通路富集分析。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 DHA 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALl 模型小鼠肺組織濕/干重比值的影響

模型組小鼠肺W/D 值（7.3±0.4）較正常對(duì)照組（4.2±0.4）顯著升高（P＜0.01），模型+DHA組小鼠肺W/D 值（5.5±0.5）較模型組顯著降低（P＜0.01），提示DHA能夠顯著改善毛細(xì)血管滲漏，減輕肺水腫。

2.2 DHA 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALl 模型小鼠肺組織形態(tài)的影響

HE 染色結(jié)果（圖1）顯示，正常對(duì)照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯病理改變；模型組小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重，肺泡間隔增厚，肺泡腔變小，肺泡水腫、充血；模型+DHA 組上述組織病理學(xué)損傷明顯改善，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。

Fig.1 Effect of dihydroartemisinin（DHA）on lung histopathological morphology in acute lung injury（ALl）model mice induced by lipopolysaccharide （LPS）（HE staining）.The mice were adaptively fed for 7 d,and randomly divided into normal control group，model group，and model+DHA group，with 10 mice in each group.The model was induced by LPS（ip，10 mg·kg-1）.Meanwhile，mice in model+DHA group were injected ip with DHA 20 mg·kg-1.The mice were executed 24 h after DHA administration.Arrows show alveolar cavity shrinking，thickening alveolar septum，inflammatory cell infiltration and the formation of hyaline membranes.

2.3 DHA 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALl 模型小鼠BALF 中炎癥細(xì)胞數(shù)的影響

光鏡下觀察細(xì)胞計(jì)數(shù)涂片（表2）可見(jiàn)，模型組中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、白細(xì)胞等炎癥細(xì)胞數(shù)均較正常對(duì)照組顯著增多（P＜0.01），而模型+DHA組較模型組顯著減少（P＜0.01）。

Tab.2 Effect of DHA on counts of inflammatory cells in bronchoalveolar lavage fluid（BALF）of ALl model mice induced by LPS

2.4 DHA 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALl 模型小鼠BALF 中炎癥細(xì)胞因子水平的影響

2.4.1 ELlSA

表3結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠BALF 中炎癥因子IL-1β，IL-6 和TNF-α 水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，模型+DHA 組小鼠BALF 中IL-1β，IL-6 和TNF-α 分泌水平顯著降低（P＜0.01）。提示DHA 能夠抑制炎癥細(xì)胞因子的分泌，緩解LPS誘導(dǎo)的ALI。

Tab.3 Effect of DHA on levels of lL-1β，lL-6 and TNF-α in BALF of ALl model mice induced by LPS

2.4.2 RT-qPCR

RT-qPCR 檢測(cè)結(jié)果（表4）顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠肺組織中炎癥因子IL-1β，IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，模型+DHA 組小鼠肺組織中IL-1β，IL-6和TNF-αmRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。提示DHA 能夠抑制肺組織中炎癥細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平。

Tab.4 Effect of DHA on mRNA levels of lL-1β，lL-6 and TNF-α in lung tissue of ALl model mice induced by LPS

2.5 DHA 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALl 模型小鼠肺組織全基因轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及生物信息學(xué)分析

由圖2結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組差異基因共有3 153 個(gè)，其中上調(diào)1 745 個(gè)，下調(diào)1 408 個(gè)。與模型組相比，模型+DHA 組差異基因1 255 個(gè)，其中上調(diào)336 個(gè)，下調(diào)919 個(gè)。對(duì)正常對(duì)照組、模型組和模型+DHA 干預(yù)組之間的差異表達(dá)基因進(jìn)行GO 功能富集分析，結(jié)果（圖3）顯示，差異表達(dá)基因在生物過(guò)程中主要共同富集的前30 個(gè)重要條目為：細(xì)胞因子生成調(diào)控、T 細(xì)胞活化調(diào)節(jié)、白細(xì)胞遷移和細(xì)胞趨化作用等。對(duì)正常對(duì)照組、模型組和模型+DHA組之間的差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG通路富集分析，前20條結(jié)果（圖4）顯示，涉及304 條生物學(xué)功能相關(guān)信號(hào)通路，其中共同顯著富集的途徑中免疫相關(guān)通路包括B 細(xì)胞受體信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路、FcγR介導(dǎo)吞噬作用信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路信號(hào)通路等。

Fig.2 Volcano maps of differentially expressed genes in lung tissue of ALl model mice induced by LPS.See Fig.1 for the mouse treatment.FDR：false discovery rate；Fold change：the average gene expression levels of the two groups.

Fig.3 GO enrichment analysis of differentially expressed genes in lung tissue of ALl model mice induced by LPS.See Fig.1 for the mouse treatment.Mouse lung tissue was collected for RNA transcriptome sequencing（RNA-seq）.Top 30 significant biological processes，cellular components and molecular function determined by GO functional enrichment analysis for differentially expressed genes.A：the GO analysis diagram of model group and normal control group；B：the GO analysis of the model group and the model+DHA group.In the figure，BP represents the biological process module，CC represents the cellular component module，and MF represents the molecular function module.The color bars ranging from blue to red represent the adjusted P-value of enrichment significance，with blue indicating a large adjusted P-value and red indicating a small adjusted P-value.

Fig.4 KEGG pathway enrichment analysis of differentially expressed genes in lung tissue of ALl model mice induced by LPS.See Fig.1 for the mouse treatment.Mouse lung tissue was collected for RNA transcriptome sequencing（RNA-seq）.A：the KEGG analysis chart compared with the normal control group in the model group；B：the KEGG analysis of the model group compared to the model+DHA group.The color bars ranging from blue to red represent the adjusted P-value of enrichment significance，with blue indicating a large adjusted P-value and red indicating a small adjusted P-value.

該分析結(jié)果表明，從基因差異表達(dá)分析，DHA作用的潛在基因靶標(biāo)數(shù)量較多；從差異基因的功能分析，DHA 可能主要通過(guò)調(diào)控炎癥與免疫反應(yīng)相關(guān)信號(hào)通路，發(fā)揮抑制小鼠ALI作用。

2.6 DHA改善小鼠ALl炎癥的潛在調(diào)控靶點(diǎn)篩選

從差異表達(dá)基因中篩選模型組較正常對(duì)照組顯著上調(diào)、模型+DHA 組較模型組顯著下調(diào)且變化趨勢(shì)穩(wěn)定的免疫相關(guān)差異表達(dá)基因進(jìn)行后續(xù)表達(dá)驗(yàn)證，包括免疫相關(guān)的胎盤(pán)特異蛋白8（placentaspecific 8，Plac8）、Toll樣受體7（Toll-like receptor 7，TLR7）、同種異體移植炎癥因子1（allograft inflammatory factor 1，Aif1）、POU 2級(jí)同源框2（POU domain，class 2，transcription factor 2，Pou2f2）和鄰苯二甲酰胺抗菌肽（cathelicidin antimicrobial peptide，Camp）等。Plac8 調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分裂、分化、免疫和凋亡等生理活動(dòng)，在細(xì)菌感染防御中發(fā)揮重要作用［19］。TLR7 和Pou2f2 調(diào)節(jié)IL-6 產(chǎn)生，調(diào)控病原體的先天免疫應(yīng)答。Aif1作為活化巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物，可促進(jìn)炎癥介質(zhì)的表達(dá)并刺激炎癥細(xì)胞的增殖和遷移［20］。Camp 也在防御微生物感染中起重要作用。

2.7 DHA 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ALl 小鼠肺組織關(guān)鍵基因mRNA表達(dá)影響

應(yīng)用RT-qPCR，對(duì)選取的基因Plac8，TLR7，Aif1，Pou2f2和CampmRNA 表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果（表5）顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠肺組織Plac8和TLR7mRNA 表達(dá)均顯著上升（P＜0.01）；與模型組相比，模型+DHA 組小鼠肺組織Plac8和TLR7mRNA 表達(dá)均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。Plac8和TLR7mRNA 表達(dá)與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序表達(dá)趨勢(shì)一致，Aif1，Pou2f2和CampmRNA表達(dá)與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序表達(dá)趨勢(shì)不一致。提示ALI可導(dǎo)致小鼠肺組織Plac8和TLR7表達(dá)活化誘發(fā)炎癥反應(yīng)，DHA 能夠降低LPS 損傷小鼠肺組織Plac8和TLR7mRNA表達(dá)改善小鼠炎癥反應(yīng)，Plac8和TLR7可能是DHA發(fā)揮抗炎作用的潛在靶點(diǎn)。

Tab.5 Effect of DHA on expression of relevant differentially expressed genes in lung tissues of ALl model mice induced by LPS

3 討論

本研究結(jié)果表明，DHA能有效改善LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺組織病理變化，顯著降低小鼠肺組織W/D比值和BALF中炎癥細(xì)胞數(shù)，并減少促炎因子TNF-α，IL-1β和IL-6的分泌。研究表明，LPS通過(guò)激活炎癥細(xì)胞，誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子過(guò)度產(chǎn)生，造成血管內(nèi)皮損傷，血管通透性增加，引發(fā)彌漫性肺泡損傷、肺水腫等病理表現(xiàn)［21-22］。本研究結(jié)果表明，DHA 可能通過(guò)降低內(nèi)皮屏障通透性、改善微血管滲漏、減輕肺水腫、調(diào)節(jié)多種炎癥因子分泌而改善ALI的炎癥反應(yīng)。

本研究采用全基因組轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，分析正常對(duì)照組、模型組、DHA 干預(yù)組小鼠肺組織中的差異表達(dá)基因。初步篩選到免疫相關(guān)的2 個(gè)關(guān)鍵基因——Plac8和TLR7。TLR7 屬于TLR 家族，在炎癥、先天免疫和宿主感染防御中發(fā)揮著核心作用［23］，主要由單鏈RNA 激活，受到接頭分子髓樣分化因子（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88）和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子（tumor necrosis factor receptor-associated factors，TRAF）等調(diào)控，最終促進(jìn)NF-κB p65 活化、誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生；TLR7通過(guò)激活NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)IL-6和TNF-α等炎癥因子產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥反應(yīng)［24-26］。本研究結(jié)果表明，DHA對(duì)ALI的改善作用，可能通過(guò)作用TLR7，調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以減輕小鼠肺部炎癥［27］。有研究顯示，DHA可以抑制NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)減輕LPS誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥［28］，本研究結(jié)果與此報(bào)道一致。

Plac8 在呼吸道纖毛細(xì)胞、分泌細(xì)胞和肺樹(shù)突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及對(duì)SARS-CoV-2感染高度敏感的細(xì)胞中高度表達(dá)，定位于溶酶體區(qū)，是參與自噬反應(yīng)和程序性細(xì)胞死亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子，而ALI 誘發(fā)的炎癥反應(yīng)涉及免疫細(xì)胞等多種細(xì)胞的程序性死亡和細(xì)胞周期調(diào)控［28-30］。Plac8 通過(guò)作用于PI3K/Akt/NF-κB，PI3K/Akt/GSK3β 和Wnt信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和（或）凋亡，促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子IL-6 的產(chǎn)生，加重炎癥進(jìn)展［31-33］。本研究結(jié)果表明，Plac8 是DHA 作用的相關(guān)分子，可能是DHA 減輕ALI的新作用靶標(biāo)。差異表達(dá)基因GO和KEGG 通路富集分析顯示，DHA 主要通過(guò)調(diào)控炎癥與免疫反應(yīng)相關(guān)信號(hào)通路發(fā)揮減輕ALI 的作用，與Plac8和TLR7功能相符。

本研究結(jié)果表明，DHA 能夠減輕LPS 誘導(dǎo)的ALI，通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Plac8 和TLR7 可能是DHA治療ALI潛在靶點(diǎn)，其機(jī)制可能為DHA通過(guò)降低TLR7和Plac8mRNA的表達(dá)，負(fù)調(diào)控其參與的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進(jìn)而調(diào)控炎癥相關(guān)細(xì)胞因子分泌、免疫細(xì)胞活化等免疫反應(yīng)，以多靶點(diǎn)多途徑方式改善ALI，發(fā)揮抑制小鼠ALI的作用，減輕肺部炎癥損傷。