小建中合劑活性炭除雜工藝優(yōu)化及其制劑穩(wěn)定性影響研究

摘要：為提高小建中合劑制劑澄清度與穩(wěn)定性，選用活性炭除雜工藝純化小建中合劑，采用正交試驗評價法，以活性炭的用量、煮炭時間、除炭時的藥液溫度為考察因素，以芍藥苷轉(zhuǎn)移率、干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率為考察指標，進行方差分析、直觀分析結(jié)合加速穩(wěn)定性試驗結(jié)果，優(yōu)選小建中合劑活性炭除雜工藝，并在該條件下生產(chǎn)3批小建中合劑制劑進行長期穩(wěn)定性試驗。結(jié)果表明小建中合劑制劑煮炭除雜最佳工藝參數(shù)為活性炭使用量0.4%、煮炭時間30 min及濾過時藥液溫度100 ℃，此工藝條件擴大生產(chǎn)的平均芍藥苷轉(zhuǎn)移率為75.24%、干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率為89.08%。該試驗所得最佳煮炭除雜工藝可保證小建中合劑澄清度及穩(wěn)定性，同時最大程度保留芍藥苷及干物質(zhì)，從而保證藥品療效的穩(wěn)定均一，為小建中合劑煮炭除雜純化工藝參數(shù)的明確及優(yōu)化提供了科學(xué)、合理的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：小建中合劑；活性炭；高效液相色譜；芍藥苷；干物質(zhì)

中圖分類號：R283.6"" 文獻標志碼：A"" 文章編號：1002-4026（2024）04-0001-08

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標志碼（OSID）：

Optimization of activated charcoal impurity removal process for Xiaojianzhong

mixture and its impacton the stability of the mixture’s preparations

ZHANG Wei1，2，LIU Zhenyuan1，2，DU Haochen1，2*，GUO Tiantian1，2，YANG Mei1，3，

WANG Shandong1，3，HAN Pei1，2，SONG Xiangyun3，ZHANG Guimin2，3*

（1.Shandong Engineering Research Center of Generic Manufacture Technology of Traditional Chinese Medicine，Lunan Hope

Pharmaceutical Co.， Ltd.，" Linyi 276006， China; 2.State Key Laboratory of Integration and Innovation

of Classic Formula

and Modern Chinese Medicine， Lunan Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Linyi 276006， China;

3.Lunan Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Linyi 276006，China）

Abstract∶To improve the clarity and stability of Xiaojianzhong mixture， the activated charcoal impurity removal process was selected to purify Xiaojianzhong mixture. The orthogonal test evaluation method was used; the evaluation factors were the amount of activated charcoal， boiling time， and the temperature of the solution during charcoal removal. Furthermore， the transfer rates of paeoniflorin and dry matter were used as evaluation indicators. Variance and visual analyses as well as accelerated stability tests were conducted to optimize the activated charcoal purification process for Xiaojianzhong mixture.In order to carry out these above experiments， three batches of Xiaojianzhong mixture preparations were produced for long-term stability testing. Results showed that the optimal parameters for the activated charcoal boiling purification process of Xiaojianzhong mixture preparations were 0.4% activated charcoal usage， 30 min of activated charcoal boiling time， and a liquid temperature of 100 ℃ during filtration. The average transfer rates of paeoniflorin and dry matter in expanded production under these process conditions were 75.24% and 89.08%， respectively. The optimal activated charcoal boiling purification process obtained from this test can ensure the clarity and stability of Xiaojianzhong mixture preparations while maximizing the retention of paeoniflorin and dry matter， thereby ensuring stable and uniform drug efficacy. This study provides a scientific and reasonable basis forclarifying and optimizing the parameters of the activated charcoal boiling purification process for Xiaojianzhong mixture.

Key words∶Xiaojianzhong mixture; activated charcoal;HPLC; paeoniflorin; dry matter

小建中合劑來源于漢代張仲景《傷寒論》［1］中的經(jīng)典名方小建中湯，具有溫中補虛，緩急止痛之功效，由桂枝、白芍、炙甘草、生姜、大棗及飴糖經(jīng)過凈制、提取、純化、濃縮、灌封、滅菌處理而成的合劑，口服給藥發(fā)揮治療作用，其制劑的安全性、有效性、質(zhì)量可控性直接影響藥物的臨床療效［2-4］。因小建中在《傷寒論》中為湯劑，與湯劑最接近的劑型為合劑，現(xiàn)行藥典［5］規(guī)定：“除另有規(guī)定外，合劑應(yīng)澄清。在貯存期間不得有發(fā)霉、酸敗、變色、異物、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，允許有少量搖之易散的沉淀?！爆F(xiàn)行生產(chǎn)工藝為最大程度保留其有效成分，無醇沉等精制步驟，故所得制劑干物質(zhì)含量較高、澄清度較差、制劑穩(wěn)定性較差，因此如何在保留制劑干物質(zhì)及有效成分的同時又能去除影響制劑澄清度的脂溶性色素等雜質(zhì)，使合劑符合《中國藥典》的要求是小建中合劑制備過程中的難點［6-7］。

使用活性炭除雜工藝可以改善制劑澄清度［8-11］，但隨著活性炭用量的增加，藥物中芍藥苷等有效成分也被吸附。為最大程度保留藥物中有效成分，本文對小建中合劑的最佳活性炭除雜工藝進行了研究，選干物質(zhì)代表未知有效成分，同時以芍藥苷質(zhì)量濃度為質(zhì)量標準指標，以二者轉(zhuǎn)移率為考察指標，選用正交試驗評價法，以煮炭時間、活性炭的用量、除炭時藥液的溫度為考察因素，利用高效液相色譜法測定芍藥苷質(zhì)量濃度及干燥失重測定法測定藥液中干物質(zhì)質(zhì)量濃度，并賦予相應(yīng)權(quán)重，計算綜合得分，結(jié)合制劑加速穩(wěn)定性試驗，確定小建中合劑最佳活性炭除雜工藝。該工藝穩(wěn)定、重復(fù)性好，保證小建中合劑大生產(chǎn)的制劑中指標成份芍藥苷，未知成分干物質(zhì)質(zhì)量濃度及臨床療效，為合劑生產(chǎn)工藝的中成藥品種生產(chǎn)提供參考。

1 儀器、材料與試劑

1.1 儀器

Waters高效液相色譜儀（包括e2695四元泵、2998二極管陣列檢測器、自動進樣器，沃特世科技有限公司）；ZSH-100B型恒溫恒濕箱（上海偵翔機電科技有限公司）；EasyPlus Density Easy D40型密度計（上海梅特勒-托利多有限公司）；十萬分之一電子分析天平（TOLEDO LE204E，METTLER）；萬分之一電子分析天平（01193-YP601N，METTLER）；數(shù)控超聲波清洗器（昆山潔力美超聲儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號RK-2002EX，鄭州科泰實驗設(shè)備有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（型號GZX-9240MBE，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；純水/超純水系統(tǒng)。

1.2 材料與試劑

小建中合劑供配液（魯南厚普藥物研發(fā)中心制備，批號：210302、211005），高效液相用試劑均為色譜純，分析用試劑均為分析純；芍藥苷標準品（Paeoniflorin，中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-202044，純度≥96.8%）。

2 方法

2.1 芍藥苷質(zhì)量濃度測定

芍藥苷質(zhì)量濃度（ρ（芍藥苷））測定方法參考《中國藥典》2020年版一部［12］小建中合劑項下高效液相色譜法測定ρ（芍藥苷）

的方法。

2.1.1 色譜條件

Agilent EORBAX Extend G18（4.6 mm×250 mm，5 μm） Agilent-016；流動相：0.3%磷酸（A）—甲醇（B），梯度洗脫（0～20 min，75% A；20～21 min，75%→10% A；21～28 min，10%A；28～29 min，10%→75% A；29～40 min，75% A）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：230 nm；進樣體積：5 μL。

2.1.2 對照品溶液的制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成質(zhì)量濃度為60 μg/mL的溶液即得。

2.1.3 供試品溶液的制備

精密稱定小建中合劑藥液約1.0 g，置50 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

小建中合劑藥液液相色譜圖及芍藥苷對照圖譜見圖1，計算藥液中ρ（芍藥苷），并計算芍藥苷轉(zhuǎn)移率，公式如下：

芍藥苷轉(zhuǎn)移率=煮炭后濾過液ρ（芍藥苷）×煮炭后濾過液質(zhì)量小建中合劑供配液ρ（芍藥苷）×供配液質(zhì)量×100%。（1）

2.2 干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率測定

干物質(zhì)得率測定方法參考《中國藥典》2020年版四部［5］通則0831干燥失重測定法，精密量取供配液10 mL，稱量，記錄藥液質(zhì)量，水浴蒸干，置于105 ℃烘箱，干燥至恒重，干燥器中冷卻至室溫，稱重，計算干物質(zhì)得率及干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率，公式如下：

干物質(zhì)得率=（干物質(zhì)質(zhì)量/藥液質(zhì)量）×100%，（2）

干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率=煮炭后濾過液質(zhì)量×煮炭后濾過液干物質(zhì)得率供配液質(zhì)量×供配液干物質(zhì)得率×100%。（3）

2.3 相對密度的測定

按照《中國藥典》2020年版四部［5］相對密度測定法（通則0601）項下的震蕩型密度計法，取供試品，在與儀器校準時相同的條件下進行測定，測量時應(yīng)確保震蕩管中沒有氣泡形成，同時還應(yīng)保證樣品實際溫度與測量溫度一致。

2.4 澄清度的測定

按照《中國藥典》2020年版四部［5］澄清度檢測法（通則0902）項下的第一法（目測法），并作出適當修改，將藥品溶液與規(guī)定的濁度標準液相比較，用以檢查溶液的澄清程度，濁度標準液配制與分級見表1、表2。

2.5 活性炭除雜工藝正交試驗設(shè)計

取小建中合劑供配液，根據(jù)活性炭除雜的影響因素及有效成分的性質(zhì)，對活性炭的用量、煮炭時間、濾過時藥液的溫度進行了考察。為了使活性炭除雜工藝更趨合理，本研究采用了L9（34）正交表進行正交試驗開展活性炭除雜工藝優(yōu)化。根據(jù)因素水平表3，取小建中合劑1個處方量供配液，含有芍藥苷3.35 g，共計9份，按設(shè)計方案進行煮炭，濾過，得濾液。以芍藥苷、干物質(zhì)為考察指標，測定濾液中ρ（芍藥苷）及干物質(zhì)，計算芍藥苷及干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率，設(shè)芍藥苷轉(zhuǎn)移率權(quán)重為0.5，干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率權(quán)重為0.5，綜合得分用下列公式計算：

綜合得分=芍藥苷轉(zhuǎn)移率×50%×100+干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率×50%×100。（4）

2.6 小建中合劑加速試驗穩(wěn)定性考察

取樣品在加速條件下溫度（40±2）℃、相對濕度75％±5%的條件下放置6個月進行加速試驗，分別于初始月、3個月、6個月取樣，觀察樣品澄清度，澄清度合格按取樣點進行質(zhì)量檢測，澄清度不合格即為結(jié)束穩(wěn)定性試驗［5］。

2.7 最佳活性炭吸附除雜工藝驗證試驗

按批次量擴大10倍稱取小建中合劑供配液，共計3份，加入0.4%活性炭，加熱煮沸30 min，藥液100 ℃時慢速濾紙濾過，得濾過液。按《中國藥典》2020年版一部［12］小建中合劑項下制法加入防腐劑苯甲酸鈉與桂枝揮發(fā)油，加水定容至體積，攪勻，灌封，滅菌，即得。

2.8 小建中合劑長期試驗穩(wěn)定性考察

取3批驗證試驗樣品，在溫度（25±2）℃、相對濕度60％±5%的條件下放置12個月進行長期試驗，分別于初始月、3個月、6個月、9個月、12個月取樣檢測，考察澄清度、相對密度、ρ（芍藥苷）、鑒別和微生物限度檢測。

3 結(jié)果與分析

3.1 正交試驗結(jié)果與分析

3.1.1 正交試驗測定結(jié)果直觀分析

正交試驗煮炭后藥液綜合得分直觀分析見表4，根據(jù)極差可知，對綜合得分影響由大到小為活性炭用量、濾過時藥液的溫度、煮炭時間。因素A活性炭用量對綜合得分的影響由大到小為0.3%、0.4%、0.5%，因素B煮炭時間對綜合得分的影響由大到小為10、30、50 min，因素C濾過時藥液的溫度對綜合得分的影響由大到小為100、50、6 ℃。

3.1.2 正交試驗測定結(jié)果方差分析

由表5的方差分析可以看出，煮炭時間及濾過時藥液的溫度均無顯著影響，可根據(jù)直觀分析結(jié)果選擇最佳煮炭時間及濾過時間；活性炭用量對綜合得分有顯著性影響，說明隨著活性炭用量增加對藥液中芍藥苷及干物質(zhì)損失也會增加，需結(jié)合樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果盡量減少活性炭使用量。

3.2 正交試驗樣品加速穩(wěn)定性試驗

取正交試驗9組樣品濾液，分別按《中國藥典》2020年版一部［12］小建中合劑項下制法加入防腐劑苯甲酸鈉與桂枝揮發(fā)油，加水定容至1 000 mL，攪勻，灌封，滅菌，即得9組正交試驗樣品制劑。

取9組正交試驗樣品制劑，分別放入恒溫恒濕箱設(shè)定溫度（40±2）℃、相對濕度75％±5%的條件下放置6個月進行加速試驗，分別于初始月、3個月、6個月取樣檢測，觀察樣品根據(jù)表2對澄清度進行分級，澄清度1級為合格按取樣點進行質(zhì)量檢測，澄清度為2～3級及以上為不合格結(jié)束穩(wěn)定性試驗，加速試驗結(jié)果見表6。

3.3 最佳活性炭除雜工藝驗證試驗

測定濾液中芍藥苷及干物質(zhì)質(zhì)量，計算芍藥苷及干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表7。3次煮炭后濾液中總芍藥苷平均質(zhì)量為25.73 g、總干物質(zhì)平均質(zhì)量為9 798.90 g，芍藥苷平均轉(zhuǎn)移率為75.24%、干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率為89.08%，試驗結(jié)果與小試工藝優(yōu)選結(jié)果無顯著差異。通過3次平行驗證試驗，得到濾液總芍藥苷和干物質(zhì)質(zhì)量的結(jié)果，其相對標準偏差值均較小，分別為0.54%、0.23%，表明工藝穩(wěn)定、合理。

3.4 驗證試驗樣品長期穩(wěn)定性試驗

取3批驗證試驗樣品制劑，分別放入恒溫恒濕箱設(shè)定溫度（25±2）℃、相對濕度60％±5%的條件下放置12個月進行長期試驗，分別于初始月、3個月、6個月、9個月、12個月取樣，考察澄清度、相對密度、ρ（芍藥苷）、鑒別和微生物限度檢測。長期試驗結(jié)果見表8。

4 討論與結(jié)論

通過方差分析結(jié)果可以看出活性炭用量對芍藥苷及干物質(zhì)質(zhì)量濃度影響較為顯著，應(yīng)盡量減小活性炭用量來保證芍藥苷及干物質(zhì)質(zhì)量濃度的轉(zhuǎn)移率，在選擇活性炭用量時要結(jié)合制劑穩(wěn)定性加速試驗結(jié)果選擇最佳活性炭用量，通過直觀分析及制劑穩(wěn)定性加速試驗結(jié)果選擇最佳煮炭時間及濾過時藥液溫度。

本實驗以小建中合劑供配液為原料，研究了小建中合劑煮炭除雜工藝對芍藥苷質(zhì)量濃度及干物質(zhì)質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)移率的影響；實際生產(chǎn)過程中，煮炭除雜工藝采用加入0.4%活性炭使用量、煮炭30 min并趁熱100 ℃濾過，所得濾過藥液中芍藥苷及干物質(zhì)轉(zhuǎn)移率最高平均為75.24%和89.08%，該方法可解決合劑生產(chǎn)工藝無醇沉等精制步驟帶來的制劑澄清度差、穩(wěn)定性差的難題，最大程度地保留藥液中指標成份芍藥苷及干物質(zhì)代表未知成分的轉(zhuǎn)移率，同時保證小建中合劑在存放過程中制劑的澄清度去除脂溶性色素等雜質(zhì)，從而達到活性炭吸附除雜，保證藥品療效的穩(wěn)定均一。

該研究為小建中合劑制劑工藝提供試驗研究基礎(chǔ)，同時對其他合劑中成藥的制劑穩(wěn)定性也有借鑒作用。該煮炭除雜工藝穩(wěn)定，重復(fù)性好，可最大程度降低活性炭吸附對芍藥苷及干物質(zhì)的損失，保證小建中合劑大生產(chǎn)的制劑中指標成份芍藥苷及未知成分干物質(zhì)的質(zhì)量濃度及臨床療效，為合劑生產(chǎn)工藝的中成藥品種生

產(chǎn)提供參考。

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