DNA錯配修復(fù)主要蛋白與胃腺癌臨床病理特征的關(guān)系及其臨床意義

【摘要】目的 檢測胃腺癌患者錯配修復(fù)（MMR）主要蛋白的表達情況，分析錯配修復(fù)缺陷（dMMR）與胃腺癌患者病理特征的關(guān)系。方法 收集2021年1月至2022年12月隴南市第一人民醫(yī)院收治的65例初治胃腺癌患者的臨床資料，根據(jù)MMR主要蛋白的檢測結(jié)果，將其分為pMMR組（MMR蛋白無缺失，n=52）與dMMR組（MMR蛋白有缺失，n=13）。比較兩組患者的一般資料、病理學(xué)參數(shù)，并對MMR主要蛋白缺失的影響因素進行分析。結(jié)果 兩組患者腫瘤浸潤深度、腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均Plt;0.05），腫瘤部位、Lauren分型、分化程度、腫瘤大小等差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均Pgt;0.05）。經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤深度、TNM分期是胃腺癌中MMR表達缺失的影響因素（均Plt;0.05）。結(jié)論 MMR主要蛋白缺失與胃腺癌患者的腫瘤浸潤深度、TNM分期具有一定關(guān)聯(lián)，完善MMR主要蛋白檢測，對胃腺癌的臨床診治工作可能有良好指導(dǎo)作用。

【關(guān)鍵詞】胃腺癌；病理特征；錯配修復(fù)；主要蛋白表達；缺失

中圖分類號：R735.2 文獻標識碼：A 文章編號：2096-2665.2023.16.00.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.16.030

錯配修復(fù)（MMR）系統(tǒng)由人類mut-l同源物1（hMLH1）、減數(shù)分裂后分離蛋白2（hPMS2）、人類mut-s同系物2（hMSH2）等組成，與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間具有緊密聯(lián)系。在DNA甲基化、基因突變等因素的作用下，可引起MMR基因缺失，改變基因序列長度，產(chǎn)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）現(xiàn)象，并誘發(fā)癌癥?，F(xiàn)有研究表明，在胃癌[1]、結(jié)直腸癌[2]、子宮內(nèi)膜癌[3]等多種腫瘤中存在MSI現(xiàn)象。參考2020版胃癌臨床實踐指南[4]，MMR基因引起的MSI可能是胃癌發(fā)病的新機制，臨床需增加胃癌患者的MSI狀態(tài)檢測。MSI檢測對胃癌患者預(yù)后的預(yù)測、輔助化療方案的決策及晚期病例的免疫治療等皆有重要的指導(dǎo)價值，選擇免疫組織化學(xué)染色法（IHC）檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四種MMR蛋白抗體，借此判斷是否存在MSI現(xiàn)象，是既往常用微衛(wèi)星狀態(tài)檢測方法，具有操作簡單、準確度較高、成本低等優(yōu)勢[5]。本研究對胃腺癌組織中MMR主要蛋白的表達情況進行討論，就其所致MSI現(xiàn)象與患者病理特征之間的關(guān)聯(lián)進行分析，明確MMR主要蛋白檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021年1月至2022年12月隴南市第一人民醫(yī)院收治的65例初治胃腺癌患者的臨床資料。本研究經(jīng)隴南市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。納入標準：①參考相關(guān)指南[6]進行診斷，經(jīng)病理診斷確診；②有足夠原發(fā)病，可完成免疫組織檢測；③此前未接受手術(shù)、放化療或免疫治療等；④臨床病理資料完整。排除標準：①無明確病理診斷；②初診時合并其他惡性腫瘤；③伴心、肝、腎等功能障礙；④造血功能嚴重異常；⑤入院前接受其他治療。

1.2 檢測方法 MMR蛋白檢測：使用手工染色方式對mut-l同源物1（MLH1）、mut-s同源物2（MSH2）、mut-s同源物6（MSH6）、減數(shù)分裂后分離蛋白2（PMS2）進行免疫組化染色。癌組織經(jīng)固定、包埋、制片、烤片、脫蠟水化后，進行抗原修復(fù)（Tris-EDTA，pH 8.4），高溫、高壓修復(fù)2 min后，自然冷卻；經(jīng)一抗孵育、二抗孵育、Fast-red顯色、DAB顯色、復(fù)染、封片，進行結(jié)果判讀。所用一抗均為鼠單克隆抗體，由福州邁新公司提供；DAB顯色試劑盒為邁新工作液。判讀復(fù)核由2名具有豐富病理組織學(xué)經(jīng)驗的病理醫(yī)師完成。在內(nèi)對照細胞核著色情況良好的前提下，出現(xiàn)棕黃色顆粒染色，則認定為陽性。根據(jù)4種MMR蛋白表達情況進行分組，無缺失的52例患者判讀為表達正常，作為pMMR組；有缺失的13例患者判讀為表達異常，作為dMMR組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料用（x±s）表示，用t檢驗；計數(shù)資料用[例（%）]表示，用χ2檢驗。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般病理資料比較 兩組患者的性別、年齡等一般病理資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均Pgt;0.05），見表1。

2.2 兩組患者臨床病理學(xué)參數(shù)比較 兩組患者腫瘤浸潤深度、腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均Plt;0.05），腫瘤部位、Lauren分型、分化程度、腫瘤大小等比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均Plt;0.05），見表2。

2.3 MMR主要蛋白表達的影響因素 將差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標作為自變量，按表3進行賦值，納入Logistic回歸模型中進行分析。結(jié)果顯示，腫瘤浸潤深度、TNM分期是胃腺癌中MMR表達缺失的影響因素（均Plt;0.05），見表4。

3 討論

胃癌的精準治療是近年來學(xué)術(shù)研究的重點。根據(jù)相關(guān)流行病學(xué)資料[7]，目前我國胃癌發(fā)病率仍處于較高水平，雖然相關(guān)篩查工作的開展為胃癌的早診早治創(chuàng)造了良好條件，但如何準確判斷患者的病情并實施精準治療，仍然是迫切需要解決的難題。按精準醫(yī)學(xué)的基本理念，在診治過程中，需要對腫瘤組織的各項情況進行準確判斷，如病灶部位、腫瘤大小、周圍組織受累情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的范圍，以此為基礎(chǔ)，遵循個體化治療原則，選取單純手術(shù)或手術(shù)+輔助放化療等治療方案，準確去除腫瘤組織，并最大限度降低各治療操作對患者機體造成的損害。為建立有效的預(yù)后評估工作，實現(xiàn)不同病理類型胃癌患者的精準治療，國內(nèi)外學(xué)者圍繞胃癌的分子分型進行深入研究。根據(jù)TCGA提出的分型標準，胃癌共有EBV陽性型、MSI型、GS型、CIN型4種。2015年，亞洲癌癥研究組織（ACRG）的一項研究表明，胃癌不同亞型的復(fù)發(fā)率、生存時間等存在一定的差異[8]。根據(jù)不同病理類型的特征，完善相關(guān)檢測與分析方法，明確各類型鑒別的具體標準，有助于患者預(yù)后的初步評估及后續(xù)治療方案的決策。本研究圍繞MMR主要蛋白與胃腺癌患者病理特征之間的關(guān)聯(lián)展開分析，結(jié)果顯示，胃腺癌患者有出現(xiàn)MMR主要蛋白表達缺失的概率，且蛋白表達是否缺失，與部分腫瘤病理特征之間存在關(guān)聯(lián)。

本研究共納入65例胃腺癌患者，所有患者均為初次確診，且入院前未接收其他治療。從MMR蛋白表達的檢測結(jié)果看，本組患者中，共13例患者被檢出MMR主要蛋白表達缺失。按是否存在蛋白表達缺失進行分組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者病理特征的統(tǒng)計結(jié)果不完全一致，兩組腫瘤浸潤深度、腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而腫瘤部位、Lauren分型、分化程度、腫瘤大小等資料的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，考慮MMR蛋白表達可能與胃腺癌組織病理特征之間存在關(guān)聯(lián)。在一般病例資料中，兩組患者的性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而既往部分文獻[9]報道女性高齡患者更容易出現(xiàn)MSI型胃癌，分析其原因，可能與地域差異、飲食文化差異或本研究納入的樣本過少等因素有關(guān)。胃腺癌一般是胃腺體細胞惡變所致，疾病范圍與其他類型胃癌有所差異。本研究中，兩組患者的腫瘤部位均以胃竇部、幽門為主。腫瘤Lauren分型對患者的病情評估有重要參考價值，本研究發(fā)現(xiàn)，胃腺癌患者分型以腸型、混合型為主，未定型病例相對較少，且兩組腫瘤分型的分布情況不存在明顯差異。分化程度可反映腫瘤組織的惡性程度，對患者的病理分型、病情評估及綜合治療方案的決策等皆有參考作用。本研究中，兩組患者腫瘤均以中分化、低分化為主，pMMR組有3例（5.77%）高分化，組間無明顯差異。腫瘤浸潤深度是反映腫瘤生長深度的重要參數(shù)，一般認為，浸潤深度相對較淺的腫瘤細胞，分化程度較高，經(jīng)積極治療后，多數(shù)患者可獲得良好預(yù)后。本研究中，pMMR組患者的浸潤多集中在T2期、T3期，而dMMR組T3期及以上的占比高達92.31%，經(jīng)對比分析，兩組患者腫瘤組織浸潤深度的分布情況存在差異。腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與患者的病情評估及預(yù)后評估密切相關(guān)，本研究提示，兩組分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況存在關(guān)聯(lián)。

為進一步明確主要蛋白表達缺失與患者病理特征之間的關(guān)聯(lián)，本研究將具有統(tǒng)計學(xué)差異的3項指標納入Logistic回歸模型中進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤深度、TNM分期是胃腺癌中MMR表達缺失的影響因素。由此考慮，在胃腺癌患者診治過程中，完善腫瘤組織MMR主要蛋白檢測工作，對各類蛋白表達缺失情況進行準確判讀，不僅有助于患者分子分型的判斷，在胃腺癌治療方面可能也具有臨床價值。建議后續(xù)研究中，可重點關(guān)注四種蛋白表達缺失的分布情況以及不同缺失類型之間的差異等問題，通過擴大樣本量，開展多中心前瞻性研究等方式，分析MMR蛋白檢測在胃腺癌診治中的臨床意義。

綜上所述，在胃腺癌患者中，蛋白缺失可能與胃腺癌患者的浸潤深度、TNM分期之間存在關(guān)聯(lián)，考慮MMR蛋白檢測結(jié)果對胃腺癌的診治工作有指導(dǎo)作用，但其具體臨床意義仍未完全明確，仍需進一步跟蹤隨訪。

參考文獻

高潔， 史明鵬， 宋婷婷， 等. HER2陽性胃癌組織MSI和PD-L1表達及意義[J]. 青島大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2021， 57（1）： 59-63.

王麗， 袁會軍， 錢震， 等. 結(jié)直腸癌中錯配修復(fù)功能缺陷/微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)與免疫檢查點抑制劑治療的研究進展[J]. 中華病理學(xué)雜志， 2018， 47（11）： 884-886.

張煜涵， 吳煥文， 王靖， 等. 錯配修復(fù)缺陷的子宮內(nèi)膜樣腺癌中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析[J]. 中華病理學(xué)雜志， 2021， 50（5）： 470-475.

林晨， 張再重， 王烈. 美國國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)臨床實踐指南：胃癌（2020V2）更新要點和解讀[J]. 臨床外科雜志， 2021， 29（1）： 23-25.

PELTOMAKI P. Deficient DNA mismatch repair： A common etiologic factor for colon cancer[J]. Human Molecular Genetics， 2001， 10（7）： 735-740.

徐澤寬. 2015年V1版《NCCN胃癌臨床實踐指南》更新解讀[J]. 中國實用外科雜志， 2015（5）： 512-514， 518.

曹毛毛， 李賀， 孫殿欽， 等. 2000—2019年中國胃癌流行病學(xué)趨勢分析[J]. 中華消化外科雜志， 2021， 20（1）： 102-109.

CRISTESCU R， LEE J， NEBOZHYN M， et al.Molecular analysis of gastric cancer identifies subtypes associated with distinct clinical outcomes[J].Nature Medicine， 2015， 21（5）： 449-456.

POLOM K， MARANO L， MARRELLI D， et al. Meta-analysis of microsatellite instability in relation to clinicopathological characteristics and overall survival in gastric cancer[J]. British Journal of Surgery， 2018， 105（3）： 159-167.