魚類性別特異分子標(biāo)記篩選及分子性控育種研究現(xiàn)狀與展望

劉 洋，陳松林*

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，海水養(yǎng)殖生物育種與可持續(xù)產(chǎn)出全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071；2.山東省海洋漁業(yè)生物技術(shù)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071)

1 引言

中國是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，近二十年來，中國水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量一直占世界水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量的三分之二左右，具有舉足輕重的地位。魚類是水產(chǎn)養(yǎng)殖的主體，魚類養(yǎng)殖業(yè)是保障國家糧食安全的重要產(chǎn)業(yè)。2022 年我國水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量5 565.46 萬t，其中魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量2 903.04 萬t，占水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量的52.16%。培育養(yǎng)殖魚類良種，提高單位水體的魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量，增加魚類養(yǎng)殖收益，是踐行“打好種業(yè)翻身仗”、實(shí)踐大食物觀、增加我國優(yōu)質(zhì)蛋白供應(yīng)渠道與總量、提高我國食品安全指數(shù)和改善全民膳食結(jié)構(gòu)的有效途徑。

許多魚類都存在典型的性別二態(tài)性現(xiàn)象，雌雄個(gè)體在生長速率上存在明顯差異。如羅非魚(Oreochromisspp.) 和黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)等淡水魚類雄魚比雌魚生長速率快30%～200%，而大麻哈魚(Oncorhynchus keta)、鱖(Siniperca chuatsi)和半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)等魚類的雌性個(gè)體比雄性個(gè)體生長快，特別是半滑舌鰨，其雌性個(gè)體生長速率比雄性個(gè)體快2～4 倍。因此，開展上述魚類的性別控制研究，培育全雄(或全雌)苗種，進(jìn)行單性養(yǎng)殖對(duì)于提高單位養(yǎng)殖產(chǎn)量具有重要意義。魚類性別控制和單性養(yǎng)殖一直都是國際上的重要研究課題，而性別特異分子標(biāo)記作為開展性別決定機(jī)制研究與性別控制的基礎(chǔ)工具，始終是魚類性別決定和性別控制研究中的前沿?zé)狳c(diǎn)，國際上一直都在尋找不同魚類性別特異的分子標(biāo)記，并建立可靠的遺傳性別鑒定方法。

自20 世紀(jì)90 年代以來，科學(xué)家紛紛采用限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA 標(biāo)記 (random amplified polymorphic DNA,RAPD)、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)和簡單重復(fù)序列(simple sequence repeats,SSR)等不同的分子標(biāo)記技術(shù)，嘗試發(fā)掘魚類性別特異分子標(biāo)記。國外早期研究取得的進(jìn)展主要包括Devlin 等[1]在大鱗鉤吻鮭(O.tshawytscha)上開發(fā)出了Y 染色體特異的雄性特異標(biāo)記，這是最早的魚類性別特異分子標(biāo)記的報(bào)道；Allendorf 等[2]通過差減雜交方法在虹鱒(O.mykiss)上獲得了1 個(gè)雄性特異的DNA 片段；Iturra 等[3]用RAPD 技術(shù)和集團(tuán)分離分析法(bulked segregant analysis,BSA)在虹鱒基因組中找到了2 個(gè)雄性特異的分子標(biāo)記；Lee 等[4]用BSA 方法在尼羅羅非魚(O.niloticus)上找到10 個(gè)與表型性別連鎖的微衛(wèi)星標(biāo)記，這些標(biāo)記可以用于不同Y 染色體等位基因功能的研究和具有1 個(gè)或者幾個(gè)Y 染色體拷貝的親魚的鑒定；Griffiths 等[5]在三刺魚(Gasterosteus aculeatus)中找到了2 個(gè)雄性特異的AFLP 標(biāo)記，但當(dāng)應(yīng)用于另外兩種刺魚時(shí)，卻未能正確的鑒定其性別；Ezaz 等[6]用AFLP 技術(shù)掃描尼羅羅非魚基因組，找到3 個(gè)Y 染色體連鎖的AFLP 標(biāo)記，然而這些標(biāo)記卻不能鑒別無親緣關(guān)系的個(gè)體性別，表明這些標(biāo)記并不是物種通用的雄性特異分子標(biāo)記。

我國養(yǎng)殖魚類多達(dá)200 余種，很多魚類都存在性別二態(tài)性現(xiàn)象，具有單性育種的必要性，因此，魚類性別特異分子標(biāo)記篩選對(duì)于我國魚類性別控制和養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展尤其重要。國內(nèi)學(xué)者自20世紀(jì)初就開展了魚類性別特異分子標(biāo)記篩選的研究，目前，我國已在半滑舌鰨等三十多種養(yǎng)殖魚類上篩選到性別特異分子標(biāo)記，并建立了分子標(biāo)記輔助性控技術(shù)，使我國在魚類性別特異分子標(biāo)記篩選上躋身國際前列。下面本文系統(tǒng)回顧一下我國魚類性別特異分子標(biāo)記篩選的研究歷程、取得的重要進(jìn)展及今后的發(fā)展方向。

2 我國魚類性別特異分子標(biāo)記研究歷程

2.1 我國魚類性別特異分子標(biāo)記研究的探索期(2001—2006)

借鑒國外魚類性別特異分子標(biāo)記的研究經(jīng)驗(yàn)，國內(nèi)學(xué)者在不同魚類上開展了相應(yīng)的研究，嘗試在養(yǎng)殖魚類中找到性別特異分子標(biāo)記。如常重杰等[7]利用40 種隨機(jī)引物在2 種泥鰍的3 個(gè)地理群體雌雄各30 尾個(gè)體中未發(fā)現(xiàn)性別特異片段；宋平等[8]應(yīng)用RAPD 在黃顙魚中也沒有找到性別特異的DNA 片段；李建中等[9]共采用了120 個(gè)隨機(jī)引物，以雌、雄性異源四倍體鯽(Carassius auratus)、鯉(Cyprinus carpio)DNA 池為模板，同時(shí)進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)有14 個(gè)重復(fù)性好、帶型清晰明亮且雌雄群體有差異，但在進(jìn)一步驗(yàn)證中，只有引物S129 在雌雄個(gè)體間存在差異。

2.2 我國魚類性別特異分子標(biāo)記篩選的突破期(2007—2012)

半滑舌鰨性別特異分子標(biāo)記的發(fā)現(xiàn) 半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)主要生活于我國的黃渤海海域，其肉味鮮美，營養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者歡迎，市場價(jià)值高。但半滑舌鰨雌雄個(gè)體生長差異大，研究表明，2 齡雌性成魚體重平均為同齡雄魚的3.28 倍[10]，而在普通養(yǎng)殖群體中，雄魚比例高達(dá)80%左右，這導(dǎo)致半滑舌鰨養(yǎng)殖產(chǎn)量降低、成本升高，影響了半滑舌鰨苗種的推廣和產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，開展半滑舌鰨性別控制研究，提高雌魚比例，對(duì)于半滑舌鰨養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。要進(jìn)行性別控制，首先要能進(jìn)行遺傳性別鑒定，因此，篩選半滑舌鰨性別特異分子標(biāo)記成為進(jìn)行性別控制育種研究的重要前提。

半滑舌鰨雌性特異AFLP 標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所陳松林團(tuán)隊(duì)，采用64 個(gè)AFLP 引物組合對(duì)半滑舌鰨雌雄魚基因組進(jìn)行了掃描，篩選到 7 個(gè)雌性特異的DNA 條帶，并首次開發(fā)出半滑舌鰨雌性特異的AFLP 分子標(biāo)記M1。隨后，根據(jù)雌性特異AFLP 標(biāo)記M1 的核苷酸序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物，成功將M1 轉(zhuǎn)化為SCAR 標(biāo)記。使用研發(fā)的SCAR 標(biāo)記分別擴(kuò)增57個(gè)雌性和55 個(gè)雄性半滑舌鰨個(gè)體的DNA，在所有雌性個(gè)體中均擴(kuò)增出一個(gè)特異的DNA 條帶，而所有雄性個(gè)體中則未擴(kuò)增出該條帶，從而證明了黃海所開發(fā)的半滑舌鰨雌性特異標(biāo)記與PCR 技術(shù)的有效性[11]，這也是我國發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)魚類性別特異分子標(biāo)記。

半滑舌鰨性別特異微衛(wèi)星標(biāo)記的研發(fā)半滑舌鰨是ZW 型性別決定類型[12]。根據(jù)遺傳學(xué)經(jīng)典理論，半滑舌鰨雌魚產(chǎn)生Z 型和W 型兩種卵子，通過人工雌核發(fā)育可以生產(chǎn)ZZ 型雄和WW型超雌兩種雌核發(fā)育魚苗，將WW 超雌魚苗培育成熟，然后與ZZ 雄魚交配，即可大量生產(chǎn)ZW型全雌魚苗。而要篩選培育WW 超雌個(gè)體，其前提是必須能鑒定出WW 超雌個(gè)體和普通ZW 雌性個(gè)體，因此半滑舌鰨WW 超雌個(gè)體的鑒定成為研制半滑舌鰨全雌魚苗的關(guān)鍵。而中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所2007 篩選到的半滑舌鰨雌性特異AFLP 標(biāo)記是一種顯性遺傳標(biāo)記，盡管能區(qū)分ZZ 雄魚和ZW 雌魚，但難以區(qū)分ZW 雌和WW 超雌。因此，探索能夠區(qū)分半滑舌鰨ZW 雌魚和WW 超雌的分子標(biāo)記，對(duì)于篩選和大量培育超雌個(gè)體，進(jìn)而培育半滑舌鰨全雌苗種，具有重要意義。為此，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所在完成半滑舌鰨全基因組測序和組裝的基礎(chǔ)上，對(duì)雌、雄魚基因組序列進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)了性別連鎖的微衛(wèi)星標(biāo)記并進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，其中1 個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記CseF-SSR1 與半滑舌鰨性別緊密連鎖，是性別特異微衛(wèi)星標(biāo)記。采用CseFSSR1 引物分別擴(kuò)增性成熟的半滑舌鰨雌、雄魚各12 尾，雌魚可以擴(kuò)增出2 個(gè)片段，而雄魚只能擴(kuò)增出其中1 個(gè)片段，因此，確定僅在半滑舌鰨雌性中擴(kuò)增出的DNA 片段為W 染色體特異片段[13]。

采用上述微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)半滑舌鰨卵裂雌核發(fā)育孵出前胚胎進(jìn)行鑒定，從39 尾異精卵裂雌核發(fā)育孵出前胚胎中檢測到4 個(gè)只含有W 染色體片段胚胎，由此初步表明，在半滑舌鰨異精卵裂雌核發(fā)育孵出前胚胎中含有約10%的超雌個(gè)體。半滑舌鰨性別特異微衛(wèi)星標(biāo)記為半滑舌鰨性別控制和全雌育種提供了重要技術(shù)手段，在半滑舌鰨繁殖用親魚鑒定、雌核發(fā)育魚苗鑒定、性別控制以及高雌苗種培育中具有重大應(yīng)用價(jià)值和廣闊的推廣前景。

黃顙魚雄性特異AFLP 標(biāo)記的發(fā)現(xiàn) 黃顙魚是我國重要淡水養(yǎng)殖魚類。但黃顙魚存在雌雄生長速率差異大，雌魚生長速率明顯慢于雄魚，據(jù)報(bào)道，雄魚要比雌魚生長速率快2 倍。因此，開展黃顙魚性別控制研究，培育全雄黃顙魚苗種，對(duì)于黃顙魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義和應(yīng)用價(jià)值。中國科學(xué)院水生生物研究所桂建芳團(tuán)隊(duì)2009年使用256 個(gè)AFLP 引物組合對(duì)三種遺傳性別的6 個(gè)樣品(XX 混合樣品、XX 個(gè)體、XY 混合樣品、XY 個(gè)體、YY 混合樣品和YY 個(gè)體)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增后分析，發(fā)現(xiàn)共有24 個(gè)引物組合能夠擴(kuò)增出Y 或X 染色體連鎖的片段。其中，引物組合E6M3 和E5M12 擴(kuò)增出X 染色體連鎖片段Pf63-X 和Pf512X；由此發(fā)現(xiàn)了黃顙魚性染色體連鎖的DNA 片段，篩選到黃顙魚X 和Y 染色體連鎖的AFLP 標(biāo)記[14]，解決了黃顙魚遺傳性別鑒定的技術(shù)難題。

2.3 我國魚類性別特異分子標(biāo)記篩選的快速發(fā)展期(2013—2023)

我國魚類性別特異分子標(biāo)記篩選工作的爆發(fā)性增長 由于性別特異分子標(biāo)記在魚類性別決定機(jī)制研究和性控育種中的重要作用，長期以來，我國魚類科研工作者一直努力在不同魚類上篩選性別特異標(biāo)記。然而，RFLP、RAPD、AFLP和SSR 等分子標(biāo)記開發(fā)與鑒定通量低，工作量大，加之魚類性別決定機(jī)制復(fù)雜，大多數(shù)魚類具有性染色體分化不明顯，性別特異區(qū)間小等特點(diǎn)，篩選到性別特異標(biāo)記的魚類種類較少。2014 年，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所陳松林領(lǐng)銜完成了我國第一個(gè)養(yǎng)殖魚類(半滑舌鰨)全基因組測序工作[15]，建立了通過雌、雄魚基因組序列比對(duì)篩選性別特異分子標(biāo)記的方法，大大提高了性別特異分子標(biāo)記的篩選精度。隨著全基因組測序在水產(chǎn)動(dòng)物中的普及和測序成本的降低，高通量的基因組測序在魚類性別特異標(biāo)記的篩選中已經(jīng)從參考工具發(fā)展為常用的技術(shù)手段，再加上通過傳統(tǒng)分子標(biāo)記技術(shù)篩選性別特異標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展和經(jīng)驗(yàn)的積累，我國魚類性別特異分子標(biāo)記的研究進(jìn)入快速發(fā)展期 (表1)，在包括半滑舌鰨、黃顙魚、條石鯛、尼羅羅非魚、鯉、大口鲇、大黃魚、烏鱧、平鲉、大刺鰍、黃姑魚、翹嘴紅鲌、金錢魚、鳙、鰱、奧利亞羅非魚、斑石鯛、圓斑星鰈、鰻鱺、黃姑魚、斑鱧、卵形鯧鲹、四棘金錢魚、鯪魚、香魚、大口黑鱸、長吻鮠、弓背青鳉、光倒刺鲃等三十多種魚類中篩選到性別特異分子標(biāo)記。

魚類性別特異分子標(biāo)記的優(yōu)化與鑒定應(yīng)用 為了使性別特異分子標(biāo)記更好進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用，在一些養(yǎng)殖魚類中，性別特異分子標(biāo)記及配套的遺傳性別鑒定方法得到了優(yōu)化。以半滑舌鰨為例，研究表明半滑舌鰨存在自然性逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象，在養(yǎng)殖群體中存在偽雄魚，這種偽雄魚遺傳性別為ZW 雌性，生理性別為雄性，可產(chǎn)生精子并繁育后代。然而，其后代中偽雄比例占ZW 型魚的90%以上，導(dǎo)致雌性比例大為降低。因此，在繁育前將雄性親本進(jìn)行遺傳性別鑒定，剔除偽雄魚，是培育半滑舌鰨高雌苗種的有效手段，而利用性別特異分子標(biāo)記在養(yǎng)殖場對(duì)雄性親魚進(jìn)行快速性別鑒定就顯得尤為重要。然而，一般情況下養(yǎng)殖現(xiàn)場的實(shí)驗(yàn)條件惡劣，方法有限，鑒定速度和準(zhǔn)確度難以保障。半滑舌鰨AFLP 雌性特異標(biāo)記是顯性標(biāo)記，只能在ZW 雌魚中擴(kuò)增出一個(gè)條帶，無法鑒別出由于DNA 提取質(zhì)量差而導(dǎo)致的假陰性結(jié)果；而開發(fā)的半滑舌鰨微衛(wèi)星性別特異標(biāo)記，在Z 和W 染色體上擴(kuò)增的片段只有12 bp的差異，適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳分型，這在養(yǎng)殖場難以實(shí)現(xiàn)。針對(duì)這種情況，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所陳松林團(tuán)隊(duì)從已開發(fā)的半滑舌鰨SSR 性別特異分子標(biāo)記中選擇Z 和W 染色體中擴(kuò)增到的片段相差最大的一個(gè)(35 bp)重新設(shè)計(jì)引物，提高擴(kuò)增片段中差異片段的占比，同時(shí)選用較高濃度的瓊脂糖，提高小片段的分辨率，成功開發(fā)出了可用于瓊脂糖分型的適用于養(yǎng)殖場現(xiàn)場鑒定的半滑舌鰨性別特異標(biāo)記。以這一標(biāo)記為核心工具，優(yōu)化鑒定流程，在保證質(zhì)量的同時(shí)縮短DNA提取時(shí)間，開發(fā)出了一套半滑舌鰨遺傳性別快速鑒定方法，大大提高了養(yǎng)殖現(xiàn)場遺傳性別鑒定的速度，并將鑒定結(jié)果準(zhǔn)確率提高到100%[23]。此外，陳松林團(tuán)隊(duì)還結(jié)合半滑舌鰨性別相關(guān)基因的研究，開發(fā)出了差異片段為113 bp 的性別特異標(biāo)記，進(jìn)一步降低了適于鑒定的瓊脂糖濃度，提高了鑒定效率[24]。在黃顙魚中，圍繞開發(fā)的雄性特異標(biāo)記，也進(jìn)行了性別鑒定流程的優(yōu)化，提升了性別鑒定效率，為“全雄1 號(hào)”、“全雄2 號(hào)”新品種的研發(fā)提供了技術(shù)保證[52]。

3 魚類分子標(biāo)記輔助性控育種

目前，性別特異分子標(biāo)記已經(jīng)在部分魚類性控育種中得到了應(yīng)用，并取得了顯著的成效。如在半滑舌鰨良種培育過程中，首先通過建立雄性候選親本遺傳性別現(xiàn)場快速鑒定技術(shù)，剔除偽雄魚，保證了后代的高雌性比例在40%左右，隨后對(duì)高雌苗種結(jié)合家系選育與基因組選擇育種技術(shù)，培育出了抗哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)感染能力提高30.9%、18 月齡體重平均提高 17.7%、養(yǎng)殖成活率平均提高 15.7%的高雌速生抗病半滑舌鰨新品種“鰨優(yōu)1 號(hào)”[53]。

由于黃顙魚具有明顯的性別二態(tài)性，在相同養(yǎng)殖條件下，第一年雄性黃顙魚比雌魚的生長速率快約30%，在養(yǎng)殖的第二年，雌雄生長差異接近3 倍。黃顙魚通過人工誘導(dǎo)，可以得到XY 型生理雌魚，進(jìn)而繁育出YY 型超雄魚，與XX 型雌魚交配即可建立黃顙魚全雄繁育體系。黃顙魚雄性特異標(biāo)記的研發(fā)，可以通過分子手段精準(zhǔn)區(qū)分XY 型正常雄魚和YY 型超雄魚，大大降低篩選YY 型超雄魚的工作量，解決了黃顙魚“全雄1 號(hào)”、“全雄2 號(hào)”等全雄新品種技術(shù)難點(diǎn)。黃顙魚 “全雄1 號(hào)”比普通黃顙魚增產(chǎn)35%，而2023 年新通過審定的黃顙魚“全雄2 號(hào)”在相同養(yǎng)殖條件下，12 月齡體重提高12.42%[54-56]。

尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚是羅非魚屬中的兩個(gè)不同物種，分別為兩種不同的性別決定類型，尼羅羅非魚是XY 型，奧利亞羅非魚是ZW 型。中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所使用分子標(biāo)記輔助性控技術(shù)，以選育的尼羅羅非魚通過性逆轉(zhuǎn)及測交得到超雄個(gè)體(YYn♂)，再與選育的奧利亞羅非魚雌性(ZW)雜交得到WY 型雌魚，再與 YYn♂雜交獲得超雄羅非魚 YYa♂，得到的YYa♂作為父本，連續(xù)5 代選育的尼羅羅非魚雌性作為母本，所得子代即為“粵閩1 號(hào)”新品種，其自然雄性率達(dá)到98.31%，在相同養(yǎng)殖條件下，“粵閩1 號(hào)”平均體重比同期養(yǎng)殖的吉富羅非魚提高 23.77%，父本超雄羅非魚制種相對(duì)簡單，便于推廣[57]。

截止到2023 年，我國審定的水產(chǎn)新品種共計(jì)283 個(gè)，其中魚類新品種142 個(gè)，包括半滑舌鰨“鰨優(yōu)1 號(hào)”、黃顙魚“全雄1 號(hào)”、“全雄2 號(hào)”、虹鱒“全雌1 號(hào)”、羅非魚“鷺雄 1 號(hào)”、“粵閩1 號(hào)”、“夏奧1 號(hào)”、雜交鱧“雄鱧1 號(hào)”、翹嘴鱖“鼎鱖 1 號(hào)”、翹嘴鲌“全雌 1 號(hào)”、黃姑魚“全雌1 號(hào)”等11 個(gè)全雌/雄或高雌/雄水產(chǎn)新品種，性別特異分子標(biāo)記在這些新品種培育中起到了重要的作用。

4 展望

4.1 持續(xù)開發(fā)養(yǎng)殖魚類性別特異分子標(biāo)記

我國養(yǎng)殖魚類物種眾多，具有巨大的開發(fā)潛力和推廣前景。許多養(yǎng)殖魚類存在性別差異現(xiàn)象，有必要進(jìn)行性別控制和單性育種技術(shù)研究。性別特異標(biāo)記是進(jìn)行性控育種的重要基礎(chǔ)工具，然而，我國養(yǎng)殖魚類性別特異標(biāo)記開發(fā)尚不充分，不能完全覆蓋所有養(yǎng)殖魚類的有關(guān)需求。近年來，在全基因組測序技術(shù)的輔助下，通過雌、雄個(gè)體的基因組重測序數(shù)據(jù)進(jìn)行高通量比對(duì)，作為一種有效的技術(shù)手段，大大加快了養(yǎng)殖魚類性別特異分子標(biāo)記的開發(fā)進(jìn)程。因此，整合建立我國養(yǎng)殖魚類全基因組測序平臺(tái)，集成基于基因組數(shù)據(jù)的魚類性別特異標(biāo)記篩選流程和技術(shù)體系，預(yù)期將對(duì)進(jìn)一步提高魚類性別特異分子標(biāo)記的開發(fā)效率和普及程度起到推動(dòng)作用。

4.2 強(qiáng)化魚類性別特異分子標(biāo)記篩選方法創(chuàng)新

在脊椎動(dòng)物中，魚類的進(jìn)化地位較低，性別決定機(jī)制復(fù)雜，受到環(huán)境和遺傳因素的共同影響。在基因組層面上，有些魚類沒有性染色體，有些魚類的性別決定區(qū)域很小，這為魚類性別特異標(biāo)記的篩選帶來了困難?，F(xiàn)有的篩選方法，難以滿足魚類性別特異分子標(biāo)記的研發(fā)需要，如大菱鲆目前還沒有找到有效的性別特異分子標(biāo)記。因此，針對(duì)魚類基因組與性別決定機(jī)制的復(fù)雜現(xiàn)象，創(chuàng)新篩選方法，突破大菱鲆等魚類的性別特異標(biāo)記篩選難題，或?qū)⒊蔀槲磥眙~類性別特異標(biāo)記篩選的重要研究方向。

4.3 優(yōu)化魚類性別特異分子標(biāo)記的應(yīng)用方法

性控育種是提高養(yǎng)殖魚類產(chǎn)量的重要方法，性別特異分子標(biāo)記的研發(fā)為魚類性控育種提供了有效工具。目前，雖然我國科研人員在三十多種養(yǎng)殖魚類篩選到性別特異分子標(biāo)記，然而已經(jīng)應(yīng)用于良種培育的性別特異標(biāo)記還只有半滑舌鰨、黃顙魚、羅非魚、烏鱧、翹嘴鱖、黃姑魚、虹鱒等少數(shù)魚類，其他大多數(shù)養(yǎng)殖魚類中采用性別特異標(biāo)記培育良種的研究仍有待突破。

在實(shí)際的性控育種工作中，遺傳性別的鑒定往往要在養(yǎng)殖場等簡易實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行，高效的鑒定流程、簡單的鑒定方法和可靠的鑒定結(jié)果是更好實(shí)現(xiàn)性控育種目標(biāo)的必要條件。因此，在研發(fā)得到性別特異分子標(biāo)記之后，圍繞性別特異分子標(biāo)記，結(jié)合高效核酸提取或分離技術(shù)，建立簡潔有效的鑒定技術(shù)流程，將為養(yǎng)殖魚類單性良種培育提供可靠的遺傳性別鑒定技術(shù)手段。

（作者聲明本文無實(shí)際或潛在的利益沖突）