黃金百香果莖尖組織培養(yǎng)體系與脫毒苗生產(chǎn)

百香果發(fā)展前景較好，且在市場(chǎng)中擁有較高價(jià)值，但是，中國(guó)缺少優(yōu)質(zhì)的百香果幼苗，品種相對(duì)較為單一，導(dǎo)致種植后產(chǎn)量較差，甚至?xí)驗(yàn)榭共⌒暂^差影響百香果質(zhì)量。當(dāng)前，在種植百香果過程中，90%以上幼苗都是利用無性繁殖種植，但在無性繁殖過程中，很容易出現(xiàn)幼苗差異較大、品種容易退化，甚至?xí)驗(yàn)椴∠x害降低百香果質(zhì)量等。在百香果產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中，頻繁的跨地區(qū)轉(zhuǎn)移容易傳播各種病害[1]。百香果幼苗上存在大量病毒，百香果幼苗組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)逐漸成為去除病毒害最有效的辦法，它可以在短時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)幼苗，有效克服繁殖效率低及速度慢等問題。

1材料與方法

1.1材料

結(jié)合黃金百香果幼苗發(fā)育的不同階段及內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，選取出不同階段的培養(yǎng)材料，具體如表1所示。

1.2組織培養(yǎng)方法

1.2.1消毒處理流程

當(dāng)黃金百香果生長(zhǎng)最茂盛時(shí)，需要用其主莖頂端的芽或主莖上帶有側(cè)生芽的部分作為培養(yǎng)材料，取得百香果新長(zhǎng)出的枝梢大約30 cm，保留該部分頂端的芽及側(cè)生芽，余下的部分需要截取成1～2 cm左右的小段。在培育前，需要對(duì)截取的小段用水沖洗3～5次，再使用蒸餾水沖洗，將沖洗好的莖段放在無菌環(huán)境下，再次使用無菌水進(jìn)行2遍沖洗。隨后使用濃度為75%酒精進(jìn)行消毒處理，使用時(shí)間為60 s左右，再利用無菌水進(jìn)行消毒洗滌[2]。在上述處理過程中，還需要在消毒試劑中額外加入3滴表面活性劑。并且還需要在消毒過程中不斷搖晃試劑瓶，使消毒劑可以與材料進(jìn)行充分接觸。消毒處理完成后，還需要使用無菌水對(duì)其進(jìn)行沖水5次左右，每次大約5 min，全部完成后，需要使用濾紙將表面水分吸干。利用解剖鏡取得百香果主莖段上的莖尖部位，大約取得1 mm大小作為培養(yǎng)材料，并將其放到初代培養(yǎng)基中。

1.2.2組織培養(yǎng)與繁殖

在初代培養(yǎng)階段，按照表1來進(jìn)行消毒培養(yǎng)后，需要取得20個(gè)左右并且大小一致的莖尖。在培育35 d后，需要在每瓶中放入2個(gè)莖尖，此時(shí)需要處理60個(gè)左右的莖尖，還需要再培養(yǎng)30 d左右，通過觀察培養(yǎng)情況，選擇最優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)組合。在繼代培養(yǎng)階段，當(dāng)莖尖長(zhǎng)到10 cm左右時(shí)，需要對(duì)其進(jìn)行切段處理，每段1 cm左右。將取得的材料接種到6-BA+萘乙酸基本培養(yǎng)基中進(jìn)行再次培養(yǎng)，需要培養(yǎng)5次左右，每次時(shí)間間隔大致為2個(gè)月，觀察繁殖情況[3]。

在生根培養(yǎng)階段，需要挑選長(zhǎng)勢(shì)較好并且相對(duì)健康的育苗進(jìn)行生根處理，將長(zhǎng)度在3 cm左右的芽尖從根基處進(jìn)行切除，將切除好的材料放入到不同濃度的萘乙酸之中，并且還需要配合吲哚丁酸來進(jìn)行組織培養(yǎng)，此階段需要培育25 d。當(dāng)以上工作全部完成后，等到培養(yǎng)的育苗根部長(zhǎng)到3 cm左右時(shí)，培養(yǎng)7 d左右。將培養(yǎng)的育苗放入專門容器內(nèi)，土壤主要以腐殖土為主，在保證土壤透氣性的同時(shí)，還需要讓其具有一定的保水能力。這樣育苗不僅可以生長(zhǎng)得更加茂盛，也可以保證育苗成活率。接種后半個(gè)月，還需計(jì)算育苗污染情況及存活情況，具體公式如下：育苗污染率=育苗污染的數(shù)量/育苗總數(shù)量×100%；育苗褐化率=育苗褐化的數(shù)量/育苗總數(shù)量×100%；育苗存活率=（育苗總數(shù)量—育苗污染的數(shù)量-育苗褐化的數(shù)量）/育苗總數(shù)量×100%。利用SPSS進(jìn)行處理及分析，準(zhǔn)確了解黃金百香果莖尖組織培養(yǎng)具體情況[4]。

1.3脫毒苗生產(chǎn)

在脫毒苗生產(chǎn)過程中，需要先對(duì)其進(jìn)行病毒檢測(cè)，育苗以每株為單位進(jìn)行擴(kuò)散性繁殖，當(dāng)育苗數(shù)量達(dá)到50～100株時(shí)，隨機(jī)選取5個(gè)樣本，每個(gè)樣本中選擇5株進(jìn)行病毒檢測(cè)，通常使用的方法是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、血清學(xué)鑒定方法及指定植物鑒定。通過檢測(cè)后，選擇脫毒后的育苗進(jìn)行后續(xù)繁殖，并且保證每批育苗都要進(jìn)行檢測(cè)，以此來控制育苗質(zhì)量[5]。在對(duì)黃金百香果莖尖進(jìn)行脫毒生產(chǎn)時(shí)，需要將溫度控制在25℃左右、相對(duì)濕度控制在80%左右、光照強(qiáng)度控制在4 000～40 000 LX，并且還需要每天對(duì)其進(jìn)行12 h左右的照射。由于培養(yǎng)空間過大，光照充足，無須進(jìn)行煉苗處理，可直接在溫室內(nèi)進(jìn)行移植，育苗成活率可以達(dá)到99.99%以上。夏季與冬季光照強(qiáng)度不同，夏季中午光照可以達(dá)到45 000 LX以上，冬季中午光照可以達(dá)到12 000 LX以上，除了利用遮陽幕進(jìn)行調(diào)節(jié)外，還可以利用架子層進(jìn)行調(diào)節(jié)。這樣既可以完成脫毒苗生產(chǎn)，也可以使育苗茂盛[6]。

2結(jié)果與分析

2.1不同消毒時(shí)間對(duì)黃金百香果莖尖的影響

需要對(duì)黃金百香果莖尖設(shè)置不同的消毒時(shí)間，從而分析莖尖出芽率的具體情況，如表2所示。由表2可以看出，對(duì)黃金百香果莖尖消毒15 min，兩種方法出芽率分別為96%和100%，消毒15 min比消毒5 min、10 min及20 min效果要好。隨著消毒時(shí)間不斷增加，對(duì)植物內(nèi)部細(xì)胞的殺傷力也在不斷增強(qiáng)，一旦消毒時(shí)間超過15 min，不僅不會(huì)增加植物存活率，反而會(huì)呈現(xiàn)出降低趨勢(shì)。而消毒時(shí)間不足，則無法完全消除病毒害，甚至?xí)俅紊L(zhǎng)，導(dǎo)致植物出現(xiàn)壞死。

2.2不同植物激素對(duì)莖尖生芽的影響

莖尖組織培養(yǎng)及脫毒苗選擇的細(xì)胞分裂素為6-BA。為了驗(yàn)證該細(xì)胞分裂素效果，選擇三種不同的細(xì)胞分裂素進(jìn)行對(duì)比分析，其中育苗A使用細(xì)胞分裂素6-BA，育苗B使用細(xì)胞分裂素是激動(dòng)素（簡(jiǎn)稱KT），育苗C則使用玉米素（簡(jiǎn)稱ZT）。將三種育苗放置在同一環(huán)境下，使用的分裂素濃度也是完全相同的，以此來觀察出芽情況，具體如圖1所示。由圖1可以看出，使用激動(dòng)素來刺激植物生長(zhǎng)，經(jīng)過30 d，黃金百香果出芽率也只有41.3%；使用玉米素來刺激植物生長(zhǎng)，經(jīng)過30 d，黃金百香果出芽率可以達(dá)到62.5%。而使用6-BA來刺激植物生長(zhǎng)，當(dāng)培育5 d時(shí)，出芽率就能夠達(dá)到57.5%；當(dāng)培育30 d后，黃金百香果出芽率可以達(dá)到97.8%，可使用6-BA細(xì)胞分裂素來刺激植物生長(zhǎng)。

2.3煉苗移植對(duì)黃金百香果莖尖的影響

煉苗是黃金百香果莖尖育苗中正常生根中必不可少的環(huán)節(jié)。本文驗(yàn)證了不同煉苗移植技術(shù)下黃金百香果莖尖成活概率，如圖2所示。

由圖2可以看出，使用傳統(tǒng)移植技術(shù)30 d后，黃金百香果存活率只有41.5%。而使用本文移植技術(shù)10 d后，黃金百香果存活率就可以達(dá)到62.5%；經(jīng)過30 d后，黃金百香果存活率可以達(dá)到90%以上。在煉苗移植過程中，需要特別注意的是，將育苗生成根莖培養(yǎng)至3～5下約1個(gè)星期左右，再將放育苗培養(yǎng)瓶蓋子打開，在自然光線再次培養(yǎng)2～3 d。完成這一步驟后，將育苗用鑷子輕輕取出，放入濃度為0.1%的多菌靈殺菌劑中浸泡大約5 min左右，隨后將其取出后用清水沖洗3～5次左右，將根部位置的試劑沖洗干凈后栽入土中。土壤中表層土壤、椰糠及蛭石粉比例大約為椰糠表層土壤和蛭石粉用量的總和，對(duì)其進(jìn)行定期澆水，并且將其放入到避光空間內(nèi)。等搭配移植后15～20 d，就會(huì)長(zhǎng)出新的根莖與枝葉，讓其成活概率始終保持在90%以上。

綜上所述，利用黃金百香果莖尖組織培養(yǎng)法可以有效避免育苗品質(zhì)退化及提高黃金百香果產(chǎn)量。用黃金百香果莖尖進(jìn)行統(tǒng)一育苗培養(yǎng)，可以提高黃金百香果繁殖率。例如每次接種的百香果莖尖為10個(gè)，并且從上一年6月開始進(jìn)行培養(yǎng)至此年年底，隨后再對(duì)其進(jìn)行移植、繁殖及生產(chǎn)等步驟，可以培養(yǎng)出6萬株無毒育苗。而使用傳統(tǒng)的繁殖技術(shù)，能夠存活的育苗大致為600株左右。

參考文獻(xiàn)

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[2]黃艷花，黃遠(yuǎn)光，歐善生，等.百香果莖基腐病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2022，35（1）：105-112.

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[4]蔡昭艷，王小媚，邱文武，等.培養(yǎng)基pH值及蔗糖、硼酸、PEG-4000對(duì)百香果花粉體外萌發(fā)的影響[J].分子植物育種，2021，19（21）：7 274-7 281.

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[6]朱元芳，徐永清，陳芾葳，等.EM菌生物有機(jī)肥對(duì)馬鈴薯脫毒苗生產(chǎn)微型薯的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，59（20）：46-50.

（廣西玉林農(nóng)業(yè)學(xué)校梁明驊）