ALDH3A1通過(guò)IL-6/STAT3信號(hào)通路激活GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化

王全凱，金惠萍，李昕葦，崔旭芳，顧軼婷，烏瀚寶櫟爾，康同影，許建寧，*

(1.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所，北京 100050；2.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心創(chuàng)傷與化學(xué)中毒全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

甲基丙烯酸縮水甘油酯(glycidyl methacrylate，GMA)，又稱甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、甲基丙烯酸-2，3-環(huán)氧丙基酯，是一種無(wú)色透明、易融于多種有機(jī)溶劑的液體。GMA防紫外線、耐水、耐熱等優(yōu)良特性使其被大量應(yīng)用于環(huán)氧聚合物，牙科和骨科材料等復(fù)合材料的合成和改性[1]。早在2009 年，經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(Organization for Economic Co-operation and Development，OECD)篩選數(shù)據(jù)集中已將GMA分類為高產(chǎn)量化學(xué)品[2]。GMA 的職業(yè)暴露和環(huán)境釋放通常與其產(chǎn)品制備過(guò)程相關(guān)且無(wú)可避免，在生產(chǎn)或使用GMA的化工廠附近，一般人通過(guò)飲用水和食用魚類接觸GMA的機(jī)會(huì)分別為2.97×10-4和1.34×10-5mg/kg[3]；而在使用含有雙酚A-甲基丙烯酸縮水甘油酯和三乙二醇二甲基丙烯酸酯的牙齒和骨骼復(fù)合材料時(shí)，包括幼兒在內(nèi)的患者可能會(huì)短期接觸到未反應(yīng)的GMA 單體[4]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，吸入濃度為32.95 mg/m3時(shí)，會(huì)對(duì)人體造成明顯的毒性反應(yīng)[5]。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(International Agency for Research on Cancer，IARC)根據(jù)“強(qiáng)有力”的致癌機(jī)制證據(jù)及“充分”的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，將GMA歸類為2A類“對(duì)人類很可能致癌”[5]。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn)，使用GMA 染毒第30 代16HBE 細(xì)胞，二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)為對(duì)照組，GMA 組細(xì)胞可在軟瓊脂中形成集落，且細(xì)胞在裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，裸鼠皮下腫塊經(jīng)病理組織學(xué)檢查診斷為鱗狀上皮細(xì)胞癌，而同時(shí)期DMSO 組細(xì)胞未形成集落和裸鼠皮下腫塊[6]。但GMA 在蛋白水平上的致癌機(jī)制仍不甚明確。

醛 脫 氫 酶 3A1(aldehyde dehydrogenase 3a1，ALDH3A1)是ALDH 超家族的重要成員之一，該家族成員能夠氧化多種內(nèi)源性和外源性醛類物質(zhì)為相應(yīng)的羧酸。近年來(lái)，ALDH3A1 已被證明在包括口腔癌[7]、小細(xì)胞肺癌[8]等多種癌癥類型中出現(xiàn)明顯的下調(diào)表達(dá)。ALDH3A1可作為預(yù)測(cè)惡性腫瘤預(yù)后的生物標(biāo)志物同時(shí)其表達(dá)水平可能與不良臨床結(jié)局相關(guān)。范飛飛等[9]以癌癥基因組圖譜(TCGA)中肺腺癌患者的RNA 測(cè)序數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，發(fā)現(xiàn)ALDH3A1 在有轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者中明顯高表達(dá)，與癌癥干細(xì)胞及其上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)特性有關(guān)。此外，敲除ALDH3A1 的A549 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力明顯下降。在口腔鱗狀細(xì)胞癌中，ALDH3A1 被證明可通過(guò)IL-6/STAT3 信號(hào)通路抑制細(xì)胞的EMT 過(guò)程[7，10]。根據(jù)本課題組前期蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中ALDH3A1 蛋白表達(dá)水平是未處理對(duì)照細(xì)胞的73%，即表達(dá)下調(diào)了27%，且ALDH3A1 富集到6 個(gè)KEGG 通路中，故ALDH3A1 可能為GMA 誘導(dǎo)16HBE 細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中的關(guān)鍵差異表達(dá)蛋白質(zhì)。然而，ALDH3A1 能否作為GMA 誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的生物標(biāo)志物目前尚不清楚。

本研究在課題組既往建立的GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞模型基礎(chǔ)上，使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)過(guò)表達(dá)ALDH3A1，研究GMA 致癌性分子機(jī)制，以期明確其與ALDH3A1表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

GMA(純度≥98.5%)和DMSO 購(gòu)于美國(guó)Sigma 公司；Lipofectamine 3000 和無(wú)血清opti-MEM 培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)Thermo Fisher 公司；0.25%胰酶-EDTA 購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司；無(wú)RNase 水購(gòu)于北京金克隆科技有限公司；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清購(gòu)于美國(guó)Gibco 公司；TRIzol 試劑購(gòu)于美國(guó)Invitrogen 生命技術(shù)有限公司。Western blot 中使用的PageRuler 預(yù)染蛋白梯購(gòu)于美國(guó)Thermo Fisher 公司，一抗ALDH3A1、IL-6、STAT3、E-cadherin、MMP3、Snail、Vimentin 購(gòu)于美國(guó)Abcam公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG 抗體購(gòu)于碧云天有限公司。

CO2恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)于美國(guó)Thermo Fisher 公司；臺(tái)式高速低溫離心機(jī)購(gòu)于美國(guó)Beckman 公司；倒置顯微鏡購(gòu)于日本Olympus公司；熒光顯微鏡購(gòu)于美國(guó)Leica公司；潔凈工作臺(tái)購(gòu)于上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；HH-6-恒溫水浴鍋購(gòu)于江蘇天瑞電子儀器廠；Infinite 200pro 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀購(gòu)于瑞士Tecan 公司；電泳儀購(gòu)于北京六一生物科技有限公司；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)購(gòu)于上海天能生命科學(xué)有限公司；ViiA 7實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)體系購(gòu)于美國(guó)Thermo Fisher公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

16HBE 細(xì)胞為人支氣管上皮細(xì)胞，是經(jīng)SV40 Large T抗原永生化的細(xì)胞，保留著正常人器官氣道上皮細(xì)胞的特定形態(tài)和功能，由美國(guó)加利福尼亞大學(xué)捐贈(zèng)。復(fù)蘇細(xì)胞后，使用含有10%胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)的MEM 培養(yǎng)基，于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)?；诒菊n題組既往GMA 細(xì)胞毒性和細(xì)胞克隆形成率結(jié)果[11]，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期16HBE 細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，24 h后向培養(yǎng)液中加入終濃度為8 μg/mL的GMA染毒液，等量DMSO 為溶劑對(duì)照。每次染毒時(shí)間72 h，間隔24 h 后進(jìn)行第2 次染毒，重復(fù)染毒3 次后結(jié)束染毒，細(xì)胞記為第0代(P0)，更換為含有5% FBS的MEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每3 d 換液1 次，每5 d 傳代1 次，傳代過(guò)程中收取第40 代(P40)GMA 處理組和同代齡DMSO 對(duì)照組細(xì)胞，經(jīng)多種實(shí)驗(yàn)鑒定，P40 GMA(8 μg/mL)處理組細(xì)胞已完成惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程，惡性轉(zhuǎn)化特征顯著且穩(wěn)定，可用于后續(xù)ALDH3A1 功能和作用機(jī)制的探索和研究[12]。

1.3 質(zhì)粒構(gòu)建與細(xì)胞轉(zhuǎn)染

過(guò)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建通過(guò)將人ALDH3A1 cDNA 插入質(zhì)粒載體GV658中獲得，通過(guò)DNA測(cè)序證實(shí)其構(gòu)建成功。ALDH3A1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和對(duì)照質(zhì)粒均由中國(guó)上海吉?jiǎng)P化學(xué)股份有限公司合成。構(gòu)建ALDH3A1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的引物序列見(jiàn)表1。

表1 構(gòu)建ALDH3A1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒使用的引物列表

1.4 Western blot檢測(cè)

提取各組細(xì)胞總蛋白，BCA 法蛋白定量后進(jìn)行SDS-PAGE 電泳，使用PageRuler 預(yù)染蛋白梯作為標(biāo)準(zhǔn)。5%的脫脂牛奶封閉PVDF 膜(0.45 μm)，TBST 緩沖液沖洗3 次，每次5 min，然后分別加入一抗ALDH3A1、 IL-6、 STAT3、 E-cadherin、 MMP3、Snail、Vimentin(1∶1 000稀釋) 4 ℃孵育過(guò)夜，內(nèi)參抗體為GAPDH。次日，使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體作為二抗(1∶1 000 稀釋)室溫孵育1 h 后用TBST再次清洗膜3次，ECL試劑處理膜后曝光成像。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time PCR，qPCR)對(duì)所選基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析。qPCR使用2×Hieff Canace PCR 母液(10136ES01，YEASEN，中國(guó))，在Bio-Rad CFX(Bio-Rad，美國(guó))儀上進(jìn)行40次熱循環(huán)，退火溫度均為60 ℃，使用管家基因β-actin作為內(nèi)參，引物序列見(jiàn)表2。采用比較CT法對(duì)目的基因表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量(△△CT法)，目的基因的表達(dá)水平與內(nèi)參基因的表達(dá)進(jìn)行歸一化處理。每組進(jìn)行3次重復(fù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)和圖表使用SPSS 23.0 軟件處理并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用±s表示，組間比較采用雙側(cè)t檢驗(yàn)或單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用ImageJ 軟件處理蛋白質(zhì)條帶圖。采用GraphPad Prism軟件完成文章中圖表繪制。

2 結(jié) 果

2.1 ALDH3A1 在GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞中的表達(dá)

使用Western blot 和qPCR 法檢測(cè)GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞與DMSO 對(duì)照組細(xì)胞中ALDH3A1的表達(dá)情況，以驗(yàn)證既往課題組蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果，即GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中ALDH3A1 是未處理對(duì)照細(xì)胞的73%(P＜0.01)。如圖1，與對(duì)照組相比，惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中ALDH3A1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P＜0.01)，與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果一致，提示ALDH3A1可能在GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中發(fā)揮作用。

圖1 ALDH3A1在GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中的表達(dá)

2.2 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)ALDH3A1細(xì)胞的驗(yàn)證

為進(jìn)一步明確ALDH3A1 在GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中的作用，采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)過(guò)表達(dá)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的ALDH3A1，并采用Western blot和qPCR分析確認(rèn)。結(jié)果如圖2，實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高，與空質(zhì)粒組細(xì)胞相比，基因和蛋白表達(dá)水平在ALDH3A1 過(guò)表達(dá)組細(xì)胞中顯著增加(P＜0.01)。因此，本研究中構(gòu)建的ALDH3A1 瞬時(shí)過(guò)表達(dá)惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞可用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。

圖2 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中ALDH3A1的表達(dá)情況

2.3 過(guò)表達(dá)ALDH3A1 抑制GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞EMT過(guò)程

為進(jìn)一步探究ALDH3A1 對(duì)GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞EMT 過(guò)程的影響，使用Western blot 和qPCR 技術(shù)檢測(cè)惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞中EMT 過(guò) 程 標(biāo) 志 蛋 白(E-cadherin、Vimentin、Snail、MMP3)的表達(dá)變化。如圖3A 和3B 所示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞中E-cadherin 和Vimentin 的蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平分別出現(xiàn)顯著的下調(diào)及上調(diào)(P＜0.01)。而與空質(zhì)粒對(duì)照組細(xì)胞相比，ALDH3A1 過(guò)表達(dá)細(xì)胞中E-cadherin 表達(dá)上調(diào)，Vimentin、MMP3、Snail 表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平則顯著下降(P＜0.01)。上述結(jié)果提示ALDH3A1在GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中可能具有抑制EMT過(guò)程的作用。

圖3 ALDH3A1在GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中抑制EMT過(guò)程

2.4 ALDH3A1 過(guò)表達(dá)抑制GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中IL-6/STAT3通路激活

為進(jìn)一步明確ALDH3A1 影響GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞EMT 過(guò)程的潛在機(jī)制，使用Western blot 和qPCR 分析確定ALDH3A1 過(guò)表達(dá)對(duì)IL-6/STAT3通路的影響。如圖4A 所示，與對(duì)照組相比，惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中STAT3表達(dá)水平顯著提高，而STAT3蛋白表達(dá)雖未出現(xiàn)明顯改變但其磷酸化水平顯著提高(P＜0.01)。然而在ALDH3A1 過(guò)表達(dá)組細(xì)胞中，IL-6、STAT3、p-STAT3 表達(dá)受到抑制，IL-6、STAT3 的轉(zhuǎn)錄水平也呈現(xiàn)顯著降低(P＜0.01)。結(jié)果提示，IL-6/STAT3 通路的抑制可能參與到ALDH3A1 在GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中抑制EMT過(guò)程。

圖4 ALDH3A1在GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中對(duì)IL-6/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響

3 討 論

在眾多的癌癥致病因素中，約90%以上是化學(xué)因素，而各種化學(xué)物質(zhì)廣泛存在于多種環(huán)境介質(zhì)中[13]。然而作為一種明確“可能對(duì)人類致癌”的化學(xué)物質(zhì)，GMA對(duì)人類的致癌性證據(jù)依然十分有限。由于人類流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)難以獲得，因此，基于相應(yīng)致癌分子機(jī)制的研究對(duì)判斷GMA可能的人類致癌性則顯得更為重要。20 世紀(jì)80 年代開始，課題組先后對(duì)GMA 的致畸性、致突變性和致癌性進(jìn)行了一系列的研究[14]。軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)和刀豆蛋白凝集素A(conanavalin A，ConA)凝集實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)GMA 誘導(dǎo)發(fā)生形態(tài)改變的金倉(cāng)鼠胚胎細(xì)胞已獲得惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞特征，提示GMA能夠誘發(fā)金倉(cāng)鼠胚胎細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[15]。裸鼠皮下接種GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化BALB/c 3T3 細(xì)胞后，可形成分化程度較低的纖維肉瘤[16]。上述結(jié)果說(shuō)明，GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞模型已成功建立，可用于GMA的致癌性機(jī)制研究。

ALDH3A1 作為NAD(P)+依賴性酶組成的ALDH 超家族的重要成員，通過(guò)將多種醛氧化成羧酸的方式調(diào)節(jié)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中增殖、分化、存活和對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)等功能[17-18]。ALDH3A1 已被證明在幾種癌癥類型中表達(dá)下調(diào)，在Patel 等[8]的報(bào)道中，與正常肺組織相比，ALDH3A1在小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平更低，且ALDH3A1 過(guò)度表達(dá)與腫瘤進(jìn)展或預(yù)后可能呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)[1，19-20]。但也有文獻(xiàn)表明，大鼠肝細(xì)胞胞質(zhì)ALDH3A1由多環(huán)芳烴氯化化合物誘導(dǎo)會(huì)在致癌過(guò)程中增加，因此ALDH3A1在GMA誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中表達(dá)降低的相關(guān)作用機(jī)制仍需進(jìn)一步的研究和探討。

細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)是一種由細(xì)胞分泌的非細(xì)胞成分，可以為細(xì)胞提供必要的結(jié)構(gòu)和生化支持。癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，其中多個(gè)步驟均有ECM 的參與，包括腫瘤組織的細(xì)胞分離，細(xì)胞活性調(diào)節(jié)，并通過(guò)淋巴系統(tǒng)或血管侵襲，增殖和逃逸等[21]。近年來(lái)，EMT 在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的重要作用已得到充分驗(yàn)證，Zhao等[22]報(bào)告了EMT促進(jìn)上皮樣腫瘤細(xì)胞獲得侵襲潛力，促進(jìn)細(xì)胞通過(guò)血液或淋巴系統(tǒng)的運(yùn)輸。在大多數(shù)腫瘤中，上皮細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)減少和Vimentin、MMP3、Snail 的表達(dá)增加被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移和侵略性增加的關(guān)鍵標(biāo)志[23]。在我們的研究中，GMA 誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE 細(xì)胞中E-cadherin 表達(dá)下調(diào)，Vimentin 表達(dá)上調(diào)，提示ALDH3A1 可通過(guò)調(diào)控EMT 過(guò)程中相關(guān)E-cadherin、Vimentin的表達(dá)，激活GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞的EMT過(guò)程。

IL-6 通過(guò)與IL-6 受體結(jié)合后，Janus 激酶(JAK)就會(huì)被激活，STAT3 被磷酸化，通過(guò)2 個(gè)單體之間的相互SH2 結(jié)構(gòu)域-磷酸酪氨酸相互作用形成同源二聚體，并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，從而在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核之間交換信號(hào)，與靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，激活EMT相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，參與癌細(xì)胞的抗凋亡、血管生成、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥性的過(guò)程[24-26]。異常的IL-6/STAT3 信號(hào)通路在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起著至關(guān)重要作用，目前已在肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等多種癌癥中檢測(cè)到IL-6/STAT3 信號(hào)通路的持續(xù)激活[27-28]。為了明確GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞中ALDH3A1 如何影響其EMT 過(guò)程，我們檢測(cè)了IL-6/STAT3 通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中ALDH3A1 表達(dá)降低的同時(shí)IL-6/STAT3 通路被激活。上述結(jié)果提示，上調(diào)ALDH3A1 可以通過(guò)IL-6/STAT3信號(hào)通路有效抑制GMA誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化16HBE細(xì)胞的EMT過(guò)程。

ALDH3A1 與GMA 誘導(dǎo)16HBE 細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程密切相關(guān)，IL-6/STAT3通路激活促使惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化能力增加，從而在GMA 誘導(dǎo)16HBE 細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程發(fā)生作用。本研究的結(jié)果將有助于闡明GMA的致癌機(jī)制。