血小板內(nèi)皮聚集受體-1基因多態(tài)性與間歇性血液透析患者血管通路感染的相關(guān)性

閆曉輝，趙娟茹，梁 衍

(1.陜西省人民醫(yī)院腎內(nèi)科,陜西 西安 710065;2.陜西省人民醫(yī)院老年病科,陜西 西安 710065)

間歇性血液透析(intermittent hemodialysis,IHD)是終末期腎病患者有效生存手段,且血管通路是血液透析順利進(jìn)行的基本保證[1-2],而血管通路感染可引起敗血癥、菌血癥等并發(fā)癥,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致患者死亡[3]。因此,尋找影響血管通路感染的因素對(duì)提高IHD患者臨床治療效果有重要意義。血小板內(nèi)皮聚集受體-1(platelet endo thelial aggregation receptor 1,PEAR1)是血小板內(nèi)皮聚集受體,不僅在血小板活化聚集過(guò)程中起著重要作用,也是評(píng)估血管內(nèi)皮損傷的蛋白質(zhì),參與機(jī)體血管內(nèi)皮相關(guān)的生理病理改變過(guò)程[4-5]。有研究表明,PEAR1的多個(gè)基因位點(diǎn)與激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板聚集活性顯著相關(guān)[6-8]。但關(guān)于PEAR1基因多態(tài)性是否影響血液透析患者血管通路感染的發(fā)生發(fā)展尚未明確?；诖?本研究探討IHD患者中PEAR1基因多態(tài)性與血管通路感染的相關(guān)性,以期為臨床優(yōu)化治療措施提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年1月至2022年1月于陜西省人民醫(yī)院收治的105例接受IHD治療的患者為觀察組,另選擇同期入院體檢的50例健康者為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)接受IHD治療的患者透析時(shí)間1 a以上,且有完整透析記錄,血管通路均為長(zhǎng)期管路;(2)健康受試者均無(wú)肝腎功能不全;(3)無(wú)精神功能障礙,可正常交流,且病歷資料齊全者;(4)受試者均為本人自愿、直系親屬支持參與,并簽署知情同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并有獲得性免疫缺陷綜合征、淋病等特殊疾病者;(2)合并有影響PEAR1基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果的血液系統(tǒng)疾病者;(3)合并有嚴(yán)重心腦血管等實(shí)質(zhì)性病變者;(4)存在腦外傷或出血性疾病者;(5)合并大面積外傷伴隨全身感染者;(6)同時(shí)參與其他課題研究者。觀察組:男76例,女29例;年齡55～75(65.35±3.33)歲;體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)20.18～26.72(23.35±2.18)kg·m-2。 對(duì)照組:男35例,女15例;年齡 56～75(65.74±3.41)歲;BMI 20.24～26.68(23.71±2.23)kg·m-2。觀察組和對(duì)照組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)陜西省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)受試者PEAR1基因多態(tài)性

2組受試者入組后抽取10 mL空腹靜脈血置于乙二胺四乙酸抗凝管中,然后進(jìn)行全血DNA提取,提取步驟根據(jù)DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,獲得的DNA樣本置于-20 ℃冷藏柜中保存。采用平臺(tái)的擴(kuò)增阻礙突變系統(tǒng)引物與多重Taqman MGB探針組合技術(shù)檢測(cè)PEAR1基因的rs122937342c2位點(diǎn)多態(tài)性,PEAR1上游引物序列:5′-AAATGGAGGTGTCTTCCAAACC-3′,下游引物序列:5′-CCCAGTGAATCGGTCACAGA-3′。使用熒光定量PCR擴(kuò)增,根據(jù)試劑盒及檢測(cè)儀器要求進(jìn)行操作。PCR反應(yīng)體系:10×擴(kuò)增緩沖液2.0 μL,dNTPs 2.0 μL,正反向引物各0.5 μL,r-Taq DNA聚合酶0.2 μL,DNA 200 μg,高壓雙蒸水補(bǔ)足反應(yīng)總體積至20 μL。PCR擴(kuò)增條件:94 ℃預(yù)變性180 s,94 ℃變性 30 s,55 ℃退火50 s,72 ℃延伸60 s,重復(fù)30個(gè)循環(huán);再次72 ℃延伸5 min,獲取PCR產(chǎn)物在 4 ℃ 環(huán)境下保存。限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性實(shí)驗(yàn):在恒定電壓下,將DNA樣品置于 0.4 g 瓊脂糖熔化制成的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳,基因型條帶使用凝膠成像系統(tǒng)記錄,觀察2組受試者PEAR1基因型和等位基因型分布,并行遺傳平衡定律(哈迪-溫伯格)檢驗(yàn)。

1.3 IHD患者分組及臨床資料收集

觀察組患者入組24 h內(nèi)進(jìn)行影像學(xué)、血清學(xué)、病原學(xué)等檢查,患者出現(xiàn)多形性紅斑、紫瘢等癥狀,血清炎癥因子異常升高,經(jīng)CT檢查顯示血管通路長(zhǎng)期出現(xiàn)不同程度的狹窄甚至閉塞,經(jīng)病原學(xué)檢查存在感染菌株可判斷為血管通路感染。根據(jù)是否發(fā)生血管通路感染將IHD患者分為感染組(n=68)和未感染組(n=37),收集2組患者臨床資料,包括性別、年齡、體溫、BMI、收縮壓(systolic blood pressure,SBP)、舒張壓(diastolic blood pressure,DBP)、透析時(shí)間、透析頻率、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、肌鈣蛋白T(troponin T,TnT)、白細(xì)胞(white blood cell,WBC)計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)(platelet,PLT)、血細(xì)胞比容(hematocrit,Hct)、降鈣素原(procalcitonin,PCT)、中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值(neutrophil/lymphocyteratio,NLR)、血小板/淋巴細(xì)胞比值(platelet/lymphocyteratio,PLR)、高血壓史、糖尿病史、高血脂史、抽煙史、飲酒史等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對(duì)照組受試者PEAR1基因型與等位基因型分布及哈迪-溫伯格平衡檢驗(yàn)

2組受試者PEAR1基因位點(diǎn)有G和A 2個(gè)等位基因;檢出3種基因型,包括野生型(GG)、突變雜合型(GA)、突變純合型(AA)。觀察組患者的GG基因型頻率、G等位基因型頻率均高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2組基因位點(diǎn)等位基因頻率符合均哈迪-溫伯格平衡(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 觀察組和對(duì)照組受試者PEAR1基因型及等位基因型分布比較Tab.1 Comparison of PEAR1 genotype and allele type distribution between the observation group and control group 例(%)

2.2 影響IHD患者發(fā)生血管通路感染的單因素分析

感染組與未感染組患者性別比例、體溫、BMI、SBP、DBP、TC、TG、LDL和HDL水平及GA和AA基因型頻率、高血脂史占比、抽煙史占比、飲酒史占比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);未感染組患者年齡、透析時(shí)間≥3 a占比、透析頻率1周≥3次占比、PEAR1 GG基因型頻率、PEAR1 G等位基因頻率及TnT、WBC、PLT、Hct、PCT、NLR和PLR水平和高血壓史占比、糖尿病史占比均低于感染組,PEAR1 A等位基因頻率高于感染組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 影響IHD患者發(fā)生血管通路感染的單因素分析Tab.2 Univariate analysis of factors associated with the development of vascular access infection in patients with IHD

2.3 影響IHD患者發(fā)生血管通路感染的危險(xiǎn)因素多因素分析

Logistic回歸分析結(jié)果顯示,透析時(shí)間長(zhǎng)、年齡大及高透析頻率、高NLR、高PLR和PEAR1攜帶G等位基因是IHD患者發(fā)生血管通路感染的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 IHD患者發(fā)生血管通路感染的危險(xiǎn)因素多因素logistic分析Tab.3 Logistic regression analysis of risk factors affecting the development of vascular access infections in patients with IHD

3 討論

相關(guān)研究顯示,終末期腎病患者的腎臟無(wú)法維持機(jī)體內(nèi)的新陳代謝,因此造成體內(nèi)雜質(zhì)無(wú)法排出;而利用IHD可快速有效地清除血液中各種有害、多余的代謝產(chǎn)物,但是在2次透析之間,體內(nèi)會(huì)累及大量毒素和水分,導(dǎo)致患者因透析前、后體內(nèi)水分及血壓變化過(guò)大引起血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定,損傷心肺血管系統(tǒng),進(jìn)而增加患者血管通路感染風(fēng)險(xiǎn),影響治療效果[9-11]。有報(bào)道指出,IHD患者血管通路感染的發(fā)生發(fā)展受操作規(guī)范情況、衛(wèi)生環(huán)境、血管相關(guān)疾病、基因易感性等多種因素的影響,其中基因的多態(tài)性可導(dǎo)致患者個(gè)體間的差異,并且相關(guān)基因突變會(huì)增加患者血管內(nèi)皮細(xì)胞的易感性,給臨床治療帶來(lái)較大挑戰(zhàn)[12-13]。因此,及早了解影響患者血管通路感染的基因易感性,對(duì)臨床針對(duì)性干預(yù)具有積極作用[14]。

PEAR1在血小板和內(nèi)皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá),有研究發(fā)現(xiàn),PEAR1基因的rs12041331攜帶A等位基因的血小板聚集活性增強(qiáng),是炎癥反應(yīng)等多種激動(dòng)劑促血小板聚集反應(yīng)的關(guān)鍵部分[15-17]。有研究對(duì)PEAR1 rs12041331的AA純合子及其與經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈患者病情進(jìn)展情況進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),與AA純合子相比,GG+GA基因型頻率偏高的患者血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加3倍[18-19]。以上結(jié)果雖已表明,PEAR1基因多態(tài)性表達(dá)與血管內(nèi)皮及炎癥反應(yīng)有一定相關(guān)性,但并未明確PEAR1基因多態(tài)性是否影響血液透析患者血管通路感染情況。本研究結(jié)果顯示,2組受試者PEAR1基因位點(diǎn)有2個(gè)等位基因G和A,檢出3種基因型,包括GG、GA、AA,哈迪-溫伯格平衡值為0.229,提示所選樣本具有群體代表性。本研究結(jié)果顯示,感染組患者的PEAR1 GG基因型頻率和G等位基因型頻率均高于未感染組,提示PEAR1 rs12041331的基因型可能參與IHD患者血管通路感染的發(fā)生發(fā)展,臨床可進(jìn)一步探索PEAR1基因多態(tài)性對(duì)血液透析患者血管通路感染的影響。

本研究單因素分析顯示,年齡、透析時(shí)間、透析頻率、PEAR1 GG基因型頻率及G等位基因頻率、TnT、WBC、PLT、Hct、PCT、NLR和PLR水平、高血壓史和糖尿病史是影響IHD患者血管通路感染的相關(guān)因素;多因素logistic分析結(jié)果顯示,透析時(shí)間長(zhǎng)、年齡大及高透析頻率、高NLR和高PLR水平及PEAR1攜帶G等位基因是影響IHD患者發(fā)生血管通路感染的危險(xiǎn)因素;說(shuō)明PEAR1攜帶G等位基因與IHD患者血管通路感染的發(fā)生發(fā)展有顯著相關(guān)性,G等位基因是IHD患者發(fā)生血管通路感染的易感基因,這提示早期檢測(cè)血液透析患者的PEAR1基因型及等位基因頻率對(duì)血液透析患者具有臨床價(jià)值和意義。本研究評(píng)估PEAR1 rs122937342c2基因多態(tài)性與IHD患者血管通路感染情況的關(guān)系,研究結(jié)果將為臨床抗炎和修復(fù)血管內(nèi)皮損傷治療的遺傳易感性提供參考,同時(shí)為有效保護(hù)患者血管通路正常,保證長(zhǎng)期血液透析順利進(jìn)行提供數(shù)據(jù)支持。

4 結(jié)論

PEAR1基因多態(tài)性表達(dá)與IHD患者血管通路感染存在相關(guān)性,G等位基因可作為IHD患者發(fā)生血管通路感染的易感基因,早期進(jìn)行PEAR1基因多態(tài)性篩查對(duì)輔助臨床判斷血管通路情況提供參考,應(yīng)用價(jià)值頗高。但本研究樣本量較少,未進(jìn)行前瞻性隨機(jī)研究,具有一定的局限性;未來(lái)可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量、延長(zhǎng)血液透析時(shí)間并進(jìn)行前瞻性研究驗(yàn)證PEAR1基因多態(tài)性表達(dá)與IHD患者血管通路感染的相關(guān)性。