食品微生物檢測技術(shù)及其質(zhì)量控制的重要性

鐘婷婷

（廣東省汕尾市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所，廣東汕尾 516600）

食品安全一直是人們關(guān)注的焦點，而微生物污染是食品安全問題的主要原因之一。為了確保食品安全，食品微生物檢測技術(shù)的發(fā)展和質(zhì)量控制尤為重要。利用微生物檢測技術(shù)能夠迅速、準確地檢測食品中的微生物污染情況，并及時采取相應(yīng)措施進行處理，從源頭上保障消費者的身體健康。在如今食品微生物檢測要求越來越高的背景下，對相關(guān)檢測技術(shù)的應(yīng)用要點及質(zhì)量控制措施進行探究具有重要意義。

1 微生物污染對食品安全的影響

微生物包括細菌、霉菌、病毒等，廣泛存在于自然界中。有害微生物污染食品后，會影響食品質(zhì)量。例如，霉菌會導(dǎo)致面包、果蔬等食品發(fā)霉，而細菌則會引發(fā)肉類、海鮮等食品產(chǎn)生異味。某些微生物可以在食品中繁殖并釋放有毒物質(zhì)，進而導(dǎo)致人們食用后出現(xiàn)食物中毒。常見的微生物如沙門氏菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等都可能引發(fā)人體消化系統(tǒng)不適甚至產(chǎn)生嚴重的危害。

2 常見的食品微生物檢測技術(shù)及方法

2.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)法

傳統(tǒng)培養(yǎng)法是一種常用的食品微生物檢測技術(shù)，其原理是將食品樣品接種于含有適宜營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上，并提供適宜的環(huán)境條件使微生物能夠生長和繁殖，通過觀察培養(yǎng)基上出現(xiàn)的生長菌落，并進行進一步的鑒定和計數(shù)來確定食品中存在的微生物類型和數(shù)量[1]。在具體的應(yīng)用中，傳統(tǒng)培養(yǎng)法引申出多種具體檢測方法，如表面計數(shù)法主要是將液態(tài)或半固態(tài)的食品樣品均勻地涂布在含有特定培養(yǎng)基的瓊脂平板上，并進行培育，最終根據(jù)瓊脂平板表面上形成的菌落數(shù)量來估計原始樣品中微生物的個數(shù)。而液體恒溫共振分析法是將食品樣品加入含有適宜培養(yǎng)基的液體培養(yǎng)物中，并在恒溫搖床等設(shè)備上恒溫搖動培養(yǎng)。搖動過程中，微生物會在液體中懸浮并呈現(xiàn)一定的混濁度。

傳統(tǒng)培養(yǎng)法可以檢測多種不同類型的微生物，包括細菌、真菌等，同時可以提供詳細的菌落形態(tài)描述，進而經(jīng)過進一步分離純化完成鑒定。該方法成本低、操作簡單。但是針對某些需求復(fù)雜或?qū)μ囟ōh(huán)境條件依賴較高的微生物，傳統(tǒng)培養(yǎng)法無法滿足相關(guān)檢測要求。同時，該方法需要較長的培養(yǎng)時間，通常需要24 ～48 h 或更長時間才能得到結(jié)果。

2.2 分子生物學(xué)檢測方法

分子生物學(xué)檢測方法是一種基于生物分子的特異性識別和擴增原理的微生物檢測技術(shù)，它通過檢測微生物基因組中的特定目標(biāo)序列來確定食品樣品中存在的微生物種類和數(shù)量，并能夠提供更快速、靈敏和準確的結(jié)果。①聚合酶鏈式反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）。PCR 技術(shù)是最常用且廣泛應(yīng)用于食品微生物檢測領(lǐng)域的分子生物學(xué)方法之一，該方法利用酶體系在適當(dāng)溫度條件下，通過連續(xù)進行3 個步驟（變性、退火和延伸）來擴增目標(biāo)DNA 或RNA 序列。其后可使用凝膠電泳等技術(shù)對擴增產(chǎn)物進行檢測和分析。②限制性片段長度多態(tài)性方法（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）。該方法通過PCR 擴增目標(biāo)DNA 片段后，使用限制性內(nèi)切酶切割生成不同長度的DNA 片段。因為不同樣本中的DNA 序列可能存在差異，所以在某些位置上限制性內(nèi)切酶的切割位點會發(fā)生變化，從而導(dǎo)致不同樣本之間產(chǎn)生不同長度的DNA 片段。這些不同長度的DNA 片段可以通過凝膠電泳分離。通過比較不同樣本中生成的DNA 片段長度差異，可以推斷樣本之間是否存在遺傳差異。

分子生物學(xué)檢測方法可以檢測到極低濃度的微生物，并能夠識別多種微生物種類。同時，相較于傳統(tǒng)培養(yǎng)法，分子生物學(xué)檢測方法通常能夠在幾小時內(nèi)得到結(jié)果，檢測步驟較少，無須煩瑣的培養(yǎng)步驟。但是，這種方法也存在一定不足，比如需要特殊設(shè)備和試劑，購買和維護成本較高。樣品提純、富集和純化等前處理步驟，對檢測流程管理及人員專業(yè)要求較高。

2.3 分子ATP 生物發(fā)光法

分子ATP 生物發(fā)光法是一種基于三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate，ATP）的特異性檢測原理的微生物快速檢測技術(shù)。在實際應(yīng)用中，被檢測樣品中如細菌、霉菌等微生物或其他生物細胞存在時，通常會含有ATP 分子。在采用分子ATP 生物發(fā)光法進行檢測時，添加螢光素酶（Luciferase）和底物鞘氨醇（D-luciferin），當(dāng)螢光素酶與底物接觸并活化時，它會將底物D-luciferin 和存在的ATP 催化轉(zhuǎn)化為氧化的D-luciferin，同時釋放出大量的能量。這種能量釋放過程伴隨著典型的生物發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生可見光。這個發(fā)光是即時且強烈的，并且與存在的ATP 分子數(shù)量成正比[2]。使用光學(xué)儀器（如熒光分光光度計）來測量樣品中生成的發(fā)光強度，并將其與標(biāo)準品進行比較，以確定樣品中存在的微生物數(shù)量。

分子ATP 生物發(fā)光法可以檢測到低至數(shù)百個微生物細胞所釋放出的ATP，在短時間內(nèi)，測試結(jié)果可以反映微生物的活動情況。另外，相較于其他方法，該方法不需要液體富集、提純或培養(yǎng)等復(fù)雜前處理。盡管該方法能夠快速確定食品樣品微生物污染程度，但無法明確識別具體的微生物類型。同時，存在于食品中的某些成分或化合物，如某些清潔劑、防腐劑等可能會對ATP 酶催化反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用，從而影響檢測結(jié)果。底物試劑中的ATP 以及存在于環(huán)境中一些非微生物源的ATP也會導(dǎo)致假陽性結(jié)果發(fā)生。

3 食品微生物檢測技術(shù)質(zhì)量控制的重要性

3.1 確保數(shù)據(jù)準確性

嚴格做好質(zhì)量控制，通過設(shè)置合適的參照標(biāo)準、方法驗證和環(huán)境監(jiān)管等手段，有助于提高檢測數(shù)據(jù)的準確性。正確的質(zhì)量控制過程能夠排除測試誤差或技術(shù)問題導(dǎo)致的不確定因素，以保證檢測結(jié)果的可靠性[3]。

3.2 優(yōu)化實驗設(shè)計

為了保證食品微生物檢測質(zhì)量，通常需要考慮實驗操作中的影響因素，如環(huán)境條件、試劑、儀器設(shè)備等。同時，針對富集過程中的微生物生長，可以優(yōu)化富集培養(yǎng)基的成分和溫度參數(shù)。通過調(diào)整富集時間和培養(yǎng)條件，可以最大限度地增加目標(biāo)微生物的數(shù)量，并提高檢測效率[4]。根據(jù)目標(biāo)微生物種類和檢測要求，選擇合適的檢測方法。例如，選擇PCR技術(shù)可以實現(xiàn)對特定目標(biāo)序列的快速、靈敏性檢測；而傳統(tǒng)培養(yǎng)方法則可以提供目標(biāo)微生物的可培養(yǎng)計數(shù)。權(quán)衡不同方法的優(yōu)缺點，并根據(jù)具體需求進行選擇。另外，為有效控制檢測質(zhì)量，可以引入內(nèi)部質(zhì)量控制樣本（如陽性對照和陰性對照），以評估實驗流程的準確性和一致性。

3.3 提高檢測效率

在檢測過程中，嚴謹?shù)馁|(zhì)量控制措施可以提高檢測的準確性，避免對異常結(jié)果的重復(fù)試驗，從而有助于提高工作效率，減少資源和時間的浪費。同時，通過建立標(biāo)準化的工作流程，并優(yōu)化樣品處理步驟，可以提高檢測效率。一致的流程可以節(jié)省時間，并使整個檢測過程更加高效。除此之外，質(zhì)量控制要求建立嚴格的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)和質(zhì)量評估程序，以確保數(shù)據(jù)的準確性和一致性。通過監(jiān)測、審查和評估檢測結(jié)果，可以及時發(fā)現(xiàn)潛在問題，并采取糾正措施，減少數(shù)據(jù)錯誤的發(fā)生。

4 食品微生物檢測技術(shù)的質(zhì)量控制策略

4.1 樣品采集與保存

嚴格確保樣品采集操作符合標(biāo)準要求，對于避免外源性污染、確保檢測結(jié)果的代表性具有重要意義。對于特定微生物的檢測，還需根據(jù)其生存要求選擇適當(dāng)?shù)谋４鏃l件，以保持樣品在運輸和存儲過程中的穩(wěn)定性[5]。

4.2 樣品預(yù)處理

樣品預(yù)處理環(huán)節(jié)中，不僅需要消除如抑菌劑、離子等潛在干擾因素，還應(yīng)防止交叉感染。對于固體樣品，比如肉類、蔬菜、奶制品等，通常進行切割、破碎或混合均勻。對于液體樣品，比如汁液、原料等，則需要適當(dāng)攪拌或搖動，確保樣本中微生物分散均勻。在預(yù)處理過程中，應(yīng)注意保持操作臺衛(wèi)生無污染。

4.3 培養(yǎng)基選擇與準備

在采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法進行食品微生物檢測時，培養(yǎng)基為微生物的生長提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境。為了提高檢測結(jié)果的準確性，在培養(yǎng)基選擇上應(yīng)參照國家或地方標(biāo)準。同時，培養(yǎng)基配制也需要按照固定比例和程序進行，并注意無菌操作以避免交叉污染。

4.4 合理設(shè)置對照組

設(shè)置好對照組，便于對樣品的實際情況進行準確判斷。為此，在每個批次檢測中設(shè)置合適的陰性對照和陽性對照樣品，以排除干擾因素的影響，提升方法的準確性。同時，注意對對照樣本的保存和管理，確保其在整個檢測過程中不被污染。

4.5 儀器設(shè)備運行與維護

在實驗前應(yīng)進行必要的儀器校準、清洗工作，保持儀器設(shè)備的良好狀態(tài)，正確使用并加強日常維護等，以保證儀器的正常運行[6]。同時，操作人員需要熟悉儀器設(shè)備的使用方法，并按照操作手冊或標(biāo)準操作程序進行操作。例如，在PCR 儀器中，涉及樣品裝載、反應(yīng)條件設(shè)置、實時監(jiān)測等方面都需要按照規(guī)定來進行。并且，可以定期使用已知濃度或含量的質(zhì)量控制樣本來驗證儀器的性能和準確性。比如，針對光譜分析儀，使用標(biāo)準溶液進行定期校驗可以確保儀器的準確度和一致性。另外，要定期對儀器設(shè)備進行維護和保養(yǎng)，如更換耗材、校準儀器參數(shù)、清潔濾網(wǎng)等。例如，高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）設(shè)備在每次使用后要沖洗系統(tǒng)，定期更換柱子，以確保分離效果和檢測信號穩(wěn)定。

5 結(jié)語

綜上所述，合理的質(zhì)量控制對于食品安全具有重要意義。良好的質(zhì)量控制能夠降低數(shù)據(jù)誤差，優(yōu)化實驗設(shè)計，提高效率，并降低檢測成本。同時，能提升人員的檢測能力，增強人們對食品微生物檢測實驗室的認可度。保障食品安全是現(xiàn)代社會穩(wěn)定發(fā)展的重要前提，因此在食品微生物檢測中應(yīng)更加重視質(zhì)量控制，并持續(xù)優(yōu)化和改進相關(guān)流程，以確保檢測結(jié)果更加準確、可靠。