非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)在臨床中的應(yīng)用及意義

胡波+蔡四忠+常元程

【摘要】 目的 研究分析非小細(xì)胞肺癌表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）基因突變檢測(cè)在臨床中的應(yīng)用及意義。方法 非小細(xì)胞肺癌患者65例， 檢測(cè)患者組織中的EGFR基因外顯子18、19、20和21突變情況。結(jié)果 非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因共發(fā)生突變25例， 總突變率為38.46%。外顯子18突變1例， 突變率為1.54%；外顯子19突變12例， 突變率為18.46%；外顯子20突變1例， 突變率為1.54%；外顯子21突變11例， 突變率為16.92%。女性患者突變率顯著高于男性患者突變率， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肺腺癌患者突變率顯著高于鱗狀細(xì)胞癌患者突變率， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌患者存在EGFR基因突變率高的現(xiàn)象， 特別是EGFR外顯子19和外顯子21突變情況結(jié)合肺癌的臨床病理特征在理論上可成為評(píng)估酪氨酸激酶抑制劑（TKI）治療非小細(xì)胞肺癌臨床療效的分子標(biāo)志。

【關(guān)鍵詞】 非小細(xì)胞肺癌；表皮生長(zhǎng)因子受體；基因突變；臨床應(yīng)用價(jià)值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.15.085

非小細(xì)胞肺癌是臨床上十分常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病， 據(jù)相關(guān)報(bào)告統(tǒng)計(jì)， 在我國(guó)非小細(xì)胞肺癌占肺癌總數(shù)的80%以上， 嚴(yán)重影響了我國(guó)廣大人民群眾的身體健康與生命安全[1]。近年來(lái)隨著醫(yī)療科技的進(jìn)步， 以EGFR為靶點(diǎn)的分子靶向治療成為了非小細(xì)胞肺癌疾病的一種新型的治療方法[2]。但有大量實(shí)驗(yàn)表明， 只有一部分的患者對(duì)EGPR-TKI Gefitibib和Erlotimib藥物較為敏感。為研究分析非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)在臨床中的應(yīng)用價(jià)值， 本研究選取本院近期收治的65例非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對(duì)象進(jìn)行研究分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年4月～2015年5月本院收治的非小細(xì)胞肺癌患者65例。其中男44例， 女21例；年齡最大94歲， 最小36歲；平均年齡（64.43±16.81）歲。所有患者均經(jīng)過(guò)肺穿刺或外科手術(shù)切除病變標(biāo)本， 進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)室檢測(cè)， 符合WHO關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。按照WHO組織學(xué)分型將所有患者分為肺腺癌（53例）和鱗狀細(xì)胞癌（12例）。所有患者及其家屬均對(duì)本研究知情同意， 并簽署知情同意書(shū)。

1. 2 方法 在每例患者的病變組織標(biāo)本中切取厚度為5～6 μm切片， 根據(jù)組織大小與腫瘤細(xì)胞含量取6～15片石蠟切片， 將切取的切片放到1.5 ml的Eppendorf管中， 在管中加入適量的二甲苯進(jìn)行脫蠟處理， 然后應(yīng)用潔凈的手術(shù)刀片刮取玻片上組織放入到Eppendorl管， 充分震蕩混勻后靜置10 min， 12000×g離心5 min， 舍棄上清液， 加入適量的乙醇進(jìn)行洗脫， 再重復(fù)離心， 舍棄上清液。再加入無(wú)水乙醇， 重復(fù)洗滌樣品1次， 室溫開(kāi)蓋靜置， 等待無(wú)水乙醇徹底揮發(fā)。應(yīng)用基因組DNA提取試劑盒， 按照試劑盒提取說(shuō)明書(shū)的相關(guān)操作步驟提取基因組DNA。然后應(yīng)用EGFR基因突變檢測(cè)試劑盒北京鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)有限公司采用Taqman法實(shí)施EGFR基因突變檢測(cè)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

65例患者中， 非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因共發(fā)生突變25例， 總突變率為38.46%。其中外顯子18突變1例， 突變率為1.54%；外顯子19突變12例， 突變率為18.46%。外顯子18、19的突變方式均為缺失突變。外顯子20突變1例， 突變率為1.54%；外顯子21突變11例， 突變率為16.92%， 外顯子20、21的突變方式均為EGFR基因L858R突變。另外53肺腺癌組織中共發(fā)生突變23例， 突變率為43.40%；12例鱗狀細(xì)胞癌患者中共發(fā)生突變2例， 突變率為16.67%。肺腺癌突變率明顯高于鱗狀細(xì)胞癌的突變率， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。44例男性患者中發(fā)生突變的有15例， 突變率為34.09%；21例女性患者中發(fā)生突變的有10例， 突變率為47.62%。女性患者突變率顯著高于男性患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

EGFR作為一種跨膜受體型酪氨酸激酶， 在非小細(xì)胞肺癌病變組織中存在過(guò)表達(dá)及發(fā)生突變[3]。而靶向EGFR的酪氨酸激酶抑制劑Gefitimib是非小細(xì)胞肺癌在在病情發(fā)展期的常規(guī)一線用藥[4]。肺癌患者EGFR酪氨酸激酶編碼區(qū)基因突變是EGFR酪氨酸激酶抑制劑靶向治療的一個(gè)前提條件。當(dāng)前， 突變擴(kuò)增阻滯系統(tǒng)已經(jīng)逐成為國(guó)際上腫瘤個(gè)體化分子檢測(cè)最重要， 最先進(jìn)的幾種技術(shù)之一， 該技術(shù)在臨床應(yīng)用中的優(yōu)勢(shì)被業(yè)內(nèi)相關(guān)專家所認(rèn)可[5]。該技術(shù)是應(yīng)用特異引物， 對(duì)突變靶序列進(jìn)行高精準(zhǔn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增放大， 同時(shí)再利用探針對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)， 在實(shí)時(shí)熒光定量PCR平臺(tái)上實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品DNA中的稀有突變進(jìn)行檢測(cè)， 從而達(dá)到對(duì)基因突變檢測(cè)的高特異性和高靈敏度[6-8]。EGFR基因中共有28個(gè)外顯子， 而編碼酪氨酸激酶區(qū)是第18、19、20和21外顯子。在本研究結(jié)果中19和21外顯子突變率明顯較高， 這表明19外顯子和21外顯子更加容易受到環(huán)境致癌物攻擊， 突變后可能激活EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路， 在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起到重要的作用。同時(shí)本研究結(jié)果中也可以看出女性患者總的突變率要明顯高于男性患者突變率， 肺腺癌患者突變率要顯著高于鱗狀細(xì)胞癌（P<0.05）。

綜上所述， 非小細(xì)胞肺癌患者存在EGFR基因突變率高的現(xiàn)象， 特別是EGFR外顯子19和外顯子21突變情況結(jié)合肺癌的臨床病理特征在理論上可成為評(píng)估TKI治療非小細(xì)胞肺癌臨床療效的分子標(biāo)志。

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[收稿日期：2015-12-21]