黔中金蕎麥提取物安全性評價及對大鼠腸道菌群的影響

張 濤，周思旋，唐遠江，陶小艷，盧昱希，杜春林，王 魯，齊維金，郭云勛，浦同燦

（1.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽 550005；2.貴州大學(xué) 貴州省生化工程中心，貴州 貴陽 550025；3.貴州省黔南布依族苗族自治州龍里縣養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中心，貴州 龍里 551299；4.貴陽市花溪區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽 550025）

隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，人們對畜禽產(chǎn)品的需求已由量向質(zhì)轉(zhuǎn)變，生產(chǎn)綠色健康、優(yōu)質(zhì)的畜禽產(chǎn)品是畜牧業(yè)的長期目標。為避免養(yǎng)殖過程中因抗生素造成的細菌耐藥性、藥物殘留、環(huán)境污染等問題，應(yīng)盡量少用或不用抗生素類藥物，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部已頒布了減抗替抗相關(guān)法規(guī)，明確了抗生素減用和限用時間表。因此，尋找和開發(fā)低毒、低殘留且能提高畜禽生長性能、免疫力和抗病力的中藥制劑、植物提取物和益生菌等，是養(yǎng)殖行業(yè)健康發(fā)展的必然選擇[1]。金蕎麥[Fagopyrum dibotrys（D.Don）Hara]又名金鎖銀開、蕎麥三七、赤地利等，為蓼科多年生藥飼兼用草本植物，主要分布在我國西南地區(qū)[2]。金蕎麥及其制劑和提取物中含有抗炎殺菌等活性成分，在動物飼養(yǎng)方面具有促生長、防疾病、提高肉品質(zhì)及免疫功能等作用[3]。黔中金蕎麥（Fagopyrum dibotrysQian Zhong）是以貴州黔中地區(qū)野生金蕎麥為原始材料經(jīng)優(yōu)化栽培條件馴化而成的牧草新品種，該牧草產(chǎn)量高、營養(yǎng)價值高、適口性好[4]，生物活性成分豐富，具有抑菌、抗氧化、增強免疫力等功效[5-6]。貴州省畜牧獸醫(yī)研究所獸用中草藥課題組前期研究表明，黔中金蕎麥表兒茶素、蘆丁、槲皮素等黃酮類物質(zhì)總含量高于野生金蕎麥，其中槲皮素含量差異最為顯著[7-8]；黔中金蕎麥是一種亟待開發(fā)應(yīng)用的飼料及飼料添加劑，其提取物地上和地下部分對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用[9]。目前，對黔中金蕎麥提取物的研究多集中在抑菌活性、提物工藝的優(yōu)化、物質(zhì)含量等方面，對安全性及其對腸道微生物區(qū)系的研究報道較少。鑒于此，通過急性毒性和亞慢性毒性試驗對黔中金蕎麥提取物的安全性進行評價，采用高通量測序比較高劑量黔中金蕎麥水提物及醇提物對大鼠腸道菌群的影響，探究黔中金蕎麥提取物的安全使用劑量范圍及對大鼠腸道菌群的影響，以期為黔中金蕎麥提取物臨床應(yīng)用及飼料添加劑研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗動物

SPF 級昆明小鼠、SD 大鼠購自重慶騰鑫實驗動物中心[動物許可證號：SCXK（京）2019-0008]，在貴州大學(xué)貴州省生化工程中心SPF 級動物實驗室飼養(yǎng)，試驗過程中對動物的處理方法符合中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見（2006）》的規(guī)定。

1.2 黔中金蕎麥提取物的制備

取黔中金蕎麥粉適量，分別用料液比1∶40的水和70%乙醇浸泡過夜，70 ℃回流30 min，過濾，濾渣重提1 次，合并濾液，濃縮至浸膏恒質(zhì)量，分別得到黔中金蕎麥水提物和黔中金蕎麥醇提物，備用。

1.3 黔中金蕎麥提取物急性毒性試驗

1.3.1 黔中金蕎麥提取物對小鼠急性毒性預(yù)試驗

選取健康的（20±2）g 昆明小鼠12 只，隨機分成3組，每組4 只，雌雄各半，A 組為黔中金蕎麥水提物組，B 組為黔中金蕎麥醇提物組，C 組為生理鹽水空白組，按生藥40 g/kg 的最大給藥劑量和20 mL/kg 給藥體積一次灌胃給藥，觀察14 d，記錄小鼠行為活動、精神狀態(tài)及死亡情況。給藥結(jié)束后，頸椎脫位方式處死小鼠，解剖觀察并記錄其臟器情況。

1.3.2 黔中金蕎麥提取物對小鼠急性毒性限度試驗 選取健康的昆明小鼠[（20±2）g]60只，隨機分成3 組，每組20 只，雌雄各半，A 組為黔中金蕎麥水提物組，B 組為黔中金蕎麥醇提物組，C 組為生理鹽水空白組，按生藥40 g/kg 的最大給藥劑量和20 mL/kg給藥體積一次灌胃給藥，觀察14 d，記錄小鼠行為活動、精神狀態(tài)及死亡情況。給藥結(jié)束后，頸椎脫位方式處死小鼠，解剖觀察并記錄其臟器情況。

1.4 黔中金蕎麥提取物亞慢性毒性試驗

1.4.1 動物分組及給藥 選取提前檢疫與馴化的健康狀況良好的（180±2）g SPF 級SD 大鼠140 只，隨機分為7 組，每組20 只，雌雄各半。黔中金蕎麥水提物低（10 g/kg）、中（20 g/kg）、高（40 g/kg）劑量組，醇提物低（10 g/kg）、中（20 g/kg）、高（34 g/kg）劑量組和對照組（生理鹽水20 mL/kg），每組灌胃給予相同劑量藥物，每天給藥1次，連續(xù)4周。

1.4.2 臨床癥狀觀察和質(zhì)量測定 給藥飼喂期間每天觀察并記錄大鼠的行為活動、外觀體征、精神狀況、糞便形狀及顏色、下腹部，肛門處有無污物及排泄物等情況。分別于第0、2、4 周最后一天進行1次體質(zhì)量測定，然后進行解剖。

1.5 檢測指標

1.5.1 血液常規(guī)指標檢測 末次給藥后大鼠禁食16 h，按3 mL/kg 腹腔注射10%水合氯醛進行麻醉，經(jīng)心臟采血，樣品立即送至貴州安康醫(yī)學(xué)檢測中心進行血液學(xué)常規(guī)項目指標檢測，主要有白細胞（WBC）、中性粒細胞（NEUT）、淋巴細胞（LYMPH）、紅細胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血小板（PLT）。

1.5.2 血清生化指標檢測 處理同1.5.1，采集血樣經(jīng)室溫靜置1 h 后3 000 r/min 離心10 min，分離血清。樣品送至貴州安康醫(yī)學(xué)檢測中心進行血清生化指標檢測，主要有丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）、總膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）。

1.5.3 系統(tǒng)剖檢、臟器系數(shù)及組織病理學(xué)檢查 給藥結(jié)束后，使用10%水合氯醛腹腔注射麻醉進行剖檢，檢查腦、心臟、肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、腎上腺、胸腺、雄性動物睪丸和附睪、雌性動物子宮和卵巢等臟器變化，并稱其質(zhì)量，計算各臟器質(zhì)量與體質(zhì)量之比（臟器系數(shù)）。將各組大鼠的肝臟、心臟、腎臟等臟器組織用4%甲醛固定、保存。將高劑量組和對照組的臟器組織按常規(guī)方法進行脫水、包埋、切片、HE染色后，光學(xué)顯微鏡觀察。

1.5.4 腸道樣品采集與微生物多樣性分析 無菌操作分別收集黔中金蕎麥提取物高劑量水提物組（R1）、高劑量醇提物組（R2）和對照組（R3）大鼠盲腸內(nèi)容物。置于液氮保存，由北京諾禾致源生物信息技術(shù)有限公司進行16S rDNA高通量測序。

1.6 數(shù)據(jù)處理

體質(zhì)量、血液學(xué)、血液生化、臟器系數(shù)以均數(shù)±標準差表示，采用SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析。利用Uparse 對腸道微生物進行聚類，采用Mothur 方法與SILVA 138 中SSU rRNA 數(shù)據(jù)庫進行物種注釋分析?；诜诸惒僮鲉卧∣TU）聚類結(jié)果，利用Qiime軟件進行樣本復(fù)雜度分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 黔中金蕎麥提取物急性毒性試驗結(jié)果

將2 mg/mL 黔中金蕎麥水提物和醇提物，按40 g/kg 一次灌胃小鼠，結(jié)果顯示，觀察14 d 內(nèi)各組未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡，期間小鼠精神狀態(tài)良好，皮毛光澤，眼及黏膜無變化，呼吸無異常，未見中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常，采食飲水正常。剖解觀察主要臟器組織，未見明顯眼觀變化。表明黔中金蕎麥水提物和醇提物對小鼠最小致死量大于限度劑量（5.00 g/kg）。

2.2 黔中金蕎麥提取物亞慢性毒性試驗結(jié)果

2.2.1 大鼠臨床癥狀與體質(zhì)量變化 由圖1 可見，黔中金蕎麥提物各劑量組大鼠體質(zhì)量隨飼喂周期增加而增加，與對照組無顯著性差異（P＜0.05）。給藥期間黔中金蕎麥水提物各劑量組和醇提物低、中劑量組大鼠正常飲水采食，精神狀態(tài)良好，外觀體征、行為活動未見異常；醇提物高劑量組大鼠表現(xiàn)為食欲不振、精神萎靡、采食及行為活動能力降低，至給藥結(jié)束，該組大鼠死亡9只。

圖1 黔中金蕎麥提取物處理下大鼠體質(zhì)量變化情況Fig.1 The curve of weight changes of rats affected by extracts of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong

2.2.1 大鼠血液學(xué)指標檢測 由表1 可見，與對照組比較，黔中金蕎麥水提物各劑量組與醇提物中、高劑量組的大鼠WBC、NEUT、LYMPH、RBC、HGB及PLT 等相關(guān)指標均無顯著性差異（P＜0.05）；醇提物低劑量組WBC 和LYMPH 顯著性升高（P＜0.05），其余各指標無顯著性差異（P＜0.05）。

2.2.2 大鼠血清生化指標檢測 由表2 可見，與對照組相比，黔中金蕎麥水提物低、中劑量組和醇提物低劑量組ALT、AST、TP等血清生化指標均無顯著性差異（P＜0.05）。黔中金蕎麥水提物高劑量組TP含量極顯著降低（P＜0.01），TG 濃度顯著增加（P＜0.05），其余各指標無顯著性差異（P＜0.05）；醇提物中劑量組TP含量極顯著降低（P＜0.01），BUN含量顯著降低（P＜0.05），其余各指標無顯著性差異（P＜0.05）；醇提物高劑量組除TG 無顯著性差異（P＜0.05），ALB 含量顯著降低、GLU 含量顯著增加（P＜0.05），其余各指標均表現(xiàn)出極顯著性差異（P＜0.01）。

表2 黔中金蕎麥提取物對大鼠血液生化指標的影響Tab.2 Effects of extracts of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong on blood biochemical indexes of rats

2.2.3 大鼠系統(tǒng)尸檢、臟器系數(shù)檢查 由表3和表4可見，與對照組比較，第4 周時，黔中金蕎麥水提物和醇提物各劑量組SD 雄性大鼠心臟、肝臟、脾臟等組織臟器系數(shù)均無顯著差異（P＜0.05）；黔中金蕎麥醇提物中劑量組SD 雌性大鼠脾臟系數(shù)呈顯著降低（P＜0.05），高劑量組呈極顯著降低（P＜0.01），其余各劑量組均無顯著差異（P＜0.05）。

表3 黔中金蕎麥提取物對雄性大鼠臟器系數(shù)的影響Tab.3 Effects of extracts of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong on organ coefficient of male rats

表4 黔中金蕎麥提取物對雌性大鼠臟器系數(shù)的影響Tab.4 Effects of extracts of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong on organ coefficient of female rats

2.2.4 高劑量黔中金蕎麥提取物對大鼠組織病理學(xué)的影響 由圖2可見，與對照組比較，高劑量黔中金蕎麥水提物和醇提物組心臟未見明顯與給藥相關(guān)的異常病理改變（H-1、H-2 和H-3）。高劑量水提物組可見病變的肝臟組織，表現(xiàn)為肝小葉結(jié)構(gòu)不清，肝細胞腫大，胞質(zhì)疏松，有的凝固，細胞變性壞死，細胞核不清楚（L-2）；同時，腎臟組織中可見腎小管管腔結(jié)構(gòu)不完整，有脫落壞死的變性上皮細胞組織（K-2）。高劑量醇提物組腎小管中可見皺縮細胞核，近、遠曲小管管腔結(jié)構(gòu)不完整，有大量脫落壞死的變性上皮細胞（K-3）。

圖2 黔中金蕎麥提取物對大鼠心、肝、腎組織病理切片的影響Fig.2 Effects of extracts of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong on histopathological section of rat heart，liver and kidney

2.3 黔中金蕎麥提取物對大鼠腸道微生物多樣性的影響

2.3.1 序列拼接質(zhì)控與OTU 聚類分析 經(jīng)Illumina NovaSeq 測序分析得到細菌原始序列共225 324 條，有效序列共176 579 條，按照97%相似性進行聚類注釋得到OTU 數(shù)共7 184 個。其中，R1、R2 和R3 平均原始序列分別為87 352、71 239、66 733 條，平均有效序列分別為72 094、54 801、49 684 條（表5）；聚類分析得到3 組樣品OTU 分別為2 122、2 383、2 679個，特有的OTU 分別為202、328、382 個，共有的OTU為1 434個（圖3）。

表5 黔中金蕎麥提取物處理下大鼠腸道樣品序列統(tǒng)計Tab.5 Sequence statistics of intestinal samples in different groups of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong extracts

圖3 不同處理組大鼠腸道菌群間OTU分布韋恩圖Fig.3 Venn diagram of OTU distribution in intestinal bacteria of rats between different groups

2.3.2 黔中金蕎麥提取物對大鼠腸道菌群Alpha 多樣性的影響 據(jù)稀釋曲線，隨著測序深度的增加，樣本序列數(shù)量不斷增加時，OTU 數(shù)量逐漸趨于平緩，說明樣本量充足，測序數(shù)據(jù)合理，能夠較好地反映各試驗組菌群信息（圖4）。與對照組比較，R1 組Chao 1 和ACE 指數(shù)偏 低，R2 組Chao 1 和ACE 指 數(shù)增大；R1組和R2組Simpson 和Shannon指數(shù)均比R3小。根據(jù)Observed species 指數(shù)可得，細菌物種數(shù)目為R2＜R3＜R1。具體見表6。

表6 黔中金蕎麥提取物對大鼠腸道微生物Alpha多樣性指數(shù)的影響Tab.6 Effects of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong extracts on alpha diversity index of rat intestinal flora

2.3.3 黔中金蕎麥提取物對大鼠腸道菌群Beta 多樣性的影響 對各組大鼠腸道內(nèi)容物菌群多樣性數(shù)據(jù)進行PCoA 分析見圖5，結(jié)果顯示，主成分PC1和PC2 的貢獻率分別為總變量的46.72% 和15.43%，R1 組與R3 組的菌群特征接近，R2 組與另2組菌群特征相對較遠。

圖5 黔中金蕎麥提取物處理下大鼠腸道菌群的PCoA分析Fig.5 PCoA analysis of intestinal flora of rats under treatments of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong extracts

2.3.4 黔中金蕎麥提取物對大鼠腸道菌群相對豐度的影響 由表7 可見，3 個組的優(yōu)勢菌群門類均為擬桿菌門（Bacteroidota）和厚壁菌門（Firmicutes）。與R3 比較，R2 Firmicutes 相對豐度減少，R1 兩個門類相對豐度均增加。屬分類水平上，R1組主要有唾液乳酸桿菌屬（Ligilactobacillus）、阿克曼菌屬（Akkermansia）、羅姆布茨菌屬（Romboutsia），其中Ligilactobacillus相對豐度最高（9.06%）；R2 組主要有擬桿菌屬（Bacteroides）、Akkermansia、擬普雷沃菌屬（Alloprevotella），其中Bacteroides相對豐度最高（37.67%）；R3 主要有Alloprevotella、杜氏乳桿菌屬（Dubosiella）、Romboutsia，其中Alloprevotella相對豐度最高（5.91%）。

表7 黔中金蕎麥提取物對大鼠腸道菌群相對豐度的影響Tab.7 Effects of Fagopyrum dibotrys Qian Zhong extracts on the relative abundance of intestinal flora in rats %

2.3.5 黔中金蕎麥提取物處理下大鼠腸道菌群差異性分析 由圖6 可見，經(jīng)線性判別分析效應(yīng)大小分析（LEfSe）篩選不同組差異顯著的細菌群類，LDA＜4 水平上，共發(fā)現(xiàn)57 個菌群結(jié)構(gòu)有差異。R1中有18 個標記性質(zhì)物種，包括2 個門、4 個綱、3 個目、5個科、2個屬和2個種，以梭菌綱（Clostridia）、顫藻目（Oscillosprales）和未鑒別細菌門為主；R2 中有10個標記性質(zhì)物種，包括1個門、1個綱、1個目、2個科、2 個屬和3 個種，以擬桿菌屬（Bacteroides）、擬桿菌科（Bacteroidaceae）和擬桿菌門（Bacteroidota）為主；R3 中有29 個標記性質(zhì)物種，包括1 個界、3 個門、3個綱、6個目、5個科、6個屬和5個種，以厚壁菌門（Firmicutes）、乳桿菌目（Lactobacillales）和桿菌綱（Bacilli）為主。在屬水平上，R1 特征屬為杜氏桿菌屬（Dubosiella），R2特征屬為擬桿菌屬（Bacteroides），R3特征屬為乳酸桿菌屬（Ligilactobacillus）。

3 結(jié)論與討論

植物提取物是經(jīng)物理或化學(xué)方法從植物中提取得到的活性物質(zhì)富集物，增加了藥物成分，還可更好提取出不同極性、不同分子質(zhì)量的活性成分，包括多酚類、黃酮類、多糖類等，充分發(fā)揮中藥的功效。我國有著悠久的中藥用藥歷史，中藥資源豐富多樣，藥用植物及其提取物作為飼料添加劑、中獸藥和綠色消毒劑等養(yǎng)殖投入品受到眾多關(guān)注研究[10-11]。前人研究發(fā)現(xiàn)，波棱瓜子和趕黃草提取物可有效治療因維生素A 急性中毒所致小鼠骨損傷，兩者聯(lián)合使用效果更佳[12]；以多葉勾兒茶、地榆、烏藥、萹蓄入藥的復(fù)方中藥止痢散制劑可有效減緩番瀉葉引起的小鼠腹瀉，且長期服用未見明確的毒性反應(yīng)[13]；肉雞日糧中添加400 mg/kg 和600 mg/kg 的金銀花提取物能提高肉雞生產(chǎn)性能，提高胸肌中GSH-Px基因表達量及其相應(yīng)的抗氧化酶活性，進而提高肌肉抗氧化性能，改善肌肉品質(zhì)[14]。

黔中金蕎麥為藥飼兼用優(yōu)質(zhì)牧草，臨床使用廣泛，但其相關(guān)毒理研究資料缺乏，本試驗對黔中金蕎麥水提取物和醇提取物的急性毒性和亞慢性毒性進行研究，為臨床用藥提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。急性毒性試驗是評價藥物毒性最基本的方法，也是新藥物生物安全評價的重要指標，可為后續(xù)亞慢性或長期毒性試驗提供劑量參考[15-16]。本研究通過預(yù)試驗確定黔中金蕎麥水提物和醇提物灌胃劑量為2 mg/mL，一次灌胃小鼠劑量為40 g/kg。給藥后小鼠精神狀態(tài)良好，無明顯不良反應(yīng)及死亡，解剖亦無明顯病變，說明40 g/kg黔中金蕎麥水提物和醇提物無明顯毒性，表明黔中金蕎麥水提物和醇提物對小鼠最小致死量大于5.00 g/kg。本研究所用黔中金蕎麥水提物和醇提物均為粗提物，其中大量有效成分目前還不明確，但結(jié)果顯示無明顯急性毒性，說明提取物具有較高的安全性。

亞慢性毒性試驗是評價藥物或毒物在一定時期內(nèi)對機體產(chǎn)生危害的主要依據(jù)，可指導(dǎo)臨床給藥劑量。為探討黔中金蕎麥水提物和醇提物的亞慢性毒性作用，分別設(shè)低、中、高劑量連續(xù)對大鼠給藥4 周，觀察大鼠生長情況，測定血液常規(guī)、生化指標及臟器系數(shù)等。發(fā)現(xiàn)黔中金蕎麥提取物各劑量組對大鼠體質(zhì)量無不良影響，高劑量醇提物可致部分大鼠死亡，其余各組對大鼠外觀行為無不良影響。與對照組比較，醇提物低劑量組白細胞和淋巴細胞顯著性升高，中劑量組總蛋白極顯著降低，尿素氮顯著降低；醇提物高劑量組甘油三酯無顯著性差異，白蛋白顯著降低、葡萄糖顯著增加，中、高劑量組雌性大鼠脾臟系數(shù)顯著和極顯著降低，血液學(xué)和臟器系數(shù)個別指標有一定的波動，但均在正常參考范圍內(nèi)[12]；高劑量水提物組大鼠甘油三酯顯著增加，以上各指標均在正常參考范圍內(nèi)[17-19]。從組織病理學(xué)檢測結(jié)果可知，長期灌胃高劑量黔中金蕎麥水提物（40 g/kg）和醇提物（34 g/kg）后，大鼠心臟結(jié)構(gòu)無明顯病變，肝臟和腎臟結(jié)構(gòu)均發(fā)現(xiàn)明顯病變，但停藥后是否恢復(fù)正常需進一步試驗驗證。

腸道微生物菌群直接影響機體健康狀態(tài)、腸道功能、免疫能力等，與多種疾病相關(guān)，目前主要以抗生素或其他化學(xué)物質(zhì)進行臨床治療，但這可能進一步產(chǎn)生包括藥物殘留、耐藥性、食品安全等問題，故研究中藥制劑、植物提取物和益生菌等對機體腸道微生物的影響對研制和開發(fā)獸藥或飼料添加劑具有指導(dǎo)意義[20-24]。譚露霖等[25]飼喂以黔金蕎麥1 號為主的中草藥飼料添加劑可顯著降低仔豬直腸糞便中大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量，改善腸道微生物環(huán)境。本研究中，與對照組比較，高劑量水提物組大鼠腸道菌群豐度減少，醇提物組豐度增加，水提物組和醇提物組菌群多樣性和物種均勻度均減少。表明飼喂黔中金蕎麥提取物可調(diào)節(jié)大鼠腸道菌群多樣性和物種豐富度。黔中金蕎麥水提物、醇提物及對照組優(yōu)勢菌群門類均為擬桿菌門和厚壁菌門，擬桿菌門和厚壁菌門參與機體腸道重要的代謝活動，包括碳水化合物的發(fā)酵、含氮物質(zhì)的利用以及脂肪酸和其他類固醇的生物轉(zhuǎn)化，提高宿主的免疫力，促進腸道發(fā)育，還能夠通過預(yù)防可能定植和感染腸道的潛在病原體感染使宿主受益[26-27]。黔中金蕎麥水提物、醇提物及對照組最優(yōu)菌屬分別為唾液乳酸桿菌屬（9.06%）、擬桿菌屬（37.67%），擬普雷沃菌屬（5.91%）。LEfSe 分析表明，與對照組比較，黔中金蕎麥水提物組擬桿菌屬、醇提物組乳桿菌屬等有益菌相對豐度增加。

綜上所述，黔中金蕎麥水提物和醇提物為無毒物質(zhì)；結(jié)合亞慢性毒性試驗和病理組織觀察，高劑量黔中金蕎麥水提物（40 g/kg）和醇提物（34 g/kg）可影響大鼠肝臟和腎臟結(jié)構(gòu)，停藥后是否恢復(fù)需進一步試驗驗證；黔中金蕎麥提取物可改變大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)菌群種類和數(shù)量，提高宿主的免疫力，促進腸道發(fā)育。