富含羥基酪醇橄欖油對(duì)高血脂小鼠的影響

葉文斌，陳文東，王 昱，張 凱，黃新異，邸多隆

（1.隴南師范高等專(zhuān)科學(xué)校農(nóng)林技術(shù)學(xué)院，甘肅 成縣 742500；2.中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所，甘肅 蘭州 730000）

橄欖油是木犀科木犀欖屬的一種常綠經(jīng)濟(jì)喬木油橄欖（Olea europaeaL.）鮮果經(jīng)過(guò)冷榨離心工藝得到的產(chǎn)物，由于保存了天然營(yíng)養(yǎng)成分，被譽(yù)為“液體黃金”，因其富含可降低膽固醇和血脂的油酸及人體必需的維生素和微量元素[1-4]，是世界公認(rèn)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高的植物油。而且它還是一種不干性食用油，人體消化吸收率高達(dá)90%以上，是食用油脂中最有益于人體健康的植物油之一，同時(shí)橄欖油中還富含三萜類(lèi)、甾醇類(lèi)、多酚類(lèi)、酚類(lèi)化合物和類(lèi)胡蘿卜素和其他色素成分[3-8]，長(zhǎng)期食用橄欖油能增強(qiáng)消化系統(tǒng)功能、預(yù)防心腦血管疾病和神經(jīng)退行性疾病、降低癌癥發(fā)生率、促進(jìn)骨骼發(fā)育[9-13]，尤其在改善一些心血管風(fēng)險(xiǎn)因子如血脂、血糖代謝、內(nèi)皮功能和炎癥反應(yīng)方面具很好的效果[7-8,14-16]，對(duì)人體健康具有重要作用。羥基酪醇是一種存在于油橄欖葉和樹(shù)皮中的多酚類(lèi)化合物，具有很強(qiáng)的抗氧化活性和藥學(xué)效果[17]，羥基酪醇的自由基清除能力強(qiáng)，表現(xiàn)出獨(dú)特的生物活性，如抗氧化、抗菌、抗炎、改善心臟的冠脈血流[17]等，還可以通過(guò)阻滯腫瘤細(xì)胞的增殖及誘發(fā)其凋亡，起到很好的抗癌活性，同時(shí)能有效防治小鼠生殖系統(tǒng)的損傷[18-20]，而且無(wú)明顯毒性反應(yīng)，其在醫(yī)藥與食品行業(yè)的應(yīng)用前景近年來(lái)受到廣泛關(guān)注[21-22]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)橄欖油保健功效的研究比較深入，而對(duì)橄欖油保健食品的研究較少[14]，在國(guó)內(nèi)存在一些以膠囊、片劑、粉劑為主的橄欖油保健產(chǎn)品，但其在保健品的市場(chǎng)影響都比較小。隨著我國(guó)居民對(duì)健康的重視水平不斷提高以及國(guó)內(nèi)橄欖油消費(fèi)量的快速攀升，國(guó)內(nèi)對(duì)橄欖油保健食品功效的研究將會(huì)更加重視。

本實(shí)驗(yàn)采用脂肪乳劑和體積分?jǐn)?shù)為75%的蛋黃乳誘導(dǎo)高血脂小鼠模型，研究富含羥基酪醇橄欖油（olive oil rich in hydroxyl tyrosol，OHT）對(duì)高血脂小鼠的影響，以期為開(kāi)發(fā)無(wú)毒無(wú)副作用的降脂降糖橄欖油保健食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

PFKM小鼠購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，雌雄各半，體質(zhì)量（22.00±0.45）g，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（甘）2020-0002。

普通橄欖油由甘肅時(shí)光油橄欖科技有限公司提供，羥基酪醇含量為0.25 mg/100 g；富含羥基酪醇橄欖油由中國(guó)科學(xué)院西北特色植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制，羥基酪醇含量為20 mg/100 g。

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測(cè)試劑盒 北京索萊寶科技有限公司；糖化血紅蛋白、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）檢測(cè)試劑盒 南京建成生物工程研究所有限公司；動(dòng)物專(zhuān)用全自動(dòng)生化分析儀專(zhuān)用綜合24 項(xiàng)生理指標(biāo)檢查盤(pán)片 天津微納芯科技有限公司；菲勒貝特江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司；膽固醇、膽酸鈉 美國(guó)Sigma公司；丙基硫氧嘧啶片、聚山梨酯-80、1,2-丙二醇南京天一生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 上海千載科技有限公司；TGL-16G高速臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；UV759紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；Pointcare V3動(dòng)物專(zhuān)用全自動(dòng)生化分析儀 天津微納芯科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 富含羥基酪醇橄欖油制備

取新鮮的油橄欖果，清洗、粉碎至80 目，加入6 倍鮮果質(zhì)量的45 ℃純凈水，攪拌。用高速剪切機(jī)以轉(zhuǎn)速16 000 r/min對(duì)果肉中細(xì)胞組織進(jìn)一步破碎提取，提取時(shí)間為10 min，每提取2 min間隔0.5 min，再用攪拌器在45 ℃下加熱保溫?cái)嚢栊纬晒麧{。在常溫下對(duì)果漿以20 000 r/min離心5 min后，果漿固液分離，分離果渣后，對(duì)油-水混合液進(jìn)一步用400 目的濾膜過(guò)濾，在過(guò)濾后的油-水混合液中加入其質(zhì)量為10%的硫酸鈉，攪拌使得硫酸鈉完全溶解。靜置25 min后油-水分離，得到富含羥基酪醇橄欖毛油和果水。富含羥基酪醇橄欖毛油靜置24 h，得富含羥基酪醇特級(jí)初榨橄欖油，即本實(shí)驗(yàn)所用的實(shí)驗(yàn)材料——OHT。用高效液相色譜法測(cè)定OHT中羥基酪醇的含量為20 mg/100 g。檢測(cè)條件：色譜柱：SinoChrom ODS-BP（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：0.10%甲酸溶液（溶劑為V（水）∶V（乙腈）＝86∶14），流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣體積：20 μL；二極管陣列檢測(cè)器（diode array detector，DAD）；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。

1.3.2 脂肪乳劑和體積分?jǐn)?shù)75%蛋黃乳配制

參考郗艷麗等[23]的方法制備脂肪乳劑，取80 g豬油置于500 mL燒杯中加熱融化后，加入40 g膽固醇繼續(xù)溶解，再加入8 g膽酸鈉和4 g丙基硫氧嘧啶片，充分?jǐn)噭颍缓蠹尤脒m量的蒸餾水及聚山梨酯-80、1,2-丙二醇各80 mL，不斷攪勻加熱，再加雙蒸水至400 mL并充分混勻，即配制成含100 g/L膽固醇、200 g/L豬油、20 g/L膽酸鈉和10 g/L丙基硫氧嘧啶的脂肪乳劑，將脂肪乳劑放入4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，使用時(shí)加熱融化。

取新鮮雞蛋黃用蒸餾水配制成體積分?jǐn)?shù)為75%的蛋黃乳，即用即配。

1.3.3 高血脂小鼠動(dòng)物模型建立

參考葉文斌等[24]的方法，將正常PFKM小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，隨機(jī)取10 只小鼠作為正常對(duì)照組，將其余60 只小鼠（模型組）按10 mL/kgmb的劑量，早上灌胃脂肪乳劑，下午灌胃75%的蛋黃乳，每天1 次，連續(xù)灌服6 周，在末次灌胃后禁食12 h，不禁水后眼眶取血，模型組的總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）含量比正常對(duì)照組高3～4 倍即造模成功。

1.3.4 富含羥基酪醇橄欖油對(duì)高血脂小鼠的影響實(shí)驗(yàn)

取建模成功的高血脂KM小鼠60 只，隨機(jī)分為6 組：模型組，菲勒貝特藥物對(duì)照組（philbert，PL），橄欖油（olive oil，OL）組，OHT高、中、低劑量（HOHT、MOHT和LOHT）組。PL組、OL組均按200 mg/kgmb劑量每天分別灌胃菲勒貝特藥物、橄欖油1 次；HOHT、MOHT和LOHT組，按照200、100、50 mg/kgmb的劑量每天灌胃1 次OHT。連續(xù)灌胃28 d。小鼠自由飲食和飲水，取10 只正常小鼠，以灌胃相同體積的生理鹽水為CK(0)組。灌胃期間，每7 d稱(chēng)量體質(zhì)量，末次給藥后12 h眼眶靜脈叢采血，用肝素抗凝管收集，4 ℃、3 000 r/min離心5 min后，收集血清，用動(dòng)物專(zhuān)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定小鼠空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、TC、TG、總膽紅素（total bilirubin，TBIL）、總膽汁酸（total bile acid，TBA）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、γ-氨?；D(zhuǎn)移酶（gammaammonia acyltransferase，GGT）和堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）水平；依照試劑盒方法測(cè)定糖化血紅蛋白（glycated hemoglobin，HbA1c）相對(duì)含量及HDL和LDL濃度；解剖小鼠取心臟、腦、肝、脾、腎，稱(chēng)取質(zhì)量并按下式計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3.5 小鼠毒理學(xué)分析

1.3.5.1 急性毒理實(shí)驗(yàn)

選取40 只PFKM小鼠，隨機(jī)分成4 組，其中1 組小鼠喂生理鹽水（CK(0)組），剩余3 組小鼠進(jìn)行OHT口服（灌胃）急性毒理實(shí)驗(yàn)，分為OHT高、中、低劑量組（HOHT、MOHT、LOHT組），灌服劑量分別為30 000、25 000 mg/kgmb和20 000 mg/kgmb，給藥后每天早、中、晚各觀察1 次，連續(xù)觀察7 d，觀察小鼠皮毛是否光亮，眼角膜是否有血絲、紅腫現(xiàn)象，小鼠活動(dòng)是否有異常行為[24]，并對(duì)小鼠稱(chēng)質(zhì)量。末次給藥后12 h眼眶靜脈叢采血，用肝素抗凝管收集，4 ℃、3 000 r/min離心5 min，收集血清，依照試劑盒方法測(cè)定SOD、CAT、GSH-Px活力和MAD濃度，對(duì)小鼠進(jìn)行頸椎脫臼處死并解剖，對(duì)重要臟器進(jìn)行病理檢查。

1.3.5.2 慢性毒理實(shí)驗(yàn)

選取20 只PFKM小鼠，隨機(jī)分成2 組，其中1 組小鼠進(jìn)行OHT口服（灌胃）慢性毒理實(shí)驗(yàn)，具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程參考《保健食品及其原料安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（2020年版）》，灌服劑量為200 mg/kgmb，另外1 組小鼠灌胃等體積的生理鹽水，計(jì)為CK(0)組，每天灌胃1 次，連續(xù)灌胃90 d。每30 d對(duì)小鼠稱(chēng)質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行頸椎脫臼處死，進(jìn)行重要臟器病理檢查，按1.3.5.1節(jié)方法取血清，測(cè)定SOD、CAT、GSH-Px活力和MDA濃度。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，數(shù)據(jù)分析采用SPSS 27.0軟件進(jìn)行，組間數(shù)據(jù)的差異顯著性分析采用單因素方差分析（One-way ANOVA）中的Tukey’s多重比較進(jìn)行，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 OHT對(duì)高血脂小鼠血糖、血脂的影響

由表1可知，給藥28 d后，模型組小鼠血清中TC、TG、FBG濃度和HbA1c相對(duì)含量極顯著高于其他6 組（P＜0.01）。HOHT對(duì)小鼠血清中TC、TG、FBG和HbA1c濃度的降低作用明顯強(qiáng)于OL，但與PL相比降糖降脂能力較溫和，HOHT組與PL組相比除TG濃度無(wú)顯著性差異外，TC、FBG濃度和HbA1c含量均呈極顯著或顯著差異（P＜0.01，P＜0.05）。隨OHT劑量增加，TC、TG、FBG濃度及HbA1c相對(duì)含量降低，說(shuō)明OHT對(duì)高血脂小鼠降血糖、血脂的作用呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，富含高劑量的羥基酪醇橄欖油對(duì)高血脂小鼠降血糖、血脂的作用較強(qiáng)。綜上，OHT可以有效調(diào)節(jié)高血脂小鼠血糖血脂水平。

表1 OHT對(duì)高血脂小鼠血糖與血脂的影響Table 1 Effect of OHT on blood glucose and lipids in hyperlipemic mice

2.2 OHT對(duì)高血脂小鼠脂蛋白、膽紅素和膽汁酸的影響

如表2所示，給藥28 d后，與CK(0)組相比，高血脂模型組小鼠血清中HDL、TBIL和TBA的濃度極顯著升高（P＜0.01），LDL濃度極顯著降低（P＜0.01）；與高血脂模型組小鼠相比，PL、OL、HOHT組小鼠血清中HDL、TBIL和TBA的濃度顯著或極顯著降低（P＜0.05、P＜0.01），LDL濃度顯著或極顯著升高（P＜0.05、P＜0.01）；與HOLT組相比，PL組小鼠血清以上指標(biāo)更接近CK(0)組，說(shuō)明HOLT處理與PL處理相比恢復(fù)血脂能力稍弱。隨OHT劑量的增加，各OHT處理組恢復(fù)小鼠血清中HDL、LDL、TBIL和TBA濃度的能力逐漸增加，說(shuō)明OHT恢復(fù)小鼠血脂指標(biāo)的能力具有劑量效應(yīng)關(guān)系。

表2 OHT對(duì)高血脂小鼠HDL、LDL、TBIL和TBA濃度的影響Table 2 Effect of OHT on HDL, LDL, TBIL and TBA concentrations in hyperlipemic mice

2.3 OHT對(duì)高血脂小鼠血清中4 種關(guān)鍵酶的影響

由表3可知，給藥28 d后，高血脂模型小鼠血清中ALT、AST、GGT和ALP活力極顯著高于其他6 組（P＜0.01）；HOHT組小鼠血清中ALT、AST、GGT和ALP活力極顯著低于OL組（P＜0.01），與PL組相比對(duì)高血脂小鼠4 種關(guān)鍵酶的活力降低能力較弱。與模型組相比，HOHT組在灌胃給藥28 d后小鼠血清中4 種關(guān)鍵酶的活力雖然極顯著降低（P＜0.01），但仍然極顯著高于CK(0)組（P＜0.01）。隨OHT劑量的增加，其降低高血脂小鼠血清中4 種關(guān)鍵酶活力的能力逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明OHT降低高血脂小鼠血清4 種關(guān)鍵酶活力具有劑量效應(yīng)關(guān)系。以上結(jié)果說(shuō)明OHT對(duì)高血脂小鼠的4 種關(guān)鍵酶具有很好的抑制作用，但作用效果比較溫和。

表3 OHT對(duì)高血脂小鼠4 種關(guān)鍵酶活力的影響Table 3 Effect of OHT on four key enzyme activities in hyperlipemic mice

2.4 OHT對(duì)高血脂小鼠體質(zhì)量與臟器指數(shù)的影響

如表4所示，在脂肪乳劑和75%的蛋黃乳誘導(dǎo)高血脂小鼠模型成功后，模型組小鼠與CK(0)小鼠相比飲水和進(jìn)食明顯增加，活動(dòng)量減少，體質(zhì)量極顯著增加（P＜0.01）。在給藥過(guò)程中，HOHT、MOHT、LOHT組小鼠體質(zhì)量整體上逐漸增加，但與模型組相比增加緩慢，小鼠活動(dòng)與精神狀況逐漸好轉(zhuǎn)，HOHT組與PL組相比小鼠體質(zhì)量無(wú)顯著差異（P＞0.05），且低于OL組。隨著OHT劑量的增加，其降低高血脂小鼠體質(zhì)量的作用也逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明OHT降低高血脂小鼠體質(zhì)量的作用具有劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果表明OHT可有效控制高血脂小鼠的體質(zhì)量。如表5所示，高血脂模型小鼠心臟、腦、肝、腎、脾等重要臟器指數(shù)與其他各組相比均無(wú)顯著差異（P＞0.05），這說(shuō)明用脂肪乳劑和75%的蛋黃乳誘導(dǎo)構(gòu)建高血脂小鼠模型的方法穩(wěn)定可靠。

表4 OHT對(duì)高血脂小鼠體質(zhì)量的影響Table 4 Effect of OHT on body mass of hyperlipemic mice g

表5 OHT對(duì)高血脂小鼠重要臟器指數(shù)的影響Table 5 Effect of OHT on major organ coefficients of hyperlipemic mice

2.5 小鼠OHT急性毒理實(shí)驗(yàn)結(jié)果

小鼠口服（灌胃）急性毒性實(shí)驗(yàn)中，一次性灌服OHT劑量分別為20 000、25 000 mg/kgmb和30 000 mg/kgmb，給藥后依據(jù)葉文斌等[24]的方法籠邊觀察7 d，發(fā)現(xiàn)給藥后各組小鼠外觀毛色光亮，無(wú)竄動(dòng)跳躍、豎毛扭體等異常反應(yīng)現(xiàn)象，小鼠活動(dòng)自如，攝食、進(jìn)水、大小便正常，未出現(xiàn)死亡，半數(shù)致死量（median lethal dose，LD50）未檢出，根據(jù)毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，LD50＞10 000 mg/kgmb屬于無(wú)毒性物質(zhì)[24-25]，本研究中一次性灌服OHT的最大劑量為30 000 mg/kgmb，結(jié)果說(shuō)明OHT對(duì)小鼠無(wú)急性毒性。如圖1所示，各組小鼠體質(zhì)量無(wú)顯著差異（P＞0.05）。對(duì)小鼠進(jìn)行頸椎脫臼處死，進(jìn)行重要臟器病理檢查，均未觀察到明顯病理變化。對(duì)于SOD、CAT、GSH-Px活力及MDA濃度，HOHT組與CK(0)組有顯著性差異（P＜0.05、P＜0.01），MOHT組、LOHT組與CK(0)組相比均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

圖1 OHT對(duì)小鼠急性毒理生理指標(biāo)的影響Fig. 1 Effect of OHT on acute toxicological physiological indexes in mice

2.6 小鼠OHT慢性毒理實(shí)驗(yàn)結(jié)果

OHT對(duì)小鼠口服（灌胃）慢性毒理實(shí)驗(yàn)中，連續(xù)灌胃90 d后小鼠外觀毛色正常，無(wú)異常反應(yīng)，攝食、進(jìn)水、大小便等均無(wú)明顯異常，小鼠活動(dòng)自如。在灌胃過(guò)程中，小鼠重要臟器均無(wú)明顯病理變化。由圖2可知，2 組小鼠體質(zhì)量均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增長(zhǎng)，但CK(0)組小鼠體質(zhì)量均顯著或極顯著高于OHT組（P＜0.05、P＜0.01），說(shuō)明OHT具有降低體質(zhì)量的功效。隨時(shí)間延長(zhǎng)，2 組小鼠血清中SOD、CAT和GSH-Px的活力均升高，且CK(0)組小鼠血清中以上指標(biāo)均高于OHT組，其中在60 d時(shí)兩組差異顯著（P＜0.05），90 d時(shí)差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明OHT具有提高小鼠血清中SOD、CAT和GSH-Px活力的功能，能夠提高小鼠的抗氧化能力。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，2 組小鼠血清中的MDA濃度均升高，CK(0)組小鼠體內(nèi)血清中的MDA濃度高于OHT組，30 d時(shí)兩組MDA濃度無(wú)顯著性差異（P＞0.05），60、90 d時(shí)差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明OHT具有降低小鼠體內(nèi)血清中MDA濃度的作用。綜上，OHT屬于慢性無(wú)毒性物質(zhì)，而且具有一定的降低體質(zhì)量、提高抗氧化能力的功效。

圖2 OHT對(duì)小鼠慢性毒理生理指標(biāo)的影響Fig. 2 Effect of OHT on chronic toxicological physiological indexes in mice

3 討 論

高血脂主要是由脂代謝紊亂引起，會(huì)引發(fā)高血糖和高血壓，還可導(dǎo)致脂肪肝、心血管疾病、冠心病、胰腺炎及動(dòng)脈粥樣硬化等疾病，是對(duì)人體生命健康產(chǎn)生威脅的主要原因之一[26]，降脂藥物主要包括他汀和貝特類(lèi)，長(zhǎng)期口服具有肝損害等不良反應(yīng)[23]。而橄欖油具有很好的預(yù)防心腦血管疾病作用，尤其在改善心血管風(fēng)險(xiǎn)因子如血脂、血糖代謝、內(nèi)皮功能和炎癥反應(yīng)方面具有很好的效果[7-15]，有關(guān)羥基酪醇的生物功能研究很多[17-22]，但是有關(guān)OHT對(duì)高血脂小鼠的血糖血脂代謝影響的報(bào)道較少。高血脂是以TC、TG、LDL濃度升高，HDL濃度降低為主要臨床特征的一類(lèi)疾病[27]，本研究發(fā)現(xiàn)，OHT能降低高血脂小鼠的TC、TG、LDL水平，提高HDL水平，對(duì)高血脂小鼠的代謝紊亂有較好的調(diào)節(jié)與治療作用，其中HOHT作用顯著。

BIL和TBA濃度的升高是臨床上判斷肝膽功能異常和肝細(xì)胞病變的重要現(xiàn)象，TBIL是亞鐵血紅素的分解終產(chǎn)物，絕大多數(shù)來(lái)源于紅細(xì)胞血紅蛋白的分解[28]，其異常會(huì)引發(fā)膽紅素代謝障礙性肝病，影響肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的攝取、運(yùn)輸、酯化及排泄等過(guò)程[29]，過(guò)多的膽紅素還會(huì)擴(kuò)散進(jìn)入組織、大部分內(nèi)臟器官和體液，引發(fā)Dubin-Johnson綜合征、Rotor綜合征、Gilbert綜合征和Crigler-Najjar綜合征[29-31]。TBA由肝臟產(chǎn)生后進(jìn)入腸道，作為激活法尼醇X受體（farnesoid X receptor，F(xiàn)XR）和G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體5（the G-proteincoupled bile acid receptor-5，TGR5）的信號(hào)分子可影響腸道激素的合成與分泌，并參與葡萄糖代謝的調(diào)節(jié)，TBA異常會(huì)加劇動(dòng)物的糖脂代謝紊亂[32-33]，本研究發(fā)現(xiàn)，OHT能降低高血脂小鼠的TBIL和TBA濃度，降低糖脂代謝紊亂，且HOLT作用效果顯著。

高血脂模型小鼠血清中的ALT和AST活力水平與脂肪在肝臟表面堆積有關(guān)，高脂影響了肝細(xì)胞的正常代謝、導(dǎo)致肝細(xì)胞損害，是反映肝臟損傷程度的敏感指標(biāo)[34]，本研究表明在OHT灌胃治療28 d后，高血脂小鼠血清ALT和AST活力極顯著降低，這說(shuō)明OHT可清除高血脂小鼠堆積在肝臟的脂肪，減輕其對(duì)肝臟的損傷。GGT是γ-谷氨酰循環(huán)的關(guān)鍵酶，既能夠分解谷胱甘肽及其S結(jié)合物，又能夠促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的重新合成，GGT還能氧化谷胱甘肽產(chǎn)生一系列自由基，誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化和氧化損傷，促進(jìn)細(xì)胞病變[35]。ALP是在人與動(dòng)物組織中廣泛表達(dá)的一種胞外核苷酸酶，其水平是用于診斷肝癌、肝硬化及其他肝膽系統(tǒng)疾病的重要指標(biāo)，與ALT、AST活力可共同反映肝細(xì)胞的受損程度[36]。本研究中，低、中、高劑量的OHT對(duì)高血脂小鼠的ALT、AST、GGT和ALP水平均具有極顯著的抑制作用，可降低肝細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化和氧化損傷，對(duì)肝臟起到很好的保護(hù)作用。

SOD是細(xì)胞內(nèi)負(fù)責(zé)清除超氧陰離子自由基的重要內(nèi)源性抗氧化劑，其活力是反映機(jī)體抗氧化能力的敏感指標(biāo)[23,37]，H2O2在細(xì)胞內(nèi)大量存在時(shí)也會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷，CAT可以將H2O2分解成氧和水，降低細(xì)胞內(nèi)的H2O2水平[23,38]。GSH-Px可以清除由活性氧和自由基誘發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化物，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性[23,39]，過(guò)多的活性氧會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生MDA，因此MDA濃度可以直接反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化和組織過(guò)氧化損傷程度[23,40-41]。對(duì)正常小鼠進(jìn)行急慢性毒理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，OHT能提升小鼠血清中的SOD、CAT和GSH-Px的活力，降低MDA水平，證明OHT可以通過(guò)調(diào)節(jié)氧化酶活力和降低脂質(zhì)過(guò)氧化，進(jìn)而維持氧化和抗氧化之間的平衡，改善小鼠肝組織的氧化損傷程度，且具有一定的控制體質(zhì)量的作用。

與CK(0)組相比，高血脂模型小鼠血清的FBG、TC、TG、LDL、TBIL、TBA濃度，HbA1c相對(duì)含量，ALT、AST、GGT、ALP活力極顯著增加，HDL濃度極顯著降低，經(jīng)過(guò)28 d的HOHT、MOHT和LOHT灌胃治療，小鼠血清中以上指標(biāo)得到不同程度恢復(fù)，其中HOHT的效果最顯著，其以上作用效果不如PL治療組，但卻強(qiáng)于OL組。在小鼠急慢性毒理研究中一次性灌服OHT最大劑量為30 000 mg/kgmb，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明OHT對(duì)小鼠屬于急性無(wú)毒物質(zhì)；在小鼠慢性毒理研究中，連續(xù)灌胃OHT 90 d后進(jìn)行重要臟器病理檢查，均無(wú)明顯病理變化，且OHT能提高小鼠血清中SOD、CAT和GSH-Px活力，降低MDA濃度，提高小鼠的抗氧化能力和降低體質(zhì)量，所以O(shè)HT對(duì)小鼠屬于慢性無(wú)毒性物質(zhì)。雖然OHT的降血糖血脂作用不如口服降血脂藥物菲勒貝特強(qiáng)烈，但其作用比較溫和、無(wú)副作用，是具有很好輔助治療作用的橄欖油保健食品。