規(guī)?；馀?chǎng)布魯氏桿菌病的診斷及防控措施

武軍民

山西省河津市樊村鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，山西河津 043300

布魯氏菌病簡(jiǎn)稱“布病”，是由布魯氏菌引起的一種急性或慢性人獸共患病，能夠引起多種家畜（牛、羊、豬、馬）和野生動(dòng)物（野牛、野兔、小鼠、大鼠、蜱和跳蚤）、人感染。布魯氏菌是一種革蘭氏陰性菌，形狀多不規(guī)則，無(wú)鞭毛、芽孢和莢膜，對(duì)自然環(huán)境抵抗力強(qiáng)，耐高溫。該病一年四季都可發(fā)生，多發(fā)生于母牛妊娠季節(jié)，主要經(jīng)消化道感染，主要影響動(dòng)物生殖系統(tǒng)，能夠引起動(dòng)物不孕、流產(chǎn)、關(guān)節(jié)炎等癥狀[1]；病原菌通過(guò)黏膜侵入機(jī)體內(nèi)部并定位于淋巴結(jié)，乳房、生殖道、睪丸等部位。妊娠母牛感染后多表現(xiàn)為流產(chǎn)，公牛感染后多表現(xiàn)為睪丸和附睪功能異常、關(guān)節(jié)腫大、淋巴結(jié)炎。患病牛是布魯氏菌病的主要傳染源。該疾病的傳播速度很快，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)在養(yǎng)殖區(qū)域大范圍的傳播。目前，大多數(shù)病牛為隱性感染，有明顯的地方性流行特點(diǎn)。老疫區(qū)表現(xiàn)為慢性經(jīng)過(guò)，新疫區(qū)多為急性經(jīng)過(guò)。當(dāng)患病牛流產(chǎn)時(shí)，大量的病原菌就會(huì)隨著陰道分泌物排出體外，這時(shí)健康牛就很容易被感染。當(dāng)飼料、墊草、水等被患病牛污染，健康牛采食后就會(huì)引起布魯氏菌病。布病是一種人獸共患病，飼養(yǎng)人員常常會(huì)感染布病，所以，必須加強(qiáng)牧場(chǎng)布病的管理，保證飼養(yǎng)人員的健康，近年來(lái)，肉牛布病發(fā)病率較高，病原體感染率顯著上升[2]。目前，我國(guó)對(duì)肉牛布魯氏菌病的預(yù)防仍以免疫接種為主，同時(shí)通過(guò)疾病檢疫方法及時(shí)發(fā)現(xiàn)病牛并撲殺為輔。在當(dāng)前養(yǎng)殖工作過(guò)程中，需做好牛布病的防治工作，結(jié)合牛布病的流行實(shí)際，有效做好防治，降低牛布病的患病概率。基于此，文章對(duì)牛布病的流行與防控進(jìn)行了分析和探究，旨在通過(guò)探究能夠找到有效防控牛布病的方式，給養(yǎng)殖工作帶來(lái)參考。

1 臨床癥狀

潛伏期一般2 ～3 周，布病主要損害牛生殖系統(tǒng)。當(dāng)布氏桿菌侵入肉牛機(jī)體后，在關(guān)節(jié)、淋巴結(jié)、子宮、胎盤等部位進(jìn)行增殖，引起組織器官炎癥。妊娠母牛感染布病后，常發(fā)生流產(chǎn)或者分娩死胎，流產(chǎn)常發(fā)生在妊娠6 ～8 個(gè)月。流產(chǎn)后部分母牛陰道流出惡臭的分泌物，分泌物呈污灰色或棕褐色。流產(chǎn)母牛表現(xiàn)為精神不振、采食下降、時(shí)起時(shí)臥、陰唇腫脹、生殖道發(fā)言和乳房腫脹等癥狀；

而公牛感染布魯氏菌主要影響睪丸與附睪發(fā)育，主要表現(xiàn)為睪丸腫大，并伴有疼痛，觸摸發(fā)現(xiàn)變得堅(jiān)硬，配種能力降低。部分公牛還會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎，主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫大、疼痛、常臥、跛行。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷

當(dāng)母牛發(fā)生流產(chǎn)時(shí)，應(yīng)首先考慮布魯氏菌病，但應(yīng)與螺旋體病、牛傳染性鼻氣管炎及其他多種真菌疾病相鑒別。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

規(guī)定免疫地區(qū)使用布病疫苗免疫接種過(guò)的牛只，在接種后18 個(gè)月進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，陽(yáng)性牛只進(jìn)行撲殺。非免疫地區(qū)直接檢疫，陽(yáng)性牛只進(jìn)行撲殺。

布氏桿菌診斷方法有很多，包括ELISA、琥紅平板凝集法、試管凝集法、PCR、細(xì)菌分離鑒定等，不同的診斷方法特點(diǎn)不同。采用ELISA 方法進(jìn)行診斷，主要是價(jià)格昂貴，需要技術(shù)人員操作，需要使用酶標(biāo)儀讀數(shù)；采用琥紅平板凝集法進(jìn)行診斷，主要是國(guó)標(biāo)初檢方法，價(jià)格便宜，操作簡(jiǎn)單，適合大面積開(kāi)展檢疫；采用試管凝集法進(jìn)行診斷，主要是國(guó)標(biāo)復(fù)檢方法，價(jià)格便宜，操作相對(duì)復(fù)雜；采用PCR 進(jìn)行診斷，需要技術(shù)人員操作，不適合大面積檢測(cè)；采用細(xì)菌分離鑒定進(jìn)行診斷，為避免人畜共患病發(fā)生，沒(méi)有條件的實(shí)驗(yàn)室不允許進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。下面選擇幾種診斷方法進(jìn)行描述。

2.2.1 細(xì)菌學(xué)檢查

選擇患病母牛陰道分泌物、分娩后胎衣、死胎內(nèi)容物進(jìn)行涂片，然后在酒精燈上加熱，來(lái)固定組織，固定好之后滴加2%沙黃水溶液，采用酒精燈火焰上方加熱約0.5 ～1 min，直至出現(xiàn)蒸氣，水洗后采用1%孔雀綠再?gòu)?fù)染1 ～2 min，然后水洗，吸干水分，進(jìn)行鏡檢。鏡檢如果發(fā)現(xiàn)紅色的球桿菌，則可說(shuō)明就是布氏桿菌；如果發(fā)現(xiàn)綠色的菌，就是其他菌。

2.2.2 全乳環(huán)狀反應(yīng)

采集患病母牛新鮮乳汁，取1 mL 全乳加入反應(yīng)管，然后加入抗原（藍(lán)色）0.1 mL，在振蕩器上充分混勻，放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，放置1 h 后取出進(jìn)行結(jié)果判定。如果發(fā)現(xiàn)乳脂層乳柱深的藍(lán)色環(huán)狀帶，表示結(jié)果呈陽(yáng)性，說(shuō)明該牛被布氏桿菌感染。

2.2.3 琥紅平板凝集反應(yīng)

琥紅平板凝集法相對(duì)其他方法來(lái)說(shuō)，價(jià)格便宜、方法簡(jiǎn)單，是規(guī)?；翀?chǎng)開(kāi)展布病檢測(cè)的首選，牧場(chǎng)遇到如下情況可使用此法開(kāi)展布病檢疫：新引進(jìn)的肉?？墒褂苗t法開(kāi)展檢測(cè)，禁止購(gòu)買陽(yáng)性牛；懷孕母牛發(fā)生早流產(chǎn)時(shí)開(kāi)展檢測(cè)，及時(shí)篩出陽(yáng)性牛并處理；對(duì)配次高且無(wú)法懷孕的牛進(jìn)行篩查，及時(shí)處理陽(yáng)性牛。琥紅平板凝集法如下。

2.2.3.1 血液采集。采血者單手將牛尾舉至與水平線成45°角，做好消毒后，在離尾根10 cm 左右凹點(diǎn)處垂直進(jìn)針，采血針出現(xiàn)回血后，將另一端針頭插入真空采血管中，采集4 ～5 mL 血液后撥出采血針，并對(duì)尾根部位進(jìn)行再次消毒，同時(shí)做好采血記錄。將采好的血液呈45°角在室溫（20 ～25 ℃）下放置過(guò)夜，血清析出，將析出的血清裝入2 mL離心管中，做好記錄。短期（1 ～2 d）4 ℃保存，長(zhǎng)期將血清放入-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3.2 樣品檢測(cè)。使用移液槍吸取30 μL 琥紅試劑，加到載玻片上，每張載玻片可以加兩份琥紅試劑。用移液槍分別吸取30 μL 血清對(duì)應(yīng)加到琥紅試劑中。使用槍頭將琥紅試劑和血清混勻，保證一份待檢血清用一個(gè)槍頭。加樣后，輕晃載玻片，室溫下4 min 后觀察結(jié)果，血清有肉眼可見(jiàn)凝集現(xiàn)象的判為陽(yáng)性，均勻無(wú)變化的判為陰性。

3 預(yù)防措施

3.1 科學(xué)防疫

接種疫苗是預(yù)防布魯氏桿菌病的有效措施。高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)的動(dòng)物主要依靠接種疫苗預(yù)防和控制布魯氏菌病，低風(fēng)險(xiǎn)區(qū)主要采用檢疫、撲殺、消毒和移動(dòng)控制等措施，不對(duì)動(dòng)物布魯氏菌病進(jìn)行治療。目前，布病疫苗均為活疫苗，對(duì)接種動(dòng)物有一定的毒力。國(guó)內(nèi)現(xiàn)在有3 種布病疫苗，分別為牛種A19 疫苗、豬種S2 疫苗、羊種M5 疫苗，牛場(chǎng)使用A19 和S2疫苗較多，M5 疫苗使用較少。牛種A19 疫苗，皮下注射，保護(hù)期長(zhǎng)，可達(dá)到72 個(gè)月，毒力強(qiáng)，不能用于懷孕牛；豬種S2 株疫苗，口服，安全性高，保護(hù)期短，需多次進(jìn)行免疫，免疫過(guò)程中對(duì)環(huán)境污染大，同時(shí)容易感染免疫人員；羊種M5 株疫苗，皮下注射，毒力強(qiáng)，保護(hù)力強(qiáng)，安全性低。

3.2 加強(qiáng)消毒工作

布魯氏菌在土壤中能夠存活1 ～4 個(gè)月，在水中能夠存活2 ～3 個(gè)月，在糞與尿中能夠存活1 ～2個(gè)月，在肉制品、乳制品中能夠存活2 ～5 個(gè)月。但是，布魯氏菌對(duì)濕熱抵抗力均很差，在50 ～55℃水中，60 min 就可滅活；在60 ℃水中，30 min就可滅活；在70 ℃水中，10 min 就可滅活。布魯氏菌對(duì)多種消毒液敏感，所以消毒是減少環(huán)境中病原菌數(shù)量和阻止病原菌傳播的有效措施，為避免布病交叉?zhèn)鞑?，牧?chǎng)發(fā)生早流產(chǎn)后第一時(shí)間對(duì)流產(chǎn)物污染區(qū)域拋灑生石灰、漂白粉、新潔爾滅、2%火堿液等消毒[3]，流產(chǎn)胎兒和胎衣消毒后收集至填埋井內(nèi)，同時(shí)采集流產(chǎn)牛只血液進(jìn)行布病檢測(cè)，陽(yáng)性牛只第一時(shí)間隔離，然后進(jìn)行無(wú)害化處理。牧場(chǎng)要安排人員每天對(duì)產(chǎn)房、新產(chǎn)牛舍開(kāi)展一次消毒，保證墊草干燥。

3.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

引進(jìn)患病肉牛是感染該病的最大威脅，應(yīng)嚴(yán)格加強(qiáng)肉牛的引種管理。原則上建議各肉牛場(chǎng)實(shí)行自繁自養(yǎng)，盡量減少?gòu)耐饷嬉M(jìn)種牛。

感染布病的牛只可以將自身攜帶的病原菌排入常乳或初乳中，直接飼喂?fàn)倥?huì)導(dǎo)致?tīng)倥１桓腥?。因此必須?duì)初乳和常乳進(jìn)行滅菌，而巴氏滅菌可以在不損失牛奶中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及不改變風(fēng)味的前提下殺滅奶中細(xì)菌（滅菌率97%～99%），可以從源頭控制布病，降低犢牛感染布病風(fēng)險(xiǎn)。

3.4 加強(qiáng)人員管理

布病是人畜共患病，可以通過(guò)動(dòng)物感染人，目前沒(méi)有發(fā)現(xiàn)人與人之間相互感染。為了確保從業(yè)者健康，必須從根本上進(jìn)行引導(dǎo)，認(rèn)識(shí)到布病的危害。政府和企業(yè)對(duì)從業(yè)人員進(jìn)行培訓(xùn)，掌握相關(guān)專業(yè)知識(shí)，并定期進(jìn)行體檢。在免疫疫苗時(shí)，因活疫苗有不同程度的殘余毒力，所以必須做好自身防護(hù)。不允許在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)屠宰動(dòng)物、加工動(dòng)物產(chǎn)品；禁止外來(lái)人員隨意出入養(yǎng)殖場(chǎng)。