對乙酰氨基酚配伍腺苷蛋氨酸復(fù)方片劑的制備及質(zhì)量評價

陳俊,唐其蔚,胡秀虹,譚榮,黃雨驥

(1.凱里學(xué)院,貴州 凱里 556011,2.黔東南州人民醫(yī)院,貴州 凱里 556099)

對乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)又名撲熱息痛,作為OTC類解熱鎮(zhèn)痛藥是目前全球最常用的解熱鎮(zhèn)痛藥物,其解熱作用緩慢而持久,且具有刺激性小、極少有過敏反應(yīng)等優(yōu)點,在推薦治療量范圍內(nèi)通常被認(rèn)為是安全的,但服用不當(dāng)或藥物過量會引起藥物性肝損傷,目前是臨床上導(dǎo)致DILI最常見藥物,引起全世界范圍內(nèi)越來越多的關(guān)注[1-2]。

腺苷蛋氨酸(S-adenosy-L-methionine,SAMe)于1952年由意大利科學(xué)家Cantoni發(fā)現(xiàn)[3],存在于人體所有組織和體液中的內(nèi)源性物質(zhì)及生物活性成分。大量的實驗研究表明,外源性SAMe通過調(diào)節(jié)肝細(xì)胞生長、分化和死亡的重要代謝產(chǎn)物可減輕肝癌的發(fā)生[4]。它可參與合成內(nèi)源性谷胱甘肽,減弱氧化應(yīng)激反應(yīng);促進腺苷蛋氨酸依賴性質(zhì)膜磷脂的合成而恢復(fù)細(xì)胞質(zhì)膜的流動性,降低術(shù)后急性總膽紅素增高;克服轉(zhuǎn)硫基反應(yīng)障礙,促進了內(nèi)源性解毒過程中巰基的合成;抑制肝星狀細(xì)胞的活化,減弱肝纖維化,增加DNA的甲基化作用,抑制惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5]。鑒于對體內(nèi)多種生化反應(yīng)起重要作用,它的不足可引起多種病理生理及病理學(xué)改變,補充外源性的SAMe可以恢復(fù)體內(nèi)不足引起的肝損傷及減低慢性肝病中肝硬化的發(fā)展[6-7]。

藥物性肝損傷(Drug-induced liver injury,DILI)是在服用某種或幾種藥物后,由藥物、藥物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物以及輔料導(dǎo)致肝損傷或肝臟對其發(fā)生過敏反應(yīng)引起的肝損傷[8]。藥物性肝損傷(DILI)發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。作為肝病大國,對DILI的認(rèn)識并進行相關(guān)研究提供理論指導(dǎo)刻不容緩。國內(nèi)外未見有文獻明確報道對SAMe和APAP復(fù)方制劑的研究。課題組前期研究表明SAMe對APAP引起的DILI有保護作用,其作用與SAMe的劑量呈相關(guān)性且效果優(yōu)于等劑量的N-乙酰半胱氨酸。根據(jù)其生物藥劑學(xué)特性,有針對性地開展復(fù)方制劑的劑型研究,為一種安全有效復(fù)方制劑的開發(fā)和實際應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。本課題的實施對開發(fā)具有副作用較小的對乙酰氨基酚復(fù)方制劑具有指導(dǎo)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

腺苷蛋氨酸(陜西森弗天然制品有限公司,批號:SX171005);對乙酰氨基酚(源葉生物科技有限公司,批號:B19M8E36136);聚乙烯吡咯烷酮(大連美侖生物技術(shù)有限公司,批號:N0928A);硬脂酸鎂(大連美侖生物技術(shù)有限公司,批號:M0509A);交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(上海源葉生物科技有限公司,批號:B24N9S75970);低取代丙纖維素(阿拉丁試劑有限公司,批號:B1629352);交聯(lián)羧甲纖維素(北京索萊寶科技有限公司,批號:521K021);羧甲淀粉鈉(安徽山河藥用輔料股份有限公司,批號:J02M6R1);乳糖(大連美侖生物技術(shù)有限公司,批號:A000007);微晶纖維素(大連美侖生物技術(shù)有限公司,批號:M0126A);可壓性淀粉(北京索萊寶科技有限公司,批號:308M021);無水乙醇(重慶川東化工(集團)有限公司;批號:20170301);微粉硅膠(上海源葉生物科技有限公司,批號:141202)。

1.1.2 主要儀器

AUY120型分析天平(日本島津公司產(chǎn)品);超純水純化系統(tǒng)(四川沃特爾科技有限公司);紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);DP30A型單沖式壓片機(北京國藥龍立科技有限公司);ZRS-6G型溶出儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司);YD-35型片劑硬度測試儀(天津盛達(dá)三合光學(xué)儀器有限公司);CS-2型脆碎度測試儀(天津市精拓儀器科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 APAP顆粒的制備工藝

原料藥與輔料過100目篩(篩孔徑0.15 mm)備用,將APAP、稀釋劑和崩解劑均勻混合,然后加入5%PVP乙醇溶液,混合均勻制成軟材(握之成團,觸之即散),20目(篩孔徑0.85 mm)整粒過篩,于50 ℃下干燥30 min,干燥后在20目篩(篩孔徑0.85 mm)進行整粒,加入潤滑劑(等量遞加)混勻,壓片。

1.2.2 APAP崩解劑、填充劑、潤滑劑的選擇

處方中APAP用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為76.5%。填充劑用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11%,黏合劑用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%,崩解劑用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%,潤滑劑用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%。分別以交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、低取代丙纖維素(L-HPC)、交聯(lián)羧甲纖維素鈉(CCNa)、羧甲淀粉鈉(CMS-Na)采用內(nèi)加法,PVPP和CMS-Na以質(zhì)量比1∶1采用內(nèi)外加法作為崩解劑。固定以MCC為填充劑,PVP-K30為黏合劑,硬脂酸鎂為潤滑劑。分別以乳糖、微晶纖維素(MCC)、可壓性淀粉作為填充劑,固定以PVPP為崩解劑,PVP-K30為黏合劑,硬脂酸鎂為潤滑劑。分別以硬脂酸鎂,微粉硅膠作為潤滑,固定以MCC為填充劑,PVP-K30為黏合劑,PVPP為崩解劑。按制備工藝進行處方壓片,隨機選取6片進行溶出度的測定,并計算溶出度平均值,篩選合適的崩解劑、填充劑、潤滑劑。

1.2.3 對乙酰氨基酚顆粒輔料用量的優(yōu)化

在以上單因素試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,固定處方其他因素,本次試驗確定PVP-K30為黏合劑,得最佳崩解劑,最佳稀釋劑,最佳潤滑劑,但其用量需進一步優(yōu)化。采用正交試驗的方法,設(shè)計一個三因素三水平的正交試驗。通過L9(34)正交表,以APAP在15 min時的溶出度為主要考察指標(biāo),優(yōu)化輔料的用量。因素水平表見表1。

表1 正交設(shè)計因素水平表

1.2.4 腺苷蛋氨酸顆粒處方設(shè)計

1.2.4.1 SAMe顆粒的制備工藝

將腺苷蛋氨酸及輔料分別過100目篩(篩孔徑0.15 mm)備用,按照要求取適量L-HPC、MCC、乳糖,采用等量遞加的方法加入研缽混合均勻,腺苷蛋氨酸的用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為67%,微晶纖維素用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22.8%,乳糖用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.2%,微粉硅膠用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%,低取代丙纖維素用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%,加入5% PVP-K30乙醇溶液制備軟材,20目篩(篩孔徑0.85 mm)制粒,50 ℃鼓風(fēng)干燥30 min后,20目篩(篩孔徑0.85 mm)整粒,加入微粉硅膠作為潤滑劑(等量遞加)混勻,壓片。

1.2.4.2 填充劑的比例篩選

腺苷蛋氨酸的吸濕性較強,前期的實驗研究表明優(yōu)選微晶纖維素和乳糖作為填充劑能很好解決吸濕性導(dǎo)致的顆粒不易成型。故本次優(yōu)選兩者的比例作為優(yōu)選的填充劑。按照《中國藥典》2020版 四部 9103 藥物引濕性試驗指導(dǎo)原則下的規(guī)定,對腺苷蛋氨酸的吸濕效果進行考察,從而確定填充劑的比例,微晶纖維素和乳糖的比例用量見表2。

表2 微晶纖維素和乳糖的比例

1.2.5 復(fù)方對乙酰氨基酚片劑的制備

本實驗按照前期篩選的最優(yōu)處方和制備工藝,使用DP30A型單沖式壓片機,14號沖模為囊型模具制備復(fù)方片劑。

1.2.6 復(fù)方對乙酰氨基酚片的溶出度測定

從制得的復(fù)方片劑中隨機選取6片(批號20191110),溶出度采用(《中國藥典》2015年版 四部 通則 0931 第二法),以pH值6.8的磷酸鹽緩沖溶液1000 mL為溶出介質(zhì),升溫使溫度保持在(37±0.5)℃,轉(zhuǎn)速為50 r/min,放入已精密稱定的片劑,同時開始計時,分別在1,5,10,15,30,45 min時取樣10 mL,同時補加同溫等體積的溶出介質(zhì)。用0.45 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,精密量取續(xù)濾液1 mL置25 mL量瓶中,并用溶出介質(zhì)稀釋至刻度。相似因子法評價復(fù)方對乙酰氨基酚片劑主藥成分的體外溶出度,簡單的模型非依賴性方法采用差異因子f1和相似因子f2比較溶出曲線。差異因子f1是計算在每一個時間點兩個曲線差異的百分率(%),是兩條曲線相對誤差的衡量參數(shù)。相似因子f2對偏差的平方根的倒數(shù)進行對數(shù)轉(zhuǎn)換。為兩條曲線溶出百分率(%)相似性評價的衡量參數(shù)。

f1={[|Rt﹣Tt|]/[Rt]}×100%

(1)

f2=50×log{[1+(1/n)(Rt﹣Tt)2]-0.5×100%}

(2)

式中:Rt為參比制劑,Tt為受試制劑在時間t的釋放度,n為時間點的個數(shù)。

1.2.7 外觀性質(zhì)

隨機篩選實驗所制的片劑,考察其外觀性狀。

1.2.8 片重差異

按片重差異的測定方法(《中國藥典》2015版 四部 0101片劑),精密稱取自制片20片的總質(zhì)量,求得平均片重。再分別精密稱定每片的質(zhì)量,將每片質(zhì)量與平均片重相減,再除以平均片重,即得質(zhì)量差異百分比。按照限度規(guī)定:平均質(zhì)量0.30 g以下的質(zhì)量差異限度為±7.5%,0.30 g或0.30 g以上的為±5%。

1.2.9 硬度的測定

隨機取片劑6片,用硬度測定儀測定硬度。調(diào)整儀器上硬度指示為零,打開硬度盒蓋,讓藥片徑向放在頂柱與夾頭間,夾住被測藥片。開啟電源開關(guān),按下啟動按鈕,當(dāng)加壓指針右移,藥片破碎顯示的值即為硬度值。

1.2.10 脆碎度測定

按照(《中國藥典》2015年版 四部 通則0923)的要求,取10片藥片,用吹風(fēng)機吹去脫落的粉末后精密稱量置圓桶中,轉(zhuǎn)動100次取出,同法除去粉末,精密稱重。

2 結(jié)果

2.1 對乙酰氨基酚的處方篩選

2.1.1 崩解劑的選擇

以PVPP、L-HPC、CCNa、CMS-Na用內(nèi)加法,PVPP、CMS-Na質(zhì)量比為1∶1用內(nèi)外加法,綜合考慮選用PVPP作崩解劑。

2.1.2 稀釋劑的選擇

分別以乳糖、微晶纖維素、可壓性淀粉作為稀釋劑時主藥的溶出曲線結(jié)果見圖1,綜合考慮最終決定選用MCC作稀釋劑。

圖1 稀釋劑(填充劑)的選擇

2.1.3 潤滑劑的選擇

分別以硬脂酸鎂,微粉硅膠作為潤滑劑時主藥的溶出曲線結(jié)果見圖2,綜合考慮最終決定選用硬脂酸鎂作為潤滑劑。

圖2 潤滑劑的選擇

2.1.4 正交試驗方案及結(jié)果

正交試驗方案及結(jié)果見表3。由正交數(shù)據(jù)分析結(jié)果可知,因素C的極差最大,說明因素C對實驗結(jié)果影響較大,其次是因素A和因素B。影響溶出度的重要性依次為:因素C>因素A>因素B。A 影響因素A3>A2>A1,B 影響因素B1>B2>B3,C 影響因素C2>C1>C3。綜合分析最優(yōu)組合為A3B1C2,即PVPP為崩解劑用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%,MCC用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11%,PVP-K30的用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%。

表3 正交試驗方案及結(jié)果

2.2 腺苷蛋氨酸的處方優(yōu)化

優(yōu)選稀釋劑MCC和乳糖的比例見表4,在此比例下的平衡吸濕量最低。

表4 微晶纖維素和乳糖比例的選擇

2.3 復(fù)方對乙酰氨基酚片劑處方的確定

復(fù)方對乙酰氨基酚片劑處方見表5。按制備方法,將主藥與輔料采用等量遞加的方法加入研缽混合均勻,加入5% PVP-K30乙醇溶液制備軟材,20目篩(篩孔徑0.85 mm)制粒,50 ℃鼓風(fēng)干燥30 min后,20目篩(篩孔徑0.85 mm)整粒,加入潤滑劑硬脂酸鎂(等量遞加)混勻,壓片,即得復(fù)方對乙酰氨基酚片劑。

表5 復(fù)方對乙酰氨基酚片劑處方

2.4 相似因子法評價復(fù)方對乙酰氨基酚片劑主藥成分的體外溶出度

對于溶出相似性曲線,一般情況下,差異因子f1值≤15且相似因子f2≥50,則認(rèn)為兩條溶出曲線相似,反之,認(rèn)為不相似。結(jié)果見表6,f1=4.16<15,f2=67.42>50,說明自制復(fù)方對乙酰氨基酚片的主藥成分(對乙酰氨基酚)與通過一致性評價的市售產(chǎn)品(對乙酰氨基酚片,通化萬通藥業(yè)股份有限公司)溶出度相近,體外釋放度相似無明顯差異,本次試驗對自制的復(fù)方片劑具有參考價值。

表6 APAP與SAMe溶出曲線相似性比較

2.5 外觀檢查

所檢查的片劑表面完整光潔,色澤均勻,邊緣整齊,均符合中國藥典2015版四部制劑通則中0101片劑的要求。

2.6 片重差異

所制備的三批片劑的片重平均值分別為800.60,799.58,803.43 mg,根據(jù)藥典規(guī)定允許片重差異±5%,三批片劑的片重在760.57～840.63,759.60～839.56,763.26～843.60 mg之間,符合規(guī)定。

2.7 硬度的測定

三批片劑平均硬度分別為115.3,128.7,119.2 N,在100～150 N之間,符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

2.8 脆碎度的測定

三批片劑平均脆碎度分別為0.11%,0.23%,0.19%,均小于1%,檢測無斷裂、龜裂及粉碎的片劑。符合片劑脆碎度檢查法標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

3 討論

藥物的處方篩選中,APAP的溶解性不好,在制備過程中選用加入崩解劑可提高藥物的溶出度。SAMe是吸濕性很強的藥物通過大量的實驗篩選抗吸濕劑的種類和用量,找到了適宜的抗吸濕性輔料,從而嚴(yán)格控制了樣品制備過程中出現(xiàn)的吸潮現(xiàn)象。輔料的性質(zhì)及用量可影響藥物的安全、有效、穩(wěn)定和可控性,因此選擇恰當(dāng)?shù)乃幬镙o料是處方工藝篩選的重要步驟。

固體制劑口服給藥后,藥物的吸收取決于藥物從制劑中的溶出或釋放、藥物在生理條件下的溶解以及在胃腸道的滲透,對吸收具有重要影響[9]。體外溶出度試驗常用于指導(dǎo)藥物制劑的研發(fā),評價制劑批間、批內(nèi)質(zhì)量的一致性,以及評價藥品處方工藝變更前后質(zhì)量和療效的一致性等[10]。通常采用多條溶出曲線測定藥物的溶出行為,相對體內(nèi)試驗具有更高的靈敏度和更強的區(qū)分能力,可更好地反映制劑質(zhì)量的特點[11]。

普通口服固體制劑仿制藥質(zhì)量一致性評價主要采用比較體外多條溶出曲線相似性這一技術(shù)手段進行[12]。本實驗中比較實驗室自制的復(fù)方對乙酰氨基酚片劑主藥成分與市售的萬通藥業(yè)對乙酰氨基酚片劑的體外溶出曲線時,能客觀反映制劑特點、具有適度的靈敏度和區(qū)分力。

本節(jié)實驗參照《中國藥典》2015版 四部 0101片劑項下的要求,主要針對自制復(fù)方片劑的外觀性狀、片重差異、脆碎度、硬度、含量測定以及穩(wěn)定性實驗建立初步的標(biāo)準(zhǔn)。為了制劑中主藥成分可同時測定,本實驗采用高效液相色譜法。它具有分離效能高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點,在藥品檢驗中應(yīng)用較廣泛。