電子煙中依托咪酯的含量測(cè)定方法的研究

賴昌威,黃財(cái)順,陸璐璐,王乾蕾（廣東省中山市食品藥品檢驗(yàn)所,廣東 中山 528437）

電子煙是一種模仿卷煙的電子產(chǎn)品，可將液體形態(tài)的霧化物（煙油）形成氣溶膠，供人吸食。霧化物儲(chǔ)存于煙彈中，其主要成分包括霧化劑、煙堿及煙草提取物、添加劑[1]。據(jù)報(bào)道[2]，2020年中國(guó)電子煙用戶的全民滲透率已超過(guò)1%，銷售額突破200億大關(guān)。但在電子煙行業(yè)高速發(fā)展的同時(shí)，也帶來(lái)了各種問(wèn)題與亂象。國(guó)家禁毒辦發(fā)布的報(bào)告[3]指出：近年來(lái)，含依托咪酯、美托咪酯的煙油和煙粉正在社會(huì)上出現(xiàn)，使電子煙成為了一種新型“涉毒工具”，對(duì)社會(huì)穩(wěn)定與公眾健康造成了極大的威脅。近段時(shí)間，我單位收到來(lái)自本轄區(qū)內(nèi)的多批涉案電子煙煙油及煙粉的執(zhí)法檢驗(yàn)委托，其中多批涉嫌違法添加。

依托咪酯為咪唑類靜脈藥，臨床用于麻醉誘導(dǎo)、維持以及危重患者的鎮(zhèn)靜[4]；而美托咪酯則為依托咪酯的類似物，作用類似，多用作獸藥[5-7]。不法分子將以上成分違法摻入電子煙中，其中以依托咪酯的違法添加最為常見，吸食后可產(chǎn)生“快感”，長(zhǎng)期吸食還會(huì)對(duì)神經(jīng)、肝臟、肌肉等功能產(chǎn)生不良影響[4,8]。

電子煙中依托咪酯的含量測(cè)定暫無(wú)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)及方法，目前參考《中國(guó)藥典》（2020年版）中依托咪酯注射液含量測(cè)定項(xiàng)下方法（紫外分光光度法）來(lái)進(jìn)行含量分析。研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，電子煙中成分復(fù)雜且未知，部分成分在依托咪酯檢測(cè)波長(zhǎng)附近同樣存在較強(qiáng)的紫外吸收，故紫外法專屬性不強(qiáng)，影響定量結(jié)果。鑒于當(dāng)前依托咪酯濫用的嚴(yán)峻形勢(shì)，以及當(dāng)前分析方法的局限性，本文將建立更加可靠、準(zhǔn)確的方法對(duì)電子煙中的依托咪酯進(jìn)行含量測(cè)定，以協(xié)助相關(guān)部門打擊違法犯罪行為，凈化社會(huì)環(huán)境。

1 材料

1.1 儀器 Waters 2695e高效液相色譜儀，配置二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；XS205電子分析天平（梅特勒托利多儀器有限公司）。

1.2 材料 涉案電子煙煙油、煙粉均來(lái)自本轄區(qū)內(nèi)相關(guān)部門繳獲的涉案物品；依托咪酯對(duì)照品（批號(hào)：101132-201902，含量：99.8%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇（美國(guó)Honeywell公司）為色譜純；水為超純水（本實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)制備）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 資生堂CAPCELL PAK C18色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相：甲醇∶水（60∶40）；體積流量為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為241nm，柱溫為50℃；進(jìn)樣量為5μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取依托咪酯對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml含依托咪酯0.1mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 煙油供試品溶液的制備 精密稱取煙油100mg，置于100ml量瓶中，加入適量流動(dòng)相，振搖使溶解，流動(dòng)相稀釋至刻度，即得。

2.3.2 煙粉供試品溶液的制備 精密稱取煙粉10mg，置于100ml量瓶中，加入適量流動(dòng)相，振搖使溶解，流動(dòng)相稀釋至刻度，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品、供試品、空白溶液各5μl，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖中主峰為依托咪酯，見圖1；經(jīng)二極管陣列檢測(cè)器掃描可知，對(duì)照品與供試品溶液主峰的紫外吸收光譜圖一致，見圖2。

圖1 對(duì)照品、供試品HPLC色譜圖。A.依托咪酯對(duì)照品；B.供試品；C.空白

圖2 對(duì)照品、供試品主峰光譜圖。A.依托咪酯對(duì)照品；B.供試品

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度分別為5.050、25.25、50.50、101.0、151.5、202.0μg/ml的依托咪酯對(duì)照品溶液各5μl，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=13378X-11470，r=0.9998，表明依托咪酯在線性范圍5.050-202.0μg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液5μl，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，測(cè)得依托咪酯峰面積值RSD為0.07%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，并在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得依托咪酯含量RSD為0.38%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液5μl，分別于0、4、8、12、24小時(shí)在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得依托咪酯峰面積值RSD為0.20%，表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取含量已知（10.67%，w/w）的電子煙煙油樣品50mg，繼續(xù)精密加入依托咪酯對(duì)照品溶液（1.097mg/ml）5ml，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，并在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 依托咪酯加樣回收率結(jié)果(n=6)

2.6 樣品含量測(cè)定 分別取煙油及煙粉樣品各3批，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 依托咪酯含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 含量測(cè)定方法的考察 目前，電子煙的含量分析參考《中國(guó)藥典》（2020年版）中依托咪酯注射劑含量測(cè)定項(xiàng)下的紫外法，但研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用該方法具有一定的局限性。由于部分電子煙中成分相對(duì)復(fù)雜（包括煙草提取物、各類改善口感、香味的添加劑，以及不法分子私自添加的其他未知成分等），其中一些成分在依托咪酯檢測(cè)波長(zhǎng)241nm附近處同樣會(huì)產(chǎn)生紫外吸收，使樣品最大吸收波長(zhǎng)產(chǎn)生了較大偏移（見圖3），干擾含量測(cè)定結(jié)果，甚至部分不含依托咪酯的樣品（經(jīng)HPLC確認(rèn)不含目標(biāo)成分）中，在檢測(cè)波長(zhǎng)下仍會(huì)出現(xiàn)一定的紫外吸收（見圖4），導(dǎo)致“假陽(yáng)性”的錯(cuò)誤結(jié)論。后查閱文獻(xiàn)時(shí)可知，《美國(guó)藥典》中依托咪酯原料藥及其注射劑均使用了HPLC法進(jìn)行含量測(cè)定；同時(shí)也有科研工作者應(yīng)用HPLC法對(duì)依托咪酯進(jìn)行含量測(cè)定，該法可有效分離復(fù)雜成分，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高[9-12]，故HPLC法測(cè)定電子煙中依托咪酯含量具有可行性。

圖3 紫外吸收光譜圖。A.依托咪酯對(duì)照品；B.供試品

圖4 紫外吸收光譜圖。A.依托咪酯對(duì)照品；B.供試品

3.2 色譜條件的選擇 本文的液相色譜條件參考了《中國(guó)藥典》（2020年版）中依托咪酯有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的相關(guān)內(nèi)容，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了考察優(yōu)化。本實(shí)驗(yàn)分別考察了流動(dòng)相中水相的乙酸銨濃度（0%、0.062%與0.1%乙酸銨）、柱溫（25℃、35℃、50℃）及檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：不同濃度乙酸銨對(duì)依托咪酯峰形無(wú)明顯影響（峰塔板數(shù)及不對(duì)稱因子無(wú)明顯差別），故選擇甲醇-水作為流動(dòng)相；不同柱溫對(duì)峰形和出峰時(shí)間影響較大，故選擇更優(yōu)的50℃作為柱溫；經(jīng)液相色譜儀的二極管陣列檢測(cè)器掃描可知，241nm附近是依托咪酯最大吸收波長(zhǎng)，故選擇241nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 電子煙中的依托咪酯含量 實(shí)驗(yàn)室對(duì)百余批的涉案電子煙煙油與煙粉進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)煙油中依托咪酯的含量范圍主要在1%-25%（w/w），其中含約10%和20%依托咪酯的較為常見。煙粉中依托咪酯的含量范圍主要在80%-100%（w/w）左右，其中含量近100%的較為常見。此外，除煙粉及煙油等常規(guī)涉案樣品外，實(shí)驗(yàn)室還對(duì)非常規(guī)涉案物品類型（如吸食完的煙彈，儲(chǔ)存過(guò)煙油及煙粉的塑料瓶、塑料袋，注射器等）進(jìn)行了含量分析，該檢驗(yàn)方法同樣適用，可檢出依托咪酯殘留的含量。目前，就本實(shí)驗(yàn)室所檢驗(yàn)過(guò)的全部涉案物品中，暫未發(fā)現(xiàn)美托咪酯的違法添加行為。

3.4 煙油與煙粉的性狀 煙油一般呈無(wú)色澄清或黃色澄清的黏稠油狀物，部分樣品中會(huì)有固體析出，推測(cè)為不法分子摻入過(guò)多依托咪酯導(dǎo)致；煙粉一般呈白色或類白色的顆?；驂K狀物。在檢驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)不同批次涉案電子煙煙油的顏色深淺、黏稠度不一，經(jīng)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，該樣品性狀與依托咪酯添加量無(wú)關(guān)，推測(cè)與煙油中霧化劑及添加劑種類、煙草提取物等有關(guān)。

3.5 依托咪酯的鑒別 目前，實(shí)驗(yàn)室主要通過(guò)比對(duì)HPLC保留時(shí)間和紫外光譜特征吸收對(duì)依托咪酯進(jìn)行鑒別。為了提高目標(biāo)物的定性鑒別能力，下一步將使用液質(zhì)聯(lián)用（LCMS）技術(shù)對(duì)依托咪酯的鑒別方法進(jìn)行研究。LC-MS同時(shí)兼具了液相色譜的高分離能力和質(zhì)譜的強(qiáng)鑒別能力，是藥物檢驗(yàn)檢測(cè)領(lǐng)域的強(qiáng)有力工具[13]，已有科研工作者使用LC-MS對(duì)復(fù)雜混合物中的依托咪酯進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)，該方法簡(jiǎn)單快速、靈敏度高[14-15]，可應(yīng)用于涉案電子煙及相關(guān)物品中依托咪酯的鑒別分析。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜法測(cè)定電子煙（煙油與煙粉）中依托咪酯的含量，其準(zhǔn)確快速、專屬性強(qiáng)，可為今后涉案電子煙及其相關(guān)物品的含量分析工作提供一定的依據(jù)與參考，并有利于相關(guān)部門凈化煙草市場(chǎng)，打擊相關(guān)違法犯罪行為。