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    2021年度堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒北京市監(jiān)督抽驗(yàn)質(zhì)量分析

    2023-12-05 04:05:50宋偉朱晉升彭絮代蕾穎北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院北京市醫(yī)用生物防護(hù)裝備檢驗(yàn)研究中心北京101111
    首都食品與醫(yī)藥 2023年23期
    關(guān)鍵詞:互換性符合要求試劑

    宋偉,朱晉升,彭絮,代蕾穎(北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院(北京市醫(yī)用生物防護(hù)裝備檢驗(yàn)研究中心),北京 101111)

    堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤(pán)等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶。臨床上測(cè)定堿性磷酸酶主要用于骨骼、肝膽系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷,尤其是黃疸的鑒別診斷。為了加強(qiáng)對(duì)堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒(以下簡(jiǎn)稱ALP試劑盒)的監(jiān)督管理,規(guī)范市場(chǎng)秩序,保障產(chǎn)品使用的安全性及有效性,我單位根據(jù)《北京市2021年藥品、醫(yī)療器械、化妝品質(zhì)量抽查檢驗(yàn)工作實(shí)施方案》,對(duì)ALP試劑盒進(jìn)行抽查檢驗(yàn),并通過(guò)對(duì)不符合項(xiàng)目探索性研究,以期發(fā)現(xiàn)質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn),為質(zhì)量安全保障提供建議。

    1 質(zhì)量抽查檢驗(yàn)情況

    1.1 儀器與試劑 儀器:全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)7180,日立公司)。

    試劑:本次抽驗(yàn),我單位共收到來(lái)自10家受檢單位的11批次試劑(雙試劑,NPP底物-AMP緩沖液法),試劑說(shuō)明書(shū)聲稱均可適用于7180生化分析儀平臺(tái)。

    樣品:受檢單位提供此次抽驗(yàn)活動(dòng)所需的配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、重復(fù)性樣品及比對(duì)試劑系統(tǒng)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、回收試驗(yàn)樣品、臨床樣品。

    1.2 檢驗(yàn)依據(jù)與方法 按照受檢單位提供的技術(shù)要求、上機(jī)參數(shù),對(duì)ALP試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn),檢驗(yàn)項(xiàng)目包括準(zhǔn)確度及重復(fù)性。試驗(yàn)中操作步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

    1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

    1.3.1 重復(fù)性 評(píng)價(jià)試劑在測(cè)量條件相同的情況下,短時(shí)間內(nèi)重復(fù)測(cè)量同一樣本所得結(jié)果一致性的水平。結(jié)果用變異系數(shù)CV表示,CV越小,表示一致性水平越好。此次抽驗(yàn),11批次試劑CV結(jié)果在0.3%-1.5%范圍內(nèi),滿足“CV小于5%”的技術(shù)要求,符合要求率100%。

    1.3.2 準(zhǔn)確度 評(píng)價(jià)試劑測(cè)量樣本所得結(jié)果與真值間的一致程度。受檢單位提供的技術(shù)要求中準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)方法有以下3種:①相對(duì)偏差法:測(cè)試有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),計(jì)算所得結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值之間的相對(duì)偏差。要求相對(duì)偏差不超過(guò)±10%。11批次抽驗(yàn)試劑中,有3批次試劑采用相對(duì)偏差法進(jìn)行試驗(yàn),其中2批次滿足要求,1批次相對(duì)偏差20%,判定不符合要求。

    ②比對(duì)試驗(yàn)法:抽驗(yàn)試劑與比對(duì)試劑同時(shí)測(cè)試40份臨床樣本,用線性回歸方法計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及每個(gè)濃度點(diǎn)的偏差。有3批次試劑采用比對(duì)試驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn),其中2批次符合要求,1批次最大相對(duì)偏差19%,超過(guò)±10%的要求,判定為不符合要求。

    ③回收法:將已知高濃度樣本加入臨床低濃度樣本(基礎(chǔ)樣本)中,計(jì)算混合后樣本濃度減去基礎(chǔ)樣本濃度的差值與高濃度樣本濃度的百分比。有1批次采用回收試驗(yàn)的方法,符合技術(shù)要求的規(guī)定。

    此次抽驗(yàn)準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)中,抽樣11批次試劑,檢驗(yàn)7批次,另4批次因未提供準(zhǔn)確度試驗(yàn)樣品而未進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)7批次中,2批次不符合要求,首次檢驗(yàn)符合要求率71.4%。不符合要求項(xiàng)目均進(jìn)行復(fù)驗(yàn),結(jié)果仍判定為不符合要求。

    1.4 準(zhǔn)確度不符合要求原因探索 此次抽驗(yàn),不合格項(xiàng)目集中在準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)上。采用相對(duì)偏差法試驗(yàn)1批次及比對(duì)試驗(yàn)法試驗(yàn)1批次。

    1.4.1 相對(duì)偏差法 本次試驗(yàn)采用國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)試,計(jì)算相對(duì)偏差。所抽驗(yàn)不符合要求試劑,配套采用朗道校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。結(jié)果不符合要求的原因分析,一般考慮存在以下幾點(diǎn)的可能性大:①校準(zhǔn)問(wèn)題:量值傳遞過(guò)程中出現(xiàn)偏差,校準(zhǔn)品定值不準(zhǔn)確。②樣品問(wèn)題:所選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值超出測(cè)試系統(tǒng)線性范圍;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在此平臺(tái)上與參考方法之間的互換性較差;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在運(yùn)輸和儲(chǔ)存中環(huán)境溫度未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的要求,導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身量值發(fā)生變化。

    1.4.2 比對(duì)試驗(yàn)法 本次試驗(yàn)采用受檢單位提供的已上市堿性磷酸酶試劑系統(tǒng)與抽驗(yàn)試劑系統(tǒng),分別測(cè)試40例人血清樣本,計(jì)算兩個(gè)試劑系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及偏差。結(jié)果不符合要求的原因分析:主要為兩個(gè)試劑系統(tǒng)存在偏差,為進(jìn)一步尋找原因,本文選擇符合要求的抽驗(yàn)試劑A及比對(duì)試劑Ac和不符合要求的抽驗(yàn)試劑B及比對(duì)試劑Bc測(cè)試同一批臨床血清40份,比較四個(gè)試劑系統(tǒng)的偏差情況。

    2 抽驗(yàn)試劑A及Ac和抽驗(yàn)試劑B及Bc比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果

    抽驗(yàn)試劑A、B及比對(duì)試劑(試劑Ac和試劑Bc)所用校準(zhǔn)品均為朗道校準(zhǔn)品,校準(zhǔn)后測(cè)試?yán)实蕾|(zhì)控品,均在其質(zhì)控范圍內(nèi),且呈現(xiàn)出較好的一致性,質(zhì)控結(jié)果見(jiàn)圖1。而測(cè)試40例臨床樣本,抽驗(yàn)試劑A與比對(duì)試劑Ac相關(guān)系數(shù)(r)0.9998,絕對(duì)偏差(-1.8-1.2)U/L,相對(duì)偏差(-1.1-0.8)%,結(jié)果符合要求。抽驗(yàn)試劑B與比對(duì)試劑Bc相關(guān)系數(shù)(r)0.9974,絕對(duì)偏差(4.3-15.3)U/L,相對(duì)偏差(8.2-19.1)%,見(jiàn)圖2、圖3,偏差結(jié)果仍不符合要求。按照抽驗(yàn)試劑A所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行降序排列后做折線圖,見(jiàn)圖4,試劑A、Ac及B一致性較好,而試劑Bc偏差較大。A、Ac、B及Bc試劑校準(zhǔn)品均使用朗道校準(zhǔn)品及其說(shuō)明書(shū)提供的靶值進(jìn)行校準(zhǔn),測(cè)試?yán)实蕾|(zhì)控品在靶值范圍內(nèi),但是測(cè)試臨床樣本結(jié)果偏差較大,本文考慮與校準(zhǔn)品是否在多系統(tǒng)間具有互換性有關(guān)。本文針對(duì)朗道校準(zhǔn)品是否具有互換性進(jìn)行了進(jìn)一步的探索試驗(yàn)。

    圖1 抽驗(yàn)試劑A、B及比對(duì)試劑測(cè)試?yán)实蕾|(zhì)控品平均值

    圖2 試劑B及比對(duì)試劑Bc絕對(duì)偏差圖

    圖3 試劑B及比對(duì)試劑Bc相對(duì)偏差圖

    圖4 試劑A/Ac/B/Bc比對(duì)結(jié)果圖

    3 朗道校準(zhǔn)品互換性評(píng)價(jià)試驗(yàn)

    3.1 試驗(yàn)方案 采用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)發(fā)布的EP30-A[1]及EP14-A3[2]文件中介紹的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)互換性評(píng)價(jià)方案,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及朗道血清校準(zhǔn)品進(jìn)行互換性評(píng)價(jià)。

    3.2 參考方法及常規(guī)方法主要儀器與試劑 儀器:全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)7180,日立公司);Carry 100紫外可見(jiàn)風(fēng)光光度計(jì)(美國(guó)Agilent 公司)。

    試劑:選擇WAKO、利德曼、中生、九強(qiáng)、安圖、美康、邁瑞、世紀(jì)沃德及泰康9家品牌試劑及其配套校準(zhǔn)品,其中,世紀(jì)沃德及泰康試劑使用朗道校準(zhǔn)品,其余均為同生產(chǎn)廠商校準(zhǔn)品。

    3.3 試驗(yàn)樣本來(lái)源 待評(píng)價(jià)樣品:日本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(JCCLS CRM-001d),標(biāo)準(zhǔn)值:(153±6)U/L;國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW(E)090920),標(biāo)準(zhǔn)值:(222.6±5.6)U/L;血清校準(zhǔn)水平2:CAL2350(批號(hào):1528UN,朗道);水平3:CAL2351(批號(hào):1225UE,朗道),靶值分別是184U/L和362U/L(IFCC推薦AMP方法37℃)。

    血清樣本:人源血清樣本21例,無(wú)溶血、乳糜,每份血清分為2份,避光-80℃保存,用于參考測(cè)量程序和常規(guī)方法測(cè)量。

    3.4 測(cè)量方法

    3.4.1 參考測(cè)量程序測(cè)量ALP 采用IFCC推薦的37℃堿性磷酸酶參考測(cè)量程序,測(cè)試前測(cè)試2020 RELA樣本,結(jié)果在控,測(cè)試21份新鮮單人份血清樣本和各待測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)品,每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)量2次。

    3.4.2 常規(guī)方法測(cè)量ALP 在日立全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào):7180)上,按照廠家說(shuō)明書(shū)要求校準(zhǔn)測(cè)量系統(tǒng)后,測(cè)試配套質(zhì)控品,結(jié)果在控后,分別測(cè)量21份新鮮單人份血清樣本和各待測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)品,每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)量3次。

    3.5 數(shù)據(jù)收集與處理 收集全部測(cè)量結(jié)果,進(jìn)行離群值判定,未發(fā)現(xiàn)有離群值。計(jì)算參考方法、常規(guī)方法測(cè)量結(jié)果的均值,見(jiàn)表1。

    表1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)品和21份人血清ALP測(cè)量結(jié)果平均值

    3.5.1 按照EP30-A方法評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及校準(zhǔn)品互換性,以參考方法測(cè)量結(jié)果為X軸、常規(guī)方法測(cè)量結(jié)果為Y軸,采用Deming回歸法,計(jì)算臨床樣本對(duì)于相應(yīng)的X值,其Y值的預(yù)測(cè)值及雙側(cè)95%的預(yù)測(cè)區(qū)間,判斷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及校準(zhǔn)品在ALP參考方法和常規(guī)測(cè)量系統(tǒng)間是否具有互換性。

    3.5.2 按照EP14-A3的方法,判斷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及校準(zhǔn)品在兩個(gè)常規(guī)測(cè)量系統(tǒng)間是否具有互換性。以一個(gè)測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量結(jié)果為X軸,另一個(gè)測(cè)量系統(tǒng)為Y軸,采用Deming回歸法,計(jì)算臨床樣本對(duì)于相應(yīng)的X值,其Y值的預(yù)測(cè)值及雙側(cè)95%的預(yù)測(cè)區(qū)間,判斷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及校準(zhǔn)品在ALP常規(guī)測(cè)量系統(tǒng)間是否具有互換性。

    3.6 試驗(yàn)結(jié)果 4個(gè)待測(cè)物在兩個(gè)不同方法間的互換性結(jié)果,參考測(cè)量程序與常規(guī)測(cè)量程序(共9組)見(jiàn)表2,具有互換性方法組合數(shù):JCCLS CRM-001d占88.9%,GBW(E)090920占77.8%,而血清校準(zhǔn)品(朗道)都不具有互換性;兩個(gè)常規(guī)測(cè)量系統(tǒng)間(共36組)互換性結(jié)果見(jiàn)表3,具有互換性的常規(guī)系統(tǒng)組合數(shù):CCLS CRM-001d占77.8%,GBW(E)090920占80.6%,血清校準(zhǔn)水平2(朗道)占5.6%,血清校準(zhǔn)水平3(朗道)占8.3%。

    表2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)品在參考測(cè)量程序與常規(guī)測(cè)量程序間的互換性結(jié)果

    表3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)品在兩個(gè)常規(guī)測(cè)量系統(tǒng)間的互換性結(jié)果

    4 討論

    本次監(jiān)督抽驗(yàn),評(píng)價(jià)ALP試劑盒的兩項(xiàng)重要性能指標(biāo)——重復(fù)性和準(zhǔn)確度。檢驗(yàn)結(jié)果顯示,ALP試劑盒的重復(fù)性都能達(dá)到廠家提供的技術(shù)要求的規(guī)定,也符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1234-2014《堿性磷酸酶測(cè)定試劑(盒)(NPP底物-AMP緩沖液法)》[3]中重復(fù)性的要求,符合要求率100%。而準(zhǔn)確度首次檢驗(yàn)符合要求率71.4%。測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)確的原因中,保證樣本結(jié)果的計(jì)量溯源性是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的首要因素,為指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室和診斷試劑廠家進(jìn)行計(jì)量溯源,2003年國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)發(fā)布了第1版ISO 17511:2003,旨在為臨床實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)品的賦值提供計(jì)量溯源性策略,2020年,ISO發(fā)布了第2版ISO 17511:2020[4],與第1版相比,新版標(biāo)準(zhǔn)將賦值的溯源性要求擴(kuò)展到患者樣本,明確了患者檢測(cè)結(jié)果應(yīng)能追溯到目前可獲得的最高級(jí)別標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)一步確?;颊邩颖緶y(cè)量準(zhǔn)確性;針對(duì)酶學(xué)測(cè)量項(xiàng)目,新版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了酶催化活性濃度可溯源到SI單位,提供了催化活性和催化活性濃度的計(jì)量溯源路徑[5];同時(shí),新版標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)了校準(zhǔn)等級(jí)中的二級(jí)校準(zhǔn)品、體外診斷醫(yī)療器械工作校準(zhǔn)品、產(chǎn)品校準(zhǔn)品互通性的重要性,標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定,如果使用不具有互換性的物質(zhì)作為產(chǎn)品校準(zhǔn)品,則在量值傳遞過(guò)程中應(yīng)使用具有互換性的物質(zhì)(比如人血清盤(pán))對(duì)產(chǎn)品校準(zhǔn)品賦值結(jié)果進(jìn)行校正。在本文試驗(yàn)中,朗道血清校準(zhǔn)品在參考測(cè)量程序與常規(guī)測(cè)量程序之間以及兩個(gè)常規(guī)測(cè)量系統(tǒng)之間大部分情況不具有互換性,而朗道血清校準(zhǔn)品說(shuō)明書(shū)所提供的靶值為所有儀器的均值,并不是針對(duì)某個(gè)系統(tǒng)的靶值,因此,本文認(rèn)為直接使用第三方校準(zhǔn)品說(shuō)明書(shū)提供的靶值進(jìn)行校準(zhǔn),測(cè)量臨床樣本可能存在偏倚,有一定風(fēng)險(xiǎn)性。即便是國(guó)際或國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在兩個(gè)測(cè)量程序或系統(tǒng)之間也不都具有互換性,因此,對(duì)于校準(zhǔn)品溯源至堿性磷酸酶參考測(cè)量程序的廠家進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)時(shí),也應(yīng)對(duì)所選標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在參考測(cè)量程序與廠家常規(guī)測(cè)量程序之間進(jìn)行互換性評(píng)價(jià),從而選擇適合的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。

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