miR-203 靶向調節(jié)PEG3/NF-κB 信號通路對糖尿病腎病大鼠腎纖維化的影響①

趙力敏 李雅婧 張勇剛 張穎瑋（深圳市龍華區(qū)中心醫(yī)院老年醫(yī)學科，深圳 518110）

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病患者死亡的主要原因［1］。目前研究認為，炎癥-纖維化是DN 腎臟損傷的重要發(fā)展過程［2］。但引起DN患者腎臟炎癥-纖維化發(fā)展的靶向調控機制還不十分明確。

父本表達基因3（paternally expressed gene 3，PEG3）位于人類染色體19q13.43，為人類印跡基因之一，既往研究認為PEG3 可作為腫瘤抑制啟動子而介導癌細胞發(fā)展［3］。近來研究發(fā)現(xiàn)，PEG3 還可通過激活核轉錄因子-κB（nuclear transcription factorκB，NF-κB）通路來調控細胞的炎癥、凋亡及纖維化過程［4］。已有研究證實，下調DN 模型大鼠中PEG3/NF-κB 表達，可顯著阻斷DN 大鼠腎臟的炎癥-纖維化發(fā)展過程，從而改善腎損傷，提示PEG3/NF-κB 通路活化可能與DN 腎臟纖維化損傷關系密切［5］。但PEG3/NF-κB 信號通路的基因靶向調控機制不明確。

本研究應用基因信息預測軟件發(fā)現(xiàn)miR-203 與PEG3 有靶向結合位點，進一步研究發(fā)現(xiàn)miR-203 異常表達也是引起DN患者腎損傷的風險因素之一［6］。已有研究證實miR-203 低表達可誘發(fā)DN 大鼠腎臟NF-κB 炎癥通路活化而參與腎纖維化病變［7］，預示干預miR-203表達，很可能通過影響PEG3/NF-κB通路活化，治療DN 腎臟炎癥-纖維化病變。本研究建立大鼠體內外DN 模型，對此進行探究驗證，以期為DN新藥研發(fā)及基因靶向治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF 級健康雄性SD 大鼠，體質量180～200 g，3 月齡，購自北京科興中維生物技術有限公司，許可證號：SYXK（京）2020-0054。本實驗符合3R原則，經廣東醫(yī)科大學實驗動物倫理委員會批準（GDY2102633）。腎小管上皮細胞（NRK-52E）（貨號：BH0361，ATCC公司）；鏈脲霉素購自北京索萊寶公司；miR-203 模擬物（miR-203 mimic）及陰性對照（mimic NC）、PEG3 高表達重組載體（pcDNA-PEG3）及陰性對照（pcDNA-NC）均由上海生工生物有限公司構建；Lipofectamine?2000 轉染試劑購自美國Invitrogen 公司；雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒購自上海碧云天生物技術有限公司；PEG3、NF-κB、p-NF-κB、IL-6、IL-1β、Ⅰ型膠原（Collagen Ⅰ）、α-SMA、TGF-β1抗體均購自美國Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 DN動物模型建立及分組 取SD大鼠50只，給予高脂飼料（含12%蛋白、38%脂肪、50%碳水化合物）喂養(yǎng)5 周后，參照文獻［8］方法于大鼠腹腔注射65 mg/kg 鏈脲霉素溶液3 d，1 次/d，建立大鼠DN模型，取大鼠腹主動脈血測空腹血糖，選擇空腹血糖超過200 mg/dl 的大鼠（共50 只）進行后續(xù)試驗，按隨機數(shù)字表法分為模型組、miR-203 mimic 組、mimic NC 組、miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組、miR-203 mimic+pcDNA-NC 組，每組10 只。另取10 只大鼠正常飼養(yǎng)作為對照組。

miR-203 mimic 組及mimic NC 組大鼠分別于造模成功后，經尾靜脈注射miR-203 模擬物（miR-203 mimic）及陰性對照（mimic NC）載體質粒；miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組及miR-203 mimic+pcDNANC 組大鼠注射miR-203 mimic 載體的同時，分別經尾靜脈注射PEG3 高表達重組蛋白載體（pcDNAPEG3）及陰性對照（pcDNA-NC），各質粒注射濃度及體積分別為1 nmol/50 μl 及200 μl/kg，各組連續(xù)注射4周，2 次/周；模型組及對照組經尾靜脈注射10 ml/kg生理鹽水。

給藥期間觀察大鼠飲食及活動狀況。給藥結束后，收集24 h 尿液，試劑盒法測24 h 尿蛋白含量；大鼠禁食禁水12 h，取腹主動脈血3 ml，ELISA 法測空腹血糖、血清肌酐（serum creatinine，Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）水平，以評價腎功能水平。處死大鼠取腎，左腎切取一半組織，送電鏡室觀察腎組織結構變化、另一半組織用甲醛固定后制成石蠟切片，行Masson 染色觀察纖維化變化，右腎精密稱重后在液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 DN 細胞模型及分組 取NRK-52E 細胞株，37 ℃水浴復蘇后，取適量，用含10%胎牛血清的低糖培養(yǎng)基重懸后，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進行常規(guī)傳代培養(yǎng)及計數(shù)。待細胞融合度達70%時，換為無胎牛血清的低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h 后，分為對照組、模型組、miR-203 mimic 組、mimic NC 組、miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組、miR-203 mimic+pcDNA-NC組，每組設置6個復孔。

對照組用含10%胎牛血清的低糖培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)48 h；高糖組參照文獻［9］方法用含2%胎牛血清的高糖培養(yǎng)基（30 mmol/L葡萄糖）進行干預培養(yǎng)，以模擬DN 腎間質纖維化模型；miR-203 mimic 組及mimic NC 組用Lipofectamine 2000 轉染試劑向NRK-52E細胞轉染miR-203 mimic及mimic NC質粒，轉染12 h 后用含2%胎牛血清的高糖培養(yǎng)基（30 mmol/L葡萄糖）處理48 h；miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組及miR-203 mimic+pcDNA-NC 組在miR-203 mimic組基礎上分別轉染pcDNA-PEG3 及pcDNA-NC質粒。

各組處理培養(yǎng)48 h 后，取細胞檢測培養(yǎng)基中炎癥因子IL-6、IL-1β 水平及促纖維化因子TGF-β1、Collagen Ⅰ水平，以評價腎小管上皮細胞發(fā)生炎癥-纖維化變化。

1.2.3 qRT-PCR 檢測腎組織及細胞miR-203 表達 取冰凍腎組織及處理培養(yǎng)的各組細胞，粉碎、研磨及勻漿處理后，Trizol抽提總RNA，以總RNA 為模板反轉錄得cDNA，行PCR 擴增反應。miR-203以U6 為內參基因，2-ΔΔCt算法計算miR-203 表達水平。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.2.4 ELISA 法檢測細胞中炎癥因子和促纖維化因子水平 取處理培養(yǎng)的各組細胞，勻漿處理后，取勻漿上清液，使用ELISA 試劑盒檢測細胞中IL-6、IL-1β、TGF-β1、Collagen Ⅰ含量。

1.2.5 Western blot檢測腎組織及細胞PEG3、NF-κB及相關蛋白表達 取冰凍腎組織及處理培養(yǎng)的各組細胞，粉碎、研磨及勻漿處理后，取勻漿上清液，提取蛋白，BCA法測總濃度后，制備分離膠，取100 μg蛋白，進行電泳及轉膜反應，5%脫脂奶粉封閉及TBST洗膜后，滴加1∶500的一抗抗體（PEG3、NF-κB、p-NF-κB、IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、α-SMA、TGF-β1）及β-actin（1∶800）內參抗體孵育過夜，1∶1 000 的HRP 羊抗兔二抗室溫孵育1 h 后，化學發(fā)光液浸膜顯色后，Image J軟件分析蛋白條帶相對灰度值。

1.2.6 雙熒光素酶報告試驗驗證miR-203 與PEG3的靶向關系 通過Starbase 網站預測miR-203 與PEG3 存在互補配對的堿基序列。構建含有miR-203 結合位點的PEG3-3′UTR 野生型（WT）和突變型（MUT）片段，并分別克隆至熒光素酶報告質粒中，得到PEG3-3′UTR-WT 及PEG3-3′UTR-MUT 熒光素酶報告質粒，Lipofectamine 2000 轉染試劑將PEG3-3′UTR-WT 及PEG3-3′UTR-MUT 質粒分別與mimic NC 或miR-203 mimic 試劑共轉染至NRK-52E 細胞中，48 h后添加螢火蟲和海參熒光素酶試劑，檢測熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計學分析 以SPSS22.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩組間比較行SNK-q檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 DN 細胞模型中miR-203 及PEG3/NF-κB 通路蛋白表達變化 與對照組相比，DN 細胞模型中miR-203 表達降低（P<0.05），PEG3、p-NF-κB/NF-κB蛋白表達升高（P<0.05）。見圖1、表1。

表1 DN 模型細胞中miR-203、PEG3、p-NF-κB/NF-κB 表達變化比較（）Tab.1 Comparison of expression changes of miR-203，PEG3 and p-NF-κB/NF-κB in DN model cells（）

表1 DN 模型細胞中miR-203、PEG3、p-NF-κB/NF-κB 表達變化比較（）Tab.1 Comparison of expression changes of miR-203，PEG3 and p-NF-κB/NF-κB in DN model cells（）

Note：Compared with control group，1）P<0.05.

圖1 Western blot 檢測DN 模型細胞中PEG3、p-NF-κB、NF-κB蛋白表達Fig.1 Western blot detection of protein expressions of PEG3，p-NF-κB and NF-κB in DN model cells

2.2 DN模型大鼠腎組織中miR-203及PEG3/NF-κB通路蛋白表達變化 與對照組相比，DN 模型大鼠腎組織及細胞中miR-203 表達降低（P<0.05），PEG3、p-NF-κB/NF-κB 蛋白表達升高（P<0.05）。見圖2、表2。

表2 DN 模型大鼠腎組織中miR-203、PEG3、p-NF-κB/NF-κB表達變化比較（）Tab.2 Comparison of expression changes of miR-203，PEG3 and p-NF-κB/NF-κB in kidney tissue of DN model rats（）

表2 DN 模型大鼠腎組織中miR-203、PEG3、p-NF-κB/NF-κB表達變化比較（）Tab.2 Comparison of expression changes of miR-203，PEG3 and p-NF-κB/NF-κB in kidney tissue of DN model rats（）

Note：Compared with control group，1）P<0.05.

圖2 Western blot 檢測DN 模型大鼠腎組織中PEG3、p-NF-κB、NF-κB蛋白表達Fig.2 Western blot detection of protein expressions of PEG3，p-NF-κB and NF-κB in kidney tissue of DN model rats

2.3 miR-203 對PEG3 的靶向調控作用 Starbase數(shù)據(jù)庫預測試驗及雙熒光素酶報告試驗發(fā)現(xiàn)，miR-203與PEG3之間存在靶向結合位點，NRK-52E 細胞共轉染miR-203 mimic 和無突變的PEG3-WT 載體，可使NRK-52E 細胞中熒光素酶活性顯著下降（P<0.05），而共轉染miR-203 mimic 和發(fā)生突變的PEG3-MUT 載體對熒光素酶活性無顯著影響（P>0.05）。見圖3、表3。

表3 熒光素酶活性比較（）Tab.3 Comparison of luciferase activity（）

表3 熒光素酶活性比較（）Tab.3 Comparison of luciferase activity（）

Note：Compared with PEG3-MUT+mimic-NC group，1）P<0.05.

圖3 Starbase數(shù)據(jù)庫預測圖Fig.3 Starbase database forecast

2.4 miR-203 對腎組織及細胞PEG3/NF-κB 通路靶向調控的影響 與對照組相比，DN 模型組腎組織及細胞中miR-203 表達降低（P<0.05），PEG3、p-NFκB/NF-κB 蛋白表達升高（P<0.05）。與DN 模型組相比，miR-203 mimic 組腎組織及細胞中miR-203 表達升高（P<0.05），PEG3、p-NF-κB/NF-κB 蛋白表達降低（P<0.05）；mimic NC 組miR-203及PEG3、p-NFκB/NF-κB 蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與miR-203 mimic 組 相比，miR-203 mimic+pcDNAPEG3 腎組織及細胞中miR-203 表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），PEG3、p-NF-κB/NF-κB 蛋白表達升高（P<0.05）。miR-203 mimic+pcDNA-NC組miR-203及PEG3、p-NF-κB/NF-κB 蛋白表達與miR-203 mimic組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見圖4、表4。

表4 DN腎組織及細胞中miR-203、PEG3、p-NF-κB/NF-κB蛋白表達變化比較（）Tab.4 Comparison of protein expressions of miR-203，PEG3 and p-NF-κB/NF-κB in DN renal tissues and cells（）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05；compared with miR-203 mimic group，3）P<0.05.

圖4 腎組織及細胞中PEG3、p-NF-κB、NF-κB蛋白表達Fig.4 Protein expression of PEG3，p-NF-κB，NF-κB in renal tissues and cells

2.5 上調miR-203 對DN 大鼠腎組織結構、纖維化病變及腎功能的影響 電鏡觀察可見，對照組大鼠腎組織結構正常，模型組大鼠腎小球基底膜分層不清晰、增厚、細顆粒狀物質沉積明顯，腎小囊呈玻璃滴狀病變，腎血管中不規(guī)則形態(tài)的紅細胞形成較多。miR-203 mimic組大鼠腎小球基底膜增厚減輕，分層（外疏松層、致密層和內疏松）較清晰，細顆粒狀物質沉積減少，腎小囊未見明顯玻璃滴狀病變，腎血管中紅細胞形態(tài)逐漸規(guī)則。mimic NC 組腎組織結構病變與模型組相近。miR-203 mimic+pcDNANC 組腎組織結構病變與miR-203 mimic 組相近。miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 腎組織結構病變較miR-203 mimic組嚴重，但較模型組減輕，見圖5。

圖5 大鼠腎組織電鏡、Masson染色圖（×400）Fig.5 Electron microscope and Masson staining of rat kidney chart（×400）

Masson 染色可見對照組腎組織膠原沉積染色較淺；模型組可見腎間質膠原沉積染色加深，腎組織纖維化嚴重。miR-203 mimic 組大鼠腎間質膠原沉積染色變淺，纖維化減輕。mimic NC 組腎組織纖維化與模型組相近。miR-203 mimic+pcDNA-NC 組腎組織纖維化與miR-203 mimic 組相近。miR-203 mimic+pcDNA-PEG3腎組織纖維化較miR-203 mimic組嚴重，但較模型組減輕，見圖5。

與對照組相比，模型組大鼠血糖、24 h 尿蛋白、血清SCr、BUN 水平升高（P<0.05）。與模型組相比，miR-203 mimic 組血糖、24 h 尿蛋白、血清SCr、BUN水平降低（P<0.05）；mimic NC 組血糖、24 h 尿蛋白、血清SCr、BUN 水平與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與miR-203 mimic 組相比，miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組大鼠血糖、24 h 尿蛋白、血清SCr、BUN 水平升高（P<0.05）。miR-203 mimic+pcDNA-NC組血糖、24 h 尿蛋白、血清SCr、BUN 水平較模型降低（P<0.05），見表5。

表5 大鼠24 h尿蛋白、血清Scr、BUN比較（）Tab.5 Comparison of 24 h urinary protein，serum Scr and BUN in rats（）

表5 大鼠24 h尿蛋白、血清Scr、BUN比較（）Tab.5 Comparison of 24 h urinary protein，serum Scr and BUN in rats（）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05；compared with miR-203 mimic group，3）P<0.05.

2.6 上調miR-203 對DN 細胞炎癥-纖維化的影響 與對照組相比，模型組腎小管上皮細胞炎癥因子IL-6、IL-1β 及促纖維化因子TGF-β1、Collagen Ⅰ水平升高（P<0.05）。與模型組相比，miR-203 mimic組腎小管上皮細胞炎癥因子IL-6、IL-1β及促纖維化因子TGF-β1、Collagen Ⅰ水平降低（P<0.05）；mimic NC 組腎小管上皮細胞炎癥因子IL-6、IL-1β 及促纖維化因子TGF-β1、Collagen Ⅰ水平與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與miR-203 mimic 組相比，miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組腎小管上皮細胞炎癥因子IL-6、IL-1β 及促纖維化因子TGF-β1、Collagen Ⅰ水平升高（P<0.05）。miR-203 mimic+pcDNA-NC 組腎小管上皮細胞炎癥因子IL-6、IL-1β及促纖維化因子TGF-β1、Collagen Ⅰ水平較模型組降低（P<0.05），見表6。

表6 各組細胞IL-6、IL-1β、TGF-β1及CollagenⅠ水平比較（）Tab.6 Comparison of IL-6，IL-1β，TGF-β1 and Collagen Ⅰ of cells in each group（）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05；compared with miR-203 mimic group，3）P<0.05.

2.7 上調miR-203 對DN 大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、α-SMA、TGF-β1蛋白表達的影響 與對照組相比，模型組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、TGF-β1 蛋白表達升高（P<0.05）。與模型組相比，miR-203 mimic組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、TGF-β1 蛋白表達降低（P<0.05）；mimic NC 組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、TGF-β1 蛋白表達與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與miR-203 mimic 組相比，miR-203 mimic+pcDNA-PEG3 組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、TGF-β1 蛋白表達升高（P<0.05）。miR-203 mimic+pcDNA-NC 組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ、TGF-β1 蛋白表達較模型組降低（P<0.05），見圖6、表7。

表7 各組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、CollagenⅠ和TGF-β1蛋白表達比較（）Tab.7 Comparison of protein expressions of IL-6，IL-1β，Collagen Ⅰand TGF-β1 in renal tissue of rats in each group（）

表7 各組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、CollagenⅠ和TGF-β1蛋白表達比較（）Tab.7 Comparison of protein expressions of IL-6，IL-1β，Collagen Ⅰand TGF-β1 in renal tissue of rats in each group（）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05；compared with miR-203 mimic group，3）P<0.05.

圖6 各組大鼠腎組織IL-6、IL-1β、Collagen Ⅰ和TGF-β1蛋白表達Fig.6 Protein expressions of IL-6，IL-1β，Collagen Ⅰand TGF-β1 in renal tissue of rats in each group

3 討論

據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟統(tǒng)計表明，預計到2035年糖尿病患者將達到5.52 億，到2040 年，中國糖尿病患者將高達1.5 億，位居世界第一［10］。DN 一旦發(fā)現(xiàn)臨床癥狀時往往已發(fā)展成為腎衰竭，發(fā)達國家已將DN 認為是引起終末期腎衰竭死亡的首位原因，我國DN 引起的終末期腎衰竭已高居第二位［11］。因此，防治DN的發(fā)生發(fā)展迫在眉睫。

持續(xù)的高脂高糖刺激，可引起動物模型腎小球持續(xù)的濾過增加，導致腎小球硬化及間質纖維化的發(fā)展，并表現(xiàn)為蛋白尿及持續(xù)的腎功能下降［12］。本研究用高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)+鏈脲霉素誘導腎損傷建立大鼠DN 模型后發(fā)現(xiàn)，大鼠出現(xiàn)血糖升高及蛋白尿升高、腎功能下降（血清SCr和BUN升高）、腎小球基底膜增厚及腎纖維化膠原沉積嚴重等類似人類DN 病理改變，提示造模成功。高糖刺激腎小管上皮細胞，可促進細胞炎癥因子如IL-6、IL-1β釋放，而IL-6、IL-1β 的釋放一方面會誘導組織細胞損傷，另一方面會促進TGF-β1 活化來導致細胞由上皮特性轉化為間質表型（即EMT 特性改變），EMT 特性改變過程中胞外基質增厚及膠原沉積而引起纖維化［13-14］。大量體外實驗發(fā)現(xiàn)，高糖刺激可促進腎小管上皮細胞發(fā)生炎癥-纖維化病變，而模擬DN 腎纖維化發(fā)生機制［15］。本研究發(fā)現(xiàn)，體外DN 模型細胞及DN 模型大鼠，腎小管上皮細胞及腎組織中IL-6及IL-1β、TGF-β1 及纖維化標志因子如Collagen Ⅰ、CollagenⅣ、α-SMA 及FSP-1 表達均升高，進一步證實，高糖環(huán)境下，炎癥與腎纖維化發(fā)展關系密切。

抑制炎癥反應是緩解DN 腎纖維化發(fā)展的重要手段之一。HASSAN等［16］及XU等［17］發(fā)現(xiàn)阻斷NF-κB炎癥通路活化，可顯著抑制TGF-β1 促纖維化活化，而改善DN 體內外模型腎纖維化病變。miRNA 與DN炎癥-纖維化病變發(fā)生關系密切，并在DN診斷及靶向治療方面有潛在應用價值。大量體內外研究實驗發(fā)現(xiàn)，DN 患者或模型中，miRNA 異常表達可間接或直接影響炎癥通路NF-κB 活化，參與腎臟間質纖維化改變［18］。miRNA中的miR-203在某些腫瘤發(fā)展中作為抑制因子，近來研究發(fā)現(xiàn)，miR-203 的異常改變是引起臟器如心臟纖維化發(fā)展的重要原因［19］。LIU 等［7］發(fā)現(xiàn)miR-203 也與NF-κB 依賴的炎癥反應強度有關，且miR-203 可靶向作用于Toll 樣受體而間接影響NF-κB 活性，來參與DN 腎臟發(fā)展，提示干預miR-203 表達可能為緩解DN 炎癥-纖維化發(fā)展的重要機制之一。本研究發(fā)現(xiàn)，DN 大鼠及細胞模型中miR-203表達，異常低于正常大鼠及正常細胞，進一步上調miR-203 表達后，大鼠及細胞DN 模型NF-κB 炎癥通路活化被抑制，促纖維化通路及細胞因子表達也顯著降低，證實上調miR-203 可通過抑制NF-κB 炎癥通路活化，來改善DN 腎臟炎癥-纖維化發(fā)展。

PEG3 為NF-κB 炎癥通路活化的上游重要調控因子。過往研究發(fā)現(xiàn)，PEG3 可通過腫瘤壞死因子受體轉導蛋白活化來刺激NF-κB 活化而引起腫瘤微環(huán)境改變，來影響腫瘤發(fā)展［20］。近來研究發(fā)現(xiàn)敲低PEG3，可通過抑制NF-κB 活化來降低肝臟、腎臟及心臟纖維化，預示PEG3/NF-κB 通路在組織炎癥-纖維化病變過程中扮演重要角色［4-5，21］。本研究發(fā)現(xiàn)，PEG3 在DN 大鼠腎組織及細胞模型中表達異常升高，且PEG3 與miR-203 之間有靶向結合位點，上調PEG3表達后，可部分逆轉miR-203高表達發(fā)揮的抑制NF-κB 活化、改善炎癥-纖維化等作用，提示miR-203 發(fā)揮抗DN 炎癥-纖維化作用，可能與靶向抑制PEG3/NF-κB通路活化有關。

綜上所述，miR-203 可靶向負調控PEG3/NF-κB通路，上調miR-203 表達，可靶向抑制PEG3/NF-κB通路活化，發(fā)揮抗DN 腎臟炎癥-纖維化病變。這為DN 的基因靶向治療提供一定思路。但PEG3 的上調并不能完全逆轉miR-203 的抗炎癥-纖維化作用，預示miR-203 還可能通過其他通路改善DN 腎臟損傷，這有待后續(xù)繼續(xù)研究。