冠心病病人外周血sema4D、CD72表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的相關(guān)性

楊祖芳,涂祎敏,羅 智

冠心病的主要病理學(xué)變化即為冠狀動(dòng)脈硬化,目前主要以血管造影診斷為主,但是其具有侵入性,且對(duì)操作者的技術(shù)水平較為依賴[1-2]。因此,急需尋找標(biāo)志物篩查冠狀動(dòng)脈病變,以便早期確診冠心病并采取及時(shí)有效的干預(yù)方案?？扇苄孕盘?hào)素4D(semaphorin 4D,sema4D)主要表達(dá)于T細(xì)胞,為150 kDa的1型整合膜糖蛋白,可與CD72結(jié)合抑制CD72表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)B細(xì)胞發(fā)育,同時(shí)也能參與腫瘤進(jìn)展、血管形成及軸突導(dǎo)向,能夠通過增強(qiáng)血小板活化促進(jìn)體內(nèi)血管的形成[3-4]。目前,已有研究證實(shí)sema4D可能可預(yù)測(cè)冠心病的發(fā)生,且與冠狀動(dòng)脈狹窄程度具有相關(guān)性[5];CD72表達(dá)水平在急性心肌梗死病人外周血單個(gè)核細(xì)胞中降低,但是其具體價(jià)值不明確[6],冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)的形成利于改善冠心病病人臨床癥狀,降低心肌缺氧、缺血。本研究分析冠心病病人外周血sema4D、CD72表達(dá)水平及其與冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的相關(guān)性,以為臨床干預(yù)冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入選2019年8月—2021年8月北京老年醫(yī)院收治的78例冠心病病人作為冠心病組,另入選同期北京老年醫(yī)院體檢健康者78人為對(duì)照組。冠心病組納入標(biāo)準(zhǔn):1)經(jīng)影像學(xué)及血清學(xué)檢查均符合冠心病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)病人;2)自愿簽署知情同意書病人;3)為首次診斷為冠心病且接受治療病人。冠心病組排除標(biāo)準(zhǔn):1)合并心律失常、器質(zhì)性心臟病病人;2)合并免疫疾病、嚴(yán)重傳染病及腎功能不全病人;3)為心肌病、瓣膜性心臟病病人。對(duì)照組,年齡45～78(63.42±5.43)歲;男43人,女35人。冠心病組,年齡49～75(62.78±5.36)歲;男46例,女32例。兩組觀察對(duì)象一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 側(cè)支循環(huán)評(píng)估

以Rentrop分級(jí)法[7]評(píng)估冠心病病人側(cè)支循環(huán),對(duì)病變遠(yuǎn)端血管進(jìn)行造影檢查可見大部分完全顯影為3級(jí)(16例),大分支顯影為2級(jí)(21例),小邊支顯影為1級(jí)(31例),未觀察到側(cè)支血管為0級(jí)(10例)。0級(jí)或1級(jí)為側(cè)支循環(huán)良好組,2級(jí)或3級(jí)為側(cè)支循環(huán)不良組。

1.3 方法

病人入院24 h內(nèi)抽取空腹靜脈血,以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清sema4D、超敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、血脂[高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein,LDL-C)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)]水平,試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司。以Focoll分層法分層液體,得到單個(gè)核細(xì)胞。提取總蛋白并進(jìn)行定量,電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后先后用兔抗CD72一抗、羊抗兔二抗孵育,發(fā)光顯影后掃描條帶灰度,以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參計(jì)算蛋白表達(dá)量。以免疫熒光法檢測(cè)病人N末端腦鈉肽前體(N-terminal probrain natriuretic peptide,NT-proBNP)水平。收集病人年齡、性別、血壓、吸煙史、飲酒史、心率、糖尿病史、體質(zhì)指數(shù)等資料。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 冠心病組與對(duì)照組外周血sema4D、CD72表達(dá)水平比較

冠心病病人外周血sema4D、CD72水平高于對(duì)照組(P<0.05),CD72水平低于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表1。

表1 冠心病組與對(duì)照組外周血sema4D、CD72表達(dá)水平比較

2.2 側(cè)支循環(huán)良好組及不良組臨床資料比較

兩組病人血清TG、TC、HDL-C水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),年齡、血壓、吸煙史、飲酒史、性別、體質(zhì)指數(shù)、心率、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 側(cè)支循環(huán)良好組及不良組臨床資料比較

2.3 側(cè)支循環(huán)良好組及不良組病人外周血sema4D、CD72表達(dá)

側(cè)支循環(huán)不良組病人外周血sema4D水平低于側(cè)支循環(huán)良好組(P<0.05),CD72水平低于側(cè)支循環(huán)良好組(P<0.05)。詳見表3。

表3 側(cè)支循環(huán)良好組及不良組病人外周血sema4D、CD72表達(dá)

2.4 外周血sema4D與CD72表達(dá)的相關(guān)性

繪制散點(diǎn)圖評(píng)估外周血sema4D、CD72表達(dá)在冠心病冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成良好病人中的相關(guān)性,結(jié)果顯示,兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.664,P<0.05)。詳見圖1。

圖1 外周血sema4D與CD72表達(dá)的相關(guān)性

2.5 多因素Logistic回歸分析影響冠心病病人冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的因素

多因素Logistic回歸分析顯示,高表達(dá)的sema4D、高水平的TC為影響冠心病病人冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成不良的危險(xiǎn)因素(P<0.05),高表達(dá)的CD72為冠心病病人冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成不良的保護(hù)因素(P<0.05)。詳見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析影響冠心病病人發(fā)生冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的因素

3 討 論

目前,冠心病嚴(yán)重威脅我國民眾身體健康,為臨床常見的一種心血管疾病,且發(fā)病率逐年上升[8-9]。側(cè)支循環(huán)形成能夠在一定程度上避免冠心病病人心肌梗死的發(fā)生,進(jìn)而保護(hù)冠心病病人安全[10-11]。近年來,越來越多的研究聚焦于臨床預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的因素,以為臨床早期干預(yù)、促進(jìn)側(cè)支循環(huán)的形成提供更多有效參考。sema4D為跨膜糖蛋白(免疫系統(tǒng)),由基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生,主要在腫瘤細(xì)胞、血小板、內(nèi)皮細(xì)胞及B細(xì)胞中表達(dá),參與血管生成、腫瘤進(jìn)展、血栓形成及炎癥性疾病[12-13]。李月亮等[14]研究顯示,sema4D可能作為預(yù)測(cè)冠心病預(yù)后的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示,冠心病病人sema4D水平高于健康者,與Gong等[15]研究結(jié)果基本一致。分析其原因,可能是因?yàn)閍4D在病理狀態(tài)下釋放,經(jīng)切割后產(chǎn)生可溶性sema4D,促進(jìn)斑塊的易碎性,加速炎癥反應(yīng)的發(fā)生,促進(jìn)血小板聚合及激活,進(jìn)而促進(jìn)血栓形成。此外,血栓形成后,sema4D可脫落血小板表面,結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞受體誘導(dǎo)血管生成[16]。本研究亦發(fā)現(xiàn),側(cè)支循環(huán)不良組病人外周血sema4D水平高于側(cè)支循環(huán)良好組,提示外周血sema4D水平與冠心病病人側(cè)支循環(huán)形成過程可能存在一定的相關(guān)性。

有研究顯示,腦梗死病人中sema4D升高與免疫細(xì)胞過度激活有關(guān)[17]。作為sema4D主要淋巴細(xì)胞,研究已證實(shí)CD72與sema4D結(jié)合后可使自身脫落、去磷酸化,并作為B細(xì)胞表面抗原受體(BCR)信號(hào)的調(diào)節(jié)因子對(duì)B細(xì)胞功能進(jìn)行調(diào)節(jié),或介導(dǎo)B細(xì)胞活化(通過CD40-CD40L)。由此可知,異常表達(dá)的CD72可證實(shí)異常激活的免疫反應(yīng)發(fā)生。故本研究分析CD72在冠心病病人中的表達(dá),結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,冠心病組外周血CD72水平明顯降低,與Yan等[6]研究中CD72mRNA在急性心肌梗死病人外周血中呈低表達(dá)的研究一致。此外,冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)不良組CD72水平高于側(cè)支循環(huán)良好組,提示CD72表達(dá)可能與冠心病病人冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)的發(fā)生有關(guān)。本研究通過繪制散點(diǎn)圖評(píng)估外周血sema4D、CD72在冠心病冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成良好病人中的相關(guān)性,結(jié)果顯示,兩者呈負(fù)相關(guān),兩者可能共同參與側(cè)支循環(huán)形成過程。進(jìn)一步多因素Logistic回歸分析顯示,高表達(dá)的sema4D、高水平的TC為冠心病病人冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的危險(xiǎn)因素,高表達(dá)的CD72為保護(hù)因素,提示sema4D、CD72可能作為臨床早期評(píng)估冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成情況的潛在指標(biāo)。

綜上所述,冠心病病人外周血sema4D呈高表達(dá),CD72呈低表達(dá),且高表達(dá)的sema4D、高水平的TC為影響冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,高表達(dá)的CD72為保護(hù)因素,可能為判斷冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成情況的重要指標(biāo)。但是本研究為單中心研究且納入樣本量較少,還需在以后研究中擴(kuò)大樣本量,進(jìn)行多中心研究以明確sema4D、CD72在冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成中的具體作用。