血漿凝血酶激活的纖溶抑制物檢測(cè)在糖尿病腎病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中的意義*

吳艷,蔣雷,黃青華,鐘彬,吳萬(wàn)飛,趙麗霞,周潔,姚瀅,費(fèi)鮮明(.杭州市臨安區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,杭州 00;2.浙江省人民醫(yī)院a.檢驗(yàn)中心,b.內(nèi)分泌科,杭州 004;.慈溪市第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,浙江慈溪 500)

糖尿病腎病(diabetic kidney disease,DKD)是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的常見(jiàn)并發(fā)癥,嚴(yán)重影響患者生命質(zhì)量及預(yù)后[1-2]。因此,及時(shí)監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)DKD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),對(duì)指導(dǎo)臨床實(shí)踐具有重要意義。目前,一些生物標(biāo)志物已被驗(yàn)證對(duì)DKD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)具有一定價(jià)值[3-9],但更有效的預(yù)測(cè)指標(biāo)仍需探索。DKD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,多種因素參與,其中凝血纖溶系統(tǒng)異常尤為重要[10]。凝血酶激活的纖溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)是凝血激活、纖溶抑制及炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[11]。研究提示TAFI水平升高可能促進(jìn)糖尿病微血管病變[12],但TAFI與DKD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及嚴(yán)重程度之間的關(guān)系尚不清楚。本研究擬探討TAFI在DKD發(fā)生及進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中應(yīng)用價(jià)值,為DKD的早期預(yù)測(cè)及干預(yù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 納入2021年1月至12月在杭州市臨安區(qū)第一人民醫(yī)院和浙江省人民醫(yī)院門(mén)診及住院的116例初診T2DM患者。其中單純T2DM患者53例(門(mén)診45例,包括臨安醫(yī)院20例),DKD患者63例(均為浙江省人民醫(yī)院住院患者)。T2DM診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)2020年指南,DKD診斷標(biāo)準(zhǔn)為尿清蛋白/肌酐比值(UACR)>3 mg/mmol或估計(jì)腎小球?yàn)V過(guò)率<60 mL/min。排除標(biāo)準(zhǔn):(1) T2DM大血管并發(fā)癥;(2)其他T2DM微血管并發(fā)癥;(3)原發(fā)性肝腎功能不全;(4)心腦血管疾病;(5)惡性腫瘤;(6)急性炎癥或感染;(7)術(shù)后狀態(tài)。根據(jù)診斷結(jié)果,將入組T2DM患者分為單純T2DM組和DKD組,收集患者病理生理指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)室檢查等臨床資料。本研究獲浙江省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號(hào):2021KT014),患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2標(biāo)本采集及處理 患者及對(duì)照組于空腹?fàn)顟B(tài)采集標(biāo)本。(1)靜脈血3 mL,不抗凝,離心分離血清,用于常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)。(2)靜脈血2 mL,EDTA-K2抗凝,用于全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、CRP和 HbA1c檢測(cè)。(3)靜脈血2.7 mL,枸櫞酸鈉抗凝,用于凝血、抗凝和纖溶指標(biāo)檢測(cè)。(4)靜脈血5 mL,EDTA-K2抗凝,離心分離血漿,用免疫散射比濁法測(cè)定TAFI濃度。(5)晨首尿,檢測(cè)肌酐、微量清蛋白,計(jì)算UACR。(6)24 h尿,檢測(cè)尿蛋白排泄量(UAE)。所有標(biāo)本的采集和處理均嚴(yán)格遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

1.3常規(guī)指標(biāo)和血漿TAFI水平測(cè)定 血常規(guī)參數(shù)[觀察指標(biāo):白細(xì)胞計(jì)數(shù)(white blood cell,WBC)、淋巴細(xì)胞(lymphocyte,LY)、中性粒細(xì)胞(granulocyte,GR)]采用邁瑞B(yǎng)C-6900血細(xì)胞分析儀及配套試劑測(cè)定,全血C-反應(yīng)蛋白(CRP)采用邁瑞CRP-M100及配套試劑測(cè)定;生化項(xiàng)目[觀察指標(biāo)血清肌酐(Cr)]采用貝克曼-庫(kù)爾特AU5800生化儀及配套試劑測(cè)定。凝血試驗(yàn)項(xiàng)目[觀察指標(biāo):纖維蛋白原(fibrinogen,Fib)、纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(fibrin/fibrinogen degradation products,FDP)、D-二聚體(D-dimer,DD)、抗凝血酶(antithrombin,AT)]采用Sysmex CS-5100血凝儀及配套試劑測(cè)定,血栓調(diào)節(jié)蛋白(thrombomodulin,TM)濃度采用酶聯(lián)生物ELISA試劑盒測(cè)定。操作均嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。TAFI水平采用TAFI抗原測(cè)定試劑盒(免疫散射比濁法,遼寧邁迪生物公司)及貝克曼-庫(kù)爾特AU5800生化分析儀測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1DKD與單純T2DM指標(biāo)結(jié)果比較 DKD與單純T2DM患者年齡、WBC、Fib、DD、FDP、HbA1c以及AT、TAFI水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05);其中DKD患者TAFI水平高于單純T2DM患者(P<0.001),見(jiàn)表1。Spearman相關(guān)性分析顯示,DKD患者血漿TAFI水平與UACR和FDP呈正相關(guān)(r=0.302,P<0.01),與WBC、Fib、DD、FDP和AT無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。

2.2DKD風(fēng)險(xiǎn)的回歸分析 將前述T2DM和DKD比較中有差異的指標(biāo)以連續(xù)變量的形式納入進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)回歸分析。單因素回歸分析顯示,年齡、病程、WBC、Fib、AT和TAFI均為DKD的風(fēng)險(xiǎn)因子,而進(jìn)一步的多因素分析顯示,調(diào)整其他危險(xiǎn)因素后,TAFI是DKD風(fēng)險(xiǎn)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(OR:2.910,95%CI:1.719～4.926),P<0.01;見(jiàn)表2。

表2 DKD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的單因素和多因素回歸分析

2.3TAFI鑒別DKD與單純T2DM的ROC曲線 TAFI用于鑒別DKD的AUCROC為0.763(95%CI:0.674～0.853)(P<0.01)。在TAFI的最佳cut-off值為4.99 μg/mL時(shí),其敏感性為0.57,特異性為0.92,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為0.88,陰性預(yù)測(cè)值為0.32,準(zhǔn)確度為75%。

2.4DKD風(fēng)險(xiǎn)與TAFI水平的關(guān)系 基于多因素和ROC曲線分析,分別將TAFI作為連續(xù)變量和分類(lèi)變量進(jìn)行調(diào)整后的多因素回歸分析比較。在血漿TAFI最佳cut-off值為4.99 μg/mL,校正后的多變量回歸分析顯示,作為連續(xù)變量和分類(lèi)變量,TAFI的OR值分別為2.910(95%CI:1.719～4.926)和11.769(95%CI:2.869～48.215)。此外,按照TAFI四分位數(shù)區(qū)間進(jìn)行分組時(shí),各組DKD發(fā)生率的比例分別為27.5%、34.5%、67.7%和85.7%,隨四分位數(shù)值升高而呈明顯增高趨勢(shì)(F=14.11,P<0.01)。

3 討論

本研究結(jié)果顯示,DKD組患者血漿TAFI水平較單純T2DM組明顯升高,同時(shí)凝血、纖溶及炎癥相關(guān)指標(biāo)也呈現(xiàn)異常,提示TAFI水平異?？赡軈⑴cDKD的發(fā)病機(jī)制。但是,DKD組TAFI水平與炎癥、凝血及纖溶指標(biāo)的相關(guān)性較低,變化趨勢(shì)不一致,原因可能與以下因素有關(guān):(1)干擾因子影響炎癥、凝血及纖溶的激活或抑制;(2)TAFI水平與活性不一致;(3)TAFI基因多態(tài)性影響TAFI水平[13]。值得注意的是,DKD組TAFI水平與UACR呈正相關(guān),提示TAFI升高可能與T2DM患者預(yù)后不良相關(guān)。

本研究中,TAFI的OR值較高,提示其是DKD的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。ROC曲線分析顯示,TAFI預(yù)測(cè)DKD的敏感性較低,但特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較高,提示其可作為輔助指標(biāo)區(qū)分DKD和T2DM。當(dāng)TAFI>4.99 μg/mL時(shí),DKD的OR值極高,提示此時(shí)發(fā)生DKD的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。而隨TAFI水平升高,DKD的發(fā)生率也增加,進(jìn)一步驗(yàn)證了TAFI升高與DKD高風(fēng)險(xiǎn)之間的一致性。