2種品牌糞便血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析試紙檢測(cè)限和檢出率比較*

王娟,孫婷婷,武愛(ài)文,冷家驊,劉汝鋒,王悅,徐國(guó)賓(北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所,惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)化研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,.檢驗(yàn)科,.胃腸腫瘤中心,北京 100142)

糞便血紅蛋白(hemoglobin,Hb)是輔助消化道出血診斷的標(biāo)志物,多采用膠體金免疫層析法進(jìn)行定性檢測(cè)。具有更高檢測(cè)靈敏度的糞便血紅蛋白免疫學(xué)定量檢測(cè)(fecal immunological test,FIT)被各國(guó)指南推薦用于結(jié)直腸癌篩查[1]。Hb可經(jīng)胃黏膜分泌的消化酶和腸道細(xì)菌的分解被降解,免疫反應(yīng)性減弱甚至導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果呈假陰性[2]。轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin,Trf)不易被胃酸和腸道細(xì)菌降解,在糞便中的穩(wěn)定性高于Hb。文獻(xiàn)報(bào)道糞便Hb與Trf聯(lián)合定性檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著高于Hb單檢[3]。糞便Hb和Trf聯(lián)檢對(duì)于消化道出血的篩檢率高,受到推薦。糞便Hb和Trf定性與定量檢測(cè)試劑品牌多,其檢測(cè)靈敏度影響糞便檢出的陽(yáng)性率。本研究旨在了解幾種膠體金定性試紙檢測(cè)下限是否與說(shuō)明書標(biāo)示值相符,觀察不同品牌試紙檢測(cè)糞便樣本Hb和Trf的陽(yáng)性率,比較不同品牌試紙單檢和聯(lián)檢的陽(yáng)性率與檢測(cè)一致性。

1 材料與方法

1.1糞便樣本收集 連續(xù)收集2022年7月至9月北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院住院患者送檢的糞便樣本268例,男144例,女124例,年齡20～81歲,平均年齡56.7歲。本研究獲得北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批件號(hào):2022YJZ57)。入選患者于入院前均簽署樣本可用于臨床研究的同意書。糞便樣本留取后2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2Hb和Trf標(biāo)準(zhǔn)液配制

1.2.1Hb、Trf儲(chǔ)存液配制 取比色法測(cè)定Hb濃度為100 g/L的人全血樣本1 mL,加入蒸餾水破壞紅細(xì)胞并定容至100 mL,配制得1 g/L Hb儲(chǔ)存液[4]。取免疫比濁法測(cè)定Trf濃度為2 g/L的血清樣本2 mL,加入生理鹽水定容至100 mL,配制得40 mg/L Trf儲(chǔ)存液。

1.2.2膠體金試紙檢測(cè)限確定 用各廠家試劑盒配套的樣本稀釋液倍比稀釋儲(chǔ)存液配制Hb、Trf應(yīng)用液。稀釋后的Hb、Trf應(yīng)用液濃度分別為1 μg/mL、0.8 μg/mL、0.6 μg/mL、0.4 μg/mL、0.2 μg/mL、0.15 μg/mL、0.1 μg/mL、0.05 μg/mL、0.01 μg/mL以及400 ng/mL、300 ng/mL、200 ng/mL、100 ng/mL、40 ng/mL、20 ng/mL、10 ng/mL、8 ng/mL。使用不同品牌的Hb和Trf試紙平行檢測(cè)不同濃度應(yīng)用液10次,檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性的Hb或Trf最低應(yīng)用液濃度定義為該試紙的檢測(cè)下限。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示,組間率的比較采用配對(duì)卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1檢測(cè)限 Hb濃度≥150 ng/mL,Trf濃度≥40 ng/mL時(shí),A、B 2種品牌試紙10次檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。Hb濃度<50 ng/mL,Trf濃度<10 ng/mL時(shí),A、B 2種品牌試紙10次檢測(cè)結(jié)果均為陰性。A、B 2種品牌試紙的Hb檢測(cè)限為150 ng/mL,Trf為40 ng/mL。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 2種品牌膠體金試紙檢測(cè)不同濃度Hb、Trf溶液結(jié)果(n=10)

2.2糞便樣本Hb和Trf檢出率 用A、B 2種品牌試紙同時(shí)檢測(cè)268例糞便樣本Hb和Trf,結(jié)果見(jiàn)表2。A品牌試紙Hb單檢陽(yáng)性率(42.5%)和聯(lián)合Trf檢測(cè)陽(yáng)性率(60.1%)均高于B品牌(28.4%、55.2%)(P<0.05);2種品牌試紙Hb、Trf聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率均高于單檢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雖然A、B 2種品牌試紙Hb、Trf檢測(cè)下限相同,但患者糞便樣本檢測(cè)陽(yáng)性率有差異。2種品牌試紙Hb和Trf檢測(cè)結(jié)果均為+/+、+/-、-/+和-/-的總一致性為80.2%(215/268)。結(jié)果表明2種品牌Hb和Trf完全一致率未達(dá)到預(yù)期值(如90%以上)。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn),2種品牌試紙Hb、Trf陽(yáng)性一致率分別為65.2%(75/115)和88.3%(121/137)。B品牌Hb檢出率低是2種品牌檢測(cè)總一致性低的原因。

表2 2種品牌膠體金試紙檢測(cè)糞便樣本Hb和Trf的一致性(n=268)

A品牌試紙Hb/Trf +/+、+/-、-/+占總樣本量(268例)的比例分別為29.9%、12.7%和17.5%,總陽(yáng)性率為60.1%;B品牌試紙Hb/Trf +/+、+/-、-/+占比分別為22.0%、6.3%和26.9%,總陽(yáng)性率為55.2%。2種品牌Hb、Trf聯(lián)檢陽(yáng)性率差值為4.9%(60.1% vs 55.2%),低于2種品牌Hb檢測(cè)陽(yáng)性率的差值14%(42.5% vs 28.4%),說(shuō)明聯(lián)合糞便Trf檢測(cè)可提高檢出的總陽(yáng)性率并減少消化道出血的漏檢率。

A品牌Hb/Trf -/-的107例糞便樣本中,B品牌Hb/Trf +/-、-/+分別有1例和7例,僅占7.5%(8/107)。B品牌Hb/Trf -/-的120例糞便樣本中,A品牌Hb/Trf +/+、+/-、-/+分別有2例、16例和3例,占17.5%(21/120)。說(shuō)明檢出陽(yáng)性率有差異的2種品牌均存在漏檢情況,漏檢樣本可能多為Hb、Trf含量較低的樣本。

3 討論

消化道出血原因多。惡性腫瘤相關(guān)的消化道出血原因包括腫瘤浸潤(rùn)出血(23.8%)、消化道靜脈曲張(19.7%)、消化道潰瘍(16.3%)和消化道糜爛(10.9%)等[5-6]。抗腫瘤治療(包括手術(shù)、放療、化療、免疫治療、靶向治療等)均有可能導(dǎo)致腫瘤壞死破潰、潰瘍、感染或發(fā)生炎性腸病、門靜脈高壓,從而導(dǎo)致消化道出血[6-7]。對(duì)于懷疑有急性消化道出血的患者,應(yīng)進(jìn)行多學(xué)科會(huì)診(MDT)評(píng)估,并進(jìn)行緊急處理,對(duì)于慢性消化道出血者也應(yīng)明確病因。消化道出血的臨床表現(xiàn)因出血部位及出血速率而不同,輕者可無(wú)癥狀或伴有貧血及血容量減少,嚴(yán)重者可出現(xiàn)休克甚至危及生命,及時(shí)發(fā)現(xiàn)早期出血尤為重要。糞便Hb檢測(cè)是廣泛應(yīng)用的快速篩查消化道出血的方法。Hb在胃腸道中的穩(wěn)定性低于Trf,西京醫(yī)院郝曉柯團(tuán)隊(duì)定性檢測(cè)了363例腫瘤患者糞便樣本Hb和Trf,單檢和聯(lián)檢的陽(yáng)性率分別為36.1%、46.0%和55.1%[8],聯(lián)檢較Hb單檢陽(yáng)性率高19.0%。本實(shí)驗(yàn)也觀察到類似的結(jié)果。多項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果表明Hb和Trf聯(lián)檢的確可提高消化道出血的陽(yáng)性檢出率并減少部分出血的漏檢,但糞便Hb與Trf單檢和聯(lián)檢對(duì)上下消化道出血的篩檢效能仍不明確,這可能是我國(guó)部分地區(qū)糞便Trf尚未列入醫(yī)療服務(wù)項(xiàng)目的原因。

本研究發(fā)現(xiàn)實(shí)際測(cè)量的A、B 2種品牌膠體金試紙Hb、Trf檢測(cè)下限相同,均與試劑盒說(shuō)明書標(biāo)示靈敏度吻合,但2種品牌試紙檢測(cè)糞便樣本的陽(yáng)性率有差異。我們認(rèn)為這種陽(yáng)性率的差異可能與膜試紙的結(jié)構(gòu)和含水量影響膠體金標(biāo)記抗體與檢測(cè)靶抗原復(fù)合物的遷移速度有關(guān),也可能與不同品牌試紙膠體金標(biāo)記抗體檢測(cè)抗原復(fù)合物穩(wěn)定性受糞便基質(zhì)影響程度不同有關(guān)。因此實(shí)現(xiàn)不同醫(yī)院間糞便Hb、Trf定性檢測(cè)結(jié)果的互通之路面臨很多難題。我們?cè)谶x擇糞便Hb、Trf檢測(cè)試劑時(shí),除比較說(shuō)明書宣稱的檢測(cè)靈敏度外,還應(yīng)用倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液驗(yàn)證標(biāo)示的檢測(cè)限,并比較臨床送檢糞便樣本的陽(yáng)性檢出率。

目前已有免疫比濁、免疫熒光法定量檢測(cè)糞便Hb、Trf的試劑盒問(wèn)世,定量法較膠體金檢測(cè)更敏感。觀察糞便Hb、Trf、鈣衛(wèi)蛋白、乳鐵蛋白等特種蛋白質(zhì)定性與定量檢測(cè)對(duì)于各種消化道腫瘤和消化道出血的篩查效能,明確糞便特種蛋白定量檢測(cè)是否有助于急慢性消化道出血量的判斷及其對(duì)消化道出血干預(yù)的影響是有意義的,需要進(jìn)一步的研究。