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    孕酮和脂聯(lián)素受體3 及波形蛋白在膽囊癌組織中的表達及臨床意義

    2023-11-17 12:15:32張汗青張黎紅顧國建
    中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志 2023年10期

    張汗青 張黎紅 顧國建

    膽囊癌(Gallbladder carcinoma,GBC)是膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,惡性程度較高。根據(jù)Globocan 2020 數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計,全球共有84 695 例與GBC 相關的死亡病例[1]。因為GBC 患者早期癥狀不典型,被發(fā)現(xiàn)時通常已達晚期,故預后極差[2]。唯一有可能治愈GBC 的方法是早期根治性手術切除。然而,由于缺乏早期準確檢測GBC 的非侵入性方法,根治性切除率較低[3,4]。因此,發(fā)現(xiàn)能夠早期診斷GBC 的標志物對于患者制定最佳治療方案和改善預后具有重要意義。

    孕酮和脂聯(lián)素受體3(PAQR3)基因分子量為37 kDa,位于染色體4q21 上。PAQR3 的N 末端朝向細胞質(zhì),C 末端位于高爾基體,屬于PAQR 家族的第3 個成員[5~7]。研究發(fā)現(xiàn),其在多種惡性腫瘤中低表達,如非小細胞肺癌、賁門癌、食管癌,可以導致腫瘤細胞增殖、新生血管生成、侵襲力增強[8~10]。波形蛋白(Vimentin)是一種分子量為57kDa 的蛋白,在多種惡性腫瘤中高表達,是上皮間質(zhì)轉化(EMT)的典型標志物,且高表達者預后不良[11,12]。

    本研究通過探討PAQR3、Vimentin 與患者預后和臨床病理特征之間的關系,以期發(fā)現(xiàn)能用于診斷和判斷GBC 患者預后的指標。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料收集2019 年9 月~2022 年10 月于我院手術切除的77 例GBC 患者的癌組織標本,患者年齡40~82 歲,平均64.9 歲。另將77 例患者中有癌旁組織標本的23 例作為研究對照。術后病理類型均為腺癌。本研究獲得患者知情同意,術后隨訪3 年。

    1.2 方法采用免疫組織化學SP 染色法,將所有石蠟標本切成4μm 的連續(xù)薄片,使用二甲苯將標本脫蠟15min,后梯度酒精水化5min;將標本用3%H2O2孵育10min,后將標本浸入檸檬酸緩沖液中煮沸。滴加一抗單克隆兔抗人PAQR3 或Vimentin 抗體(1:100,武漢博士德生物公司)適量過夜。第2天標本在室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗3 次,每次3min。后滴加適量通用二抗(武漢博士德生物公司),室溫孵育15min。用PBS 清洗切片3 次,每次3min。在標本上滴加適量的辣根酶標記鏈酶卵白素工作液,室溫孵育30min。標本上滴加適量的DAB 液,顯微鏡下觀察顯色。而后終止反應,將切片蘇木素復染,最后脫水,封片[8]。

    1.3 結果判定由兩位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師對切片進行雙盲閱片。根據(jù)陽性細胞染色強度評分:0分為無細胞染色,1 分為淺棕色顆粒,2 分為棕黃色顆粒,3 分為褐色顆粒。根據(jù)陽性細胞所占比例評分:0 分為陽性細胞數(shù)1%~5%,1 分為陽性細胞數(shù)5%~50%,2 分為陽性細胞數(shù)51%~100%。將兩項得分相加即為最后得分,≤2 分為陰性(-)表達,>2分為陽性(+)表達[8]。

    1.4 統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)均應用SPSS 23.0 軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料用n 和%表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 免疫組織化學染色結果腫瘤細胞漿被染成棕黃色或棕褐色為PAQR3 陽性表達細胞(見圖1A),胞漿無染色者為陰性表達細胞(見圖1C)。細胞漿被染成棕黃色或棕褐色為Vimentin 陽性表達細胞(見圖1B),胞漿無染色者為陰性表達細胞(見圖1D)。

    2.2 PAQR3 和Vimentin 的表達PAQR3 在鄰近癌旁組織中的陽性表達率為78.3%,明顯高于GBC組織的48.1%,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.011);而Vimentin 在GBC 組織中的陽性表達率為59.7%,明顯高于癌旁組織的13.0%,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);PAQR3 和Vimentin 陽性表達率與腫瘤的TNM 分期、病理分級、術后生存時間和淋巴結轉移有關(P<0.05),與患者的年齡和性別無關(P>0.05)。見表1。

    圖1 PAQR3 和Vimentin 在GBC 組織中的表達(×200)

    表1 GBC 組織中PAQR3 和Vimentin 蛋白的表達情況[n(%)]

    2.3 相關性分析在77 例GBC 患者的癌組織標本中,PAQR3 和Vimentin 均陽性表達的標本11 例,均陰性表達的標本5 例;37 例PAQR3 陽性標本中,Vimentin 陰性表達26 例;46 例Vimentin 陽性表達標本中,PAQR3 陰性表達35 例;PAQR3 和Vimentin 蛋白表達呈負相關(r=-0.589,P<0.001)。

    3 討論

    PAQR3 是一種具有抑制多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展的基因[6,7,9,13],可能機制有:①PAQR3 在細胞質(zhì)內(nèi)結合原癌基因絲氨酸/蘇氨酸激酶(B-Raf/C-Raf),并將其隔離在高爾基體上,干擾Raf 激酶與其上游和下游信號分子結合,進而抑制大鼠肉瘤(Ras)/Raf/絲裂原活化蛋白激酶(MEK)/細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)信號通路[6,7]。②PAQR3 過表達后,可上調(diào)E-鈣黏蛋白的表達,下調(diào)Vimentin 的表達。進一步研究發(fā)現(xiàn),其可以通過調(diào)節(jié)TGF-β/Smad 信號通路進而抑制EMT 過程[9]。③PAQR3 能夠抑制G 蛋白偶聯(lián)受體下游的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信號傳導,進而抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲[13]。

    本研究中,我們發(fā)現(xiàn)PAQR3 在GBC 組織中的陽性率顯著低于鄰近癌旁組織,并且與TNM 分期、病理分級及淋巴結轉移有關,提示PAQRS 參與GBC 的發(fā)生和進展,可作為GBC 診斷的分子標志物。有學者報道,與PAQR3 陰性表達患者相比,陽性表達患者的預后較好[5,9],與本研究結果一致,提示PAQR3 可成為判斷GBC 患者預后的一個重要指標。Tang 等[14]將PAQR3 過表達后,結果顯示,人膠質(zhì)瘤細胞的增殖和侵襲能力明顯下降,提示PAQR3 基因可作為一個潛在的基因治療靶點。

    EMT 是指上皮細胞通過特定程序成為具有基質(zhì)表型細胞的生物學過程,其特征是細胞黏附性喪失和細胞運動性增強。EMT 是上皮細胞來源的惡性腫瘤細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程[15]。在EMT 過程中,細胞黏附分子(如E-鈣黏蛋白)的表達減少,細胞角蛋白轉化為基于Vimentin 的細胞骨架,其形態(tài)具有間充質(zhì)細胞的特征[10]。通過EMT,上皮細胞失去細胞極性及表型(如與基底膜的連接),并獲得高基質(zhì)表型,如遷移和侵襲、抗凋亡和降解細胞外基質(zhì)的能力。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)Vimentin 在GBC 組織中的陽性表達率顯著高于癌旁組織,并且與TNM 分期、組織學分級及淋巴結轉移有關,提示其參與GBC 的發(fā)生和進展,可作為GBC 診斷的分子標志物。有研究發(fā)現(xiàn),與Vimentin 陰性表達者相比,Vimentin 陽性表達者預后較差[11,12],與本研究結果一致。

    我們還發(fā)現(xiàn),PAQR3 在GBC 組織中低表達,而Vimentin 在GBC 組織中高表達,二者呈負相關,提示PAQR3 對Vimentin 有負性調(diào)節(jié)作用,其機制可能與其參與腫瘤的EMT 過程有關[9]。

    總之,PAQR3 下調(diào)或Vimentin 上調(diào)與GBC 發(fā)生和進展有關,提示PAQR3 和Vimentin 與GBC的生存和預后相關,今后可能成為GBC 患者診斷和預后的評價指標。

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