幾種檢測技術(shù)在禽蛋殘留檢測中的應(yīng)用

王俊菊，閻 芳

（天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心 300402）

目前，禽蛋中的獸藥殘留主要包括抗生素類、獸藥及其代謝物、激素類藥物等。其中，抗生素是目前使用最廣泛的藥物，同時也是造成禽蛋獸藥殘留的主要原因之一。由于抗生素對畜禽養(yǎng)殖的健康發(fā)展有重要作用，因此受到廣泛重視，但其在禽蛋中的殘留卻對人體健康造成了極大的危害。近年來，隨著人們食品安全意識的不斷提高，禽蛋產(chǎn)品中抗生素殘留、獸藥殘留、重金屬和有害物質(zhì)等問題引起了人們的廣泛關(guān)注。因此，如何快速準確地檢測這些問題，成為檢驗檢疫工作人員所關(guān)心的問題。

1 禽蛋中殘留獸藥種類及殘留檢測方法

隨著人們對食品安全問題的高度重視和對藥物殘留限量標準的不斷提高，我國規(guī)定在禽蛋中限量使用抗菌藥物（如恩諾沙星、土霉素等）。而在實際生產(chǎn)中，由于養(yǎng)殖技術(shù)不到位、飼料中添加抗生素等因素，造成獸藥殘留超標現(xiàn)象較為普遍。此外，一些家禽疾病也容易導致禽蛋中存在獸藥殘留。如雞馬立克氏病是由雞馬立克氏病菌引起的一種以免疫抑制為主的傳染病，主要危害禽類健康，導致禽蛋中獸藥殘留超標。目前，檢測禽蛋中獸藥殘留常用的方法有氣相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附試驗等方法。氣相色譜法是測定動物性食品中獸藥殘留的一種快速方法，但在實際應(yīng)用中操作繁瑣、檢測速度較慢。液相色譜法是目前被廣泛采用的一種檢測方法，但其在分析測定時對樣品提取溶劑和提取方法要求較高。酶聯(lián)免疫吸附試驗是一種靈敏度高、選擇性好、簡便快速的定性定量檢測方法，但其檢測結(jié)果受樣品基質(zhì)及樣品量影響較大。

1.1 毛細管電泳-高效液相色譜法

毛細管電泳-高效液相色譜法（簡稱CPC-HPLC）是一種應(yīng)用于復(fù)雜樣品的高效液相色譜分析方法，在分析復(fù)雜的蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、維生素以及一些金屬離子時有較好的效果，具有分離效率高、線性范圍寬、柱效高等優(yōu)點。目前，CPC-HPLC 法已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)品中藥物殘留的檢測。趙颯等[1]人通過研究發(fā)現(xiàn)：在鴨蛋中添加氯霉素可以降低鴨蛋中藥物的殘留量，如果添加量超過20 mg/kg 時，就會導致鴨蛋中藥物殘留量超標，造成食品安全隱患。在使用氯霉素后，有2%的鴨蛋被檢測出超標，而其他被檢測出超標的禽蛋中殘留藥物都在50 mg/kg 以下。李秋萍等人通過對蛋清和蛋黃中的藥物殘留進行測定，證明了蛋清和蛋黃中獸藥殘留在使用氯霉素后都有一定程度的升高。石志斌等[2]人通過對禽蛋中鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、諾氟沙星和氧氟沙星殘留檢測分析表明，該方法靈敏度高，能滿足日常檢測要求。但是，該方法不能完全替代國家相關(guān)標準。羅海強等[3]人通過測定蛋清和蛋黃中恩諾沙星、諾氟沙星和氧氟沙星殘留分析結(jié)果表明，該方法不能完全替代國家相關(guān)標準。因此，在實際檢測過程中應(yīng)當根據(jù)實際情況對檢測方法進行適當?shù)倪x擇。

1.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS/MS）是近年來發(fā)展起來的一種高靈敏度、高選擇性、快速的檢測方法，具有簡便、準確、快速等優(yōu)點。通過液相色譜柱分離目標物，利用串聯(lián)質(zhì)譜儀將目標物與質(zhì)荷比完全一致的內(nèi)標離子進行質(zhì)譜定量，在串聯(lián)質(zhì)譜儀上獲得質(zhì)荷比不同的碎片離子信息。與傳統(tǒng)的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）相比，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有檢測靈敏度高、分析速度快、分離效能高、易于實現(xiàn)多殘留同時測定等優(yōu)點，因而在獸藥殘留檢測中被廣泛應(yīng)用。在禽蛋中常用的藥物包括抗生素類（如四環(huán)素類、磺胺類等）、喹諾酮類、抗寄生蟲藥等。該方法可實現(xiàn)對食品中微量甚至痕量的分析檢測，能同時測定多類化合物，適用于復(fù)雜樣品中獸藥殘留的定性和定量分析。田蘊等[4]采用LC-MS/MS 技術(shù)對禽蛋中硝基呋喃類和四環(huán)素類藥物殘留進行檢測，結(jié)果表明，該方法準確可靠，靈敏度高，線性范圍寬。目前已用于雞蛋、鴨蛋、鵝蛋等禽蛋產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物及四環(huán)素類藥物殘留的檢測，其回收率均在80%以上。張崇威等[5]利用LC-MS/MS法檢測禽蛋中四環(huán)素類藥物殘留。結(jié)果表明：該方法靈敏度高，靈敏度比傳統(tǒng)的氣相色譜法提高10 倍以上；線性范圍寬（5～2000μg/L）；檢測限低至1μg/kg，最低檢出限可達0.5μg/kg；日內(nèi)精密度和日間精密度均較低；可用于禽蛋中硝基呋喃類和四環(huán)素類藥物殘留的定性及定量檢測。

1.3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）是將氣相色譜（GC）和質(zhì)譜儀進行有機結(jié)合的一種儀器，它在分離、分析和鑒定混合物中各組分時具有高效、快速、靈敏等特點，已廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境等領(lǐng)域。在禽蛋中獸藥殘留的檢測方面，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的應(yīng)用已經(jīng)十分廣泛。目前，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀在禽蛋中獸藥殘留檢測的應(yīng)用主要包括：蛋品中有機氯農(nóng)藥殘留檢測（包括有機磷和菊酯類）、蛋品中磺胺類藥物殘留檢測（包括磺胺甲惡唑等）、蛋品中硝基呋喃類藥物殘留檢測（包括呋喃妥因等）、蛋品中喹諾酮類藥物殘留檢測（包括恩諾沙星等）。另外，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀還可用于禽蛋中多氯聯(lián)苯類污染物的檢測。在對禽蛋中獸藥殘留分析過程中，色譜柱的選擇及凈化方法對檢測結(jié)果的準確性有很大影響。因此，在選擇色譜柱時，應(yīng)考慮色譜柱的分離效率和樣品前處理方法對獸藥殘留檢測結(jié)果的影響。另外，目前國內(nèi)禽蛋產(chǎn)品中獸藥殘留的主要檢測方法有氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法等，但由于其價格較高，一般企業(yè)無法接受，因此還需進一步研究完善。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是一種基于抗體和抗原特異性反應(yīng)的免疫測定技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于動物性食品中獸藥殘留的檢測。該方法的原理是利用抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)后形成免疫復(fù)合物，再通過加入酶標記的抗血清或抗血清與酶標物結(jié)合后產(chǎn)生顏色反應(yīng)，最后利用分光光度計測定顏色變化值，通過計算顏色變化值間接計算獸藥殘留量。目前，ELISA 方法已成為禽蛋中獸藥殘留檢測的首選方法，其應(yīng)用范圍也逐漸擴大。劉彥青等利用酶聯(lián)免疫吸附試驗對雞蛋中恩諾沙星和土霉素的殘留量進行測定，結(jié)果顯示，檢測限分別為20 ng/g 和5 ng/g。另外，朱麗娜等利用ELISA 方法對雞蛋中孔雀石綠殘留進行了檢測，結(jié)果顯示其檢測限為0.5μg/kg。

1.5 液相色譜法

液相色譜法是一種以高效液相色譜為分離手段，以固相萃取為前處理手段的分析檢測方法，其檢測結(jié)果準確性高、靈敏度強。目前，液相色譜法在禽蛋中獸藥殘留檢測中應(yīng)用廣泛，被廣泛采用的是液相色譜法，如氣相色譜法和液相色譜法等。氣相色譜法主要有兩種類型：一是利用氣體為流動相，在分析儀器的檢測器中進行檢測；二是利用惰性氣體作為流動相，在分析儀器的檢測器中進行檢測。液相色譜法主要有三種類型：一是以氣相色譜儀為基礎(chǔ)的分析方法，主要包括液相色譜- 質(zhì)譜法（LC-MS）、液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）、液相色譜- 電噴霧電離（LC-ESI-ESI）等；二是以紫外檢測器為基礎(chǔ)的分析方法，主要包括紫外-可見分光光度法（UV-Vis）、熒光檢測器（FID）等；三是以離子檢測為基礎(chǔ)的分析方法，主要包括離子對檢測器、熒光檢測器等。液相色譜法具有靈敏度高、選擇性好、專一性強等優(yōu)點，目前在禽蛋中獸藥殘留檢測中應(yīng)用最為廣泛。

1.6 免疫層析技術(shù)

免疫層析技術(shù)是一種快速、靈敏的獸藥殘留檢測方法，主要利用抗原和抗體之間特異性的結(jié)合反應(yīng)來達到檢測目的。免疫層析技術(shù)是通過對試紙條上固定的抗體或抗原之間結(jié)合反應(yīng)來實現(xiàn)對樣品中獸藥殘留的檢測，其檢測結(jié)果不受樣品基質(zhì)的影響，可用于獸藥殘留的定性和定量分析。目前，免疫層析技術(shù)廣泛應(yīng)用于獸藥殘留檢測中。宋貴方等[6]利用膠體金免疫層析技術(shù)對雞蛋中恩諾沙星和土霉素進行了快速檢測，結(jié)果表明該方法具有良好的敏感性和特異性。龔蕾等[7]建立了基于膠體金免疫層析技術(shù)對雞蛋中土霉素和恩諾沙星殘留進行快速檢測，該方法具有良好的特異性和靈敏度，適用于雞蛋中土霉素和恩諾沙星殘留的定性和定量分析。

2 禽蛋殘留檢測的步驟

2.1 樣品制備

雞蛋、鴨蛋和鵪鶉蛋是禽蛋產(chǎn)品的三大類，也是禽蛋檢測中最常見的樣品。樣品制備是檢驗檢疫工作的重要組成部分，其目的是將禽蛋中的殘留獸藥和污染物進行檢測，并根據(jù)檢測結(jié)果判定其是否合格，同時為下一步進行后續(xù)處理提供依據(jù)。色譜法操作簡單、快速、準確，但檢測成本高。質(zhì)譜法靈敏度高，但儀器昂貴。

2.2 樣品前處理

由于禽蛋中殘留獸藥種類繁多，殘留濃度低，且樣品基質(zhì)復(fù)雜多樣，因此前處理是影響檢測結(jié)果的重要因素之一。樣品前處理方法主要有：固相萃取法（SPE）、薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、液相-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）。SPE 是一種將樣品溶液進行凈化的方法，具有操作簡單、快速、靈敏度高等特點；TLC 和HPLC 是目前使用最廣泛的前處理方法；LC-MS 可以同時測定多個目標物質(zhì)，具有檢測速度快、靈敏度高等特點。

2.3 檢測方法

目前用于檢測禽蛋中殘留獸藥的主要方法有薄層色譜法、固相萃取技術(shù)（SPE）、固相萃取凈化技術(shù)（SPE）和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）。其中薄層色譜法操作簡單，成本低；SPE 具有操作簡便，耗時短的特點；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有分析速度快，靈敏度高等特點。但該方法存在的問題是檢測成本高；薄層色譜法操作復(fù)雜，耗時較長。

2.4 檢測結(jié)果

在禽蛋中殘留獸藥的檢測中，有不少文獻報道了檢測結(jié)果與真實值不符的情況。例如，在一批從越南進口的鮮雞蛋中檢出孔雀石綠殘留，經(jīng)檢測這批雞蛋中含有孔雀石綠和氯霉素兩種獸藥殘留。對于這一問題，筆者認為主要原因是：首先是由于樣品前處理不規(guī)范導致。在對鮮蛋進行前處理時，樣品沒有完全去除蛋殼上的附著物；其次是由于樣品稀釋不規(guī)范導致。在樣品稀釋時沒有將不同濃度的樣品混合均勻；最后是由于儀器檢測條件不匹配導致。

2.5 質(zhì)量控制

對檢測結(jié)果的分析和判定是檢驗檢疫工作的重要組成部分。在檢測過程中，檢驗檢疫人員需要根據(jù)檢測結(jié)果判定產(chǎn)品是否合格，并對不合格產(chǎn)品采取相應(yīng)的措施進行處理。

3 獸藥殘留的控制措施

首先要加強源頭管理，建立健全獸藥生產(chǎn)、銷售、使用的市場準入制度，嚴格執(zhí)行休藥期制度。獸藥生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)當建立并執(zhí)行獸藥產(chǎn)品的進貨查驗和記錄制度，嚴格按照產(chǎn)品使用范圍、用法和用量使用。從事養(yǎng)殖的單位或個人，應(yīng)嚴格遵守國家有關(guān)法律法規(guī)，禁止在飼料和動物飲用水中添加任何藥物。其次需要加強對飼料、動物飲用水、獸藥等相關(guān)產(chǎn)品的監(jiān)督檢查，規(guī)范生產(chǎn)經(jīng)營行為。對獸藥的使用及原料進行嚴格的監(jiān)管，尤其是飼料中抗生素等藥物的添加比例應(yīng)嚴格控制在國家規(guī)定范圍內(nèi)。嚴厲打擊非法添加和濫用獸藥及其他添加劑的行為，確保禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量安全。再者還應(yīng)該加強監(jiān)測預(yù)警。國家相關(guān)部門應(yīng)加大對禽蛋產(chǎn)品中獸藥殘留超標的監(jiān)管力度，對于不符合檢驗檢疫要求的禽蛋產(chǎn)品進行及時查處，防止不合格產(chǎn)品流入市場。同時加強對出口企業(yè)和出口禽蛋產(chǎn)品的監(jiān)管，督促企業(yè)加強管理，嚴把質(zhì)量關(guān)。最后要大力開展獸藥殘留檢測技術(shù)研究和培訓工作。一方面要加強對獸藥殘留檢測技術(shù)方面的研究，另一方面要加強對檢驗檢疫人員專業(yè)知識的培訓，使檢驗檢疫人員具備更高水平的檢測能力和對獸藥殘留檢測工作更全面深入地理解與認識。只有這樣才能確保禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量安全、保障人民群眾身體健康和生命安全。

4 結(jié)語

我國禽蛋產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，生產(chǎn)規(guī)模和產(chǎn)量逐年增加，但同時也存在著許多問題，如產(chǎn)業(yè)集中度低、集約化程度低、加工落后等，致使禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量難以保障。為了解決這些問題，確保禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量安全，需要從以下幾個方面努力：一是制定統(tǒng)一的禽蛋產(chǎn)品生產(chǎn)和加工技術(shù)標準，完善生產(chǎn)流通過程中的質(zhì)量監(jiān)管體系；二是提高飼料等原材料的質(zhì)量，加強飼料、獸藥、添加劑等產(chǎn)品的市場準入制度建設(shè)；三是加強對生產(chǎn)加工過程中技術(shù)工藝的研究；四是加強對禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量安全標準體系建設(shè)，使檢驗檢疫部門能夠更加及時有效地對禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量安全問題進行監(jiān)管。