外泌體在骨改建及種植體骨結(jié)合中的作用

曾曉妹，李鵬程，符起亞，

（1.海南醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院，海南 ?？?570216；2.海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院口腔科，海南 ?？?570102）

細胞外囊泡（extracellular vesicle， EVs）是細胞釋放的30～150 nm 大小的膜狀囊泡，作為細胞間的通信分子而受到人們的關(guān)注。細胞可以分泌多種細胞外囊泡，根據(jù)生物發(fā)生、大小、密度和主要蛋白標記物可分為： 外泌體（exosomes，Exos）、微囊泡、凋亡小體等［1］。外泌體一般直徑大小在 50～150 nm，來源于細胞的胞內(nèi)體，而微囊泡直徑大小在50～500 nm，甚至?xí)_到1 μm，一般來自細胞膜［2］。而凋亡小體一般由細胞發(fā)生凋亡后產(chǎn)生，直徑約在1～5 μm 左右。

外泌體作為細胞外囊泡的一種，直徑大約為50～150 nm，能被內(nèi)皮細胞、免疫細胞、腫瘤細胞、間充質(zhì)干細胞 （mesenchymal stemcells，MSC） 等各種細胞分泌與攝取，且不同來源的外泌體在形態(tài)、內(nèi)容物和功能等方面都具有特異性。外泌體作為分泌到循環(huán)中的小囊泡，它們可以被近端或遠端的細胞內(nèi)化，這些外泌體中的小分子（包括蛋白質(zhì)和核酸）可以在內(nèi)化時調(diào)節(jié)受體細胞的功能，從而在各種細胞和器官之間進行交流。此外，外泌體已被證明是將調(diào)節(jié)物質(zhì)遞送至靶細胞的理想納米材料之一，并在該過程中起到保護的作用。在骨吸收與骨形成的動態(tài)平衡過程中，骨組織細胞包括成骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSC）、成骨細胞（osteoblast）、破骨細胞（osteoclast）、骨細胞（osteocyte）等以及巨噬細胞（macrophages，Mφs）在骨組織中均發(fā)揮著重要的作用。骨細胞和細胞功能之間的相互驅(qū)動作用是維持正常骨結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵［2］。成骨與破骨失衡的狀態(tài)是導(dǎo)致牙種植失敗的重要原因。本研究以骨改建與骨源性外泌體為中心，對外泌體在全身骨組織改建中的不同作用進行概述，并以骨結(jié)合相關(guān)的外泌體為切入點，對外泌體參與骨結(jié)合的應(yīng)用和展望作一綜述。

1 外泌體在骨改建中的作用

骨改建的動態(tài)平衡是維持正常骨骼結(jié)構(gòu)的前提，在維持骨穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要的作用。外泌體存在于各種細胞的微環(huán)境中，在細胞間的通信中起著介導(dǎo)作用。最近的研究集中在外泌體介導(dǎo)的細胞之間的通訊在骨改建中的作用，并且在各種疾病模型中研究了外泌體的治療效果。外泌體可以為受體細胞提供遺傳信息，影響其特性和旁分泌因子，并導(dǎo)致組織改建。與細胞相比，外泌體具有穩(wěn)定性好、無免疫原性、易轉(zhuǎn)化、易獲取等優(yōu)點。不同骨源性細胞來源外泌體分泌特定蛋白質(zhì)、小分子核糖核酸及其他生長因子，觀察外泌體的內(nèi)容物，并了解其介導(dǎo)骨改建的機制。

1.1 間充質(zhì)干細胞來源的外泌體對骨改建的作用

骨髓中有一類具有自體更新能力的基質(zhì)干細胞，稱為骨髓間充質(zhì)干細胞。它們可以分化為成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞，因此其可以影響骨的形成、維持和重建。許多研究者認為，MSCs 可實現(xiàn)自身增殖和分化，以此可用于替代受損的組織，并且通過旁分泌調(diào)節(jié)重要的微環(huán)境調(diào)節(jié)因子來改變受損組織的微環(huán)境［4］。在功能上，MSCs 調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、凋亡和其他生物學(xué)功能，并間接對修復(fù)發(fā)揮治療作用。

據(jù)以往的研究報道，在絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號刺激下可影響成骨細胞的基因表達和功能，同時間充質(zhì)干細胞來源外泌體（MSC-Exos）可以增加MAPK 通路相關(guān)蛋白的表達［5］。有相關(guān)研究證實，MSC-Exos 對轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGFβ1）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 （BMP9）及生長因子的表達具有調(diào)節(jié)作用［6］，其在骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨分化中發(fā)揮著誘導(dǎo)作用。

外泌體中含有miRNAs，通過傳遞遺傳信息介導(dǎo)細胞間的通訊。此外，在各種信號通路的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中miRNAs 均有參與，發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)成骨的作用，并已被研究作為目標基因治療的藥物。有大量研究表明外泌體中的miRNAs 具有促進成骨細胞分化的作用。賴渝等［7］表明MSCs 分泌的細胞外囊泡中促進骨再生的三種成骨相關(guān)miRNAs（miR-196a、miR-27a 和miR-206）被高度上調(diào)，并且miR-196a 也被認為是成骨中最重要的調(diào)節(jié)因子之一。在MSCs分泌的外泌體中差異性表達的miRNA如miR-21、miR-4532、miR-125b-5p 和miR-338-3p 可能有助于促進成骨和血管生成。富含AT 序列的特異性結(jié)合蛋白2（SATB2）為一種特異性免疫組織化學(xué)生物標志物，其主要是由成骨細胞分化而來，已被證明對骨和軟組織的腫瘤都有一定的作用［8］。有相關(guān)研究報道，MSCs 來源的外泌體肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄子（MALAT1）可增強骨質(zhì)疏松小鼠的成骨細胞活性，這一過程中miR-34c/SATB2 軸發(fā)揮著主要的介導(dǎo)作用［9］。除此之外，也有學(xué)者研究表明外泌體中的miRNAs 具有抑制成骨細胞分化的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-424-5p 在MSCs 來源的外泌體中過度表達，miR-424-5p 的過度表達減弱了成骨分化表明骨髓間充質(zhì)干細胞來源的外泌體通過上調(diào)miR-424-5p［10］，介導(dǎo)Wnt/β-連環(huán)蛋白軸，從而抑制成骨細胞分化。

MSC-Exos 可能通過促進血管生成來促進成骨。血管生成有助于成骨的進展，其中血液供應(yīng)誘導(dǎo)成骨細胞的遷移和骨組織的礦化。由于在骨細胞成熟和活性中血管內(nèi)皮細胞發(fā)揮著刺激作用，且骨再生與血管生成的關(guān)系密切。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是一種特異性生長因子，其主要作用于血管內(nèi)皮細胞，對血管再生具有促進作用，對毛細血管的生成、血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移具有調(diào)節(jié)作用，可進一步增強成骨細胞的活性，從而促進骨的再生。劉娜娜等［11］發(fā)現(xiàn)，MSC-Exos 不僅增強了成骨相關(guān)基因的表達，還增強了血管生成相關(guān)基因如VEGF、血管生成素1（ANG 1）和血管生成素2（ANG2）的表達。這表明MSC-Exos 給受體細胞提供了一些與血管生成和骨再生相關(guān)的信息，從而導(dǎo)致受體細胞激活血管內(nèi)皮生長因子和成骨相關(guān)旁分泌因子的分泌。因此，MSC-Exos 可能部分有助于控制局部環(huán)境中的細胞生態(tài)位，并激活骨再生中包括血管內(nèi)皮生長因子在內(nèi)的旁分泌因子。目前的研究表明，骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體（BMMSC-Exos）可以加速內(nèi)皮細胞和成骨細胞的增殖和遷移，進一步促進血管生成和成骨以促進骨折愈合。作為細胞間的溝通者，外泌體可以激活HIF-1α/VEGF 和BMP-2/Smad1/RUNX2 信 號 通路，這一機制在骨折愈合過程中起著重要作用。而在MSCs 的成骨過程中，長非編碼核糖核酸（lncRNAs）正在成為新的調(diào)節(jié)劑［12］。

1.2 成骨細胞來源的外泌體對骨改建的作用

成骨細胞來源于骨髓間充質(zhì)干細胞，因骨髓間充質(zhì)干細胞具有多向分化潛能，可分泌膠原和糖蛋白，有利于骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨髓間充質(zhì)干細胞首先分化為骨母細胞，然后轉(zhuǎn)化為成骨細胞前體，最后轉(zhuǎn)化為成骨細胞，并且該過程由miRNAs、蛋白質(zhì)、信號通路等調(diào)節(jié)。成骨細胞和成骨細胞之間的交流被認為是通過被稱為外泌體的小的膜包裹的囊狀顆粒進行的，該顆粒能夠在循環(huán)途徑中與周圍的細胞膜融合。另外，也有研究表明成骨細胞來源的外泌體通過調(diào)節(jié)破骨細胞的活性，在骨微環(huán)境和骨代謝中起作用。

最近的研究表明，許多骨源性外泌體的miRNAs 參與了骨改建的調(diào)節(jié)［13］。在小鼠胚胎成骨細胞前體細胞（MC3T3-E1 細胞）外泌體中存在43 個miRNAs 呈 高 度 表 達 ，包 括 miR-140-3p、miR-133b-3p 及miR-30d-5p，已有研究證實它們在骨組織的重塑中發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用，同時還參與了對成骨細胞分化和功能的多種途徑，如鈣信號通路、Wnt、TGFβ 及胰島素等。在成骨的分化過程中，包括 miR-135b、 miR-148a、 miR-199b、 miR-203、miR-218、miR-219、miR-299-5p、miR-302b 和let-7a共9 種miRNA，均在人骨髓間充質(zhì)干細胞（HBMSC）外泌體中上調(diào)。 相比之下，五種miRNA（miR-155、 miR-181a、 miR-221、 miR-320c 和miR-885-5p）在HBMSC 外泌體樣本中顯著下調(diào)。這些下調(diào)的miRNAs 及其協(xié)同靶基因富含胰島素信號通路以及磷酸肌醇3-激酶/Akt 通路和絲裂原活化蛋白激酶，在成骨細胞分化中這兩條通路發(fā)揮著重要的作用。miRNAs 作為骨改建中的溝通者，其主要源于成骨細胞譜系的外泌體，其含有靶向關(guān)鍵破骨細胞分化因子。含有miR-503-3p 的礦化成骨細胞的外泌體對RANK 的表達具有調(diào)節(jié)作用，可用于抑制RANKL 誘導(dǎo)的破骨細胞分化。王璐等［14］研究發(fā)現(xiàn)，circ_0008542 是在張力刺激下（20%振幅/1 Hz/24 h 的Flexcell 培養(yǎng)），包含在MC3T3-E1 細胞來源外泌體中的新型環(huán)狀RNA，Circ_0008542 通過miR-185-5p/RANK 軸逐漸上調(diào)破骨細胞分化和骨吸收。

成熟成骨細胞細胞系（礦化MC3T3-E1 細胞）的外泌體對ST2 成骨細胞前體細胞系的成骨分化具有促進作用，表現(xiàn)為成骨標記物、runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2 （RUNX2）和堿性磷酸酶的表達上調(diào)，以及基質(zhì)礦化增強［15］。Let-7 存在于礦化成骨細胞和成骨細胞前體的外泌體中，通過調(diào)節(jié)高遷移率族ATHOOK 蛋白2（HMGA2）和軸蛋白2 抗體（AXIN2）來增強成骨。另外，成骨細胞分化中β-連環(huán)蛋白作為必不可少的轉(zhuǎn)錄因子。當轉(zhuǎn)移礦化成骨細胞來源外泌體后，可抑制AXIN1 的表達，并增強β-連環(huán)蛋白的表達，以此對成骨細胞前體的成骨分化起到促進作用。

1.3 破骨細胞來源的外泌體對骨改建的作用

破骨細胞是來源于巨大多核細胞，該細胞是單核巨噬細胞的前體細胞，主要負責(zé)在活生物體內(nèi)的骨吸收。破骨細胞參與許多骨疾病的發(fā)生和發(fā)展，如骨質(zhì)疏松癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等等［16］。破骨細胞中外泌體的鑒定蛋白質(zhì)包括：細胞分化（CD）63，上皮細胞粘附分子（EpCAM），腫瘤易感基因（TSG）101，熱休克蛋白（HSP）70，和β-肌動蛋白。韓光麗等［17］分析了破骨細胞來源外泌體的調(diào)節(jié)活性，得出結(jié)論：小鼠骨髓中破骨細胞在來自破骨細胞前體的外泌體刺激下數(shù)量增加，而來自成熟破骨細胞的相同數(shù)量的外泌體抑制破骨細胞的形成。

破骨細胞通過含miRNA 的外泌體抑制成骨細胞。骨改建是一個精細的過程，成骨細胞與破骨細胞的生理耦合必不可少。Sun 研究確定了破骨細胞介導(dǎo)的通過含miRNA 的外泌體抑制成骨細胞的機制。破骨細胞分泌富含miR-214 的外泌體，miR-214在破骨細胞中富集4 倍。這些外泌體可以通過ephrinA2/EphA2 分子整合到成骨細胞中。因此，miR-214 具有抑制成骨細胞活性的作用。另外，Garg 等［18］先 前 的 一 項 研 究 確 定miR-214 通 過 調(diào) 節(jié)成骨細胞中的Osterix 和激活轉(zhuǎn)錄因子（ATF）4，即重要的轉(zhuǎn)錄因子來抑制骨形成，這一研究進一步證實miR-214 促進破骨細胞的生成主要通過靶向Pten張力蛋白同源物的PI3K/Akt 這一途徑。因此，所含miR-214 的外泌體有多種對骨破壞有利的作用。Lv 等［19］進行了一系列在試管內(nèi)和在活生物體內(nèi)鑒定破骨細胞來源的外泌體miR-214-3p 可轉(zhuǎn)移至成骨細胞抑制骨形成的研究，為參與局部骨環(huán)境的穩(wěn)態(tài)機制提出了一種miRNA 介導(dǎo)的破骨細胞-成骨細胞通訊范式。結(jié)果表明外泌體中miR-214-3p 可以作為細胞間信使來介導(dǎo)破骨細胞與成骨細胞之間的通訊，從而抑制成骨細胞的骨形成。也有研究表明，破骨細胞含有miR-23a-5p 的外泌體可有效抑制RUNX2 和升高Yes 相關(guān)蛋白1 （ YAP1 ）介導(dǎo)的金屬硫蛋白1D 假基因（MT1DP）而有效地抑制成骨細胞分化［20］。另外，梁玲等［21］發(fā)現(xiàn)microRNA-146a在破骨細胞中富集了80 倍以上，使其成為調(diào)節(jié)分子和生物標記物的候選物。

1.4 骨細胞來源的外泌體對骨改建的作用

骨細胞是骨中最豐富的細胞，分布在一個相互連接的網(wǎng)絡(luò)中，通過該網(wǎng)絡(luò)，它們感知和響應(yīng)系統(tǒng)或局部刺激以調(diào)節(jié)骨改建，通過細胞與細胞間的相互作用和可溶性介質(zhì)來發(fā)揮其作用。駱瑜等［22］研究發(fā)現(xiàn)骨細胞分泌外泌體，然后在血液中循環(huán)，這是初次對于骨細胞來源外泌體聯(lián)合循環(huán)外泌體的研究：將骨細胞減少的小鼠與正常小鼠的血漿進行比較，前者血漿循環(huán)外泌體中，共12 個miRNAs（miR-3473a、miR-3473b、miR-3473e、miR-5128、miR-6244、miR-6239、miR-5132-5p、miR-705、miR-208a-5p、miR-3104-5p、miR-1224-5p 、miR-5621-5p）表達水平呈下降趨勢，究其原因可能與骨細胞來源外泌體的分泌減少或滲漏有關(guān)。來源于骨細胞的外泌體，可將生物活性分子轉(zhuǎn)移至靶細胞，在骨改建中起著關(guān)鍵作用，特別是在破骨細胞和成骨細胞分化過程中［23］。目前的研究表明，骨細胞產(chǎn)生的外泌體可能在全身中循環(huán)，然后通過結(jié)合到細胞表面，從而轉(zhuǎn)移其組成信號分子，包括miRNA 和pre-miRNA，隨后由其他器官或組織中的受體細胞融合和內(nèi)化［19］。骨細胞來源的外泌體已經(jīng)被證明可以調(diào)節(jié)肌肉和骨骼的交流。孫金生等［24］證實了在肌生長抑制素治療后骨細胞來源的miR-218 表達下調(diào)的外泌體可以摻入成骨細胞，并通過下調(diào)Wnt信號抑制成骨細胞分化；該過程可以通過外源性miR-218 的表達來逆轉(zhuǎn)，表明骨細胞來源外泌體中miR-218 具有促進成骨的作用，擁有治療骨疾病的潛力。

1.5 巨噬細胞來源的外泌體對骨改建的作用

巨噬細胞是一種細胞類型，可以根據(jù)局部細胞和分泌信號分化成一系列效應(yīng)子亞型。血管生成是種植體骨結(jié)合的先決條件，可以輸送氧氣、營養(yǎng)物質(zhì)、代謝物和細胞因子，因此對于骨修復(fù)和骨再生至關(guān)重要［25］。巨噬細胞在種植體骨結(jié)合過程中可以發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。所以巨噬細胞和骨細胞之間的相互作用對于骨形成和修復(fù)至關(guān)重要。外泌體可以在微小核糖核酸和蛋白質(zhì)之間主動運輸，同時傳遞信息到靶細胞，從而影響它們的行為并改變整個微環(huán)境［26］。

有學(xué)者研究了M0，M1 和M2 極化巨噬細胞來源的EVs 在骨修復(fù)中的旁分泌功能中的作用［27］。對富含M1 型巨噬細胞EVs 的miR-155 進行的功能檢查表明，通過降低BMP2、骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 和RUNX2 的表達，miR-155 模擬降低了MSC 成骨分化的過程，相反，用富含M2 型巨噬細胞EVs 的miR-378a 治療骨髓間充質(zhì)干細胞模擬了骨髓間充質(zhì)干細胞骨誘導(dǎo)基因表達的增加。這些研究結(jié)果表明，極化的巨噬細胞來源外泌體微小核糖核酸參與體內(nèi)觀察到的骨再生的正或負調(diào)節(jié)，M0 和M2 型巨噬細胞 EVs 促進修復(fù)和再生，M1 型巨噬細胞EVs 抑制骨修復(fù)。

外泌體富含的miRNA 是關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子。最近的一項研究表明，銅離子可以使Mφs 極化為促炎M1 表型，可通過分泌血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）促進血管生成［28］。除了VEGF，Mφs 還可以分泌外泌體，可以靶向受體細胞，包括內(nèi)皮細胞，并通過遞送核糖核酸、蛋白質(zhì)和其他成分來調(diào)節(jié)其功能。Mφs 分泌的外泌體含有miR-361-5p，它可以負性調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA） mRNA 的轉(zhuǎn)錄［29，30］。總之，銅離子刺激MΦ 可下調(diào)外泌體中抗血管生成RNA 的表達和上調(diào)外泌體中促血管生成RNA 的表達，最終促進血管生成。來源于M1 型巨噬細胞的外泌體高度表達miR-155 并可被內(nèi)皮細胞（ECs）攝取，ECs 同時靶向兩條信號通路RAC1-PAK2 和Sirt1/AMPKα2-eNOS，從而抑制血管生成和心臟修復(fù)。Jeppesen 等［31］試圖研究M2 型巨噬細胞來源的外泌體微小核糖核酸對骨髓間充質(zhì)干細胞分化的影響，研究證明miR-5106 在M2 型巨噬細胞Exos 中高度表達，并且它可以轉(zhuǎn)移到骨髓間充質(zhì)干細胞中，其中它靶向鹽酸誘導(dǎo)激酶 2（SIK2）和鹽酸誘導(dǎo)激酶 3（SIK3）基因誘導(dǎo)體外和體內(nèi)成骨細胞分化。另外有研究報道，另外有研究報道，巨噬細胞來源的外泌體含有miR-184，其可通過GATA2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子（FOG-2）的負調(diào)控抑制VEGF 表達［2］。

2 外泌體在種植體骨結(jié)合中的功能

研究表明，種植體外涂層TA-SPEEK 可以促進骨髓間充質(zhì)干細胞的直接成骨分化。更重要的是，Exo-TA-SPEEK 植入具有免疫調(diào)節(jié)和直接成骨特性，最終可促進活生物體內(nèi)的骨結(jié)合和新骨形成?？傊贅s林等［32］的研究表明外泌體是產(chǎn)生高級免疫調(diào)節(jié)和骨再生材料的有效和有力添加劑。此外，骨髓間充質(zhì)干細胞來源的外泌體將纖連蛋白、I 型膠原等細胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合并束縛于生物材料及骨表面上。這一功能還允許外泌體作為仿生工具，誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化為成骨譜系。

研究發(fā)現(xiàn)，Circ_0008542 通過miR-185-5p/RANK 軸逐漸上調(diào)破骨細胞分化和骨吸收［33-35］。這種現(xiàn)象是骨結(jié)合微環(huán)境中響應(yīng)種植體頸部不平衡應(yīng)力的一種新的分子機制。此外，王娟等［30］發(fā)現(xiàn)AlkB 同源物5（ALKBH5）在外泌體中的過度表達明顯挽救了circ_0008542 誘導(dǎo)的骨丟失。該研究提供了使用MC3T3-E1 細胞釋放ALKBH5 的外泌體來增強即刻種植體抗性的方法。

血管生成對于種植體骨結(jié)合至關(guān)重要［36］。眾所周知，巨噬細胞在血管生成中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。巨噬細胞可以通過植入物釋放的離子來影響外泌體的分泌，Co 離子可通過二價金屬轉(zhuǎn)運體1（DMT1）進入細胞，刺激活性氧產(chǎn)生，激活PI3K/AKT/mTORC1 和MEK/ERK 信號通路，調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)因子-Iα（HIF-1α）的轉(zhuǎn)錄，從而促進血管生成。目前的研究表明，對植入物進行適當?shù)谋砻嫣幚恚? 000 μmol/L 的Co 離子濃度可以刺激巨噬細胞分泌促血管生成的外泌體，可以發(fā)揮血管生成潛力［37］。此外，外泌體也可以裝載到種植體表面，以促進種植體周圍的血管生成和骨結(jié)合［38］。

3 總結(jié)與展望

外泌體調(diào)節(jié)骨改建是一個復(fù)雜的過程，其受多方面多因素的影響。骨相關(guān)細胞來源的外泌體對骨細胞的活性和功能的影響可通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin 信 號 通 路、成 骨 抑 制 基 因（RANKL、SOST、DKK1）及成骨分化基因（RUNX2、ALP）等機制實現(xiàn)。本文闡述了間充質(zhì)干細胞、成骨細胞、破骨細胞、骨細胞、巨噬細胞來源的外泌體對骨改建的作用，以及外泌體在種植體骨結(jié)合中的功能。希望本文有助于幫助讀者理解外泌體在調(diào)節(jié)骨改建過程中的作用，以此為提高種植體骨結(jié)合成功率提供一個新的思路，如通過種植體所釋放的離子來調(diào)節(jié)骨源性細胞所分泌的外泌體，有效調(diào)節(jié)巨噬細胞M2 極化以形成局部骨改建環(huán)境。

所有作者聲明不存在利益沖突關(guān)系。