白及內(nèi)生真菌Ilyonectria sp.的化學成分及其生物活性研究

范寅仲，葉可，同舜堯，田淳，艾洪蓮

（中南民族大學 藥學院，武漢 430074）

中藥白及為蘭科植物白及Bletilla striata的干燥塊莖［1］.據(jù)文獻報道，白及主要含螺環(huán)烷甾類、皂苷類、聯(lián)苯類、菲類、蒽醌類等［2-5］化合物，具有收斂止血、消腫生肌的功效.臨床實踐中，白及常用于治療咯血、嘔血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皴裂等疾病.

內(nèi)生真菌普遍存在于植物組織內(nèi)，對植物生長具有積極影響，在長期的協(xié)同進化過程中，與宿主植物形成了互惠共生關系，部分內(nèi)生真菌可以分泌提高植物體抵抗力、增強植物體抗逆性的次生代謝產(chǎn)物［6］.從植物內(nèi)生真菌中分離得到的具有新穎結構與骨架的次級代謝產(chǎn)物已有大量報道，而且其次級代謝產(chǎn)物往往具有抗菌［7］、抗炎［8］、抗腫瘤［9］等生物活性.本文以一株分離自白及的優(yōu)勢內(nèi)生真菌Ilyonectriasp.作為研究對象，對其固體發(fā)酵產(chǎn)物的化學成分進行研究，以期發(fā)現(xiàn)具有較好生物活性的次級代謝產(chǎn)物.

1 實驗部分

1.1 實驗儀器與材料

核磁共振波譜儀（AM600型，德國Bruker），旋轉蒸發(fā)儀（SB-1300 型，美國ELELA），中壓液相色譜（Puriflash 430 型，法國Interchim），半制備型高效液相色譜（Agilent 1260 型，美國），半制備高效液相色譜（1260型，美國Agilent）.

正相柱色譜硅膠（80～100 目和200～300 目）、GF254 薄層色譜板（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20 凝膠材料（瑞典Amersham Bioscience 公司）；反相柱色譜材料 Chromatorex（40-75μm）（日本富士）；色譜柱為CHIRALCEL OD-H 手性色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）Agilent Zorbax 和SB-C18 柱（9.4 mm×150 mm，5 μm）Agilent Zorbax.

顯色方法為紫外燈下波長254 nm 和365 nm 處觀察熒光，香草醛顯色及5%硫酸乙醇溶液顯色劑加熱顯色.

1.2 菌種鑒定及發(fā)酵培養(yǎng)

從湖北省恩施州采集白及，并從其健康塊莖中分離得到白及內(nèi)生真菌.根據(jù)18S rDNA-seq 測序，在NCBI 數(shù)據(jù)庫中進行對比，將其鑒定為Ilyonectriasp.，該菌株保存在中南民族大學藥學院藥用真菌與民族藥研究組.

將白及內(nèi)生真菌Ilyonectriasp.菌株接種至PDA瓊脂培養(yǎng)基上，25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)3～5 d.然后將培養(yǎng)基切割成若干小塊放入大米固體培養(yǎng)基中，在25 ℃條件下發(fā)酵30 d.大米固體培養(yǎng)基的配制方法為：50 g大米和50 mL水分裝于500 mL培養(yǎng)瓶中，經(jīng)120 ℃下高壓滅菌30 min，共212瓶.

1.3 提取分離

菌絲與培養(yǎng)基于45 ℃低溫烘干，粉碎后過80目篩，經(jīng)有機溶劑（氯仿-甲醇，50∶50）30 L浸泡之后減壓濃縮，重復3 次，用水溶解至5 L.同等體積的乙酸乙酯萃取5 次.乙酸乙酯萃取液減壓濃縮后獲得浸膏120 g.80～100 目正相硅膠柱層析，氯仿-甲醇（100∶0—0∶100，V/V）梯度洗脫，經(jīng)薄層層析色譜（TLC）在酸性高錳酸鉀溶液中顯色，合并，將粗浸膏分為五個粗組分（A～E）.

組分B 經(jīng)中壓液相色譜（甲醇-水，20∶80—100∶0，V/V）梯度洗脫，分離得到9 個組分B1～B9.組分B4（2.6 g）經(jīng)硅膠柱色譜（200—300目正相硅膠）石油醚-丙酮體系（8∶1—0∶1，V/V）梯度洗脫，分離得到11 個亞組分B4-1～B4-11；組分B4-3（25.0 mg）經(jīng)半制備型HPLC（乙腈-水，26∶74—35∶65，20 min，4 mL/min）分離，得到化合物11（1.7 mg，tR=12.1 min）；組分B4-7（210.6 mg）經(jīng)半制備型HPLC（乙腈-水，36∶64—38∶62，21 min，4 mL/min）分離，得到化合物9（24.5 mg，tR=14.1 min）.組分B5（6.0 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜石油醚-乙酸乙酯體系（15∶1—0∶1，V/V）梯度洗脫分離得到6個亞組分B5-1～B5-6.組分C經(jīng)中壓液相色譜（甲醇-水，20∶80—100∶0，V/V）梯度洗脫，分離得到9 個亞組分C1～C9.組分C3（210.0 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜石油醚-丙酮體系（10∶1-0∶1，V/V）梯度洗脫，分離得到7 個亞組分C3-1～C3-7；組分C3-1（51.0 mg）經(jīng)半制備型HPLC（甲醇-水，26∶74—32∶68，20 min，4 mL/min）分離，得到化合物8（28.8 mg，tR=13.0 min）.組分C4（0.9 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜石油醚-丙酮體系（10∶1—0∶1，V/V）梯度洗脫，分離得到9 個亞組分；組分C4-8（150.1 mg）經(jīng)半制備型HPLC 分離（乙腈-水，16∶84—22∶78，20 min，4mL/min），得到化合物2（28.8 mg，tR=12.4 min）.組分C5（1.1 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-丙酮，6∶1—0∶1，V/V）梯度洗脫，得到11 個亞組分C5-1～C5—11；組分C5-6（140.0 mg）經(jīng)半制備型HPLC（乙腈-水，18∶82—23∶77，20 min，4 mL/min）分離得到化合物1（3.4 mg，tR=13.2 min）；組分C5-11（184.2 mg）經(jīng)半制備型HPLC（乙腈-水，24∶76—26∶74，20 min，4 mL/min）分離，得到化合物10（3.5 mg，tR=12.8 min）.組分C6（1.0 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜氯仿-丙酮體系（8∶1—0∶1，V/V）梯度洗脫，得到8個亞組分C6-1～C6-6；組分C6-2（50.0 mg）經(jīng)半制備型HPLC 乙腈-水，31∶69—33∶69，20 min，4 mL/min）分離，得到化合物3（2.9 mg，tR=12.0 min）；組分C6-4（62.0 mg）經(jīng)半制備型HPLC（乙腈-水，28∶72—33∶69，20 min，4 mL/min）分離，得到化合物4（4.4 mg，tR=14.0 min）；組分C6-5（56.0 mg）經(jīng)半制備型HPLC（乙腈-水，31∶69—35∶65，20 min，4 mL/min）分離，得到化合物5（1.9 mg，tR=12.5 min）.由于化合物5 為外消旋體，利用高效液相色譜，以正己烷和異丙醇為流動相，通過色譜拆分法（流動相經(jīng)0.45 μm 微孔膜過濾，進樣量50 μL，正己烷：異丙醇=80∶20；色譜柱溫度25 ℃；流速1 mL/min；205、220、254、280、365 nm紫外波長檢測）得到化合物（±）-5.組分D經(jīng)過中壓液相色譜（甲醇-水，20∶80—100∶0，V/V）梯度洗脫，用薄層層析色譜檢視，得到10個亞組分D1-D10，組分D8經(jīng)過正相硅膠柱層析（石油醚-丙酮，10∶1—0∶1，V/V）和半制備型HPLC（乙腈-水，54：46，18 min，4 mL/min）分離得到化合物6（1.8 mg）和7（3.1 mg）.

2 活性測定

2.1 抗炎活性檢測

將用Lipopolysaccharide（LPS）誘導的RAW 264.7巨噬細胞接種在含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 g/mL 鏈霉素的Dulbecco's 改良培養(yǎng)液中，于37 ℃下加入5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng).培養(yǎng)12 h 后，用各種濃度的測試化合物（10～40 mM）處理2 h，然后在有無脂多糖（500 ng/mL）的情況下孵育24 h.除去培養(yǎng)基，在每個孔中加入100 μm/mL 3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3，5-di-phenytetrazoliumromide（MTT）溶液（0.5 mg/mL）隨后將板在37 ℃下培養(yǎng)4 h，每個孔用150 μL DMSO 溶解晶體.最后記錄酶標儀上570 nm 處的吸光度，細胞存活率為對照的百分比來表示.使用Griess 試劑盒收集細胞上清液，以測量上清液中NO 的產(chǎn)生.使用酶標儀在540 nm處測量吸光度.

2.2 抗菌活性測定

通過微量肉湯稀釋法，檢測化合物對大腸埃希菌Escherichia coli（ATCC 25922）和白色念珠菌Candida albicans（ATCC 10231）的抑制作用.將上述兩個病原菌接種于PDB 液體培養(yǎng)基，恒溫培養(yǎng)搖床過夜培養(yǎng)（37 ℃，200 r/min）.化合物用DMSO溶解濃度為1 mg/mL，然后將超純水分別調(diào)為16、32、64、128、256、512 μg/mL，并將DMSO 也對應地用超純水調(diào)為同濃度溶液.

設置實驗組為不同濃度100 μL化合物和100 μL菌液，按濃度由高到低的順序加入孔中，3 復孔；陰性對照1 為200 μL MH 或PDB 培養(yǎng)基，2 復孔；陰性對照2 為100 μL 化合物+100 μL 培養(yǎng)基，2 復孔；陽性對照為100 μL氯霉素（大腸桿菌i）或氟康唑（白色念珠菌）和100 μL 菌液，2 復孔；空白對照為200 μL菌液，2 復孔.將96 孔板放入高通量生長曲線分析儀中震蕩培養(yǎng)24 h，觀察結果.觀察化合物濃度為8、16、32、64、128、256和512 μg/mL 時的菌液生長情況.空白對照孔顯示渾濁，陰性對照顯示清亮，質(zhì)控在規(guī)定范圍內(nèi)，以肉眼觀察無細菌生長的最低濃度即為化合物的最小抑菌濃度（MIC）值.

3 結構鑒定

11種化合物結構見圖1.

圖1 化合物1～9的結構Fig.1 Chemical structures of compounds 1-9

化合物1：為白色粉末，通過（+）-HR-ESI-MS 高分辨質(zhì)譜正離子模式，確定了其分子式為C13H12O4Cl（269.05725［M+H］+，計算值為269.05751），在m/z271.05429（計算值為271.05456）處的同位素峰驗證了該化合物含有氯原子，得出該化合物的不飽和度為8.1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH6.76（1H，s，H-6），6.12（1H，s，H-3），4.28（1H，m，H-2），2.80（1H，dd，J=14.5，5.0 Hz，H-1），2.72（1H，dd，J=14.5，7.9 Hz，H-1′），2.70（3H，s，H-11），1.31（3H，d，J=6.2 Hz，H-3′），13C NMR（150 MHz，CD3OD），δc181.6（C-4），167.2（C-2），159.0（C-7），156.5（C-9），141.2（C-5），117.4（C-6），116.6（C-10），112.8（C-3），106.9（C-8），66.2（C-2′），44.2（C-1′），23.5（C-3′），22.9（C-11）.該化合物只有單個手性中心，通過與已知化合物對比比旋光度（［α］）來判斷C-2?的絕對構型.與7-hydroxy-2-（2'-hydroxypropyl）-5-methylchromone（［α］25D+46）和（2'S*）-2-（2'-hydroxypropyl）-5-methyl-7，8-dihydroxy-chromone（［α］27D+57）［10-11］兩個相同骨架的已知化合物進行比較，化合物1 的比旋光度（［α］25D+34.89）與它們一致，表明C-2'的絕對構型為S，進而確定了該化合物的絕對構型.并將其命名為（2'S）-2-（2'-hydroxypropyl）-5-methyl-7-dihydroxy-8-chlorochromone.

化合物2：分子式為C13H14O3，無色固體，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH 6.67（1H，m，H-8），6.62（1H，m，H-6），6.06（1H，s，H-3），4.18（1H，m，H-2′），2.71（3H，s，H-11），2.70（1H，dd，J=14.0，5.0 Hz，H-1a），2.65（1H，dd，J=14.0，7.9 Hz，H-1′b），1.27（3H，d，J=6.2 Hz，H-3′）；13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC182.0（C-4），167.1（C-2），163.1（C-7），161.4（C-9），143.7（C-5），118.0（C-6），115.8（C-10），112.5（C-3），101.7（C-8），66.4（C-2′），44.2（C-1′），23.5（C-3′），23.3（C-11）.［α］27D+57，以上數(shù)據(jù)與文獻［12］數(shù)據(jù)一致，故化合物2 被確定為2-（2'S-Hydroxypropyl）-5-methyl-7-hydroxychrom-one.

化合物3：分子式為C13H12O3，黃色油狀，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH6.84（1H，m，H-2′），6.68（1H，m，H-8），6.62（1H，m，H-6），6.23（1H，m，H-1′），5.99（1H，d，J=4.5 Hz，H-3），2.71（3H，s，H-11），1.97（3H，d，J=6.9 Hz，H-3′）；13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC182.3（C-4），163.3（C-7），162.1（C-2），160.9（C-9），143.7（C-5），137.4（C-2′），124.7（C-1′），118.0（C-6），116.0（C-10），110.0（C-3），101.7（C-8），23.1（C-11），18.6（C-3′）.以上數(shù)據(jù)和文獻［13］數(shù)據(jù)一致，故化合物3被確定為clapone.

化合物4：分子式為C16H12O6，黃色固體，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH8.33（1H，s，H-8），7.49（1H，s，H-5），7.14（1H，m，H-4），6.54（1H，m，H-2），5.20（1H，q，J=6.4 Hz，H-11），1.47（3H，d，J=6.4 Hz，H-12）；13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC187.5（C-9），183.8（C-10），166.4（C-3），166.1（C-1），160.9（C-6），141.1（C-7），136.8（C-4a），135.4（C-3b），127.0（C-8），126.4（C-8a），113.4（C-5），110.9（C-8b），108.9（C-4），65.8（C-11），23.7（C-12）.以上數(shù)據(jù)與文獻［14］數(shù)據(jù)一致，故化合物4被確定為ZSU-H85 A.

化合物5：分子式為C25H22O7，白色粉末，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH7.11（1H，t，J=7.9 Hz，H-12′），6.71（1H，d，J=7.9 Hz，H-13′），6.69（1H，d，J=7.1 Hz，H-11′），6.65（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.61（1H，s，H-6），6.11（1H，s，H-6′），5.97（1H，s，H-3），3.70（1H，m，H-2′），3.18（1H，dd，J=14.0，9.9 Hz，H-1′），2.88（1H，dd，J=14.0，6.1 Hz，H-1′），2.69（3H，s，H-11），2.10（3H，s，H-15′），1.39（3H，d，J=7.2 Hz，H-3′）；13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC182.1（C-4），169.2（C-2），169.1（C-7′），168.0（C-8′），163.0（C-7），161.5（C-9），159.2（C-5′），156.7（C-10′），143.5（C-5），139.6（C-14′），131.8（C-12′），122.3（C-13′），121.4（C-9′），117.9（C-6），115.7（C-10），114.2（C-11′），111.5（C-3），106.2（C-6′），105.5（C-4′），101.8（C-8），38.7（C-1′），29.4（C-2′），23.1（C-11），19.9（C-15′′），18.2（C-3′）.該化合物只存在C-2′這一個手性中心，而不能通過ROESY 圖譜確定其相對構型.化合物5 的旋光度（［α］25D-1.3）接近于0，表明該化合物可能為外消旋體，并通過手性柱分析拆分的方式證實了其為一對外消旋體.通過手性制備后，得到了旋光值為［α］25D+71.55（c0.07，MeOH）的（+）-5 和［α］25D-72.56（c0.07，MeOH）的（-）-5.如圖2 所示.并通過ECD 計算的方式，與實驗數(shù)據(jù)相比較，確定了（+）-5 的C-2′的絕對構型為S，（-）-5 的C-2′的絕對構型為R.將其命名為（±）-Ilyonectriachromone.

圖2 手性分析和制備化合物（±）-5的HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatogram for chiral analysis and preparation of compound（±）-5

化合物6：分子式為C28H46O5，白色粉末，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH5.27（1H，m，H-7），5.23（2H，m，H-22，23），3.97（1H，m，H-3），3.54（1H，dt，J=5.2，2.0 Hz，H-6），1.06（3H，s，H-9），1.04（3H，d，J=6.6 Hz，H-21），0.94（3H，d，J=6.8 Hz，H-28），0.87（3H，d，J=6.8 Hz，H-27），0.85（3H，d，J=6.8 Hz，H-28），0.64（3H，s，H-18）.13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC143.7（C-8），137.0（C-22），133.2（C-23），119.0（C-7），76.9（C-5），74.2（C-6），68.3（C-3），57.3（C-17），55.9（C-14），44.7（C-13），44.3（C-9），44.3（C-24），41.8（C-20），40.7（C-4），40.5（C-12），38.1（C-10），34.3（C-25），33.9（C-2），31.7（C-1），29.1（C-16），24.0（C-15），23.0（C-11），21.6（C-21），20.4（C-17），20.0（C-26），18.9（C-19），18.2（C-28），12.8（C-18）.以上數(shù)據(jù)與文獻［15］數(shù)據(jù)一致，故化合物6 被確定為（22E，24R）-7，22-dien-3β，5α，6β-ergotriol.

化合物7：分子式為C28H44O3，白色粉末，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH5.33（1H，dd，J=5.2，2.4 Hz，H-7），5.23（1H，m，H-23），5.21（1H，m，H-22），3.99（1H，m，H-3），3.65（1H，dd，J=5.2，2.4 Hz，H-6），2.50（1H，m，H-14），2.20（1H，dt，J=13.8，4.0 Hz，H-1a），2.11（1H，dd，J=13.6，11.4 Hz，H-4a），2.05（1H，m，H-20），1.89（1H，m，H-11a），1.87（1H，m，H-2a），1.85（1H，m，H-24），1.82（1H，m，H-12a），1.79（1H，m，H-16a），1.64（1H，m，H-4b），1.61（1H，m，H-12b），1.59（1H，m，H-11b），1.56（1H，m，H-15a），1.52（1H，m，H-2b），1.49（1H，m，H-15b），1.47（1H，m，H-25），1.37（1H，m，H-17），1.36（1H，m，H-1b），1.35（1H，m，H-16b），1.12（3H，s，H-19），1.04（3H，d，J=6.6 Hz，H-21），0.95（3H，d，J=6.8 Hz，H-28），0.87（3H，d，J=6.8 Hz，H-26），0.85（3H，d，J=6.8 Hz，H-27），0.66（3H，s，H-18）.13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC143.8（C-8），136.9（C-22），133.3（C-23），121.0（C-7），78.9（C-5），76.0（C-9），73.6（C-6），68.1（C-3），57.3（C-17），51.8（C-14），44.8（C-13），44.3（C-24），41.8（C-20），41.4（C-10），40.7（C-4），36.5（C-12），34.3（C-25），31.6（C-2），29.2（C-16），29.1（C-11），28.2（C-1），24.0（C-15），22.2（C-19），21.6（C-21），20.4（C-26），20.0（C-27），18.2（C-18），12.2（C-18）.以上數(shù)據(jù)和文獻［16］數(shù)據(jù)一致.故化合物7被確定為（24S）-5α，6α-epoxyergosta-7，22-dien-3β，9α-diol.

化合物8：分子式為C9H10O3，黃色油狀，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH7.07（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.72（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），3.65（3H，s，HOMe），3.52（3H，s，H-7）.13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δC174.6（C-8），157.5（C-4），131.3（C-2，6），126.3（C-1），116.3（C-3，5），52.4（C-OMe），40.9（C-7）.以上數(shù)據(jù)與文獻［17］數(shù)據(jù)一致，故化合物8 被確定為p-hydroxyphenylacetic acid methyl ester.

化合物9：分子式為C29H37O5N，白色粉末，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH7.27（2H，t，J=7.4 Hz，H-3′，5′），7.18（1H，t，J=7.4 Hz，H-4′），7.14（2H，d，J=7.4 Hz，H-2′，6′），6.93（1H，dd，J=15.7，4.4 Hz，H-21），5.83（1H，ddd，J=15.0，9.9，1.6 Hz，H-13），5.78（1H，dd，J=15.7，1.8，H-22），5.28（H1，s，H-12a），5.23（1H，m，H-14），5.09（1H，s，H-12b），4.44（1H，m，H-20），3.80（1H，d，J=11.0 Hz，H-7），3.39（1H，m，H-8），3.37（1H，m，H-3），3.21（1H，m，H-5），2.85（1H，dd，J=5.3，2.7 Hz，H-4），2.80（2H，m，H-10），2.09（1H，m，H-19a），1.91（1H，m，H-15a），1.72（1H，m，H-17a），1.66（1H，m，H-19b），1.56（1H，m，H-15b），1.45（1H，m，H-18a），1.28（1H，m，H-18b），1.22（1H，m，H-16），0.87（3H，d，J=6.6 Hz，H-24），0.85（3H，d，J=6.8 Hz，H-11），0.57（1H，m，H-17b）；13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δc173.9（C-1），166.4（C-23），154.7（C-21），151.3（C-6），138.2（C-1′），136.8（C-14），131.0（C-2′，6′），129.6（C-3′，5′），128.7（C-13），127.9（C-4′），119.5（C-22），114.3（C-12），85.4（C-9），71.4（C-7），71.1（C-20），54.7（C-3），49.8（C-8），49.0（C-4），44.0（C-10），43.2（C-19），36.5（C-17），35.4（C-15），34.5（C-16），32.8（C-5），21.4（C-18），20.7（C-24），14.1（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻［18］數(shù)據(jù)一致，故化合物9被確定為cytochalasin B.

化合物10：分子式為C17H12O4N2，黃色粉末，1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）：δH11.57（1H，s，9-NH），8.81（1H，s，H-4），8.39（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），7.81（1H，d，J=7.6 Hz，H-8），7.63（1H，t，J=7.6 Hz，H-7），7.42（1H，s，H-4′），7.33（1H，t，J=7.8 Hz，H-6），6.62（1H，s，H-3′），4.68（2H，s，H-2′）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）：δC167.7（C-3），157.2（C-2′），151.1（C-5′），141.5（C-8a），132.1（C-1），131.7（C-9a），129.9（C-3），128.8（C-7），122.0（C-5），121.1（C-4a，4b），120.5（C-6），115.5（C-4），112.8（C-8），111.0（C-4′），109.2（C-3′），56.0（C-2′）.以上數(shù)據(jù)與文獻［19］數(shù)據(jù)一致，故化合物10被確定為Flazin.

化合物11：分子式為C8H13ON，白色晶體，1H NMR（600 MHz，CD3OD）：δH7.21（1H，dd，J=15.3，10.7 Hz，H-3），6.24（1H，m，H-4），6.14（1H，dt，J=14.8，7.0 Hz，H-5），5.79（1H，d，J=15.3 Hz，H-2），2.17（2H，q，J=7.0 Hz，H-6），1.48（2H，m，H-7），0.94（3H，t，J=7.4 Hz，H-8）；13C NMR（150 MHz，CD3OD）：δc 171.9（C-1），146.1（C-3），144.9（C-5），130.0（C-4），121.6（C-2），36.0（C-6），23.1（C-7），14.0（C-8）.以上數(shù)據(jù)和文獻［20］數(shù)據(jù)一致，故化合物11被確定為2E，4E-octadienamide.

4 生物活性實驗

對化合物1～11均做了抗炎和抗菌活性的測定，其中化合物9 表現(xiàn)出良好的抗炎活性，其IC50值為9.47 μmol/L，略高于陽性對照藥pyrrolidinedithiocarbamate ammonium（IC50=23.08 μmol/L）.

5 結語

本文從白及內(nèi)生真菌中分離得到11 個單體化合物，包括5 個色原酮類化合物，1 個細胞松弛素類化合物，2 個甾體類和3 個其他類化合物，其中化合物1 和5 作為天然產(chǎn)物首次被報道.抗炎和抗菌活性測定結果表明，化合物9 有良好的抗炎活性，其IC50值為9.47 μmol/L.綜上所述，該研究為進一步挖掘白及內(nèi)生真菌發(fā)酵液中具有生物活性的次級代謝產(chǎn)物奠定良好的基礎，對天然產(chǎn)物的開發(fā)具有重要的意義.