砂濾模式下馬口魚消化道細菌的組成、分類與相關(guān)性

韓明明,詹 煒,黃福勇,李方興,樓 寶,*

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學院 水生生物研究所,浙江 杭州 310021; 2.武義縣心怡錦鯉家庭農(nóng)場, 浙江 武義 321200)

腸道是魚體內(nèi)集營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收、免疫、內(nèi)分泌于一體的重要場所,其所含的微生物因種類繁多、基因組成復雜而被稱為生物體的“第二基因組”[1-2],其中,細菌是魚腸道微生物的主要組分[3]。海水魚類腸道以革蘭氏陰性兼性厭氧菌為主,主要包括不動桿菌屬(Acinetobacter)、交替單胞菌屬(Alteromonas)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、噬纖維菌屬(Cytophaga)、微球菌屬(Micrococcus)、莫拉氏菌屬(Moraxella)、假單胞菌屬(Pseudomonas)和弧菌屬(Vibrio)[4-6]。淡水魚類腸道中除氣單胞菌屬、不動桿菌屬、假單胞菌屬外,腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、擬桿菌屬(Bacteroides)、梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)和梭桿菌屬(Fusobacterium)也是主要的優(yōu)勢菌屬[7-9]。依據(jù)特殊菌類對養(yǎng)殖魚類腸道的有益作用而篩選出的益生菌,如枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)和乳酸菌等,已經(jīng)成為魚類養(yǎng)殖中的重要添加劑[1,10]。

微生物在促進宿主魚類營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和調(diào)節(jié)魚類免疫系統(tǒng)方面具有重要作用。馮雪[11]以草魚(Ctenopharyngodonidellus)和銀鯽(Carassiusauratusgibelio)為試驗對象,發(fā)現(xiàn)其腸道內(nèi)的氣單胞菌屬、弧菌屬、芽孢桿菌屬(Bacillus)、假單胞菌屬細菌可分泌胞外消化酶,且分泌的胞外消化酶能夠促進兩種魚對餌料的消化吸收。除分泌消化酶外,魚類腸道菌群還可以合成多種維生素,例如:鯉魚(Cyprinuscarpio)腸道內(nèi)的細菌能合成維生素B12、維生素B1、生物素、泛酸等。攝食藻類的魚消化道內(nèi)存在木聚糖分解菌,攝食甲殼質(zhì)的魚類消化道內(nèi)存在甲殼質(zhì)分解菌[12]。Chen等[13]在對大口黑鱸(Micropterussalmoides)腸道微生物的研究中發(fā)現(xiàn),飼喂添加148 mg·kg-1維生素C的飼料,能夠提高大口黑鱸腸道微生物對維生素E的利用率,降低腸道內(nèi)的脂質(zhì)積累,從而保護其腸道內(nèi)的多不飽和脂肪酸免受過氧化,促進大口黑鱸的生長發(fā)育。

來自水環(huán)境和餌料中的微生物隨著鰓和口腔進入魚體,并與魚體發(fā)生適應性生理生化作用,最終定殖在魚類腸道中形成優(yōu)勢菌群[14]。這些附著在魚體表面或者定殖在腸道壁表面的優(yōu)勢微生物菌叢通過防止病原菌定殖和繁殖而起到物理屏障的作用[15]。Olsson等[16]通過試驗發(fā)現(xiàn),在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)腸道中定殖的鰻弧菌(Vibrioanguillarum)對肉食桿菌屬(Carnobacteriumsp.)菌株的生長起到了抑制作用。魚類腸道中的微生物菌群還可與腸黏膜免疫系統(tǒng)相互協(xié)作,刺激免疫信號通道、相關(guān)受體蛋白、非特異性因子表達,從而清除宿主病原體。張燕玉等[17]用海藻希瓦菌(Shewandlaalgae)感染半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)后發(fā)現(xiàn),后者腸道中的微生物菌群多樣性和菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,且腸道組織中與免疫功能相關(guān)的基因HSPA1A和HINTI表達紊亂,說明腸道微生物菌群參與了機體的免疫應答和疾病發(fā)生過程。遲騁[18]從鯉魚(Cyprinuscarpio)腸道中分離出360株細菌,并利用其中的優(yōu)勢菌株BA-1、BA-2和BA-3進行注射攻毒試驗,結(jié)果顯示,BA-1和BA-3可以使鯉魚的先天免疫指標,以及免疫相關(guān)基因的相對表達量顯著升高,并且注射過這2株優(yōu)勢菌株的鯉魚,即使被病原菌——嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)感染,其生存率也顯著提高,說明這兩株優(yōu)勢菌對鯉魚的先天免疫應答產(chǎn)生了積極的影響。

馬口魚(Opsariichthysbidens)屬于魚丹亞科馬口魚屬,在我國,除青藏高原、新疆和臺灣等地外,南至海南島、北至黑龍江的東部江河中均有分布,其中,在浙江省內(nèi)各水系的中上游和大小支流中都有分布。馬口魚的繁殖力強,生長速度快,肉味鮮美,深受廣大消費者喜愛。但由于近年來捕撈強度過大和生態(tài)環(huán)境改變,甌江流域的野生馬口魚資源已十分稀缺[19]。馬口魚是一種重要的溪流性經(jīng)濟養(yǎng)殖物種,但是在本研究檢索范圍內(nèi),關(guān)于其腸道微生物的研究、利用情況尚未見報道。為促進馬口魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,本研究擬從其消化道微生物組成、環(huán)境來源和微生物之間的相關(guān)性等角度進行分析,以明確馬口魚消化道重要微生物的菌屬組成與獲取途徑,為生產(chǎn)中添加適于馬口魚的微生態(tài)制劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

本試驗所用的馬口魚取自武義縣心怡錦鯉家庭農(nóng)場,養(yǎng)殖水溫(28.7±0.5)℃,溶解氧11.38 mg·L-1,鹽度0.34‰,pH值6.95±0.05。養(yǎng)殖桶的直徑1.50 m,高1.30 m,水深0.90 m。每個養(yǎng)殖桶都配有一個獨立的砂濾系統(tǒng),并與之組成一個密閉的循環(huán)系統(tǒng)。砂濾管道直徑0.67 m,高度1.80 m,管內(nèi)裝有特制濾砂,并保持砂體高度1.40 m。養(yǎng)殖過程中投喂商品飼料,每天投喂2次。在砂濾系統(tǒng)的底部泵入空氣,使得砂子保持翻轉(zhuǎn),養(yǎng)殖桶中的水體經(jīng)底部出水口進入砂濾系統(tǒng),過濾后經(jīng)進水口重新進入養(yǎng)殖桶。完整的養(yǎng)殖用水循環(huán)如圖1所示。

圖1 養(yǎng)殖設(shè)施中的砂濾循環(huán)系統(tǒng)示意圖Fig.1 Diagram of sand filtration circulation system in aquaculture facilities

1.2 取樣

隨機撈取9尾馬口魚(圖2),經(jīng)測量,其全長在9.0～11.6 cm。麻醉后,用無菌的解剖剪剖開其腹部,剪取包含胃部的完整消化道,經(jīng)無菌的1×PBS緩沖液沖洗后,將每根消化道放入單獨的凍存管中。同時,對濾砂和商品飼料進行取樣,一并保存在液氮中。

圖2 試驗用馬口魚的照片F(xiàn)ig.2 Photo of O. bidens samples used in this experiment

1.3 消化道微生物分析

1.3.1 DNA提取

自液氮中取出凍存的消化道、濾砂和飼料樣品,經(jīng)1×PBS緩沖液沖洗后,用無菌剪刀將消化道剪成小段,并放置在2 mL離心管中,加入研磨珠,在JXFSTPRP-24L全自動樣品快速研磨儀(上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司)上研磨。用同樣的方法研磨飼料。收集洗過砂子的PBS溶液。分別取30 mg經(jīng)過研磨后的消化道樣品、飼料樣品和200 μL沖洗砂子的PBS溶液,各加入100 μL裂解液,后續(xù)按照MagPure Soil DNA LQ Kit試劑盒(廣州美基生物科技有限公司)說明書上的步驟提取DNA。

1.3.2 PCR擴增與純化

以提取的基因組DNA為模板進行第1輪PCR,首輪PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測和磁珠純化(所用試劑盒為MagPure Soil DNA Kit,廣州美基生物科技有限公司出品)后作為模板(模板量50 ng)進行第2輪PCR,產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測和磁珠純化后,使用Qubit法檢測DNA的濃度。之后,根據(jù)PCR產(chǎn)物的質(zhì)量濃度進行等量混樣,用于測序。

第1輪PCR引物選用的是位于16S rRNA V3～V4區(qū)的特異引物343F(5’-TACGGRAGGCAGCAG-3’)和798R(5’-AGGGTATCTAATCCT-3’)[20],第2輪PCR引物選用的是Adapter I5(5’-TCGTCGGCAGCGTC-3’)和Adapter I7(5’-GTCTCGTGGGCTCGG-3’)。PCR反應體系均為30 μL,均包含2×Gflex PCR Buffer(緩沖液)15 μL、5 pmol·μL-1引物各1 μL、Tks Gflex DNA Polymerase(1.25 U·μL-1,日本Takara)0.6 μL和適量模板,不足部分用雙蒸水補足。反應程序如下:94 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,56 ℃ 30 s, 72 ℃ 20 s,循環(huán);72 ℃ 5 min。其中,第1、2輪PCR的循環(huán)數(shù)分別為26和7。

1.3.3 測序、建庫與分析

將樣品送上海歐易生物醫(yī)學科技有限公司,于Illumina NovaSeq 6000系統(tǒng)平臺上測序。使用Trimmomatic v0.40軟件對測序獲得的FASTQ格式的原始雙端序列進行去雜,去除含有模糊堿基(ambiguous)、單堿基高重復區(qū)(homologous)的序列和長度過短的序列,去掉含有N堿基的序列,保留堿基質(zhì)量分數(shù)Q20不低于75%的序列。測序數(shù)據(jù)經(jīng)過預處理生成優(yōu)質(zhì)序列之后,采用VSEARCH v2.8.1軟件將序列相似度≥97%的劃為一個OTU(分類操作單元)[21]。使用QIIME v2020.11[22]軟件包挑選出各個OTU的代表序列,并使用 RDP classifier v2.10.2軟件將所有代表序列在SILVA數(shù)據(jù)庫(version 132)中進行比對注釋[23],保留置信區(qū)間大于0.7的注釋結(jié)果。對獲得的ITS(內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)),在UNITE數(shù)據(jù)庫中進行比對。使用BLAST[24]程序?qū)TU序列進行物種比對注釋。采用斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)(Spearman correlation coefficient)對消化道主要微生物菌屬開展相關(guān)性分析,按照相關(guān)系數(shù)絕對值大于0.8,且差異顯著(P值分別小于0.05、0.01、0.001)的標準進行統(tǒng)計。

2 結(jié)果與分析

2.1 細菌群落組成及其分布

馬口魚消化道中相對豐度較高的菌屬(表1)主要有支原體屬(Mycoplasma,77.50%)、鯨桿菌屬(Cetobacterium,2.47%)、Muribaculaceae(1.97%)、普雷沃氏菌屬(Prevotella,1.35%)、擬桿菌屬(Bacteroides,1.10%)、奈瑟菌屬(Neisseria,0.89%)、鏈球菌屬(Streptococcus,0.64%)、乳桿菌屬(Lactobacillus,0.46%)、擬普雷沃菌屬(Alloprevotella,0.31%)、毛螺菌科NK4A136組(Lachnospiraceae_NK4A136_group,0.30%)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas,0.30%)、糞桿菌屬(Faecalibacterium,0.29%)、埃希氏-志賀氏菌屬(Escherichia-Shigella,0.24%)、嗜血桿菌屬(Haemophilus,0.14%)、嚴格梭菌屬(Clostridium_sensu_stricto_1,0.13%)和密螺旋體屬(Treponema,0.13%)。除上述菌屬外,梭桿菌屬(Fusobacterium,0.08%)、硝化螺旋菌屬(Nitrospira,0.07%)、勞特普雷氏菌屬(Lautropia,0.07%)、Haliangium(0.04%)、放線菌屬(Actinomyces,0.03%)、新鞘氨醇菌屬(Novosphingobium,0.03%)、黃桿菌屬(Flavobacterium,0.02%)、紅桿菌屬(Rhodobacter,0.01%)和SWB02(0.01%)也是馬口魚消化道中的常見菌屬。

表1 馬口魚消化道中主要細菌的菌屬及其在飼料、水體和濾砂表面的相對豐度

在環(huán)境分布上,上述菌屬中的大多數(shù)在飼料中的相對豐度高于水體和濾砂表面,如Muribaculaceae、普雷沃氏菌屬、擬桿菌屬、奈瑟菌屬、鏈球菌屬、乳桿菌屬、擬普雷沃菌屬、毛螺菌科NK4A136組、鞘氨醇單胞菌屬、糞桿菌屬、埃希氏-志賀氏菌屬、嗜血桿菌屬、嚴格梭菌屬、密螺旋體屬、梭桿菌屬等。硝化螺旋菌屬、黃桿菌屬、紅桿菌屬、SWB02、支原體屬和鯨桿菌屬在水體中的相對豐度要高于飼料和濾砂表面。Haliangium和新鞘氨醇菌屬在濾砂表面的相對豐度最高。

對前述馬口魚消化道中的主要細菌在門、綱、目、科水平上的分布情況進行分析(圖3、圖4)。在門水平上,芽孢桿菌門(Bacillota)占79.32%,擬桿菌門(Bacteroidota)占4.75%,梭桿菌門(Fusobacteriota)占2.55%,變形菌門(Proteobacteria)占1.69%,螺旋體門(Spirochaetota)占0.13%,硝化螺菌門(Nitrospirota)占0.07%,黏球菌門(Myxococcota)占0.04%,放線菌門(Actinomycetota)占0.03%。其中,芽孢桿菌門主要包含梭菌綱(Clostridia)和芽孢桿菌綱(Bacilli)中的毛螺菌科(Lachnospiraceae)、梭菌科(Clostridaceae)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、支原體科(Mycoplasmataceae)、鏈球菌科(Streptococcaceae)和乳桿菌科(Lactobacillaceae)。在綱水平上,芽孢桿菌綱在馬口魚消化道微生物中的相對豐度最高,為78.60%;在科水平上,以支原體科的相對豐度最高,為77.50%。

圖3 馬口魚消化道主要細菌在門、綱、目、科分類水平上的分類Fig.3 Classificatin of dominant bacteria in the digestive tract of O.bidens at taxonomic category of phylum, class, order and family

圖4 馬口魚消化道主要細菌在門、綱、目、科水平上的相對豐度Fig.4 Relative abundance of dominant bacteria in the digestive tract of O.bidens at taxonomic category of phylum, class, order and family

擬桿菌門主要包括擬桿菌綱(Bacteroidia)的擬桿菌目(Bacteroidales)和黃桿菌綱(Flavobacteria)的黃桿菌目(Flavobacteriales),兩個菌目的相對豐度分別為4.73%和0.02%。擬桿菌目主要包括Muribaculaceae、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)和擬桿菌科(Bacteroidaceae)共3個菌科,其相對豐度分別為1.97%、1.66%和1.10%。

變形菌門由阿爾法變形菌綱(Alphaproteobacteria)、貝塔變形菌綱(Betaproteobacteria)和伽馬變形菌綱(Gammaproteobacteria)3個菌綱組成,包含鞘氨醇單胞菌目(Sphingomonadales)、紅桿菌目(Rhodobacterales)、柄桿菌目(Caulobacterales)、奈瑟菌目(Neisseriaceae)、伯克氏菌目(Burkholderiales)、腸桿菌目(Enterobacteriales)、巴斯德氏菌目(Pasteurellales)7個菌目,是本研究中所含菌屬最豐富的菌門。

2.2 細菌間的相關(guān)性分析

馬口魚消化道中的主要細菌菌屬形成了兩大關(guān)系網(wǎng)絡(luò)(圖5、圖6)。其中一個是由17種菌屬組成的密集的相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)(簡稱為密集網(wǎng)絡(luò)),另一個由7種菌屬組成的較為稀疏的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)(簡稱為稀疏網(wǎng)絡(luò))。

*表示P<0.05,**表示P<0.01,***表示P<0.001。* indicates P<0.05; ** indicates P<0.01; *** indicates P<0.001.圖5 馬口魚消化道主要細菌菌屬的相關(guān)性Fig.5 Correlations of dominant bacteria genus in the digestive tract of O.bidens

組成密集網(wǎng)絡(luò)的菌屬有Muribaculaceae、普雷沃氏菌屬、擬桿菌屬、奈瑟菌屬、鏈球菌屬、乳桿菌屬、擬普雷沃菌屬、毛螺菌科NK4A136組、鞘氨醇單胞菌屬、糞桿菌屬、埃希氏-志賀氏菌屬、嗜血桿菌屬、嚴格梭菌屬、密螺旋體屬、梭桿菌屬、勞特普雷氏菌屬和放線菌屬。在上述17種菌屬中,以Muribaculaceae為例,該菌屬與擬桿菌屬(P<0.01)、鞘氨醇單胞菌屬(P<0.001)、密螺旋體屬(P<0.001)、奈瑟菌屬(P<0.001)、乳桿菌屬(P<0.001)、鏈球菌屬(P<0.001)、糞桿菌屬(P<0.05)、埃希氏-志賀氏菌屬(P<0.001)、擬普雷沃菌屬(P<0.01)、勞特普雷氏菌屬(P<0.001)共10種菌屬的相對豐度正相關(guān)。與Muribaculaceae類似,普雷沃氏菌屬與嚴格梭菌屬(P<0.001)、放線菌屬(P<0.001)、鏈球菌屬(P<0.01)、奈瑟菌屬(P<0.05)、勞特普雷氏菌屬(P<0.01)、嗜血桿菌屬(P<0.001)、梭桿菌屬(P<0.001)、擬普雷沃菌屬(P<0.001)、埃希氏-志賀氏菌屬(P<0.05)共9種菌屬的相對豐度正相關(guān)。同樣地,分別有14種菌屬與奈瑟菌屬、勞特普雷氏菌屬的相對豐度正相關(guān)(至少在P<0.05水平上顯著,下同),有13種菌屬與鏈球菌屬的相對豐度正相關(guān),有9種菌屬與乳桿菌屬的相對豐度正相關(guān),有11種菌屬與擬普雷沃氏菌屬的相對豐度正相關(guān),有8種菌屬與嚴格梭菌屬的相對豐度正相關(guān),有10種菌屬與鞘氨醇單胞菌屬的相對豐度正相關(guān)。有2種菌屬與毛螺菌科NK4A136組的相對豐度正相關(guān),分別為糞桿菌屬和擬桿菌屬。

稀疏網(wǎng)絡(luò)由黃桿菌屬、新鞘氨醇菌屬、Haliangium、紅桿菌屬、SWB02、硝化螺旋菌屬和支原體屬這7種菌屬組成。有4～5種菌屬與黃桿菌屬、SWB02、新鞘氨醇菌屬、Haliangium、硝化螺旋菌屬、紅桿菌屬的相對豐度至少在P<0.05水平上顯著正相關(guān)。支原體屬分別與黃桿菌屬和Haliangium屬的相對豐度至少在P<0.05水平上表現(xiàn)為顯著負相關(guān),與其他菌屬無顯著相關(guān)性。

鯨桿菌屬的相對豐度與其他菌屬的相關(guān)性均未達到P<0.05的顯著性水平。

3 討論

一般來說,變形菌門、梭桿菌門、厚壁菌門和擬桿菌門構(gòu)成魚類的“腸道核心菌群”,但是各菌門在不同物種、不同階段和不同生長環(huán)境中所占的比例不盡相同[19]。經(jīng)過分析,我們發(fā)現(xiàn),馬口魚消化道中的主要菌門有芽孢桿菌門(79.32%)、擬桿菌門(4.75%)、梭桿菌門(2.55%)、變形菌門(1.69%)等。其他淡水魚,如匙吻鱘(Polyodonspathula),其腸道微生物中梭桿菌門占62%、變形菌門占16%、擬桿菌門占13%[8]。海水魚類,如大菱鲆(Scophthalmusmaximus),其腸道中變形菌門、厚壁菌門和放線菌門的占比分別為82.0%、15.6%和2.4%[25]。此外,腸道中各菌門的豐度比重還與魚體健康狀況密切相關(guān)。魏娜[26]對健康和患病大黃魚(Larimichthyscrocea)的腸道微生物進行分析,發(fā)現(xiàn)厚壁菌門、擬桿菌門和梭桿菌門是健康魚的優(yōu)勢腸道菌群,而患病魚中的優(yōu)勢腸道菌群則為厚壁菌門和梭桿菌門。馬口魚中上述各菌門與其健康狀況的聯(lián)系還需要進一步明確。

在本研究中,我們在馬口魚消化道中發(fā)現(xiàn)了數(shù)類益生菌或者潛在益生菌,如鯨桿菌屬、乳桿菌屬、埃希氏-志賀氏菌屬、Muribaculaceae和鏈球菌屬等,這些菌屬在后續(xù)開發(fā)馬口魚專用腸道益生菌制劑方面具有重要意義。鯨桿菌屬具有發(fā)酵多肽和碳水化合物的能力,可以代謝產(chǎn)生維生素B12,是大黃魚腸道中一類重要的潛在的益生菌群[27-28]。但在馬口魚中,該菌屬的相對豐度水平與其他菌屬不具有相關(guān)性,我們推測該菌屬在馬口魚消化道微環(huán)境中或許屬于重要核心菌群,故而其在消化道中的定殖豐度不受其他微生物影響。Muribaculaceae屬于擬桿菌門的擬桿菌目,在腸道的能量代謝等方面具有重要作用,是一種重要的有益菌。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),Muribaculaceae的相對豐度與擬桿菌屬、鞘氨醇單胞菌屬、密螺旋體屬、奈瑟菌屬、乳桿菌屬、鏈球菌屬、糞桿菌屬、埃希氏-志賀氏菌屬、擬普雷沃菌屬、勞特普雷氏菌屬共10種菌屬呈顯著正相關(guān)。在上述10種菌屬中,包含多種益生菌屬,如乳桿菌屬、鏈球菌屬、埃希氏-志賀氏菌屬。同時,這3種菌屬之間同樣存在顯著相關(guān)性。在高等脊椎動物中,單一益生菌的作用可能并不明顯,但是當多種益生菌以一定的配比組合在一起,卻能夠顯著提高宿主的健康狀態(tài)[29]。馬口魚中多種益生菌之間的高度相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)從一定程度上印證了上述觀點,為后續(xù)馬口魚腸道益生菌制劑開發(fā)中利用多菌協(xié)作來提高制劑效應提供了重要參考依據(jù),但其具體作用機制目前還不清楚。

馬口魚消化道中還存在一個由黃桿菌屬、新鞘氨醇菌屬、Haliangium、紅桿菌屬、SWB02、硝化螺旋菌屬和支原體屬組成的特殊網(wǎng)絡(luò)。此次取樣的馬口魚腸道中支原體屬的相對豐度(77.50%)遠高于其他菌屬,相關(guān)性分析結(jié)果顯示,該菌屬只與黃桿菌屬和Haliangium的相對豐度呈顯著負相關(guān),與其他菌屬無顯著相關(guān)性,這說明黃桿菌屬和Haliangium與支原體屬可能存在競爭吸附的關(guān)系。支原體屬不含有細胞壁,因基因組過小而使其不能靠自身完成許多代謝功能,故而營專性共生或寄生,廣泛存在于植物和包括人類在內(nèi)的動物中[30]。支原體屬的許多成員是條件致病菌,雖然許多支原體屬成員存在于宿主體內(nèi),但并未發(fā)現(xiàn)其對宿主的健康產(chǎn)生不良的影響[31]。如前人研究發(fā)現(xiàn),支原體屬在中等大小的大黃魚(體重約304 g)和大菱鲆腸道中屬于優(yōu)勢菌屬[25-26]。支原體屬的高豐度水平對魚體健康的潛在影響還需要進一步研究。在該稀疏網(wǎng)絡(luò)中同樣存在益生菌。遲騁[18]在研究鯉魚腸道中優(yōu)勢菌對其免疫性能的影響時發(fā)現(xiàn),黃桿菌不論是其活的菌體還是胞外代謝產(chǎn)物均能顯著提高魚體對嗜水氣單胞菌的抗病力,說明黃桿菌具有抗菌能力,在生產(chǎn)上是一種有效的益生菌。

本研究發(fā)現(xiàn),飼料是馬口魚消化道微生物的主要來源,其次是養(yǎng)殖水體。另外,消化道和飼料中的微生物均能在濾砂表面檢測到,尤其是嗜血桿菌屬、Haliangium和新鞘氨醇菌屬等在濾砂表面的相對豐度高于水體,說明該養(yǎng)殖系統(tǒng)中的濾砂對水體有一定的過濾作用,可基本滿足該系統(tǒng)下馬口魚健康養(yǎng)殖的需要。