ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A5在胰腺癌中的預(yù)后意義的生物信息學(xué)分析與驗(yàn)證

費(fèi)浩然，孫丹，仲成成，楊海深，司鑫鑫，胡偉

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧 錦州 121001；2.江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院 肝膽外科，江蘇 連云港 222001；3.江蘇海洋大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 連云港 222005）

胰腺癌是一種具有高度侵襲性且致命性的消化系統(tǒng)惡性腫瘤[1]，總體5年生存率約為12%[2]。胰腺癌在全球男性惡性腫瘤發(fā)病率中排名第7，女性中排名第11，占總體惡性腫瘤相關(guān)死亡的第4位，在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率和病死率均呈明顯上升趨勢(shì)[3]。由于缺乏明顯的特異性癥狀，大多數(shù)胰腺癌患者在被確診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)了血管播散或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[4]，即使15%～20%的患者在確診后有接受手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，但最終約80%的患者術(shù)后會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)和（或）轉(zhuǎn)移，總體的預(yù)后極差[5]。因此，需要對(duì)胰腺癌有新的認(rèn)識(shí)，尋找新的生物學(xué)標(biāo)志物作為臨床研究領(lǐng)域的預(yù)后指標(biāo)，從而探索個(gè)體化精準(zhǔn)治療的方法，以進(jìn)一步提高胰腺癌的診治效果。

ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族由48個(gè)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白質(zhì)組成，廣泛分布在真核生物和原核生物中，主要與物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)[6]。ABC蛋白水解ATP所獲得的能量被用來(lái)克服濃度梯度并將底物運(yùn)輸?shù)絻?nèi)外膜，ABC蛋白促進(jìn)包括代謝物、氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)、固醇和脂類、有機(jī)和無(wú)機(jī)離子、糖、金屬和藥物等物質(zhì)穿過(guò)細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)[7]。已有研究提出，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A5（ABCA5）在結(jié)直腸癌，乳腺癌中低表達(dá)[8-9]，在結(jié)直腸癌和肺腺癌、卵巢癌中的低表達(dá)與不良預(yù)后有關(guān)[10-11]，同時(shí)它可作為前列腺癌的癌前病變—前列腺上皮內(nèi)瘤變的診斷標(biāo)志物[12]。目前ABCA5在胰腺癌中的表達(dá)和具體作用機(jī)制尚不清楚。

本研究通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)，研究ABCA5在胰腺癌中的表達(dá)，及其在胰腺癌患者預(yù)后中的意義，并通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ABCA5在胰腺癌組織中的表達(dá)情況，分析其與胰腺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，同時(shí)對(duì)ABCA5在胰腺癌中的可能作用機(jī)制進(jìn)行探索分析，以期為胰腺癌的預(yù)后判定和治療提供潛在的新的分子標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)集下載及整理

胰腺癌患者的基因表達(dá)信息來(lái)源于TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的胰腺癌患者的數(shù)據(jù)。GEO數(shù)據(jù)庫(kù)包括GSE15471和GSE62452的數(shù)據(jù)，分析具有臨床預(yù)后資料的數(shù)據(jù)集GSE62452。從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中下載患者的基因表達(dá)信息和臨床信息。去除沒(méi)有足夠臨床或（和）生存資料的樣本。

1.2 病例資料

選取采用的胰腺癌組織標(biāo)本為江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院中2019年2月—2022年4月經(jīng)病理確診為胰腺癌的65例患者的組織標(biāo)本。臨床病理資料包括年齡、性別、淋巴結(jié)分期、臨床分期、組織分化、神經(jīng)侵犯情況等。胰腺癌臨床分期按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）第8版分期標(biāo)準(zhǔn)。所有入選的患者術(shù)前均未接受任何針對(duì)腫瘤的治療。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：KY20190924002）。

1.3 免疫組織化學(xué)檢查和評(píng)分

將手術(shù)切除的胰腺癌與癌旁組織標(biāo)本經(jīng)過(guò)4%多聚甲醛固定包埋在石蠟后切成4 μm厚的切片。將切片在二甲苯中脫石蠟并在梯度乙醇中進(jìn)行再水合。用3%過(guò)氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，并用3%山羊血清阻斷非特異性結(jié)合。樣品與抗ABCA5抗體（Bioss有限公司，BS-7940R，1∶200稀釋），一起在4 ℃下孵育過(guò)夜。將磷酸鹽緩沖鹽水孵育的切片設(shè)定為陰性對(duì)照。將切片與過(guò)氧化物酶綴合的二抗一起溫育。二氨基聯(lián)苯胺用作色原體，蘇木素復(fù)染后，切片脫水、中性膠封閉并用蓋玻片覆蓋，再放入顯微鏡下觀察。由2位不了解臨床信息的病理醫(yī)師對(duì)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。免疫組化評(píng)分根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比率：＜25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；將ABCA5表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞比率和染色強(qiáng)度相乘，最終得分低于5分的定義為陰性低表達(dá)，而得分高于5分的定義為陽(yáng)性高表達(dá)[13]。

1.4 免疫浸潤(rùn)分析

通過(guò)TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cistrome.shinyapps.io/timer）分析ABCA5的表達(dá)水平與8種免疫細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、M0型巨噬細(xì)胞、M1型巨噬細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞、NK細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）浸潤(rùn)水平的相關(guān)性。

1.5 構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）、基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)

使用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cn.string-db.org）中蛋白質(zhì)互作信息對(duì)ABCA5構(gòu)建蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）。使用Gene MANIA數(shù)據(jù)庫(kù)（http://genemania.org）繪制 ABCA5的基因-基因互作關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6 基因富集分析

使用GSEA 4.2.2軟件對(duì)TCGA數(shù)據(jù)集、GSE62452數(shù)據(jù)集中的ABCA5進(jìn)行基因富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）。KEGG富集分析使用的注釋基因集為c2.cp.kegg.v2023.1.Hs.symbols.gmt。P＜0.05且偽發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate，F(xiàn)DR）＜25%認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.7 藥物治療結(jié)果預(yù)測(cè)

根據(jù)ABCA5的表達(dá)預(yù)測(cè)藥物治療結(jié)果，基于抗癌藥物敏感性基因組學(xué)（https://www.cancerrxgene.org），即Genomics of Drug Sensitivity in Cancer（GDSC），使用R包“oncoPredict”對(duì)奧拉帕尼、吉西他濱、伊立替康等藥物進(jìn)行預(yù)測(cè)。從GDSC中下載藥物的半最大抑制濃度（IC50值）的自然對(duì)數(shù)。箱形圖由R軟件包“ggplot2”繪制。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 25.0軟件和R軟件。使用R語(yǔ)言中的“survival”包取最佳截?cái)嘀祬^(qū)分高低表達(dá)組，并繪制Kaplan-Meier生存率曲線。采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析基因間的相關(guān)性，0.1≤|r|≤1.0時(shí)定義為存在相關(guān)；臨床病理特征資料表采用χ2檢驗(yàn)，使用單因素和多因素Cox回歸分析比較ABCA5對(duì)預(yù)后的影響，計(jì)算95%置信區(qū)間（CI）的危險(xiǎn)比（HR）和P值。有意義的單因素被納入多因素分析中，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ABCA5在胰腺癌組織中低表達(dá)

通過(guò)對(duì)TCGA和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的癌組織與正常組織中的ABCA5表達(dá)水平進(jìn)行分析，利用GEPIA2在線網(wǎng)站分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胰腺癌患者組織與GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)中正常胰腺組織ABCA5基因表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)在GSE15471、GSE62452和TCGA數(shù)據(jù)集中與正常組織相比ABCA5在癌組織中呈低表達(dá)（均P＜0.05）（圖1A-C）。通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)我院65例胰腺癌組織和癌旁組織中ABCA5的表達(dá)，結(jié)果顯示，蛋白陽(yáng)性顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)中。ABCA5蛋白在胰腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為38.46%（25/65）；而在癌旁組織中ABCA5陽(yáng)性表達(dá)率為61.53%（40/65），胰腺癌組織較癌旁組織表達(dá)同樣明顯降低 （P＜0.001）（圖1D-H）。

圖1 ABCA5在胰腺癌組織與正常組織的表達(dá)情況 A：TCGA；B：GSE62452；C：GSE15471；D：65例臨床樣本；E-H：免疫組化檢測(cè)ABCA5的表達(dá)Figure 1 Expression of ABCA5 in pancreatic cancer and normal tissues A: TCGA; B: GSE62452; C: GSE15471; D: Clinical samples of 65 cases; E-H: Immunohistochemical staining for ABCA5 expression

2.2 ABCA5的表達(dá)與胰腺癌患者的生存關(guān)系

為了進(jìn)一步確定ABCA5的表達(dá)與胰腺癌患者的預(yù)后關(guān)系，選取具有患者臨床預(yù)后資料的GSE62452和TCGA數(shù)據(jù)集，繪制Kaplan-Meier生存率曲線。結(jié)果顯示，在TCGA和GSE62452數(shù)據(jù)集中，低表達(dá)患者與不良的預(yù)后明顯有關(guān)（均P＜0.05）。同樣，在我院65例臨床樣本中，通過(guò)免疫組化標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分法區(qū)分高低表達(dá)組，低表達(dá)組患者的預(yù)后明顯差于高表達(dá)組患者（P=0.002 6）（圖2A-C）。

圖2 ABCA5表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 A：TCGA；B：GSE62452；C：65例臨床樣本Figure 2 The relationship between ABCA5 expression and prognosis A: TCGA; B: GSE62452; C: Clinical samples of 65 cases

2.3 ABCA5與胰腺癌患者的預(yù)后分析和臨床病理特征分析

通過(guò)對(duì)TCGA、GSE62452及我院65例臨床病例中的臨床病理特征進(jìn)行單因素與多因素Cox分析，單因素Cox分析結(jié)果顯示，在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中，ABCA5的表達(dá)、腫瘤分期和腫瘤分級(jí)與胰腺癌患者預(yù)后相關(guān)（P＜0.05）；在GSE62452中，ABCA5的表達(dá)和腫瘤分級(jí)與胰腺癌患者預(yù)后有關(guān)（均P＜0.05）。多因素Cox分析顯示，在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中，ABCA5的表達(dá)和腫瘤分期是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（P＜0.05），在GSE62452中，ABCA5的表達(dá)和腫瘤分級(jí)是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（均P＜0.05）。同樣，在我院65例臨床病例中，單因素Cox分析結(jié)果顯示，ABCA5的表達(dá)、腫瘤分期、淋巴結(jié)分期和組織分化與患者預(yù)后有關(guān)，多因素Cox分析結(jié)果顯示，ABCA5的表達(dá)和腫瘤分期是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（均P＜0.05）（表1-3）。此外，通過(guò)χ2檢驗(yàn)分析ABCA5的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果提示，ABCA5表達(dá)與組織分化程度和腫瘤分期相關(guān)（均P＜0.05），與性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、神經(jīng)浸潤(rùn)等無(wú)關(guān)（均P＞0.05）（表4）。

表1 TCGA數(shù)據(jù)單多因素Cox回歸分析Table 1 Univariate and multivariate Cox regression analysis of TCGA data

表2 GSE62452數(shù)據(jù)單多因素Cox回歸分析Table 2 Univariate and multivariate Cox regression analysis of GSE62452 data

表3 65例臨床數(shù)據(jù)單多因素Cox回歸分析Table 3 Univariate and multivariate Cox regression analysis of clinical samples of 65 cases data

表4 ABCA5表達(dá)與胰腺癌患者的臨床病理特征關(guān)系[n（%）]Table 4 Relationship between ABCA5 expression and clinical characteristics of patients with pancreatic cancer [n (%)]

2.4 ABCA5與免疫浸潤(rùn)細(xì)胞的相關(guān)性

既往有研究[14]發(fā)現(xiàn)ABC家族與腫瘤免疫微環(huán)境密切相關(guān)。ABCA5與腫瘤免疫相關(guān)性如何仍不清楚，使用TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，ABCA5與7種免疫細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、M0型巨噬細(xì)胞、M1型巨噬細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞、NK細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）密切相關(guān)。此外，盡管ABCA5與M2型巨噬細(xì)胞存在相關(guān)性，但相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與CD4+T細(xì)胞（r=0.463，P=1.66e-10）、CD8+T細(xì)胞（r=0.328，P=1.13e-05）、NK細(xì)胞（r=0.44，P=1.5e-09）、中性粒細(xì)胞（r=0.414，P=1.6e-08）和M1型巨噬細(xì)胞（r=0.224，P=3.2e-03）的浸潤(rùn)水平呈正相關(guān)，而與M0型巨噬細(xì)胞（r=-0.275，P=2.57e-04）、M2型巨噬細(xì)胞（r=-0.101，P=1.88e-01）和髓源性抑制細(xì)胞（r=-0.388，P=1.45e-07）的浸潤(rùn)水平呈負(fù)相關(guān)（圖3）。

圖3 ABCA5與免疫浸潤(rùn)細(xì)胞 A：CD4+T細(xì)胞；B：CD8+T細(xì)胞；C：NK細(xì)胞；D：中性粒細(xì)胞；E：髓源性抑制細(xì)胞；F：M0型巨噬細(xì)胞；G：M1型巨噬細(xì)胞；H：M2型巨噬細(xì)胞Figure 3 ABCA5 and immune cell infiltration A: CD4+ T cells; B: CD8+ T cells; C: NK cells; D: Neutrophils; E: Myeloid derived suppressor cells; F: M0 macrophages; G: M1 macrophages; H: M2 macrophages

2.5 ABCA5的蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)

構(gòu)建PPI，與ABCA5有關(guān)的互作蛋白有14個(gè)，分別是：ABCA13、ABCD4、ABCF1、ABCF3、CCDC137、CCDC3、CHD7、ELP6、FAM26E、MAP2K6、PAH、PLXNA4、TMEM163，TRAPPC1（圖4A）。構(gòu)建基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)，與 ABCA5相關(guān)互作基因有20個(gè)，即ABCA10、ABCD3、ABCG1、ARFGAP3、CLDN12、DMXL1、DNAJB9、DOP1A、GALT、HSPA4L、MAP2K6、PCSK9、RASGRP3、RUFY3、SARAF、SGK3、SLC25A16、STXBP3、TMEM59、WWC2（圖4B）。

2.6 ABCA5在胰腺癌中的基因集富集分析

通過(guò)使用GSEA4.2.2軟件對(duì)在TCGA數(shù)據(jù)集和GSE62452數(shù)據(jù)集中的ABCA5進(jìn)行基因富集分析，了解其在胰腺癌患者中的基因通路富集情況，結(jié)果顯示在ABCA5低表達(dá)樣本中均富集到細(xì)胞周期（P＜0.05，F(xiàn)DR＜25%）（圖5）。

2.7 ABCA5與細(xì)胞周期

通過(guò)對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GSE62452數(shù)據(jù)集中ABCA5與細(xì)胞周期關(guān)鍵基因進(jìn)行分析，并繪制相關(guān)性熱圖。發(fā)現(xiàn)在兩個(gè)數(shù)據(jù)集中ABCA5與細(xì)胞周期的關(guān)鍵蛋白如CDK1、CDK2、CHEK1、CHEK2、CCNB1、CCNB2等均呈負(fù)相關(guān)（圖6A-B）。

圖6 ABCA5與細(xì)胞周期和鐵死亡相關(guān)性熱圖 A：TCGA與細(xì)胞周期；B：GSE62452與細(xì)胞周期；C：TCGA與鐵死亡；D：GSE62452與鐵死亡Figure 6 Heat map of the relations of ABCA5 with cell cycle and ferroptosis A: TCGA and cell cycle; B: GSE62452 and cell cycle; C: TCGA and ferroptosis; D: GSE62452 and ferroptosis

2.8 ABCA5與鐵死亡

ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族和鐵死亡之間的聯(lián)系最近才被研究所報(bào)道[15]，ABC家族所具有的離子、脂質(zhì)等轉(zhuǎn)運(yùn)功能可能參與這種新的細(xì)胞死亡形式。ABCA5與鐵死亡是否相關(guān)仍不清楚，我們對(duì)胰腺癌TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GSE62452數(shù)據(jù)集中ABCA5鐵死亡相關(guān)基因進(jìn)行分析。ABCA5與促進(jìn)鐵死亡相關(guān)的基因如ULK2、FBW7、CIRBP、GLS2、ACADSB等正相關(guān)，與抑制鐵死亡相關(guān)的基因如SLC16A1、FTH1、PRDX1、PML、RELA等負(fù)相關(guān)。表明ABCA5與鐵死亡高度相關(guān)，并可能通過(guò)促進(jìn)鐵死亡從而發(fā)揮抑癌基因的作用（圖6C-D）。

2.9 ABCA5與藥物治療效果預(yù)測(cè)

ABCA5是一種ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝有關(guān)[16]。為了研究ABCA5表達(dá)與治療藥物敏感性的關(guān)系，利用GDSC對(duì)常見的胰腺癌治療藥物進(jìn)行了治療效果預(yù)測(cè)。結(jié)果共有5種常用藥物（奧拉帕尼、吉西他濱、伊立替康、奧沙利鉑、順鉑）在ABCA5高表達(dá)組與低表達(dá)組之間的IC50估計(jì)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）（圖7）。

圖7 ABCA5表達(dá)和藥物的IC50 A：奧拉帕尼；B：吉西他濱；C：順鉑；D：奧沙利鉑；E：伊立替康Figure 7 ABCA5 expression level and IC50 values of drugs A: Olaparib; B: Gemcitabine; C: Cisplatin; D: Oxaliplatin; E:Irinotecan

3 討 論

胰腺癌患者具有診斷晚，治療成功率低，生存預(yù)后差等特點(diǎn)[17-18]。其最常見、最有效的治療方法仍是手術(shù)切除，但大多數(shù)患者被確診時(shí)已經(jīng)是晚期，手術(shù)切除較為困難[19]。此外，盡管目前已經(jīng)有多種治療方法，如化療、分子靶向治療、免疫治療、手術(shù)治療和聯(lián)合治療等，但是，患者的中位生存期仍然只有20多個(gè)月[20]。因此，尋找新的預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于改善胰腺癌患者的生存預(yù)后是極其重要的。

ABC家族根據(jù)ATP結(jié)合域的氨基酸序列分為ABC亞家族A～G[21]。ABCA5基因位于17號(hào)染色體上，編碼1 642個(gè)氨基酸組成的ABCA5蛋白。它屬于ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亞家族A成員，在結(jié)構(gòu)上與其他ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相似，由一個(gè)核苷酸結(jié)合區(qū)和兩組6個(gè)跨膜片段組成[22]。既往有研究通過(guò)比較基因組分析證明ABCA5基因在進(jìn)化上相對(duì)保守，表明ABCA5在生物體中的重要性和穩(wěn)定性[23]。

本研究對(duì)ABCA5在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行分析，ABCA5在胰腺癌組織與正常組織相比顯著低表達(dá)，且與不良的預(yù)后有關(guān)，Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)ABCA5的表達(dá)是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素。表明了ABCA5在胰腺癌中發(fā)揮作用，并且是潛在的預(yù)后標(biāo)志物。胰腺癌患者標(biāo)本免疫組化分析可知，ABCA5在癌組織中低表達(dá)，低表達(dá)組患者預(yù)后更差；Cox回歸分析也發(fā)現(xiàn)ABCA5的表達(dá)是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，這與數(shù)據(jù)庫(kù)中的結(jié)果一致。此外，ABCA5與胰腺癌患者的組織分化程度和腫瘤分期密切相關(guān)?；蚋患治霭l(fā)現(xiàn)ABCA5與胰腺癌細(xì)胞周期有關(guān)。通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)和Gene MANIA數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建ABCA5的PPI，其中與其高度相關(guān)的CCDC137基因和ELP6基因，在既往研究中與多種癌癥有關(guān)，如腎癌、肝癌[24]、結(jié)直腸癌[25]、胃癌[26]等。這些發(fā)現(xiàn)表明，ABCA5可能在調(diào)節(jié)胰腺癌進(jìn)展中發(fā)揮著重要的作用。

胰腺癌的一個(gè)組織學(xué)標(biāo)志性特征是顯著的腫瘤微環(huán)境（TME）[27]。TME周圍的巨噬細(xì)胞通常被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs），活化型巨噬細(xì)胞通常分為M1型和M2型，M1型巨噬細(xì)胞促進(jìn)對(duì)侵襲病原體和腫瘤細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，起到抑制腫瘤作用，而M2型巨噬細(xì)胞傾向于發(fā)揮免疫抑制表型，促進(jìn)組織修復(fù)和腫瘤進(jìn)展[28]。ABCA5的表達(dá)水平與CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞等具有抗腫瘤作用的免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)水平呈正相關(guān)。此外，ABCA5與M1型巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)水平呈正相關(guān)，而與具有免疫抑制和促腫瘤特性的髓源性抑制細(xì)胞的浸潤(rùn)水平呈負(fù)相關(guān)。這些可能是ABCA5低表達(dá)患者預(yù)后不良的重要原因。值得注意的是，ABCA5與M2型巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)水平之間存在負(fù)相關(guān)趨勢(shì)，但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些結(jié)果表明ABCA5可能在胰腺癌的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，從而對(duì)胰腺癌的發(fā)展和預(yù)后產(chǎn)生影響。

鐵死亡是一種鐵依賴性的，區(qū)別于細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死、細(xì)胞自噬的新型的細(xì)胞程序性死亡方式，主要是由鐵離子過(guò)載、脂質(zhì)過(guò)氧化和活性氧堆積引起的[29]。既往有研究者[30]提出ABCB6可能通過(guò)出轉(zhuǎn)運(yùn)含鐵的卟啉促進(jìn)鐵的消耗來(lái)抑制肝癌患者中的鐵死亡的過(guò)程。ABCC1被認(rèn)為是一個(gè)鐵死亡的驅(qū)動(dòng)基因，它能夠在肺癌細(xì)胞中產(chǎn)生谷胱甘肽（GSH）的外排并促進(jìn)鐵死亡的敏感性。此外，研究人員在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)敲除GPX4，采用高鐵飲食，或靜脈注射鐵死亡抑制劑lipoxstatin-1等方法，可以抑制小鼠模型中胰腺癌細(xì)胞的鐵死亡，并且能延緩腫瘤的進(jìn)展速度[31]。OoKo等[32]在K-ras突變的胰腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，青蒿琥酯可以誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生并引發(fā)鐵死亡，值得注意的是，此過(guò)程對(duì)正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞無(wú)顯著毒性作用。近期研究[33]表明，鐵死亡可與其他抗腫瘤藥物協(xié)同作用，從而提高胰腺癌化療的敏感性。因此，推測(cè)當(dāng)ABCA5低表達(dá)時(shí)可能通過(guò)調(diào)節(jié)鐵死亡，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)發(fā)育，從而導(dǎo)致患者的不良預(yù)后。

奧拉帕尼、吉西他濱、伊立替康、奧沙利鉑和順鉑等藥物已成為胰腺癌治療中常用的藥物[34]，并被收錄于最新版的胰腺癌診療指南中。本研究表明，ABCA5的表達(dá)水平對(duì)5種常用藥物的敏感性具有顯著影響，高表達(dá)組患者可能對(duì)這5種藥物更加敏感，從而在經(jīng)過(guò)藥物治療后顯示更好的預(yù)后療效。這表明ABCA5在預(yù)測(cè)胰腺癌治療獲益方面具有很大的潛力。借助ABCA5的表達(dá)水平，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)藥物治療的結(jié)果。

綜上所述，ABCA5在胰腺癌中低表達(dá)且可以作為判斷胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，其在胰腺癌中的機(jī)制可能與細(xì)胞周期、免疫調(diào)節(jié)和鐵死亡有關(guān)，ABCA5的表達(dá)水平與多種治療藥物明顯相關(guān)，為胰腺癌的治療奠定基礎(chǔ)。但本研究關(guān)于ABCA5在胰腺癌中的作用機(jī)制僅局限于生物信息學(xué)分析，其在胰腺癌中發(fā)揮作用的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究加以闡明。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：費(fèi)浩然負(fù)責(zé)采集及分析數(shù)據(jù)，文章撰寫；孫丹、仲成成、楊海深負(fù)責(zé)生物信息學(xué)和統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)；司鑫鑫負(fù)責(zé)對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱及指導(dǎo)；胡偉負(fù)責(zé)項(xiàng)目研究經(jīng)費(fèi)、審校稿件和指導(dǎo)課題實(shí)施。