妊娠期糖尿病孕婦血清miR-497-5p和miR-574-5p水平的表達(dá)及臨床意義*

楊貽然,何學(xué)素,李 瑩

達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科,四川達(dá)州 635000

女性在妊娠期運(yùn)動(dòng)量大大減少,且易受傳統(tǒng)觀念影響認(rèn)為攝入營(yíng)養(yǎng)越多越好,導(dǎo)致超重孕婦越來越多[1]。妊娠期糖尿病(GDM)是妊娠期常見并發(fā)癥,發(fā)生率約為10.3%,糖尿病孕婦中約80%為GDM孕婦,且其發(fā)生率近年來有明顯增高趨勢(shì)[2]。主要表現(xiàn)為多飲、多食、多尿、體重下降等,還可導(dǎo)致胎兒過大、羊水過多,若不及時(shí)治療,可導(dǎo)致胎兒窘迫、新生兒低血糖、妊娠期高血壓等,出現(xiàn)不良的妊娠結(jié)局[3]。關(guān)于GDM發(fā)病機(jī)制,臨床上多認(rèn)為妊娠期發(fā)生生理性胰島素抵抗,機(jī)體為維持正常糖代謝水平,胰島素分泌增加,導(dǎo)致血糖升高,發(fā)生GDM[4];已有研究證實(shí),糖脂代謝紊亂與GDM發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān),尋找與糖脂代謝調(diào)控有關(guān)的分子標(biāo)志物對(duì)GDM的診斷具有重要意義[5]。研究發(fā)現(xiàn),微小核糖核酸(miRNA)異常表達(dá)與GDM密切相關(guān),miRNA表達(dá)可作為早期預(yù)測(cè)GDM發(fā)生的生物學(xué)標(biāo)志物,其可通過改變葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平影響糖代謝,還可增加胰島素的敏感性[6-7]。另有研究顯示,炎癥反應(yīng)可直接損傷動(dòng)脈管壁,導(dǎo)致內(nèi)皮通透性增加,從而導(dǎo)致胰島素抵抗,促進(jìn)GDM發(fā)生[8]。有研究表明,miR-497-5p和miR-574-5p具有抗炎和改善胰島素抵抗的作用,miR-497-5p/FOXO1軸可以調(diào)控妊娠期糖尿病的滋養(yǎng)層細(xì)胞,miR-574-5p通過增加脂肪前體細(xì)胞的分化增加胰島素敏感性,從而抑制脂肪細(xì)胞擴(kuò)張[9-10]?；诖?本研究通過檢測(cè)孕婦血清中miR-497-5p、miR-574-5p水平,分析其與臨床指標(biāo)的關(guān)系,進(jìn)一步探討其對(duì)GDM的診斷價(jià)值,為GDM臨床診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2022年1月于本院婦產(chǎn)科就診的70例GDM患者作為GDM組。另選取同期于本院產(chǎn)檢的糖耐量正常的孕婦50例作為對(duì)照組。兩組孕婦年齡、孕周、產(chǎn)次、孕次比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。本研究已通過本院倫理委員會(huì)審批。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合文獻(xiàn)[11]中GDM相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn):孕24～28周進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)測(cè)試,口服葡萄糖(服糖75 g)前需禁食禁飲8～14 h;若空腹、服糖后1 h、服糖后2 h任一時(shí)間的血糖值達(dá)到或超過界值5.1、10.0、8.5 mmol/L,則診斷為GDM;(2)單胎;(3)孕前無糖尿病、高血壓、心臟病史;(4)無血液系統(tǒng)疾病史。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并宮內(nèi)感染性疾病;(2)伴有嚴(yán)重肝腎功能損傷、惡性腫瘤;(3)臨床資料不完整。所有孕婦對(duì)本研究均知情,并自愿簽署知情承諾書,本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過。

表1 兩組基本資料對(duì)比或n/n)

1.2方法

1.2.1脂糖代謝相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 采集所有入組孕婦晨起空腹肘部靜脈血5 mL,置于-80 ℃冰箱保存待用。利用全自動(dòng)生化分析儀(TANK BIO cline200,上海拓開生物科技有限公司)檢測(cè)兩組孕婦空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、載脂蛋白A(apoA)、載脂蛋白B(apoB)水平;采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫法(美國(guó)貝克曼DXI800)檢測(cè)空腹胰島素(FINS)水平,并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。HOMA-IR=FBG(mmol/L)×FINS(mU/L)/22.5。

1.2.2miR-497-5p、miR-574-5p水平檢測(cè) 采集所有入組孕婦晨起空腹肘部靜脈血5 mL,靜置1 h后常規(guī)離心(3 000 r/min,10 min)后取上清液用于RNA檢測(cè)。按照miRNA Isolation試劑盒(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)說明提取血清總miRNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)與cDNA模板對(duì)miR-497-5p、miR-574-5p進(jìn)行擴(kuò)增,每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔,重復(fù)操作3次。以U6為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt計(jì)算miR-497-5p、miR-574-5p的相對(duì)表達(dá)量。miR-574-5p:上游引物為5′-TCTGGGTCTACCGGCCTGCC-3′,下游引物為5′-ACATGCCGAAGCCGTGGTGG-3′;miR-497-5p:上游引物為5′-CAGCAGCACACUGUGGUUUGU-3′,下游引物序列為5′-CGACAGCAGCACACTGTGGTT-3′;U6內(nèi)參:上游引物為5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,下游引物為5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。qPCR反應(yīng)條件:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s,64 ℃ 34 s,共45個(gè)循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1兩組孕婦脂糖代謝相關(guān)指標(biāo)及血清miR-497-5p和miR-574-5p水平對(duì)比 兩組孕婦TC比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);GDM組孕婦TG、LDL-C、FBG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均高于對(duì)照組(P<0.05),HDL-C水平與miR-497-5p、miR-574-5p相對(duì)表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組孕婦脂糖代謝相關(guān)指標(biāo)及血清miR-497-5p、miR-574-5p水平對(duì)比

2.2血清miR-497-5p、miR-574-5p水平與糖脂代謝指標(biāo)的相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清miR-497-5p、miR-574-5p水平與GDM孕婦HDL-C呈正相關(guān)(P<0.05),與LDL-C、FBG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-497-5p和miR-574-5p水平與脂糖代謝的相關(guān)性

2.3血清miR-497-5p和miR-574-5p水平對(duì)GDM的診斷價(jià)值 以GDM組70例患者為陽性樣本,以對(duì)照組50例為陰性樣本,建立Logistic回歸評(píng)估模型,獲得Logit(P/1-P),而后進(jìn)行ROC曲線分析?；貧w模型的標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果見表4。ROC曲線分析結(jié)果顯示,miR-497-5p、miR-574-5p聯(lián)合應(yīng)用的診斷效能高于各單獨(dú)應(yīng)用,見表5和圖1。

圖1 血清miR-497-5p、miR-574-5p水平診斷GDM的ROC曲線

表4 Logistic回歸評(píng)估模型的標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果

表5 血清miR-497-5p和miR-574-5p水平對(duì)GDM的診斷價(jià)值

3 討 論

GDM是妊娠期常見慢性病,有調(diào)查顯示,全世界約有20%孕婦受到GDM影響,GDM是妊娠期常見慢性病,對(duì)孕婦和胎兒帶來不利影響[12]。因個(gè)體及診斷策略差異,部分GDM孕婦難以及時(shí)對(duì)孕婦和胎兒帶來不利影響確診。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展,miRNA在婦產(chǎn)科領(lǐng)域廣泛應(yīng)用,已有研究證實(shí)miRNA通過胰島素分泌、胰島素抵抗、脂肪因子等參與GDM發(fā)生和發(fā)展,且多種miRNA在GDM患者胎盤組織、臍帶血中異常表達(dá)[13-14],然而臍帶血、胎盤組織只能隨分娩獲取,對(duì)GDM不具備預(yù)測(cè)價(jià)值。目前,血液循環(huán)中miRNA的檢測(cè)對(duì)GDM診斷價(jià)值已成為研究熱點(diǎn)[15],而miR-497-5p、miR-574-5p是否為GDM早期診斷的標(biāo)志物尚鮮見報(bào)道。正常妊娠時(shí),為滿足胎兒生長(zhǎng)及哺乳需要,孕婦脂糖代謝水平可能有所升高,當(dāng)發(fā)生GDM時(shí),脂糖水平往往異常升高。本研究通過檢測(cè)GDM患者血清中miR-497-5p、miR-574-5p相對(duì)表達(dá)水平,分析其在GDM發(fā)生發(fā)展中的作用及對(duì)GDM的診斷效能。

本研究結(jié)果顯示,GDM組孕婦TG、LDL-C、FBG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均高于對(duì)照組,HDL-C均低于對(duì)照組(P<0.05)。金鑫等[16]研究表明,孕前肥胖、高脂血癥均是GDM發(fā)病的危險(xiǎn)因素,提示GDM孕婦多伴有不同程度糖代謝紊亂和脂質(zhì)水平異常。體重指數(shù)大于正常值的孕婦GDM發(fā)病率升高,GDM患者因血脂水平升高、脂代謝紊亂,以及長(zhǎng)期處于高血糖水平,導(dǎo)致FBG升高,TG降解受到抑制,從而加重糖代謝紊亂,形成惡性循環(huán);HbA1c形成較緩慢且恒定,不易受血糖波動(dòng)和運(yùn)動(dòng)的影響,可準(zhǔn)確地反映孕婦平均血糖水平;apoA、apoB可調(diào)節(jié)脂蛋白代謝關(guān)鍵酶的活性,在脂蛋白代謝上發(fā)揮極為重要的作用,同時(shí)還是調(diào)節(jié)TG等代謝的重要因子;LDL-C是內(nèi)源性TG運(yùn)輸?shù)闹饕问?且超過90%的apoB存在于LDL-C中,導(dǎo)致GDM患者TG升高;HOMA-IR是反映胰島素敏感性及β細(xì)胞功能的重要指標(biāo),胰島素抵抗是妊娠早期血糖升高的主要因素[17-18]。本研究中,兩組miR-497-5p、miR-574-5p相對(duì)表達(dá)水平比較結(jié)果顯示,GDM組miR-497-5p、miR-574-5p相對(duì)表達(dá)水平均低于正常組;表明miR-497-5p、miR-574-5p在健康孕婦血漿中呈高表達(dá),但在GDM孕婦中表達(dá)水平降低。這是因?yàn)镚DM也是一種炎癥性疾病,免疫系統(tǒng)激活產(chǎn)生的各種炎癥因子均可誘導(dǎo)胰島素抵抗發(fā)生[8];miR-497-5p可減弱炎癥細(xì)胞因子水平的升高[19],作為胰島素敏化劑,增加皮下脂肪的存儲(chǔ)容量,從而對(duì)GDM的發(fā)生發(fā)揮保護(hù)作用;miR-574-5p可抑制炎癥[20],促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化,改善胰島素抵抗作用。

本研究Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清中miR-497-5p、miR-574-5p相對(duì)表達(dá)水平與GDM孕婦的LDL-C水平呈正相關(guān),與FBG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均呈負(fù)相關(guān);推測(cè)血清miR-497-5p、miR-574-5p可能通過調(diào)節(jié)糖脂代謝從而參與GDM的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果提示,HOMA-IR、miR-497-5p、miR-574-5p與GDM發(fā)病密切相關(guān)。本研究中,Logistic回歸評(píng)估模型及ROC曲線分析結(jié)果顯示,miR-497-5p和miR-574-5p聯(lián)合診斷GDM患者的AUC為0.859,均高于miR-497-5p、miR-497-5p單獨(dú)檢測(cè),提示二者均可作為GDM早期診斷的指標(biāo)。

綜上所述,miR-497-5p、miR-574-5p可能參與了GDM的發(fā)生發(fā)展過程,其在GDM孕婦中的相對(duì)表達(dá)水平較低,與FPG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均呈負(fù)相關(guān),且聯(lián)合檢測(cè)對(duì)GDM有較高的診斷效能。