中藥CN 對犢牛細菌性腹瀉的影響

佟若冰，梁晚楓

延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系,吉林延吉 133000

中藥CN是以白頭翁為主要成分的純中藥制劑，對于腹瀉具有一定的預(yù)防和治療作用。犢牛細菌性腹瀉是一種常見的消化道疾病，多發(fā)生于2 ～3 周齡的犢牛，在犢牛出生10 d 內(nèi)最易感，四季均可發(fā)生，尤其是在冬末初春氣溫多變時期，在寒冷潮濕、臟亂的畜舍中也易發(fā)生，流行范圍大，并且發(fā)病率和死亡率較高。臨床癥狀表現(xiàn)為食欲不振、呼吸加快、體重減輕、脫水嚴重、糞便惡臭、精神沉郁、排出水樣便、稀便或軟便等，嚴重影響其正常的生長發(fā)育。對此現(xiàn)象，本試驗通過病原的分離培養(yǎng)，發(fā)酵葡萄糖、乳糖試驗、鳥氨酸試驗、賴氨酸試驗、靛基質(zhì)試驗、苯丙氨酸試驗等試驗進一步地進行生化鑒定。同時采取快速檢測版進行病毒腹瀉檢測，檢測犢牛腹瀉是否由病毒引起。經(jīng)過試驗鑒定確定病畜主要是由大腸桿菌感染引起的細菌性腹瀉，再進行中藥CN 的抑菌試驗，觀察中藥CN 對大腸桿菌的抑菌效果，最后選取試驗動物進行臨床試驗。

1 犢牛細菌性腹瀉類型的鑒定

1.1 材料

1.1.1 病料

病料由延邊某牧場采集。

1.1.2 藥物

中藥CN 由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系提供。

1.2 方法

1.2.1 病料采集

在延邊某牧場進行無菌采集腹瀉犢牛病料20份。根據(jù)不同的癥狀可以采集心、肝臟、脾、肺、腎或小腸黏膜等。

1.2.2 涂片鏡檢

將從牧場采集到的病料制成涂片，用革蘭氏染色法進行染色，然后進行鏡檢。

1.2.3 細菌的分離培養(yǎng)

首先將經(jīng)過鏡檢和生理鹽水稀釋后的病料接種在普通肉湯培養(yǎng)基中進行增菌處理，其次將普通肉湯培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物接種于麥康凱瓊脂平板，最后經(jīng)過37 ℃培養(yǎng)24 h，挑取在麥康凱瓊脂平板上長出的紅色單個菌落進行涂片、染色和鏡檢，并同時接種于遠藤氏瓊培養(yǎng)基中在37 ℃下培養(yǎng)24 h。

1.2.4 細菌的生化鑒定

大腸桿菌可以發(fā)酵葡萄糖并且產(chǎn)酸產(chǎn)氣，也可以迅速發(fā)酵乳糖。大腸桿菌不分解尿素，不產(chǎn)生硫化氫。大腸桿菌能夠分解蛋白質(zhì)中的色氨酸，形成玫瑰色靛基質(zhì)，使試驗結(jié)果為陽性。在賴氨酸試驗中，大腸桿菌可使賴氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對照均變?yōu)辄S色，試驗結(jié)果為陰性。枸櫞酸鹽利用試驗中大腸桿菌不能利用枸櫞酸鹽，所以大腸桿菌在枸櫞酸鹽利用試驗中呈陰性。大腸桿菌可以將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，在硝酸鹽還原實驗中呈陽性。V-P 試驗呈陰性。

在進行細菌的生化鑒定時，選取純培養(yǎng)物進行發(fā)酵葡萄糖、乳糖試驗、硫化氫試驗、尿素酶試驗、賴氨酸試驗、鳥氨酸試驗、靛基質(zhì)試驗、苯丙氨酸試驗、枸櫞酸鹽利用試驗、硝酸鹽還原試驗、V-P試驗等，在37 ℃培養(yǎng)24 h 觀察并記錄結(jié)果。同時采取快速檢測版進行病毒腹瀉的檢測。

1.2.5 動物接種試驗

選取純培養(yǎng)物接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，24 h后將培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)物接種于小白鼠的體內(nèi)，對照組的小白鼠接種一樣劑量的生理鹽水，觀察小白鼠的發(fā)病情況并記錄。在小白鼠死亡后，對它的尸體進行剖檢處理，觀察其各個組織器官的病變情況，無菌采取小白鼠的心臟、肝臟和小腸等實質(zhì)器官做成涂片鏡檢。

1.2.6 鑒定結(jié)果

1.2.6.1 涂片鏡檢結(jié)果。在顯微鏡油鏡下可以看到紅色中等大小呈單個或成對的桿狀菌，有鞭毛，無芽孢，有時還可以見到莢膜。

1.2.6.2 細菌的分離培養(yǎng)結(jié)果。細菌在普通肉湯培養(yǎng)基上呈均勻渾濁生長，管底有黏液狀沉淀。在麥康凱瓊脂平板上可見紅色，表面光滑扁平的菌落，在遠藤氏瓊培養(yǎng)基上出現(xiàn)有金屬光澤的深紅色菌落。

1.2.6.3 細菌的生化鑒定結(jié)果。細菌在發(fā)酵葡萄糖、乳糖試驗、硝酸鹽還原試驗、賴氨酸試驗、鳥氨酸試驗、靛基質(zhì)試驗中呈陽性，苯丙氨酸試驗、硫化氫試驗、尿素酶試驗、枸櫞酸鹽利用試驗、V-P 試驗呈陰性。

1.2.6.4 動物接種試驗結(jié)果。小白鼠的癥狀和剖檢變化與感染大腸桿菌的典型癥狀一致，鏡檢可以觀察到多個兩端較深或染色均勻的革蘭氏陰性桿菌，無芽孢，有鞭毛。確定犢牛腹瀉主要是由大腸桿菌感染引起。

2 中藥CN 對犢牛細菌性腹瀉的影響

2.1 中藥抑菌試驗

在超凈工作臺上挑取適量的細菌以劃線的方式將細菌均勻地涂在平皿培養(yǎng)基上，作3 個平皿，以提高試驗的準確性。將平皿在37 ℃的恒溫箱中放置片刻，待平皿上的水分干后貼上中藥CN 的藥敏紙片。將平皿置于37 ℃培養(yǎng)24 h 后測量抑菌圈的直徑，取3 個平皿的平均值。將其結(jié)果作為確定大腸桿菌對中藥CN 的敏感性的依據(jù)。經(jīng)過試驗得出中藥CN 對大腸桿菌具有很好的抑菌效果。

2.2 臨床試驗

首先制作出中藥CN 適合臨床應(yīng)用的中藥口服液體劑，隨后選取30 頭細菌性腹瀉的犢牛，給予不同的劑量進行治療，以確定中藥CN 進行臨床治療時的正確劑量。對患病犢牛進行口服給藥，觀察72 h 內(nèi)病畜的大便次數(shù)和性狀是否恢復(fù)并記錄有效數(shù)據(jù)。

3 結(jié)果

經(jīng)過鑒定，在采集的20 份病料中，測得大腸桿菌感染16 頭、病毒性腹瀉1 頭、球蟲3 頭。經(jīng)過試驗可知犢牛腹瀉主要感染以細菌性腹瀉為主，細菌性腹瀉以感染大腸桿菌為主。

對于中藥CN 治療犢牛細菌性腹瀉的結(jié)果如表1 所示。

表1 中藥CN 治療犢牛腹瀉效果觀察結(jié)果

結(jié)果表明60%的患病犢牛經(jīng)一次口服給藥后72 h 內(nèi)大便次數(shù)和性狀恢復(fù)正常，全身癥狀消失，97%的患病犢牛經(jīng)三次口服給藥癥狀恢復(fù)正?；蛎黠@好轉(zhuǎn)，3%的患病犢牛三次口服給藥無明顯變化。

4 討論

犢牛腹瀉是新生犢牛自身免疫力不高，不能很好地適應(yīng)外界環(huán)境而引起的一種消化道疾病，通常發(fā)病是成群的犢牛相繼發(fā)病，具有很強的傳染性，病畜和帶菌牛是主要傳染源，也可經(jīng)子宮或臍帶感染。導(dǎo)致犢牛腹瀉的原因有很多，比如飼養(yǎng)管理不當(dāng)，畜舍沒有很好的衛(wèi)生環(huán)境等。新生犢牛的免疫力相對較弱，畜舍寒冷潮濕，喂乳的溫度過低；母畜妊娠期間飼養(yǎng)管理不得當(dāng)，母畜缺乏營養(yǎng)，使母畜初乳量不足，犢牛沒能在合適的時間內(nèi)飲用初乳；畜舍環(huán)境不良，大腸桿菌的生存能力較強，在120 ℃高壓消毒后死亡，在畜舍中，大腸桿菌可在水、糞便、土壤中存活數(shù)周或數(shù)月，在犢牛舔食了不潔之物，比如糞便、腐敗變性的草料等，都會引起犢牛胃腸功能紊亂，免疫力下降呈現(xiàn)致病作用。

由大腸桿菌引起的犢牛細菌性腹瀉潛伏期很短，僅幾個小時，嚴重影響了犢牛的生長發(fā)育。在臨床上根據(jù)病畜的癥狀和病理情況可以分為敗血型、腸毒血型和腸型。如果治療不及時，常常會導(dǎo)致犢牛酸中毒、脫水、心力衰竭甚至死亡，只有少數(shù)病畜可以耐過，但會導(dǎo)致發(fā)育遲緩。在犢牛發(fā)病后及時治療，大腸桿菌引起的犢牛腹瀉一般可以治愈。

中藥CN 是由多種中草藥成分組成，具有抗菌消炎、抗病毒、抗寄生蟲的作用，對機體腹瀉、腸炎等癥狀具有很好的治療和預(yù)防效果。它能夠抑制大腸桿菌的增殖，降低其致病能力，減緩小腸蠕動，提高機體的免疫力，從而達到治療效果。通過試驗結(jié)果表明，中藥CN 對犢牛細菌性腹瀉具有很好的治療效果，一次口服給藥后60%的病畜72 h 內(nèi)大便次數(shù)和性狀恢復(fù)正常，全身癥狀消失，三次口服給藥后97%的病畜72 h 內(nèi)大便次數(shù)和癥狀恢復(fù)正常或明顯好轉(zhuǎn)，3%的病畜經(jīng)三次口服給藥后無任何變化。綜上所述，在中藥CN 治療犢牛細菌性腹瀉時，推薦采取三次口服給藥的方式。