• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠黑素細(xì)胞功能的影響

    2023-10-30 06:12:26彭子輝王潤(rùn)和李進(jìn)先
    中成藥 2023年10期
    關(guān)鍵詞:涂藥黑素細(xì)胞紫草

    王 解,彭子輝,王潤(rùn)和,李進(jìn)先,李 剛

    [襄陽(yáng)市中心醫(yī)院(湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院) 皮膚科,湖北 襄陽(yáng) 441003]

    白癜風(fēng)是一種多見(jiàn)于青少年的皮膚科常見(jiàn)疾病,患者黑素細(xì)胞出現(xiàn)數(shù)目減少及功能受損,臨床癥狀以毛發(fā)、黏膜或皮膚色素脫失為主,發(fā)病部位常定位于手腳,但有時(shí)也能蔓延到面部,使患者常因外表而痛苦尷尬,導(dǎo)致部分患者抑郁[1-2]。白癜風(fēng)是一種慢性炎癥性皮膚病,免疫T 細(xì)胞的分化參與介導(dǎo)其發(fā)病過(guò)程,Th17 細(xì)胞及其表達(dá)合成的促炎因子IL-17 在白癜風(fēng)患者體內(nèi)增加,抑制Th17 細(xì)胞分化,可保護(hù)黑素細(xì)胞,減輕白癜風(fēng)患者色素脫失癥狀[3-4];IL-23 作為一種炎性因子,可激活Th17 細(xì)胞信號(hào),引發(fā)炎癥,在胸腺炎等多種自身免疫性疾病中發(fā)揮重要調(diào)控作用[5],且IL-23 及Th17 細(xì)胞因子IL-17 水平在白癜風(fēng)患者血清中升高[6],表明IL-23/Th17 信號(hào)是白癜風(fēng)的一個(gè)潛在治療靶點(diǎn)。紫草素是紫草科紫草LithospermumerythrorhizonSieb.et Zucc.根中的活性成分,具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤等生物學(xué)功效,可降低炎癥因子IL-6、IL-17 和IL-23 水平,抑制其促炎癥作用,改善銀屑病患者癥狀,對(duì)白癜風(fēng)也有較好療效[7-8],但其藥理機(jī)制目前還未明確。本文以紫草素處理白癜風(fēng)模型小鼠,探討其對(duì)白癜風(fēng)小鼠黑素細(xì)胞功能的影響及作用機(jī)理。

    1 材料

    1.1 動(dòng)物 C57BL/6 小鼠,SPF 級(jí),體質(zhì)量13 ~17 g,購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (魯) 2019-0003],在動(dòng)物中心適應(yīng)飼養(yǎng)1 周,溫度21 ℃,相對(duì)濕度45%。實(shí)驗(yàn)過(guò)程均遵循國(guó)家及單位關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)與使用的準(zhǔn)則,并經(jīng)本單位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理號(hào)2019-10)。

    1.2 試劑 氫醌、羧甲基纖維素鈉 (批號(hào)20170704、F20090916,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。紫草素對(duì)照品(純度≥98%,美國(guó)Sigma-Aldrich 公司)。白癜風(fēng)膠囊(0.45 g/粒,批號(hào)20170527,長(zhǎng)春銀諾克藥業(yè)有限公司)。HE 染色試劑盒、小鼠IL-23 ELISA 試劑盒、小鼠IL-17 ELISA 試劑盒、紅細(xì)胞裂解液、動(dòng)物總RNA 快速抽提試劑盒[生工生物工程(上海) 股份有限公司]; 小鼠α-黑色素細(xì)胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)ELISA 試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司); 反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒(日本TaKaRa 公司);IL-23、β-actin、IL-17 引物(蘇州吉瑪基因股份有限公司); FITCCD4 單克隆抗體、FITC-IL-17 單克隆抗體(上海北諾生物科技有限公司)。

    1.3 儀器 Multiskan FC 型酶標(biāo)儀(上海騰名生物科技有限公司); DM4000 型光學(xué)顯微鏡、RM2245 型切片機(jī)(德國(guó)徠卡公司); 7900HT 型熒光定量PCR 儀、3900 型高通量DNA 合成儀(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司); FACSCalibur 型流式細(xì)胞儀(美國(guó)Becton Dicknson 公司); TD-4M 型低溫高速離心機(jī)(濟(jì)南來(lái)寶醫(yī)療器械有限公司)。

    2 方法

    2.1 模型建立、分組及給藥 小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、白癜風(fēng)膠囊(504 mg/kg) 組和紫草素低、中、高劑量(20、40、80 mg/kg) 組,每組12 只。除對(duì)照組外其余各組按參照文獻(xiàn)[9] 報(bào)道制備白癜風(fēng)模型,小鼠頸背部脫毛,每天均勻涂抹0.5 mL 2.5%氫醌軟膏(將1 g 羧甲基纖維素鈉、2.5 g 氫醌加到100 mL 去離子水中,磁力攪拌1 h,即得),持續(xù)60 d (每5 d 脫毛1 次),觀察到小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)、膚色變白,表示造模成功。對(duì)照組12 只小鼠于背部脫毛處每日均勻涂抹空白基質(zhì)(將1 g 羧甲基纖維素鈉加到100 mL 去離子水中,磁力攪拌1 h,即得)。

    以生理鹽水溶解紫草素、白癜風(fēng)膠囊內(nèi)容物,制得2、4、8 mg/mL 紫草素[10],50.4 mg/mL 白癜風(fēng)膠囊[11]藥液,用藥組小鼠每天上午10: 00 灌胃給予對(duì)應(yīng)藥液10 mL/kg,模型組、對(duì)照組小鼠每天上午10: 00 灌胃給予生理鹽水10 mL/kg,每天1 次,持續(xù)21 d。

    2.2 小鼠毛發(fā)脫色情況檢測(cè)及標(biāo)本采集 末次給藥24 h后,觀察小鼠涂藥(2.5%氫醌軟膏) 部位和非涂藥部位脫色情況,參照文獻(xiàn)[12] 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,每個(gè)部位總分5分。毛發(fā)基本無(wú)脫色為0 分,0<毛發(fā)脫色面積≤10% 為1分,11%≤毛發(fā)脫色面積≤25%為2 分,26%≤毛發(fā)脫色面積≤50% 為3 分,51% ≤毛發(fā)脫色面積≤75% 為4 分,76%≤毛發(fā)脫色面積≤100%為5 分。脫頸處死小鼠,取腹主動(dòng)脈血2.0 mL,6 只小鼠血液中加入紅細(xì)胞裂解液,冰水浴孵育0.5 h,100×g離心,取細(xì)胞沉淀備用; 剩余6 只小鼠血液100×g離心,取血清備用(保存于-80 ℃)。剪取小鼠造模處皮膚組織0.5 g (保存于液氮),再剪取小鼠造模處皮膚組織(1 cm×1 cm),多聚甲醛固定。

    2.3 HE 染色觀察小鼠皮膚病理組織學(xué) 取“2.2” 項(xiàng)下固定的小鼠皮膚組織,脫水、透明、包埋后切片,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行HE 染色,封片后置于顯微鏡下觀察皮膚組織病理形態(tài),并掃描橫切面,采用CaseViewer 軟件分析同等放大倍數(shù)下視野中黑色素毛囊、基底層黑素細(xì)胞數(shù)。

    2.4 小鼠血清α-MSH、TYR、IL-23、IL-17 水平檢測(cè) 取“2.2” 項(xiàng)下小鼠血清,冰水浴中提前解凍,按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)α-MSH、TYR、IL-23、IL-17 水平。

    2.5 小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例檢測(cè) 取“2.2” 項(xiàng)下小鼠外周血細(xì)胞沉淀,以PBS 緩沖液洗滌后重懸,計(jì)數(shù)后調(diào)整密度為1.0×106/mL,取1 mL 懸液,依次加入FITC-CD4、FITC-IL-17 單克隆抗體混勻,上機(jī)檢測(cè),計(jì)算Th17 細(xì)胞比例。

    2.6 小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)檢測(cè) 取“2.2” 項(xiàng)下于-80 ℃保存的小鼠皮膚組織,提取總RNA 后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),制得cDNA,均按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,配制RT-qPCR 反應(yīng)預(yù)混液,加入皮膚組織cDNA 模板,混勻后上機(jī)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增,反應(yīng)體系配制和反應(yīng)條件設(shè)定均按照熒光定量PCR 試劑盒說(shuō)明書(shū)指導(dǎo)進(jìn)行,以β-actin基因?yàn)閮?nèi)參,2-ΔΔCT法分析IL-23、IL-17 mRNA 相對(duì)表達(dá),引物序列見(jiàn)表1。

    表1 引物序列

    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 24.0 軟件進(jìn)行處理,計(jì)量資料以(±s) 表示,組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    3.1 紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠毛發(fā)脫色評(píng)分的影響 與對(duì)照組比較,模型組小鼠涂藥部位、非涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分升高(P<0.05); 與模型組比較,紫草素各劑量組小鼠涂藥部位、非涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分降低(P<0.05),并呈劑量依賴(lài)性(P<0.05); 與白癜風(fēng)膠囊組比較,紫草素高劑量組小鼠涂藥部位、非涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分無(wú)明顯變化(P>0.05),見(jiàn)表2。

    表2 各組小鼠毛發(fā)脫色評(píng)分比較(分,±s,n=12)

    表2 各組小鼠毛發(fā)脫色評(píng)分比較(分,±s,n=12)

    注: 與對(duì)照組比較,*P<0.05; 與模型組比較,#P<0.05; 與紫草素低劑量組比較,△P<0.05; 與紫草素中劑量組比較,▲P<0.05。

    組別涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分非涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分對(duì)照組0±00±0模型組4.25±0.67*2.00±0.43*紫草素低劑量組2.75±0.52#1.42±0.16#紫草素中劑量組1.42±0.31#△0.75±0.08?!髯喜菟馗邉┝拷M0.42±0.05?!鳌?.08±0.03#△▲白癜風(fēng)膠囊組0.50±0.10?!鳌?.17±0.04?!鳌?/p>

    3.2 紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠皮膚病理組織學(xué)和黑素細(xì)胞的影響 對(duì)照組小鼠皮膚組織表皮無(wú)增生,含有大量黑色素毛囊及基底層黑素細(xì)胞; 與對(duì)照組比較,模型組小鼠皮膚組織表皮增生,黑色素毛囊及基底層黑素細(xì)胞數(shù)降低(P<0.05); 與模型組比較,紫草素各劑量組小鼠皮膚組織表皮增生減輕,黑色素毛囊及基底層黑素細(xì)胞數(shù)增加(P<0.05),并呈劑量依賴(lài)性; 與白癜風(fēng)膠囊組比較,紫草素高劑量組小鼠皮膚組織表皮增生程度相似,黑色素毛囊、基底層黑素細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯變化(P>0.05),見(jiàn)圖1、表3。

    圖1 各組小鼠皮膚組織HE 染色(×200)

    表3 各組小鼠黑色素毛囊、基底層黑素細(xì)胞數(shù)比較(個(gè),±s,n=12)

    表3 各組小鼠黑色素毛囊、基底層黑素細(xì)胞數(shù)比較(個(gè),±s,n=12)

    注: 與對(duì)照組比較,*P<0.05; 與模型組比較,#P<0.05; 與紫草素低劑量組比較,△P<0.05; 與紫草素中劑量組比較,▲P<0.05。

    組別黑色素毛囊數(shù)基底層黑素細(xì)胞數(shù)對(duì)照組112.06±17.34143.37±20.02模型組38.52±6.12*58.86±8.78*紫草素低劑量組65.42±7.54#80.92±10.61#紫草素中劑量組85.23±10.07?!?07.75±12.07#△紫草素高劑量組109.58±12.19?!鳌?40.83±18.04?!鳌遵帮L(fēng)膠囊組108.06±11.94#△▲138.96±17.47?!鳌?/p>

    3.3 紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠血清α-MSH、TYR 水平的影響 與對(duì)照組比較,模型組小鼠血清α-MSH、TYR 水平降低(P<0.05); 與模型組比較,紫草素各劑量組小鼠血清α-MSH、TYR 水平升高(P<0.05),并呈劑量依賴(lài)性; 與白癜風(fēng)膠囊組比較,紫草素高劑量組小鼠血清α-MSH、TYR 水平無(wú)明顯變化(P>0.05),見(jiàn)表4。

    表4 各組小鼠血清α-MSH、TYR 水平比較(μg/L,±s,n=6)

    表4 各組小鼠血清α-MSH、TYR 水平比較(μg/L,±s,n=6)

    注: 與對(duì)照組比較,*P<0.05; 與模型組比較,#P<0.05; 與紫草素低劑量組比較,△P<0.05; 與紫草素中劑量組比較,▲P<0.05。

    組別α-MSHTYR對(duì)照組24.03±2.1092.67±7.08模型組13.95±1.02*60.02±3.42*紫草素低劑量組16.73±1.25#70.43±4.10#紫草素中劑量組20.44±1.46?!?1.98±4.23?!髯喜菟馗邉┝拷M23.78±1.43#△▲91.41±3.94#△▲白癜風(fēng)膠囊組23.57±1.50?!?0.76±4.05?!鳌?/p>

    3.4 紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例的影響 與對(duì)照組比較,模型組小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例升高(P<0.05); 與模型組比較,紫草素各劑量組小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例降低(P<0.05),并呈劑量依賴(lài)性; 與白癜風(fēng)膠囊組比較,紫草素高劑量組小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例無(wú)明顯變化(P>0.05),見(jiàn)表5。

    表5 各組小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例比較(±s,n=6)

    表5 各組小鼠外周血Th17 細(xì)胞比例比較(±s,n=6)

    注: 與對(duì)照組比較,*P<0.05; 與模型組比較,#P<0.05; 與紫草素低劑量組比較,△P<0.05; 與紫草素中劑量組比較,▲P<0.05。

    組別Th17 細(xì)胞比例/%對(duì)照組1.13±0.09模型組3.45±0.31*紫草素低劑量組2.76±0.28#紫草素中劑量組1.98±0.20?!髯喜菟馗邉┝拷M1.25±0.19?!鳌遵帮L(fēng)膠囊組1.30±0.13?!鳌?/p>

    3.5 紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠血清IL-23、IL-17 水平的影響 與對(duì)照組比較,模型組小鼠血清因子IL-23、IL-17 水平升高(P<0.05); 與模型組比較,紫草素各劑量組小鼠血清IL-23、IL-17 水平降低(P<0.05),并呈劑量依賴(lài)性; 與白癜風(fēng)膠囊組比較,紫草素高劑量組小鼠血清IL-23、IL-17水平無(wú)明顯變化(P>0.05),見(jiàn)表6。

    表6 各組小鼠血清IL-23、IL-17 水平比較(ng/L,±s,n=6)

    表6 各組小鼠血清IL-23、IL-17 水平比較(ng/L,±s,n=6)

    注: 與對(duì)照組比較,*P<0.05; 與模型組比較,#P<0.05; 與紫草素低劑量組比較,△P<0.05; 與紫草素中劑量組比較,▲P<0.05。

    組別IL-23IL-17對(duì)照組123.00±8.74112.16±9.05模型組273.51±21.23*227.38±15.81*紫草素低劑量組227.64±15.41#190.95±12.63#紫草素中劑量組187.21±10.73?!?54.72±10.78#△紫草素高劑量組130.05±12.42?!鳌?19.84±9.47#△▲白癜風(fēng)膠囊組134.58±11.92?!鳌?22.91±10.04?!鳌?/p>

    3.6 紫草素對(duì)白癜風(fēng)小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較,模型組小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)升高(P<0.05); 與模型組比較,紫草素各劑量組小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)降低(P<0.05),并呈劑量依賴(lài)性; 與白癜風(fēng)膠囊組比較,紫草素高劑量組小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)無(wú)明顯變化(P>0.05),見(jiàn)表7。

    表7 各組小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)比較(±s,n=12)

    表7 各組小鼠皮膚組織IL-23、IL-17 mRNA 表達(dá)比較(±s,n=12)

    注: 與對(duì)照組比較,*P<0.05; 與模型組比較,#P<0.05; 與紫草素低劑量組比較,△P<0.05; 與紫草素中劑量組比較,▲P<0.05。

    組別IL-23/β-actinIL-17/β-actin對(duì)照組1.01±0.170.97±0.13模型組3.62±0.34*3.43±0.30*紫草素低劑量組2.75±0.27#2.65±0.28#紫草素中劑量組1.92±0.22?!?.90±0.20?!髯喜菟馗邉┝拷M1.10±0.19?!鳌?.09±0.16?!鳌遵帮L(fēng)膠囊組1.15±0.24?!鳌?.13±0.25?!鳌?/p>

    4 討論

    目前白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制還未得到明確闡釋?zhuān)芯空哒J(rèn)為環(huán)境因素、遺傳因素、外傷、心理因素、自身免疫失衡等均與白癜風(fēng)發(fā)生有關(guān)。激素治療、手術(shù)與激光治療在臨床得到廣泛應(yīng)用,但療效并不顯著,且費(fèi)用高昂,副作用較多,因此探尋安全有效的治療方法是臨床迫切所需[13-14]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)背部脫毛區(qū)均勻涂抹2.5%氫醌軟膏的方法構(gòu)建白癜風(fēng)模型小鼠,結(jié)果顯示,建模小鼠皮膚組織表皮增生,涂藥部位和非涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分、血清IL-23 及IL-17水平、皮膚組織IL-23 及IL-17 mRNA 表達(dá)升高,表明氫醌軟膏可誘導(dǎo)促炎因子大量合成釋放,引發(fā)炎癥,造成毛發(fā)脫色。α-MSH 是垂體產(chǎn)生的一種激素,可促進(jìn)黑素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素,而TYR 是調(diào)控黑色素合成的關(guān)鍵酶,血清α-MSH、TYR 水平可反映黑素細(xì)胞功能[9,15]。本研究結(jié)果顯示,模型小鼠黑色素毛囊及基底層黑素細(xì)胞數(shù)、血清α-MSH、TYR 水平降低,表明氫醌軟膏可誘導(dǎo)黑素細(xì)胞死亡,破壞其功能。以上結(jié)果提示白癜風(fēng)小鼠模型建立成功。

    紫草素是提取自紫草的天然藥物成分,還是治療白癜風(fēng)的中藥制劑白癜風(fēng)膠囊中含有的重要活性成分,可抑制促炎因子表達(dá),促使抗炎因子表達(dá),緩解人牙髓細(xì)胞炎癥,對(duì)銀屑病、白癜風(fēng)等多種皮膚病具有較明顯的治療作用[7-8,16-17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,以不同劑量紫草素處理白癜風(fēng)模型小鼠,能減輕小鼠皮膚組織表皮增生,降低涂藥部位和非涂藥部位毛發(fā)脫色評(píng)分、血清IL-23 及IL-17 水平,升高黑色素毛囊及基底層黑素細(xì)胞數(shù)、血清α-MSH 及TYR水平,且呈劑量依賴(lài)性,表明紫草素可抑制促炎因子表達(dá)合成,減輕炎癥,緩解黑素細(xì)胞功能損傷,改善小鼠毛發(fā)脫色情況,且在一定劑量范圍內(nèi),紫草素劑量越高,作用越強(qiáng)。

    白癜風(fēng)是一種自身免疫性炎癥疾病,免疫細(xì)胞Th17 的激活分化與其發(fā)病過(guò)程密切相關(guān)。研究顯示,白癜風(fēng)患者體內(nèi)Th17 細(xì)胞數(shù)量增加,皮膚組織Th17 細(xì)胞因子IL-17 水平也升高,IL-23 是調(diào)控Th17 細(xì)胞活化的重要炎性因子,能刺激Th17 細(xì)胞激活,促使其生成促炎因子IL-17,引發(fā)黑素細(xì)胞受損,導(dǎo)致白癜風(fēng),因而IL-23/Th17 軸可作為白癜風(fēng)的一個(gè)防治靶點(diǎn)[3-6,18-20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,白癜風(fēng)模型小鼠外周血中Th17 細(xì)胞比例、皮膚組織IL-23 及IL-17 mRNA 表達(dá)升高; 經(jīng)紫草素給藥后,其外周血中Th17 細(xì)胞比例、皮膚組織IL-23 及IL-17 mRNA 表達(dá)降低,表明IL-23/Th17 軸參與介導(dǎo)白癜風(fēng)的發(fā)病過(guò)程,紫草素可阻止IL-23/Th17 通路激活,抑制免疫T 細(xì)胞向Th17 分化,降低炎性因子IL-23、IL-17 表達(dá)釋放,減輕白癜風(fēng)小鼠脫色癥狀。

    綜上所述,紫草素可下調(diào)IL-23、IL-17 表達(dá),抑制免疫Th17 細(xì)胞活化,降低其比例,減輕黑素細(xì)胞炎癥損傷,改善其功能,促進(jìn)黑色素合成,緩解白癜風(fēng)小鼠脫色癥狀,阻斷IL-23/Th17 信號(hào)傳導(dǎo)可能是其藥理機(jī)制之一。但本實(shí)驗(yàn)未通過(guò)上調(diào)和下調(diào)該信號(hào)進(jìn)行對(duì)照驗(yàn)證,后續(xù)會(huì)對(duì)其藥理機(jī)制進(jìn)行深入探討。

    猜你喜歡
    涂藥黑素細(xì)胞紫草
    牛黃解毒片治帶狀皰疹
    小兒紅屁股涂紫草油
    特別健康(2018年9期)2018-07-17 15:29:08
    扶他林軟膏并非想用就用
    中老年健康(2016年6期)2016-06-30 01:57:40
    淺談藏醫(yī)《四部醫(yī)典》外涂藥的開(kāi)發(fā)價(jià)值
    陶四翁燒毀假紫草
    TLR3活化對(duì)正常人表皮黑素細(xì)胞內(nèi)活性氧簇表達(dá)的影響
    緩解肌肉關(guān)節(jié)痛 首選外用止痛藥
    大家健康(2014年9期)2015-04-30 10:24:14
    自體培養(yǎng)黑素細(xì)胞治療白癜風(fēng)患者療效觀察
    角質(zhì)形成細(xì)胞和黑素細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系的建立
    HPLC測(cè)定滇紫草及其兩個(gè)近緣種中乙酰紫草素的含量
    18美女黄网站色大片免费观看| 国产精品国产高清国产av| 久热爱精品视频在线9| 精品人妻1区二区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美在线一区亚洲| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产一区在线观看成人免费| 90打野战视频偷拍视频| 久久这里只有精品19| www.熟女人妻精品国产| 国产成人av激情在线播放| 9色porny在线观看| 免费av中文字幕在线| 黄片播放在线免费| 久久青草综合色| 国产精品久久久久成人av| 日本黄色视频三级网站网址| 国产av在哪里看| 精品久久久久久,| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日本 av在线| 亚洲av成人av| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品免费一区二区三区在线| 一区福利在线观看| 国产精品二区激情视频| 国产成人精品在线电影| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 免费在线观看黄色视频的| av片东京热男人的天堂| 黑人猛操日本美女一级片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 9热在线视频观看99| 亚洲精品国产区一区二| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产一区二区三区综合在线观看| 一夜夜www| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品久久久久久电影网| 两人在一起打扑克的视频| 国产区一区二久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲人成电影免费在线| 久9热在线精品视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 51午夜福利影视在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 在线永久观看黄色视频| 99re在线观看精品视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| ponron亚洲| 欧美日韩亚洲高清精品| 激情视频va一区二区三区| ponron亚洲| 1024香蕉在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人影院久久av| 成人三级做爰电影| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久香蕉精品热| 国产深夜福利视频在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 一级,二级,三级黄色视频| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品野战在线观看 | 狠狠狠狠99中文字幕| 99香蕉大伊视频| 国产成人av教育| 天堂影院成人在线观看| 手机成人av网站| 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产成人精品久久二区二区91| 久99久视频精品免费| 色婷婷av一区二区三区视频| 中文字幕av电影在线播放| 老汉色∧v一级毛片| 丁香欧美五月| 久久香蕉精品热| 成人av一区二区三区在线看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 午夜精品在线福利| 久久久久九九精品影院| 老司机午夜福利在线观看视频| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 国产精品久久视频播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日日爽夜夜爽网站| 激情视频va一区二区三区| 99re在线观看精品视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 热99re8久久精品国产| 精品国产一区二区久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 一级黄色大片毛片| 最好的美女福利视频网| 一二三四社区在线视频社区8| 又大又爽又粗| 99热国产这里只有精品6| 精品久久久久久久久久免费视频 | 欧美黑人欧美精品刺激| 久久性视频一级片| 视频在线观看一区二区三区| 一级片'在线观看视频| 韩国av一区二区三区四区| 欧美性长视频在线观看| 午夜视频精品福利| a级片在线免费高清观看视频| 51午夜福利影视在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 可以在线观看毛片的网站| 激情在线观看视频在线高清| 天天影视国产精品| 大陆偷拍与自拍| 日本一区二区免费在线视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品久久久久成人av| 国产深夜福利视频在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 国产麻豆69| 丰满迷人的少妇在线观看| 9热在线视频观看99| 一级a爱片免费观看的视频| 天天添夜夜摸| 一级作爱视频免费观看| www.熟女人妻精品国产| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 天天影视国产精品| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 午夜精品久久久久久毛片777| 精品久久久久久成人av| 日韩免费高清中文字幕av| 999久久久国产精品视频| 精品乱码久久久久久99久播| 最近最新中文字幕大全免费视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 成年女人毛片免费观看观看9| 丁香六月欧美| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产一区二区激情短视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| www.999成人在线观看| 久久精品成人免费网站| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 91九色精品人成在线观看| www日本在线高清视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产欧美日韩一区二区三| cao死你这个sao货| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 88av欧美| 啪啪无遮挡十八禁网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产成+人综合+亚洲专区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av成人av| 99热国产这里只有精品6| 亚洲午夜理论影院| 搡老岳熟女国产| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美成狂野欧美在线观看| 午夜久久久在线观看| 色综合婷婷激情| 国产99白浆流出| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲欧美一区二区三区久久| 曰老女人黄片| 欧美日韩黄片免| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜福利欧美成人| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 成在线人永久免费视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 在线观看日韩欧美| 久久久国产成人精品二区 | 在线观看一区二区三区激情| 久久亚洲精品不卡| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 精品国产国语对白av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 免费看十八禁软件| 高清av免费在线| av免费在线观看网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品 国内视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲第一青青草原| 欧美乱妇无乱码| 国产精品一区二区免费欧美| 97碰自拍视频| 亚洲av电影在线进入| 操美女的视频在线观看| 黑人操中国人逼视频| 成人三级黄色视频| 大型av网站在线播放| 欧美中文综合在线视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产一卡二卡三卡精品| 超色免费av| 黄色怎么调成土黄色| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产成人精品在线电影| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美激情久久久久久爽电影 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男人的好看免费观看在线视频 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 中文字幕人妻熟女乱码| 不卡av一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 久久久国产成人免费| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲人成77777在线视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 妹子高潮喷水视频| av在线天堂中文字幕 | 男人舔女人的私密视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 在线播放国产精品三级| 大型黄色视频在线免费观看| 精品福利永久在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 午夜福利欧美成人| 99在线视频只有这里精品首页| 超碰成人久久| 宅男免费午夜| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品av久久久久免费| 伦理电影免费视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 免费看十八禁软件| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲色图av天堂| 成年人免费黄色播放视频| www国产在线视频色| 日韩中文字幕欧美一区二区| 在线天堂中文资源库| 一级片'在线观看视频| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人精品久久二区二区91| 精品国内亚洲2022精品成人| 午夜福利欧美成人| bbb黄色大片| 久热爱精品视频在线9| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 91大片在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 日韩高清综合在线| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 成年人黄色毛片网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲成av片中文字幕在线观看| www国产在线视频色| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 69av精品久久久久久| 91精品国产国语对白视频| 精品人妻在线不人妻| 久久这里只有精品19| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久中文字幕一级| 午夜免费鲁丝| 日韩精品免费视频一区二区三区| 视频区图区小说| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产高清videossex| 新久久久久国产一级毛片| 国产精华一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品综合久久久久久久免费 | 黄频高清免费视频| 黄片播放在线免费| 一a级毛片在线观看| 99久久国产精品久久久| 亚洲专区国产一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久青草综合色| 两个人免费观看高清视频| 桃色一区二区三区在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 9191精品国产免费久久| 久久精品国产清高在天天线| 首页视频小说图片口味搜索| 国产亚洲av高清不卡| 免费观看人在逋| 窝窝影院91人妻| 在线永久观看黄色视频| 欧美黄色淫秽网站| 丝袜在线中文字幕| 最近最新免费中文字幕在线| 91九色精品人成在线观看| www.999成人在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 午夜免费成人在线视频| 久久九九热精品免费| 老司机在亚洲福利影院| 日韩视频一区二区在线观看| 午夜免费鲁丝| 国产av一区二区精品久久| 操美女的视频在线观看| 不卡一级毛片| 久久久久久久精品吃奶| 在线观看舔阴道视频| 91精品三级在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 涩涩av久久男人的天堂| 成人黄色视频免费在线看| av免费在线观看网站| 免费观看人在逋| 中文字幕高清在线视频| 国产精品二区激情视频| 午夜成年电影在线免费观看| 久久人人精品亚洲av| 免费在线观看黄色视频的| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲久久久国产精品| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 在线观看免费高清a一片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久99久视频精品免费| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 免费人成视频x8x8入口观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产一区二区三区综合在线观看| 正在播放国产对白刺激| 国产一区在线观看成人免费| 日本wwww免费看| 黄色 视频免费看| 超色免费av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久青草综合色| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 1024视频免费在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 91av网站免费观看| 一级毛片高清免费大全| 91精品三级在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久国产成人精品二区 | 亚洲免费av在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 波多野结衣一区麻豆| 丰满饥渴人妻一区二区三| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 免费高清在线观看日韩| 久久国产亚洲av麻豆专区| 99精品欧美一区二区三区四区| 在线播放国产精品三级| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品欧美一区二区三区在线| 国产男靠女视频免费网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产99白浆流出| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久国产精品影院| av网站免费在线观看视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 看黄色毛片网站| 国产三级黄色录像| 高潮久久久久久久久久久不卡| 午夜福利,免费看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产激情久久老熟女| 精品一区二区三卡| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲少妇的诱惑av| 视频区图区小说| 亚洲专区中文字幕在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久性视频一级片| 午夜激情av网站| 一级片免费观看大全| 亚洲国产精品合色在线| 18禁美女被吸乳视频| 黑人操中国人逼视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 88av欧美| 国产片内射在线| 99re在线观看精品视频| 午夜福利一区二区在线看| 波多野结衣一区麻豆| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久久久九九精品影院| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久 成人 亚洲| 国产黄a三级三级三级人| 一级毛片女人18水好多| 亚洲久久久国产精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲av美国av| 国产人伦9x9x在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 成人三级黄色视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久久国产欧美日韩av| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费在线观看亚洲国产| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产麻豆69| 亚洲少妇的诱惑av| 国产97色在线日韩免费| 最好的美女福利视频网| 在线av久久热| 精品久久久久久,| 免费在线观看亚洲国产| 久久久久久人人人人人| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产99白浆流出| 成年人黄色毛片网站| 日本黄色视频三级网站网址| 超色免费av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 午夜福利在线观看吧| 国产精品1区2区在线观看.| cao死你这个sao货| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 韩国av一区二区三区四区| 一个人免费在线观看的高清视频| 丁香六月欧美| 黄色视频不卡| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日韩欧美三级三区| 色尼玛亚洲综合影院| 一a级毛片在线观看| www国产在线视频色| 国产三级在线视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 不卡一级毛片| 男人的好看免费观看在线视频 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 精品电影一区二区在线| 成人手机av| 久久香蕉精品热| 视频在线观看一区二区三区| 麻豆成人av在线观看| 亚洲精华国产精华精| 曰老女人黄片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美激情高清一区二区三区| 国产熟女xx| 香蕉丝袜av| 91九色精品人成在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 午夜日韩欧美国产| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产激情欧美一区二区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品久久久久久电影网| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人国产一区最新在线观看| 女警被强在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩视频一区二区在线观看| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲 国产 在线| 操出白浆在线播放| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 热99re8久久精品国产| 日本五十路高清| 久久久久性生活片| 日本五十路高清| 国产亚洲欧美98| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品爽爽va在线观看网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 嫩草影院新地址| 亚洲av二区三区四区| 亚洲欧美清纯卡通| 国产免费一级a男人的天堂| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品影院久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩免费av在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产成人aa在线观看| 精品人妻1区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产探花极品一区二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 女同久久另类99精品国产91| 日本一二三区视频观看| 亚洲成人久久性| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 99热只有精品国产| 国产精品电影一区二区三区| 99国产综合亚洲精品| 99国产精品一区二区三区| 最近最新免费中文字幕在线| 我的老师免费观看完整版| 一级黄片播放器| 美女大奶头视频| 免费黄网站久久成人精品 | 成人美女网站在线观看视频| 精品午夜福利在线看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久人人爽人人爽人人片va | 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美色欧美亚洲另类二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产 一区 欧美 日韩| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人永久免费在线观看视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产美女午夜福利| 色在线成人网| 免费黄网站久久成人精品 | 脱女人内裤的视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩精品中文字幕看吧| 免费观看的影片在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 婷婷丁香在线五月| 91麻豆精品激情在线观看国产| 99久久精品一区二区三区| 欧美一区二区亚洲| 欧美不卡视频在线免费观看| 禁无遮挡网站| 99国产极品粉嫩在线观看| 校园春色视频在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲午夜理论影院| 老鸭窝网址在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日本黄色片子视频| 久久久成人免费电影| 看片在线看免费视频| 岛国在线免费视频观看| 国产极品精品免费视频能看的| 精品无人区乱码1区二区| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲三级黄色毛片| 天美传媒精品一区二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 午夜激情欧美在线| av欧美777| 脱女人内裤的视频| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产午夜精品论理片| 欧美成人a在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 最新在线观看一区二区三区| 丰满的人妻完整版| 国产精品野战在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 成人av一区二区三区在线看| 如何舔出高潮| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 成人永久免费在线观看视频| 最后的刺客免费高清国语| 国产三级中文精品|