經(jīng)典名方苓桂術(shù)甘湯復(fù)方制劑的研制

李 玲，季 光，張 彤*，肖 偉

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，上海 201203； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院脾胃病科，上海中醫(yī)藥大學(xué)脾胃病研究所，上海 200032； 3.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222000）

中醫(yī)藥是中國古代科學(xué)的瑰寶，也是打開中華文明寶庫的鑰匙，其發(fā)展已上升為國家戰(zhàn)略。經(jīng)典名方作為中醫(yī)理論的載體、臨床治療的主要手段，不僅體現(xiàn)中醫(yī)藥系統(tǒng)的理論體系和實(shí)踐成果，也是我國獨(dú)特的衛(wèi)生資源、科技資源和產(chǎn)業(yè)發(fā)展資源。為了促進(jìn)中藥傳承創(chuàng)新和中藥高質(zhì)量發(fā)展，2020年9 月，國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《中藥注冊分類及申報(bào)資料要求》，將中藥注冊分為4 類，其中3.1 類為按古代經(jīng)典名方目錄管理的古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑。

上海中醫(yī)藥大學(xué)季光教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，苓桂術(shù)甘湯治療非酒精性脂肪肝具有良好效果，其復(fù)方制劑——苓桂術(shù)甘顆粒的開發(fā)自2014 年以來已歷時8 年多，其間江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司肖偉院士牽頭承擔(dān)“十三五重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)-基于中醫(yī)典籍的經(jīng)典名方研發(fā)” 任務(wù)，該品種上市既是產(chǎn)教合作研發(fā)的成果，也是2 家合作單位研究團(tuán)隊(duì)長期努力探索的成果，并且研發(fā)過程中得到國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心和重大專項(xiàng)專家們的指導(dǎo)和大力支持。

本研究基于苓桂術(shù)甘顆粒研發(fā)的實(shí)踐，對經(jīng)典名方復(fù)方制劑研發(fā)關(guān)鍵環(huán)節(jié)中存在的共性問題進(jìn)行整理，并以苓桂術(shù)甘湯為例進(jìn)行解析，以期形成適用于3.1 類中藥的研發(fā)策略，為其他經(jīng)典名方的研發(fā)提供思路與參考。

1 關(guān)鍵信息準(zhǔn)確考證是古代經(jīng)典名方研發(fā)之源

經(jīng)典名方源自古代經(jīng)典醫(yī)籍或有代表性的古醫(yī)籍，為各代醫(yī)家長期使用并沿用至今，療效確切，其處方組成、藥材基原、藥用部位、炮制規(guī)格、折算劑量、用法用量、功能主治等內(nèi)容是中藥3.1 類研發(fā)的依據(jù)。關(guān)鍵信息的準(zhǔn)確考證是古代經(jīng)典名方研發(fā)成功的關(guān)鍵，亦是古代經(jīng)典名方開發(fā)的難點(diǎn)，在具體品種的關(guān)鍵信息考證上存在很多不同觀點(diǎn)，在國家發(fā)布古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息后，相關(guān)品種關(guān)鍵信息應(yīng)與其一致?！皞鞒芯A” 是中藥3.1 類中藥新藥研發(fā)需遵循的基本原則，也經(jīng)典名方復(fù)方制劑研發(fā)“創(chuàng)新發(fā)展” 的基礎(chǔ)，應(yīng)從歷史和發(fā)展的角度去解決關(guān)鍵信息考證中的共性問題。

1.1 已公布的古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息匯總與分析

目前，按古代經(jīng)典名方目錄管理的經(jīng)典名方有100 首，已公布關(guān)鍵信息的古代經(jīng)典名方有32 首，對于未公布關(guān)鍵信息的經(jīng)典名方的研發(fā)工作，建議加強(qiáng)古籍考證工作。而已公布的《古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息表（7 首方劑） 》 《古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息表（25 首方劑） 》 可為3.1 類及3.2 類未公布關(guān)鍵信息的經(jīng)典名方的考證提供有價(jià)值的借鑒意義［1-2］。本研究對這2 個文件進(jìn)行仔細(xì)研讀和歸納總結(jié)，發(fā)現(xiàn)其在不同時期的度量衡、藥材基原、炮制方法及制法用法等方面具有一定的內(nèi)在規(guī)律。

已公布關(guān)鍵信息的經(jīng)典名方中度量衡的變化可歸納為3 個時期，分別為漢唐兩朝、宋金元時期、明清時期，具體見表1，此外，還有部分藥物使用“個” “枚” 等特殊單位，具體見表2。另外，若藥材使用劑量為區(qū)間者，則取其中間值，如古籍記載“熟地三、五錢”，則使用四錢為宜，同理，“生姜三、五、七片” 可取五片。

表1 歷代度量衡折算Tab.1 Conversions of weights and measures in previous dynasties

表2 藥材特殊單位折算劑量Tab.2 Converted doses of medicinal material at special units

經(jīng)典名方中多數(shù)藥味的基原經(jīng)過考證后，與2020 年版《中國藥典》 所收錄的品種一致，但少數(shù)也有變化，如2020 年版《中國藥典》 規(guī)定的甘草本品為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根和根莖，但已公布關(guān)鍵信息的古代經(jīng)典名方中甘草基原均為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，同時藥味名稱也應(yīng)考慮歷史演變，如歷代郁金的基原考證為今姜科植物CurcumalongaL.的干燥根莖。自清代中后期以來，受產(chǎn)量、交通等因素影響，將本屬多種植物的卵形或紡錘形塊根作為郁金使用，而Curcuma longaL.的干燥根莖稱為“姜黃”，為避免名稱混亂，可將經(jīng)典名方中的“郁金” 表述為“姜黃”。

在確定藥物炮制方法時，需要注意處方中未注明炮制的藥物，其使用的未必都是未經(jīng)炮制的生品，還可能已在總論章節(jié)中提及，如《備急千金要方·卷一·序例》之“合和” 篇記載： “凡用甘草、厚樸、枳實(shí)、石南、茵芋、藜蘆、皂莢之類，皆炙之”。關(guān)于制法用法，煮散劑中“口父咀” “銼散” “為末” 可歸納為應(yīng)將藥味粉碎成粗粒，“治下篩” 則表明藥味應(yīng)粉碎為細(xì)粉。若未明確是日服量還是單次服量，建議結(jié)合臨床實(shí)際，每天1～3劑，遵醫(yī)囑使用。

1.2 苓桂術(shù)甘湯關(guān)鍵信息考證難點(diǎn)解析

1.2.1 桂枝藥用部位 唐以前，肉桂、桂枝、桂心都是肉桂的樹枝之皮［3-6］。北宋桂枝是桂的枝皮，而非嫩枝，干皮當(dāng)時不入藥［7］，《本草衍義》［8］記載： “仲景又言桂枝者，蓋亦取其枝上皮。其木身粗濃處，亦不中用”，但目前“枝皮” 已不入藥。2020 年版《中國藥典》 收載的肉桂為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl 的干燥樹皮，呈槽狀或卷筒狀［9］，為樹干的樹皮，非樹枝的“枝皮”。南宋開始，醫(yī)家注意到桂的樹皮（包括干皮、枝皮） 與嫩枝功能有差異，于是宋元時期樹皮稱為“肉桂”，嫩枝稱為“桂枝”［10-12］。

肉桂和桂枝功效不一樣，《湯液本草》［12］記載： “仲景傷寒發(fā)汗用桂枝。桂枝者，桂條也，非身干也，取其輕薄而能發(fā)散。仲景湯液用桂枝發(fā)表，用肉桂補(bǔ)腎，本乎天者親上，本乎地者親下，理之自然，性分之所不可移也”，桂枝湯里的桂枝振心陽，讓太陽經(jīng)傷寒微發(fā)汗； 苓桂術(shù)甘湯桂枝“溫通經(jīng)脈，助陽化氣” 以達(dá)溫陽化飲之功； 肉桂是溫腎陽，重在“補(bǔ)火助陽，引火歸元”?？紤]到歷史沿革和目前藥材飲片標(biāo)準(zhǔn)收載情況，在苓桂術(shù)甘湯中用桂枝，與2020 年版《中國藥典》 一致。

1.2.2 甘草基原 對于甘草基原的選擇方法，一是從產(chǎn)地，早有河西（南北朝），陜西河?xùn)|洲郡、青州、河羌（北宋），山西隆慶洲（明），良諸郡（清） 等描述。根據(jù)產(chǎn)地調(diào)研，以上地址為現(xiàn)山西省、陜西省及甘肅省內(nèi)區(qū)域。經(jīng)過長年的采挖，甘草的主產(chǎn)地發(fā)生變化。直到二十世紀(jì)，東北、寧夏、新疆等地區(qū)的甘草才逐漸聞名［13］； 二是從外觀，《本草圖經(jīng)》［14］、《本草蒙筌》［15］、《本草綱目》［16］均繪有甘草的原植物圖例，與《全國中草藥匯編》［17］、《中藥鑒定學(xué)》［18］中的原植物圖進(jìn)行比較，大體古代所用甘草來源與現(xiàn)代豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.相同。

甘草歷史上由于外觀相近、產(chǎn)地重疊等因素，可能有多種基原混用的現(xiàn)象。目前，甘草GlycyrrhizauralensisFisch.多產(chǎn)于東北，山西，陜北榆林，內(nèi)蒙古，沿黃河河套經(jīng)寧夏、甘肅、青海、北疆、東疆，光果甘草GlycyrrhizaglabraL.產(chǎn)于新疆，脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.產(chǎn)于南疆、東疆、甘肅金塔［13］，3 種基原產(chǎn)地具有一定重疊的現(xiàn)象。根據(jù)種屬分類，甘草、脹果甘草、光果甘草均屬于長莢果系，可從原植物的莢果及葉緣進(jìn)行區(qū)分，但甘草入藥部位為根及根莖，其外觀性狀無明顯差異，通過性狀進(jìn)行基原鑒別準(zhǔn)確性欠佳。

3 種基原的甘草在指標(biāo)成分、指紋圖譜等方面存在一定差異，雖然已有對其指紋圖譜［19］、特殊成分含量測定［20］的報(bào)道，但尚未發(fā)現(xiàn)可明確區(qū)分的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。DNA 分子鑒定技術(shù)［21］作為現(xiàn)代新興手段，具有操作簡單、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，目前已有較成熟的基于ITS2 條形碼序列鑒定藥用甘草的方法［22］，課題組前期采用該方法對各研究階段的30 批甘草進(jìn)行基原鑒別，發(fā)現(xiàn)均為甘草Glycyrrhiza uralensisFisch.，后續(xù)可加大對DNA 分子鑒定等新興技術(shù)的研究，用于多基原藥材的準(zhǔn)確鑒定。

2 藥材飲片的全過程質(zhì)量控制是經(jīng)典名方研發(fā)之基

加強(qiáng)源頭質(zhì)量控制，保障制劑質(zhì)量，鼓勵使用優(yōu)質(zhì)藥材為原料，進(jìn)行飲片炮制和制劑生產(chǎn)。在中藥3.1 類新藥的研發(fā)和生產(chǎn)中，應(yīng)從藥材基原、產(chǎn)地、種植養(yǎng)殖、生長年限、采收加工、飲片炮制及包裝貯藏等多個方面加強(qiáng)藥材和飲片的質(zhì)量控制，從源頭保障制劑的質(zhì)量。

2.1 有效加強(qiáng)藥材飲片研究全過程質(zhì)量控制 首先，進(jìn)行多批次多產(chǎn)地的藥材質(zhì)量研究。在道地產(chǎn)區(qū)或主產(chǎn)區(qū)中收集不少于3 個產(chǎn)地，總計(jì)不少于15 批藥材進(jìn)行藥材質(zhì)量研究。此環(huán)節(jié)以符合2020年版《中國藥典》 要求作為藥材納入標(biāo)準(zhǔn)，可了解全國各地臨床實(shí)際使用藥材質(zhì)量的離散情況。由于研究用藥材產(chǎn)地分布范圍廣，納入研究的藥材質(zhì)量批次間波動范圍大，更易于觀察分析藥材質(zhì)量和產(chǎn)地之間的關(guān)系，綜合分析藥材中指標(biāo)成分含量、浸出物、水分、灰分、指紋/特征圖譜等，確定藥材產(chǎn)地，并結(jié)合文獻(xiàn)及藥材基地實(shí)際種植情況，確定生長年限、采收期、產(chǎn)地加工。

其次，合理制定藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在2020 年版《中國藥典》 基礎(chǔ)上制定藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提升藥材質(zhì)量，按照《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行） 》 要求，基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分的含量波動范圍一般不超過均值的30%，即綜合不少于15 批藥材的質(zhì)量研究情況，應(yīng)進(jìn)一步確定藥材中指標(biāo)成分的波動范圍不超過均值的30%。根據(jù)具體品種研究情況，可進(jìn)一步縮窄藥材中指標(biāo)成分的波動范圍，以保障基準(zhǔn)樣品和生產(chǎn)驗(yàn)證樣品的合理波動，明確各藥味的藥材產(chǎn)地、生長年限、采收期、產(chǎn)地加工及質(zhì)量要求，合理制定藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如為多基原，一般應(yīng)明確單一基原，若確需使用多個基原，應(yīng)固定使用比例。

最后，采用符合擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥材進(jìn)行后續(xù)研究。以制定的藥材標(biāo)準(zhǔn)為納入標(biāo)準(zhǔn)，收集藥材進(jìn)行炮制工藝研究。如飲片的炮制規(guī)格沒有相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范收載，一般應(yīng)根據(jù)古籍文獻(xiàn)記載，并且參照2020 年版《中國藥典》 的炮制通則相關(guān)要求進(jìn)行工藝的研究，明確工藝參數(shù)，并開展藥材-飲片的相關(guān)性研究，根據(jù)相關(guān)性研究結(jié)果合理制定飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上，使用質(zhì)量穩(wěn)定的飲片，用于后續(xù)的基準(zhǔn)樣品和制劑的研究。

2.2 苓桂術(shù)甘湯藥材飲片研究難點(diǎn)解析 古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑研究中藥材的準(zhǔn)確溯源是一個共性難題，當(dāng)前中藥飲片廠的藥材來源多為多地收購，可明確產(chǎn)地至省或市，但進(jìn)一步溯源到縣和藥材種植基地，存在實(shí)際困難。為了解決藥材可溯源性，從合作企業(yè)簽約的基地或其他已建立合作的藥材種植基地直接采集，建立每批藥材的信息庫，從種養(yǎng)殖情況到產(chǎn)地初加工等，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)溯源，但此方法存在收集藥材效率較低、周期較長的問題。期待建立中藥全產(chǎn)業(yè)鏈追溯平臺，實(shí)現(xiàn)中藥材基地種植-產(chǎn)地初加工-藥材炮制-飲片供應(yīng)等生產(chǎn)全過程追溯，為古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑提供優(yōu)質(zhì)可溯源的飲片質(zhì)量保障。

此外，多批藥材和飲片的妥善保存也具有一定挑戰(zhàn)性。藥材飲片及基準(zhǔn)樣品研究具有一定的研發(fā)周期，需保障藥材飲片在研究期間質(zhì)量的穩(wěn)定性。可根據(jù)不同品種藥材的特點(diǎn)分類管理，必要時可抽真空密封，冷藏，做好藥材進(jìn)出臺賬，實(shí)現(xiàn)研究過程中藥材飲片的可追溯。

苓桂術(shù)甘顆粒處方所用藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在符合2020 年版《中國藥典》 標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，明確多基原藥材的基原、固定藥味的產(chǎn)地、增加特征圖譜檢查項(xiàng)，同時對桂枝和甘草藥材指標(biāo)成分的含量進(jìn)行限度控制。此外，需對飲片炮制工藝進(jìn)行研究，明確主要工藝參數(shù)，并根據(jù)藥材-飲片的相關(guān)性研究結(jié)果，進(jìn)一步明確飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并且要高于2020年版《中國藥典》。所有質(zhì)控研究和關(guān)鍵質(zhì)控點(diǎn)的設(shè)立是建立從藥材、飲片炮制到制劑的全過程質(zhì)量控制體系為目的，最終保證制劑產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定。

3 與基準(zhǔn)樣品質(zhì)量的一致性是制劑工藝設(shè)計(jì)之錨

基準(zhǔn)樣品應(yīng)根據(jù)國家發(fā)布的關(guān)鍵信息中古籍記載的制法制備，如古籍記載較少或未明確制法，可參照醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范進(jìn)行制備。制劑生產(chǎn)研究是以制得的制劑與基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量基本一致為目標(biāo)進(jìn)行生產(chǎn)工藝和參數(shù)的研究，明確商業(yè)規(guī)模的制劑生產(chǎn)工藝及關(guān)鍵工藝參數(shù)，生產(chǎn)過程控制方法。完成生產(chǎn)工藝驗(yàn)證，并說明制劑工藝的穩(wěn)定可行性、制劑質(zhì)量與基準(zhǔn)樣品質(zhì)量的一致性。

3.1 含揮發(fā)性成分處方中揮發(fā)油的處理 按《古代經(jīng)典名方目錄》 管理的經(jīng)典名方中部分處方含揮發(fā)性成分，關(guān)于揮發(fā)油的處理已然成為經(jīng)典名方研發(fā)的共性問題，該類成分是否應(yīng)該保留、如何保留、保留多少、如何實(shí)現(xiàn)有效準(zhǔn)確的保留等是困擾經(jīng)典名方研發(fā)科研工作者的難題之一。本研究認(rèn)為，關(guān)于含揮發(fā)性成分處方中揮發(fā)油保留與否，取決于按古籍制法所制得湯液中是否含有揮發(fā)性成分，若有，則可結(jié)合處方的組成，藥物所含的成分、功能主治、中醫(yī)藥理論等內(nèi)容，綜合考慮是否保留揮發(fā)性的成分?；鶞?zhǔn)樣品對標(biāo)湯劑服用時的狀態(tài)，而復(fù)方制劑工藝設(shè)計(jì)則以患者服用時能恢復(fù)湯劑的質(zhì)量屬性為目標(biāo)。

而在現(xiàn)代制劑過程中，保留多少同樣取決于湯液中含有多少量揮發(fā)性成分，只有在現(xiàn)代制劑和基準(zhǔn)樣品質(zhì)量一致的前提下，方可確保安全性和有效性。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，桂枝湯中桂枝含有桂皮醛等揮發(fā)性成分，生姜含有6-姜辣素等揮發(fā)性成分，煎煮時間、濃縮過程對這2 類揮發(fā)性成分的保留情況影響顯著，煎煮時間過長或采用常規(guī)減壓濃縮干燥方法時桂皮醛基本損失殆盡，但6-姜辣素卻能較好地保留，根據(jù)道爾頓分壓定律推測，可能與不同揮發(fā)性成分的飽和蒸汽壓等物理化學(xué)性質(zhì)差異相關(guān)。研究表明，在湯劑的現(xiàn)代劑型研制過程中揮發(fā)性成分并非提取率越高越好，這是因?yàn)閾]發(fā)性成分生物活性較強(qiáng)，含量過高時會出現(xiàn)毒性［23-24］。

經(jīng)典名方中揮發(fā)性成分的有效、穩(wěn)定地保留是一個科學(xué)問題，UPLC-Q-TOF/MS、GC-MS/MS 等技術(shù)可幫助研究者更清楚地了解湯劑中化學(xué)成分概貌，而如何保留，則需探索不同理化性質(zhì)的揮發(fā)性成分在湯劑煎煮、濃縮、干燥過程中的保留行為及其機(jī)制，具體涉及2 個方面。一方面，是基準(zhǔn)樣品中藥材-飲片-中間體（標(biāo)準(zhǔn)煎液） -基準(zhǔn)樣品中揮發(fā)性成分的保留及量值傳遞情況，尤其需關(guān)注中間體（標(biāo)準(zhǔn)煎液） -基準(zhǔn)樣品過程中可能涉及的濃縮、干燥等步驟對揮發(fā)性成分的保留，一般認(rèn)為基準(zhǔn)樣品應(yīng)保留標(biāo)準(zhǔn)煎液的質(zhì)量原貌，在眾多濃縮干燥方法中，冷凍干燥法因其由固體直接升華為水蒸氣的特點(diǎn)，對揮發(fā)性成分較友好，可考慮使用，但也應(yīng)關(guān)注冷凍干燥工藝參數(shù)可能對揮發(fā)性成分的影響以及研究期間基準(zhǔn)樣品的穩(wěn)定性； 另一方面，需通過基準(zhǔn)樣品中揮發(fā)性成分的保留特性、成分組成及含量，設(shè)計(jì)合理的復(fù)方制劑工藝路線?？筛鶕?jù)含揮發(fā)性成分的藥材-飲片-液體中間體（揮發(fā)油/芳香水） -固體中間體（包合物或其他） -制劑的相關(guān)性研究結(jié)果，推算前序工藝中揮發(fā)油/芳香水的合理接收量和接收速率，達(dá)到揮發(fā)性成分的穩(wěn)定、準(zhǔn)確的傳遞。若揮發(fā)性成分轉(zhuǎn)移率過低，則可考慮增加前期各階段工藝過程中揮發(fā)性成分權(quán)重［25］。

3.2 基于工序損耗前置的復(fù)方制劑工藝路線設(shè)計(jì) 王海南在中藥審評審批改革與中藥注冊分類——2020 第四屆中國創(chuàng)新藥論壇發(fā)言中指出，因?yàn)榛颊吆认氯サ氖菧珓?，起效的物質(zhì)就在湯劑里，故按照標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定工藝參數(shù)、制定藥品標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)質(zhì)是以臨床為導(dǎo)向制藥理念的反映，體現(xiàn)對臨床實(shí)踐的尊重，是科學(xué)合理的［26］。另外，也可考慮將標(biāo)準(zhǔn)湯劑的標(biāo)準(zhǔn)作為確定基準(zhǔn)樣品和復(fù)方制劑工藝優(yōu)選的標(biāo)準(zhǔn)，在提取工藝研究中采用將主觀賦權(quán)法與客觀賦權(quán)法相結(jié)合的AHP-熵權(quán)法來綜合確定質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，科學(xué)地處理多個指標(biāo)在質(zhì)量控制體系中的占比重，通過綜合評分確定與基準(zhǔn)樣品最接近的現(xiàn)代提取工藝參數(shù)，可為經(jīng)典名方的研發(fā)提供參考［27］，但也有待進(jìn)一步完善，即它是將復(fù)方制劑中間體質(zhì)量與基準(zhǔn)樣品進(jìn)行關(guān)聯(lián)比對，而現(xiàn)代制劑工藝中提取后還有濃縮、干燥、粉碎、混合等工序，均有一定程度的客觀損耗，即在保證提取液質(zhì)量與基準(zhǔn)樣品一致性的基礎(chǔ)上，終產(chǎn)品復(fù)方制劑與基準(zhǔn)樣品的一致性難以保證。

按照《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行） 》 （2021 年第36 號） 要求［28］，基準(zhǔn)樣品干膏率的波動范圍應(yīng)為10%，對復(fù)方制劑工藝設(shè)計(jì)提出很大的挑戰(zhàn)。本研究認(rèn)為，制劑工藝設(shè)計(jì)時可以將生產(chǎn)批次制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性與經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品確定的關(guān)鍵質(zhì)量屬性一致為目標(biāo)，將小試提取工藝結(jié)果為設(shè)計(jì)起點(diǎn)，綜合考慮復(fù)方制劑的制備過程中濃縮、干燥、粉碎、總混等工序的損耗，以及小試-中試放大-生產(chǎn)驗(yàn)證逐步放大過程中可能產(chǎn)生的損耗?？紤]制備過程中濃縮工序的收率為95% ～100%，干燥工序的物料收率為90% ～100%，粉碎工序的物料收率為98% ～100%，總混工序的物料收率為98% ～100%，小試-中試放大轉(zhuǎn)移率為95% ～105%，中試放大-生產(chǎn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)移率為95% ～105%，以各工序和環(huán)節(jié)的收率范圍預(yù)測生產(chǎn)驗(yàn)證制劑終產(chǎn)品的干膏率和關(guān)鍵質(zhì)量屬性的質(zhì)量。因此，應(yīng)科學(xué)確定關(guān)鍵質(zhì)量屬性的權(quán)重系數(shù)，結(jié)合綜合評分確定各工序工藝參數(shù)，建立適合經(jīng)典名方復(fù)方制劑的工藝路線。

3.3 苓桂術(shù)甘湯制劑工藝設(shè)計(jì)的難點(diǎn)解析 在苓桂術(shù)甘湯基準(zhǔn)樣品研究中發(fā)現(xiàn)，“一碗湯” 中保留著桂枝飲片中6%左右的桂皮醛，即中藥湯劑中保留部分揮發(fā)性成分。苓桂術(shù)甘湯中桂枝和白術(shù)均含揮發(fā)性成分，其揮發(fā)油在方中可協(xié)助發(fā)揮溫陽化氣、健脾燥濕的功效，被認(rèn)為是苓桂術(shù)甘湯治中陽不足之痰飲的中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一，因此，考慮將揮發(fā)性成分進(jìn)行合理有效保留。由于桂枝和白術(shù)混合揮發(fā)性成分與水密度相近，油水分離效果不佳，無法得到揮發(fā)油，故圍繞“如何對揮發(fā)性成分進(jìn)行保留” 這一問題，本研究采用雙提法進(jìn)行提取，即在收集水提液的同時收集芳香水，再將后者與倍他環(huán)糊精包合，可解決苓桂術(shù)甘湯中揮發(fā)性成分的保留問題，并提高其穩(wěn)定性，并對中間體中桂皮醛含量進(jìn)行嚴(yán)格控制，可對成品的質(zhì)量起到保障作用。為了使制劑與經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品物質(zhì)基礎(chǔ)保持良好的一致性，在制備工藝中未引入除水之外的其他溶劑進(jìn)行提取純化，從而不涉及溶劑殘留問題。此外，揮發(fā)性成分的合理保留使制劑更加符合臨床湯劑的真實(shí)服用狀態(tài)，還原苓桂術(shù)甘湯的原貌，也保障了制劑的安全性和有效性。

基準(zhǔn)樣品的制備工藝與國家發(fā)布的古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息及古籍記載內(nèi)容一致，即苓桂術(shù)甘湯每個處方165.6 g，加1 200 mL 水煎至600 mL，可知7.25 倍加水量是合理可行的。按照基于現(xiàn)代制劑各工序損耗前置的工藝路線設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)小試、中試、大生產(chǎn)復(fù)方制劑中間體與基準(zhǔn)樣品出膏率等各關(guān)鍵質(zhì)量屬性的一致。

4 量質(zhì)傳遞與多維質(zhì)控體系是經(jīng)典名方研發(fā)之魂

從質(zhì)量要素完整性表達(dá)及全過程質(zhì)量控制角度，通過專屬性鑒別、浸出物、多成分含量測定、指紋/特征圖譜等質(zhì)控手段和方法進(jìn)行藥材-飲片-中間體-制劑的相關(guān)性研究，確定質(zhì)量控制的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。建立經(jīng)典名方關(guān)鍵質(zhì)量屬性檢測鑒定方法，可明確關(guān)鍵質(zhì)量屬性量質(zhì)傳遞規(guī)律，完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并建立符合中藥特點(diǎn)的從藥材-飲片-中間體-制劑全過程、多維度的質(zhì)量控制體系，從而保障制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控。

4.1 關(guān)鍵質(zhì)量屬性的選擇 經(jīng)典名方與傳統(tǒng)中藥新藥研發(fā)思路有所區(qū)別，簡單地將2020 年版《中國藥典》 中藥材飲片的質(zhì)控指標(biāo)作為經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品和復(fù)方制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性的做法是不可取的。本研究認(rèn)為，應(yīng)致力于還原“一碗湯” 的化學(xué)概貌，即湯里有什么就質(zhì)控什么，若為含揮發(fā)性成分處方，應(yīng)建立揮發(fā)性成分和水溶性成分的雙重質(zhì)控方法。原則上，處方中各藥味均應(yīng)在制劑質(zhì)量控制項(xiàng)目中體現(xiàn)，應(yīng)建立多個藥味的含量測定方法［28］，但部分處方中存在個別藥味質(zhì)量控制難以體現(xiàn)的問題，如水溶性成分含量極低而不適于建立定量檢測方法，或與方中其他藥味存在陰性干擾無特異性，可考慮建立2 張或2 張以上基準(zhǔn)樣品的指紋/特征圖譜，用于不同藥味或成分的質(zhì)控，或建立可用于該藥味的薄層色譜方法與定量檢測指標(biāo)互為補(bǔ)充，同時需建立干膏率和適用于本處方的浸出物等質(zhì)控方法。此外，若處方藥味中存在部分藥味含內(nèi)源性毒性成分，則應(yīng)建立內(nèi)源性毒性成分的質(zhì)控方法，并關(guān)注外源性有害物質(zhì)的控制，以期實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的全面質(zhì)量控制。

4.2 關(guān)注生產(chǎn)全過程的量質(zhì)傳遞 采用指標(biāo)成分的含量、指紋/特征圖譜等指標(biāo)，對中試規(guī)模以上生產(chǎn)的中間體、制劑及所用的藥材、飲片進(jìn)行相關(guān)性研究，并與基準(zhǔn)樣品進(jìn)行質(zhì)量對比，說明生產(chǎn)全過程的量質(zhì)傳遞情況，根據(jù)結(jié)果確定藥材、飲片、中間體、制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控指標(biāo)，合理確定其波動范圍［28］。在研究過程中，應(yīng)關(guān)注關(guān)鍵質(zhì)量屬性的逐級傳遞，因?yàn)殡S著工藝波動，其質(zhì)量波動范圍將逐級放大，故建議根據(jù)相關(guān)性研究結(jié)果，并結(jié)合最終基準(zhǔn)樣品的合理波動范圍，進(jìn)一步收窄中間體、飲片、藥材的關(guān)鍵質(zhì)量屬性范圍。

《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行） 》 要求，應(yīng)至少從干膏率、浸出物/總固體、指標(biāo)成分的含量、指紋/特征圖譜等方面，說明商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)制劑的質(zhì)量與基準(zhǔn)樣品質(zhì)量的一致性［28］，并且明確生產(chǎn)制劑的質(zhì)量與基準(zhǔn)樣品質(zhì)量的一致性的項(xiàng)目，以及合理波動的范圍，即干膏率的波動范圍一般不超過平均值的10%，指標(biāo)成分的含量波動范圍一般不超過均值的30%，但相較于其他檢測項(xiàng)目，干膏率與工藝的變化關(guān)系密切，故其平均值10% 的波動限定較為嚴(yán)苛。因此復(fù)方制劑研究中需合理確定工藝參數(shù)控制范圍，并明確關(guān)鍵工藝參數(shù)控制點(diǎn)，并關(guān)注實(shí)驗(yàn)室小試-中試-生產(chǎn)逐級放大中干膏率的變化情況，以生產(chǎn)批次制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性與經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品確定的關(guān)鍵質(zhì)量屬性一致為目標(biāo)進(jìn)行工藝設(shè)計(jì)和優(yōu)選。

4.3 苓桂術(shù)甘湯量質(zhì)傳遞與質(zhì)量控制研究難點(diǎn)解析 在藥材和飲片相關(guān)性研究中，易出現(xiàn)指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率過高或過低，或轉(zhuǎn)移率波動過大的情況，可考慮從以下3 個方面尋找原因并進(jìn)行改進(jìn)，①關(guān)注藥材和飲片取樣的規(guī)范性，一般應(yīng)參考2020 年版《中國藥典》 四部0211 藥材和飲片取樣法進(jìn)行規(guī)范取樣； ②關(guān)注藥材自身特點(diǎn)，考慮取樣量是否符合檢測要求。文獻(xiàn)［29-30］ 報(bào)道，苓桂術(shù)甘湯藥材中指標(biāo)成分的分布具有其自身特點(diǎn)，桂枝皮部桂皮醛含量比木質(zhì)部高1 ～2 倍，桂枝皮部肉桂酸含量比木質(zhì)部高2 ～3 倍以上； 甘草中甘草苷主要分布在木質(zhì)部和韌皮部，其中以木質(zhì)部和根皮中含量較高，而在韌皮部中較低，即同一個枝/根的桂枝/甘草藥材粗部和細(xì)部含量亦存在差異，若藥材檢測取樣量為200 g，其中桂枝約3 ～7 根（枝頭約0.5 cm，枝尾約1 cm，長約30 ～50 cm），甘草約2 ～5根（頭徑約1.5～3 cm，尾徑約1 cm，長約25 ～60 cm），由于指標(biāo)成分在桂枝和甘草藥材中存在非均勻分布的現(xiàn)象，對藥材和飲片的含測檢測勢必會帶來一定的挑戰(zhàn)，故在必要時可考慮增加樣品的取樣量，保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性； ③關(guān)注炮制過程浸泡、高溫悶潤、高溫干燥等工藝對成分的影響，苓桂術(shù)甘湯中甘草在炮制工藝研究中，發(fā)現(xiàn)其存在水傷的情況，即浸泡操作會顯著降低飲片中水溶性指標(biāo)成分的含量，故采用悶潤代替浸泡工藝，保障飲片質(zhì)量。通過藥材-飲片特征圖譜研究可進(jìn)一步分析藥材至飲片的特征峰傳遞情況，說明藥材與飲片的物質(zhì)基礎(chǔ)的一致性。

此外，基準(zhǔn)樣品研究中應(yīng)關(guān)注飲片-中間體-基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分的穩(wěn)定傳遞，例如15 批基準(zhǔn)樣品指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率較為寬泛的問題，可能原因?yàn)槊颗读狭啃?，而部分飲片中不同部位中指?biāo)成分含量有顯著差異，呈現(xiàn)非均勻分布，所取飲片在反映該批次飲片質(zhì)量概貌上代表性略有差異所致，故可考慮飲片規(guī)范取樣，關(guān)注飲片取樣的代表性，必要時可增加基準(zhǔn)樣品每批次的制備量。此外，還可能出現(xiàn)基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分含量波動較大的問題，可從飲片自身的含量波動和制備工藝的波動中尋找原因。若納入研究的飲片批次間含量波動大，在工藝穩(wěn)定的情況下會反映至基準(zhǔn)樣品中，可能使基準(zhǔn)樣品指標(biāo)成分含量的波動范圍偏大，當(dāng)然制備工藝不穩(wěn)定也可能對基準(zhǔn)樣品成分轉(zhuǎn)移和波動造成影響。

苓桂術(shù)甘湯君藥茯苓水溶性特征成分的尋找及質(zhì)控方法的建立是苓桂術(shù)甘顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的難點(diǎn)，曾嘗試建立其指標(biāo)成分的含量方法，但基準(zhǔn)樣品中茯苓酸、去氫土莫酸、豬苓酸C 均低于檢測限，5-羥甲基糠醛在白術(shù)、甘草中有陰性干擾，而TLC 法可用于相關(guān)質(zhì)量控制。此外，佐藥白術(shù)水溶性指標(biāo)成分含量也均低于定量限，無法建立定量檢測方法，而苓桂術(shù)甘顆粒在指紋圖譜中指認(rèn)白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ，并建立TLC 鑒別方法。另外，苓桂術(shù)甘顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也建立了處方中各藥味的薄層色譜鑒別、特征圖譜、重金屬及有害元素檢查、微生物檢查、制劑通則檢查、醇溶性浸出物測定，以及桂枝、甘草中3 種成分含量測定方法，并規(guī)定浸出物和含量測定限度范圍。

5 討論

關(guān)鍵信息考證是經(jīng)典名方復(fù)方制劑研究中的重點(diǎn)和難點(diǎn)，已公開的《古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息表（25 首方劑） 》 中也存在一些值得進(jìn)一步討論的問題，如何做到“尊古而不泥古”，值得科研工作者進(jìn)一步思考。例如，瀉白散備注中提到“地骨皮除雜處理后注明焙的操作，其目的為使藥材質(zhì)地酥脆，便于后續(xù)粉碎，因此建議尊重原方炮制方法，可參考地方標(biāo)準(zhǔn)如2005 年版《安徽省中藥炮制規(guī)范》 中的焙法?！?但是2019 年版《安徽省中藥炮制規(guī)范》 中沒有焙法，而且文獻(xiàn)［31］ 報(bào)道曬干所得地骨皮中地骨皮乙素含量最高，其次是烘干，最后是焙干，課題組前期也發(fā)現(xiàn)炮制溫度越高，該成分含量越低，焙法目的為使藥材質(zhì)地酥脆，便于后續(xù)粉碎，但目前生品即可達(dá)到粉碎的目的，其使用可追溯至金代《醫(yī)學(xué)啟源》 去骨用皮、碎用，在明代也有記載［32-33］。綜上所述，瀉白散中地骨皮炮制方法的選擇應(yīng)結(jié)合炮制目的、歷史沿革、中藥炮制學(xué)科發(fā)展規(guī)律，不可過度拘泥于古籍記載，建議將生品代替焙法炮制品入藥。

湯劑是復(fù)雜的分散體系，課題組在相關(guān)經(jīng)典名方研究中發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)煎液（標(biāo)準(zhǔn)湯劑） 中含揮發(fā)性成分（源于桂枝、生姜等藥材），但常規(guī)濃縮干燥過程會造成部分揮發(fā)性成分（源于桂枝） 不能保留，而且其保留狀況與物理性質(zhì)相關(guān)，需要在制劑過程中密切關(guān)注，并且湯液中難溶性成分含量遠(yuǎn)高于其本身溶解度。不同性質(zhì)揮發(fā)性成分在湯劑制備過程中的保留機(jī)制、湯劑中復(fù)雜多相態(tài)的作用和影響因素等問題是長期困擾經(jīng)典名方研究、中藥新藥劑型設(shè)計(jì)的瓶頸，經(jīng)典名方復(fù)方制劑如何合理設(shè)計(jì)和優(yōu)化現(xiàn)代制劑工藝路線，還原湯劑的化學(xué)成分概貌，是還原其臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，值得廣大科研工作者深入思考探究。

苓桂術(shù)甘顆粒的上市是經(jīng)典名方服務(wù)廣大人民群眾的有益實(shí)踐。而構(gòu)建中醫(yī)藥評價(jià)體系、開展病癥結(jié)合臨床研究及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，是解析中醫(yī)藥科學(xué)內(nèi)涵的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。今后，可在基于臨床大數(shù)據(jù)總結(jié)經(jīng)典名方應(yīng)用規(guī)律的基礎(chǔ)上，選擇主治病證明確、臨床療效確切的經(jīng)典名方，按照國際臨床試驗(yàn)規(guī)范開展循證評價(jià)關(guān)鍵技術(shù)研究，形成針對中醫(yī)經(jīng)典名方的疾病-證候-癥狀-多組學(xué)關(guān)聯(lián)分析相結(jié)合的臨床循證評價(jià)關(guān)鍵技術(shù)，挖掘經(jīng)典名方現(xiàn)代臨床優(yōu)勢和定位，推動構(gòu)建病-證融合一體化評價(jià)體系，明確并逐步擴(kuò)大適用范圍，明確各適應(yīng)癥的用藥劑量與用藥周期。臨床跟蹤不良反應(yīng)，明確孕婦、嬰幼兒、哺乳期婦女等特殊人群的用藥指導(dǎo)。

經(jīng)典名方的現(xiàn)代研發(fā)是對接國家戰(zhàn)略發(fā)展需求、人民群眾健康服務(wù)要求的突破口，應(yīng)基于基礎(chǔ)研究、臨床應(yīng)用、新藥創(chuàng)制的各個技術(shù)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)開展其科學(xué)原理闡釋、中藥及其制劑成分藥理藥性分析、制藥關(guān)鍵工藝優(yōu)化、智能制藥裝備研發(fā)等方面的研究。用現(xiàn)代科學(xué)解讀中醫(yī)藥原理，推動中醫(yī)藥現(xiàn)代化、產(chǎn)業(yè)化，是時代賦予中醫(yī)藥人的使命。經(jīng)典名方的研發(fā)任重而道遠(yuǎn)，中醫(yī)藥人當(dāng)砥礪前行。