基于PI3K/AKT1 通路探討山西老陳醋對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)大鼠抗氧化作用機(jī)制

申 彤，劉佳佳，陳 嘉，龐全海,

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山西晉中 030801；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院（農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮研究所），山西太原 030031）

高脂血癥通常由長(zhǎng)期高脂飲食所致，表現(xiàn)為外周血中脂質(zhì)水平異常[1]，肝臟脂代謝紊亂，肝細(xì)胞變性[2]，可引發(fā)一系列心血管疾病[3]。山西老陳醋是中國(guó)傳統(tǒng)的全谷物固態(tài)發(fā)酵醋，發(fā)酵過(guò)程中形成了多酚、類(lèi)黑素、益生菌等多種具有降脂抗氧化功效的有機(jī)物[4]。大量研究發(fā)現(xiàn)，山西老陳醋濃縮物可有效降低高脂血癥小鼠的血脂水平[5]，陳醋源乳桿菌通過(guò)改變肝臟脂肪酸的構(gòu)成，改善高脂飲食大鼠肝脂質(zhì)損傷[6]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，山西老陳醋多酚提取物能有效減輕高脂血癥大鼠的血脂異常和氧化應(yīng)激[7]。截止目前，山西老陳醋改善高脂血癥的作用機(jī)制及最適劑量范圍尚不明確。

調(diào)節(jié)糖脂代謝相關(guān)通路是最常見(jiàn)的高脂血癥防治手段[8]。研究表明脂代謝紊亂與磷脂酰肌醇3-激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）異常表達(dá)密切相關(guān)[9]。PI3K 是細(xì)胞代謝關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，PIK3CA是其催化亞基的一種，蛋白激酶B（Protein kinase B，Akt1）作為PIK3CA 的下游靶標(biāo)響應(yīng)激活[10]，PI3K/AKT1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑通過(guò)調(diào)節(jié)甘油三酯合成關(guān)鍵酶的表達(dá)影響脂代謝[11]，抑制該通路可改善氧化應(yīng)激損傷[12]，研究證實(shí)，食醋加工后的姜黃精油通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/AKT1 通路改善肝臟纖維化[13]。固態(tài)發(fā)酵醋多酚提取物通過(guò)抑制PI3K/AKT1 通路來(lái)調(diào)節(jié)脂代謝，減輕細(xì)胞氧化應(yīng)激[14]。鑒于此，推測(cè)山西老陳醋可能通過(guò)調(diào)控PI3K/AKT1 通路相關(guān)基因表達(dá)，進(jìn)而發(fā)揮預(yù)防高脂血癥發(fā)生和發(fā)展的作用。

本研究通過(guò)構(gòu)建高脂血癥大鼠模型，并設(shè)置不同濃度山西老陳醋干預(yù)組，觀察其對(duì)大鼠血清內(nèi)脂質(zhì)及肝臟相關(guān)生化指標(biāo)的影響，研究山西老陳醋通過(guò)PI3K/AKT1 通路對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)大鼠發(fā)揮的降脂抗氧化作用，為后期進(jìn)一步探究其調(diào)控機(jī)制提供一定的試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

SPF 級(jí)雄性Wistar 大鼠 6 周齡，體重相近（170±20 g），斯貝福生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010，飼養(yǎng)于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（SYXK（晉）2020-0003），試驗(yàn)動(dòng)物使用方案嚴(yán)格執(zhí)行山西農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)倫理的要求（IACUC 審查號(hào)：SXAU-EAW-2020SD02 01）；山西老陳醋 山西紫林醋業(yè)股份有限公司；玉米胚芽油 山東西王食品有限公司；吐溫-80（T8360）、膽固醇（C8280）、膽酸鈉（C1291697）、丙基硫氧嘧啶（P7161）、總RNA 提取試劑盒（R1200）、通用SP 檢測(cè)試劑盒（SP0041）、RIPA 組織/細(xì)胞裂解液（R0020）、BCA 蛋白濃度試劑盒（PC0020）、山羊抗兔二抗及山羊抗鼠二抗（SE134、SE132）Solarbio 公司；甘油三酯（Triglyceride，TG，A110-1-1）、總膽固醇（Total cholesterol，TC，A111-1-1）、高密度脂蛋白（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C，A112-1-1）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase，ALT，C009-2-1）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferase，AST，C010-2-1）、堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，AKP，A059-2）、谷胱甘肽還原酶（Glutathione reductase，GR，A062-1-1）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD，A001-3）、總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC，A015-2-1）檢測(cè)試劑盒 南京建成生物工程研究所；HiScript Ⅲ RT SuperMix for qPCR（R323）

諾唯贊生物；2×Realtime PCR Super mix 試劑盒（MF013）北京聚合美生物科技有限公司；抗PIK3CA兔多克隆抗體（bs-2067R）、抗AKT1 兔多克隆抗體（bs-0115R）、抗GAPDH 鼠單克隆抗體（bsm-33033M）北京博奧森生物有限公司。

B11-3 恒溫磁力攪拌器 上海司樂(lè)儀器有限公司；ELX808 全自動(dòng)酶標(biāo)儀 BioTek Instruments 公司；UV-1200 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)儀器有限公司；NanoDrop One/OneC 核酸蛋白檢測(cè)儀 Thermo Fisher；T100 普通PCR 儀 美國(guó)Bio-Rad公司；LightCycler 96 熒光定量PCR 儀 Roche 生物科技有限公司；DYY-8C 電泳儀 北京六一生物科技有限公司；YD-6L 生物組織包埋機(jī) 金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司；DM4000 光學(xué)顯微鏡、RM2265輪轉(zhuǎn)式切片機(jī) 徠卡顯微系統(tǒng)（上海）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 不同濃度山西老陳醋制備 山西老陳醋原醋為中濃度醋（2.7 g/（kg·bw））；蒸餾水稀釋至原體積2 倍即低濃度醋（1.35 g/（kg·bw））；恒溫50 ℃下使用磁力攪拌器將原醋濃縮至原體積1/2 即高濃度醋（5.4 g/（kg·bw））。

1.2.2 高脂飲食誘導(dǎo)大鼠模型構(gòu)建 高脂乳劑由60%吐溫-80，15%玉米胚芽油，6%膽固醇，2%膽酸鈉，0.2%丙基硫氧嘧啶和16.8% H2O 配制而成（圖1），造模5 周[15]。

圖1 高脂乳劑制作流程Fig.1 Production process of high fat emulsion

1.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物分組及樣品采集 選取30 只6 周齡健康狀況良好SPF 級(jí)大鼠，適應(yīng)性飼喂1 周，根據(jù)每組間平均體重相近原則，隨機(jī)分為5 個(gè)試驗(yàn)組（n=6）：正常組（C，常規(guī)飼料）、高脂模型組（M，高脂乳劑）、1.35 g/（kg·bw）陳醋干預(yù)M 組（LV）、2.7 g/（kg·bw）陳醋干預(yù)M 組（V）、5.4 g/（kg·bw）陳醋干預(yù)M 組（HV）。正常組各大鼠2.0 mL/d 生理鹽水持續(xù)灌胃10 周，試驗(yàn)組高脂乳劑10 mL/kg·d 灌胃5 周后生理鹽水繼續(xù)灌胃5 周，山西老陳醋灌胃組各大鼠陳醋（2.0 mL/d）及高脂乳劑（10 mL/kg·d）灌胃5 周后使用陳醋繼續(xù)灌胃（2.0 mL/d）5 周。于溫度（22±2 ℃）、濕度（50%±5%）標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房?jī)?nèi)常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由采食。

11 周試驗(yàn)結(jié)束后，禁食16 h，乙醚麻醉，腹主動(dòng)脈采血，全血樣本室溫2 h，4 ℃ 2 h，3000 r/min 離心15 min，取血清于-80 ℃保存。采集各組大鼠同一位置肝臟組織，4%多聚甲醛固定，剩余組織-80 ℃保存。

1.2.4 不同試驗(yàn)組大鼠血清中脂質(zhì)含量、抗氧化及肝功能檢測(cè) 根據(jù)說(shuō)明書(shū)，使用酶標(biāo)儀和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C 含量，SOD、GR、T-AOC 酶活性，ALT、AST、AKP 的酶活力單位，M 組與C 組血脂含量（TC、TG、HDL-C）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異即為造模成功[16]。

1.2.5 不同試驗(yàn)組大鼠肝臟組織病理學(xué)檢測(cè) 大鼠肝組織4%多聚甲醛固定24 h 后，取出修塊，經(jīng)常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片（厚度5 μm）后，蘇木素-伊紅（HE）染色，中性樹(shù)膠封片，在200 倍光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理變化。

1.2.6 不同試驗(yàn)組大鼠肝臟中PI3K/AKT1通路mRNA 水平表達(dá)檢測(cè) 根據(jù)NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov）上檢索的大鼠PIK3CA、AKT1和GAPDHCDS 區(qū)，利用Primer Premier 3.0 分別設(shè)計(jì)3 對(duì)特異性引物（表1），由上海生工生物工程股份有限公司合成。

表1 引物序列信息Table 1 Primer sequence information

總RNA 提取試劑盒提取各組大鼠肝臟總RNA，核酸蛋白檢測(cè)儀測(cè)定濃度和純度，根據(jù)HiScript ⅢRT SuperMix for qPCR 說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄RNA 為cDNA。相對(duì)熒光定量法（qRT-PCR）檢測(cè)大鼠肝臟中PIK3CA、AKT1mRNA 表達(dá)，根據(jù)2×Realtime PCR Super mix試劑盒說(shuō)明構(gòu)建反應(yīng)體系（20 μL）：2×Realtime PCR Super mix 10 μL、cDNA 模板2.0 μL、正反向引物各0.5 μL、ddH2O 7.0 μL，每個(gè)指標(biāo)重復(fù)3 次；設(shè)置反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，循環(huán)40 次；72 ℃ 5 min。利用2-ΔΔCT法計(jì)算不同實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟中PIK3CA及AKT1mRNA水平表達(dá)。

1.2.7 不同實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟中PI3K/AKT1 通路蛋白水平表達(dá)檢測(cè) 使用組織裂解液（含PMSF）提取不同試驗(yàn)組大鼠肝臟組織總蛋白，4 ℃ 14000 r/min離心10 min，BCA 試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。SDSPAGE 電泳時(shí)，上樣量為50 μg/孔，100 ℃水浴變性5 min，按照10%分離膠80 V 20 min，5%濃縮膠120 V 60 min 電泳，200 mA 60 min 恒流濕轉(zhuǎn)至NC膜，5%脫脂奶粉室溫?fù)u床封閉2 h，TBST 洗膜5 次，抗PIK3CA 兔多克隆抗體及抗AKT1 多克隆抗體（1:300）、抗GAPDH 鼠單克隆抗體（1:5000）4 ℃孵育過(guò)夜（12～16 h），移去一抗，山羊抗鼠二抗及山羊抗兔二抗（1:15000）室溫孵育1 h，TBST 漂洗5 次，ELC Plus 超敏發(fā)光液顯色，ImageJ 8.0 分析蛋白免疫印跡灰度值。

1.2.8 不同試驗(yàn)組大鼠肝臟中PI3K/AKT1 通路定位分析 取前期烘干備用且組織完整的切片，按照通用SP 檢測(cè)試劑盒步驟依次進(jìn)行脫蠟，檸檬酸鈉緩沖液抗原修復(fù)，過(guò)氧化氫酶滅活，非特異性抗原位點(diǎn)封閉，抗PIK3CA 兔多克隆抗體及抗AKT1 多克隆抗體（1:100）4 ℃孵育過(guò)夜，復(fù)溫后，PBS 漂洗，室溫孵育二抗，PBS 漂洗，DAB 顯色，蒸餾水終止反應(yīng)，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，常規(guī)脫水后中性樹(shù)膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察，Image-Pro Plus 6.0 進(jìn)行光密度值分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Graphpad Prism 8.3.0 分析作圖，所有數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用單因素方差分析，兩兩比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)。P<0.01 作為差異極顯著的界值，P<0.05 作為差異顯著的界值。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同試驗(yàn)組大鼠血清中脂質(zhì)含量、抗氧化活性及肝損傷指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 血清脂質(zhì)含量檢測(cè)結(jié)果 高脂飲食會(huì)導(dǎo)致大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)度沉積，脂代謝紊亂，引發(fā)高脂血癥，顯著特征是血清內(nèi)TC，TG 含量升高，HDL-C 含量低于正常值[17]。如圖2 所示，與C 組相比，M 組TC 及TG 極顯著增加（P<0.01），HDL-C 極顯著降低（P<0.01），說(shuō)明，高脂血癥大鼠模型構(gòu)建成功[16]；與M 組相比，HV、MV 和LV 組TC 及TG 均極顯著降低（P<0.01），HDL-C 極顯著升高（P<0.01）；與LV 組相比，HV 和MV 組TC 及TG（極）顯著降低（P<0.05，P<0.01），HDL-C 極顯著升高（P<0.01）；與MV 組相比，HV 組HDL-C 顯著升高（P<0.05），TC、TG 差異不顯著（P>0.05），結(jié)果表明，不同劑量山西老陳醋均可改善高脂飲食引起的脂代謝紊亂，中高劑量組改善效果優(yōu)于低劑量組。

圖2 各組大鼠血脂變化情況Fig.2 Changes in blood lipids of rats in each group

2.1.2 抗氧化酶活性檢測(cè)結(jié)果 血清內(nèi)脂質(zhì)升高，會(huì)導(dǎo)致氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）增加，使機(jī)體發(fā)生一定程度的脂質(zhì)過(guò)氧化，T-AOC 表示機(jī)體內(nèi)總抗氧化能力，SOD 和GR 是氧自由基清除劑[18]。如圖3 所示，與C 組相比，M 組SOD、GR 及T-AOC 均極顯著降低（P<0.01），說(shuō)明脂質(zhì)堆積使大鼠機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)紊亂；與M 組相比，HV、MV和LV 組SOD 和T-AOC 均（極）顯著升高（P<0.05，P<0.01），MV 和HV 組GR 極顯著升高（P<0.01），LV 組GR 無(wú)顯著差異；與LV 相比，HV 組SOD 及GR 均極顯著升高（P<0.01），MV 組T-AOC 和GR（極）顯著升高（P<0.05，P<0.01）；與MV 組相比，HV 組SOD 極顯著升高（P<0.01），T-AOC 極顯著降低（P<0.01），GR 無(wú)顯著差異（P>0.05），結(jié)果表明，山西老陳醋可提高機(jī)體抗氧化能力，降低高脂飲食大鼠氧化應(yīng)激水平。

圖3 各組大鼠血清內(nèi)抗氧化酶活性Fig.3 Antioxidant enzyme activities in serum of rats in each group

2.1.3 肝損傷指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 血清內(nèi)ALT 和AST含量升高是肝細(xì)胞受損的重要標(biāo)志，AKP 含量和肝損傷的程度呈負(fù)相關(guān)[19]。如圖4 所示，與C 組相比，M 組ALT 及AST 均極顯著升高（P<0.01），AKP 極顯著降低（P<0.01），說(shuō)明血脂過(guò)高使肝細(xì)胞受損，使細(xì)胞質(zhì)內(nèi)ALT 和AST 釋放至血液內(nèi)[20]，AKP 合成減少；與M 組相比，HV、MV 和LV 組ALT 及AST均極顯著降低（P<0.01），AKP 均極顯著升高（P<0.01）；與LV 組相比，MV 和HV 組ALT 及AST 均（極）顯著降低（P<0.05，P<0.01），AKP 極顯著升高（P<0.01）；與MV 組相比，HV 組AST 極顯著降低（P<0.01），ALT 及AKP 無(wú)顯著差異（P>0.05），結(jié)果表明，山西老陳醋對(duì)肝臟具有一定保護(hù)作用，可有效減輕高脂飲食誘發(fā)的肝脂質(zhì)損傷。

圖4 各組大鼠血清內(nèi)肝功能指標(biāo)Fig.4 Serum liver function indexes of rats in each group

2.2 肝臟組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果

HE 染色結(jié)果顯示（圖5），與C 組相比，M 組肝索排列紊亂，肝細(xì)胞脂肪變性及空泡樣變?cè)龆?，肝?xì)胞腫脹，細(xì)胞核移位，胞漿內(nèi)出現(xiàn)致密且較大的脂滴空泡；與M 組相比，LV 組、MV 組、HV 組細(xì)胞變性及脂滴空泡明顯減少，HV 組和MV 組干預(yù)效果優(yōu)于LV 組，結(jié)果表明，山西老陳醋可有效改善大鼠肝臟脂肪蓄積現(xiàn)象，緩解肝組織病變。

圖5 各組大鼠肝臟組織HE 染色結(jié)果（20×）Fig.5 HE staining results of liver tissue of rats in each group (20×)

2.3 山西老陳醋對(duì)各組大鼠PIK3CA、AKT1 mRNA水平表達(dá)的影響

qRT-PCR 檢測(cè)結(jié)果顯示（圖6），與C 組相比，M 組PIK3CA及AKT1mRNA 水平表達(dá)均極顯著升高（P<0.01），說(shuō)明大鼠脂代謝異常導(dǎo)致肝臟內(nèi)PI3K/AKT1 信號(hào)傳導(dǎo)通路被激活；與M 組相比，LV、MV 和HV 組PIK3CA及AKT1mRNA 水平表達(dá)均極顯著降低（P<0.01）；與LV 組相比，MV 和HV 組PIK3CA及AKT1mRNA 水平表達(dá)均極顯著降低（P<0.01）；與MV 組相比，HV 組PIK3CA及AKT1mRNA 水平表達(dá)無(wú)顯著差異（P>0.05），結(jié)果表明，山西老陳醋可顯著改善高脂飲食誘發(fā)大鼠肝臟內(nèi)PIK3CA及AKT1基因表達(dá)異常。

圖6 各組大鼠肝臟PIK3CA 及AKT1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量Fig.6 Relative expression levels of PIK3CA and AKT1 mRNA in liver of rats in each group

2.4 山西老陳醋對(duì)各組大鼠PIK3CA、AKT1 蛋白水平表達(dá)的影響

Western blotting 檢測(cè)結(jié)果顯示（圖7），與C 組相比，M 組PIK3CA 及AKT1 蛋白表達(dá)均極顯著升高（P<0.01），說(shuō)明肝脂質(zhì)蓄積使大鼠肝臟內(nèi)PIK3CA及AKT1 蛋白表達(dá)異常；與M 組相比，HV、MV 和LV 組PIK3CA 及AKT1 蛋白表達(dá)極顯著降低（P<0.01）；與LV 組相比，HV 和MV 組PIK3CA 及AKT1蛋白表達(dá)均極顯著降低（P<0.01）；與MV 組相比，HV 組PIK3CA 蛋白表達(dá)極顯著降低（P<0.01），AKT1 表達(dá)無(wú)顯著差異（P>0.05），結(jié)果表明，山西老陳醋可有效抑制高脂血癥大鼠肝臟內(nèi)PIK3CA 及AKT1 蛋白表達(dá)。

圖7 各組大鼠肝臟PIK3CA 及AKT1 蛋白相對(duì)表達(dá)量Fig.7 Relative expression levels of PIK3CA and AKT1 proteins in liver of rats in each group

2.5 山西老陳醋對(duì)各組大鼠PIK3CA、AKT1 定位的影響

免疫組化分析結(jié)果顯示（圖8），各組大鼠肝臟細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有PIK3CA 和AKT1 表達(dá)，與C 組相比，M 組PIK3CA 及AKT1 表達(dá)極顯著升高（P<0.01）。與M 組相比，HV、MV 和LV 組PIK3CA及AKT1 表達(dá)極顯著降低（P<0.01），與LV 組相比，HV 和MV 組PIK3CA 與AKT1 表達(dá)（極）顯著降低（P<0.05，P<0.01），結(jié)果表明，山西老陳醋通過(guò)抑制大鼠肝臟PIK3CA 及AKT1 的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控PI3K/AKT1 通路。

圖8 PIK3CA、AKT1 免疫組化結(jié)果及光密度分析（20×）Fig.8 IHC results and optical density analysis of PIK3CA and AKT1 (20×)

3 討論與結(jié)論

目前，高脂血癥的治療主要以中藥和膳食輔助治療為主[21]，山西老陳醋富含多種活性物質(zhì)，可調(diào)節(jié)血脂保護(hù)肝臟[22]。研究證實(shí)，山西老陳醋可以降低醉酒小鼠肝功酶活性[19]，提取的多酚通過(guò)抑制TC、TG 分泌調(diào)節(jié)脂代謝[23]。本次研究中，高脂血癥大鼠體內(nèi)PI3K/AKT1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被激活，不同劑量山西老陳醋均可抑制該通路。PI3K/AKT1 通路參與膽固醇的攝入與轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)控該通路及其下游脂質(zhì)合成基因表達(dá)[11]，可調(diào)節(jié)脂代謝。研究結(jié)果表明，山西老陳醋可能通過(guò)下調(diào)PIK3CA 及AKT1 基因和蛋白的表達(dá)，改善高脂飲食誘發(fā)的血脂水平、肝功酶活性異常和肝臟病理性損傷，且濃度為2.7 和5.4 g/（kg·bw）山西老陳醋對(duì)血脂、肝功酶水平異常和肝脂肪性病變改善效果均優(yōu)于1.35 g/（kg·bw）低劑量干預(yù)組，中高劑量組改善效果無(wú)顯著差異。

高脂血癥通常伴隨著氧化應(yīng)激的發(fā)生，高脂飲食誘導(dǎo)脂質(zhì)積累，肝臟脂代謝紊亂[24]，游離脂肪酸堆積，肝細(xì)胞脂肪變性，抗氧化酶系統(tǒng)紊亂，過(guò)量產(chǎn)生的ROS 無(wú)法被清除，引發(fā)氧化應(yīng)激損傷[25]，研究證實(shí)山西老陳醋多酚類(lèi)提取物具有強(qiáng)抗氧化活性[26]，陳醋源類(lèi)黑素通過(guò)調(diào)控AKT 信號(hào)傳導(dǎo)途徑影響ROS生成[27]。本次研究結(jié)果表明，山西老陳醋通過(guò)提高抗氧化酶活性，增加大鼠抗氧化能力。PI3K/AKT1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與多種細(xì)胞氧化應(yīng)激密切相關(guān)[28]，可通過(guò)調(diào)節(jié)ROS 的生成調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激[29]，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)多種活性物質(zhì)均可通過(guò)抑制PI3K/AKT1 的表達(dá)來(lái)改善氧化應(yīng)激[30-31]，本次研究結(jié)果顯示，干預(yù)組大鼠肝臟內(nèi)PIK3CA 及AKT1 在基因和蛋白水平上均顯著下降，說(shuō)明山西老陳醋改善氧化應(yīng)激可能是通過(guò)抑制PI3K/AKT1 的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，且2.7 g/（kg·bw）和5.4 g/（kg·bw）山西老陳醋干預(yù)組抗氧化及抑制PI3K/AKT1 通路能力最為顯著。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)山西老陳醋濃縮物的降脂作用，優(yōu)于陳醋原液[5]。這可能是由于山西老陳醋內(nèi)富含的有機(jī)物均具有揮發(fā)性[32]，濃縮過(guò)程中以乙酸為主的有機(jī)酸[33]和黃酮類(lèi)物質(zhì)損失量最大[34]，且本研究中，高劑量組濃度及大鼠攝入量均高于前人研究，綜上推測(cè)，山西老陳醋的最適濃度可能在2.7～5.4 g/（kg·bw）之間。

綜上，不同劑量山西老陳醋均可改善高脂血癥大鼠的脂代謝紊亂和氧化應(yīng)激損傷，高脂飲食誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)PI3K/AKT1 通路高度活化，山西老陳醋干預(yù)下肝臟內(nèi)PI3K/AKT1 通路受到不同程度抑制，濃度為2.7～5.4 g/（kg·bw）山西老陳醋改善效果最佳。由此，本研究推測(cè)山西老陳醋可能通過(guò)抑制PI3K/AKT1 通路，進(jìn)而改善高脂血癥大鼠抗氧化應(yīng)激和脂代謝紊亂的能力，但其靶向抑制PI3K/AKT1 信號(hào)通路的機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。