許先猛, 伍媛媛, 卜美超, 付文婷, 薛豫皖
(1.亳州學(xué)院 生物與食品工程系,安徽 亳州 236000;2.亳州市天然產(chǎn)物分離純化工程技術(shù)研究中心,安徽 亳州 236000)
中國(guó)是世界上最大的花生生產(chǎn)國(guó),占世界花生總產(chǎn)量的36.4%.花生籽粒中富含脂肪、蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)元素和黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、甾體類(lèi)等生物活性成分[1].花生籽粒發(fā)芽后稱(chēng)為花生芽菜[2],目前深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài).研究表明,花生發(fā)芽會(huì)引起花生中總酚和白藜蘆醇等活性成分的含量增加[3].以花生芽為原料,已經(jīng)開(kāi)發(fā)出包括花生芽果凍、花生芽乳飲料[4]、花生芽奶酪等新型功能食品.花生芽功能飲料也是花生芽功能食品研究的重要方向之一,因其舒爽口感,具有保健作用,受到消費(fèi)者歡迎.復(fù)合功能飲料的研究已經(jīng)成為熱點(diǎn).以花生芽、紅棗為原料,采用單因素和響應(yīng)面法優(yōu)化花生芽紅棗復(fù)合飲料的配方工藝,為花生芽功能食品的研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ).
花生種子:魯花1號(hào),在20 ℃左右、通風(fēng)陰涼處儲(chǔ)藏備用;紅棗:新疆大棗,于20 ℃左右、通風(fēng)陰涼處儲(chǔ)藏備用;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(99%),北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司;白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品(99%),北京沃凱生物科技有限公司;羧甲基纖維素鈉(食品級(jí)),天津百倫斯生物技術(shù)有限公司;L-型蘋(píng)果酸(食品級(jí)),常茂生物化學(xué)工程股份有限公司;高錳酸鉀、福林酚試劑、碳酸鈉、無(wú)水乙醇、無(wú)水亞硝酸鈉均購(gòu)買(mǎi)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司.
ALLIANCE 2695高效液相色譜儀,美國(guó)Waters公司;UV-9000S紫外分光光度計(jì),上海元析儀器有限公司;FA2204C電子天平,上海天美天平儀器有限公司;DS-1高速組織搗碎機(jī),上海隆拓儀器設(shè)備有限公司;WZS-60手持折光計(jì),上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋,常州國(guó)華電器有限公司;C21-RT2160電磁爐,美的生活電器制造有限公司;P901數(shù)字酸度計(jì),上海佑科儀器儀表有限公司;TG16-WS高速臺(tái)式離心機(jī),湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司;DZG-50L智能真空干燥箱,合肥右科儀器設(shè)備有限公司;XHF-DY高速分散器,寧波新芝生物科技股份有限公司.
1.3.1 花生芽制備
挑選大小接近、成熟飽滿(mǎn)、無(wú)霉變、無(wú)蟲(chóng)蛀的花生種子100顆,用去離子水沖洗花生表面的浮塵,置于殺菌后的燒杯中.倒入0.5%高錳酸鉀溶液至沒(méi)過(guò)花生種子,浸泡消毒40 min后用去離子水沖洗至溶液呈澄清狀態(tài).取預(yù)處理后的花生種子,置于燒杯中,去離子水浸沒(méi),在功率280 W下超聲處理15 min,超聲溫度為30 ℃.然后在30 ℃條件下用蒸餾水浸種6 h,浸種后的花生種子置于溫度為27 ℃,濕度為(85±5)% RH條件下避光發(fā)芽,花生發(fā)芽后將花生芽朝下播種在花生發(fā)芽盤(pán)中,發(fā)芽7 d得到新鮮花生芽.
1.3.2 花生芽中黃酮含量的測(cè)定
取發(fā)芽7 d的新鮮花生芽,經(jīng)真空冷凍干燥后,研磨粉碎,稱(chēng)取0.02 g花生芽粉末于離心管中,加入70%的乙醇溶液1 mL,在300 W超聲功率下提取30 min,超聲溫度為55 ℃,然后以6 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min,得到花生芽黃酮提取液.花生芽中黃酮含量的測(cè)定采用亞硝酸鈉—硝酸鋁顯色法[5].黃酮含量的計(jì)算公式為
(1)
式中:C為查標(biāo)準(zhǔn)曲線值(mg/mL),Vt為取樣量(mL),n為測(cè)定時(shí)的稀釋倍數(shù)(mL),Vs為樣液總體積(mL),W為樣品質(zhì)量(g).
1.3.3 花生芽中白藜蘆醇含量的測(cè)定
花生芽中白藜蘆醇含量的測(cè)定采用NY/T 2641-2014《植物源性食品中白黎蘆醇和白黎蘆醇苷的測(cè)定》的高效液相色譜法.
(2)
式中,ρ為待測(cè)液中白藜蘆醇的質(zhì)量濃度(mg/L),V為體積(mL),m為試樣質(zhì)量(g).
1.3.4 花生芽紅棗復(fù)合飲料加工工藝流程
1.3.5 花生芽紅棗復(fù)合飲料加工配方優(yōu)化
(1)單因素試驗(yàn).選取花生芽汁、紅棗汁、蔗糖、復(fù)合酸味劑(含檸檬酸、蘋(píng)果酸和檸檬酸鈉)、復(fù)合穩(wěn)定劑(含羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)和黃原膠)五種物質(zhì)的添加量做單因素試驗(yàn),考察各因素對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官品質(zhì)的影響.
(2)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn).以花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官品質(zhì)為指標(biāo),采用響應(yīng)面法分別對(duì)花生芽汁(%,質(zhì)量分?jǐn)?shù),花生芽汁濃度為20.5%)、紅棗汁(%,質(zhì)量分?jǐn)?shù),紅棗汁濃度為61.0%)、蔗糖(%,質(zhì)量分?jǐn)?shù))、復(fù)合酸味劑(%,質(zhì)量分?jǐn)?shù))的添加量這4個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì),研究花生芽紅棗復(fù)合飲料的最佳配方.試驗(yàn)因素水平表見(jiàn)表1.
表1 試驗(yàn)因素水平表
(3)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官評(píng)價(jià)
選取15名經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的學(xué)生組成評(píng)價(jià)小組,按照感官評(píng)價(jià)表對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料進(jìn)行感官評(píng)價(jià),結(jié)果見(jiàn)表2.
表2 感官評(píng)價(jià)表
1.3.6 花生芽紅棗復(fù)合飲料理化指標(biāo)測(cè)定
花生芽紅棗復(fù)合飲料中可溶性固形物的含量采用折光計(jì)法進(jìn)行測(cè)定[6].花生芽紅棗復(fù)合飲料中的懸浮物采用離心沉淀法進(jìn)行測(cè)定[7].
1.3.7 花生芽紅棗復(fù)合飲料菌落總數(shù)和大腸菌群測(cè)定
菌落總數(shù)和大腸菌群的測(cè)定分別采用菌落總數(shù)測(cè)定法和大腸菌群計(jì)數(shù)法.
花生種子經(jīng)預(yù)處理后,在功率280 W下超聲處理15 min,超聲溫度為30 ℃.浸種后,花生種子置于溫度為27 ℃,濕度為(85±5)%的RH條件下避光發(fā)芽.花生發(fā)芽后將花生芽朝下播種在花生發(fā)芽盤(pán)中,發(fā)芽7 d得到新鮮花生芽.取第7 d花生芽,按照式(1)(2)分別測(cè)定花生芽中黃酮和白藜蘆醇的含量.結(jié)果顯示,花生芽中黃酮含量為588.3 mg/100 g,花生芽中白藜蘆醇的含量40.35 μg/g.
2.2.1 花生芽汁添加量的影響
在紅棗汁、蔗糖、復(fù)合酸味劑、復(fù)合穩(wěn)定劑的添加量分別為25.0%、5.0%、0.12%、0.5%條件下,考查花生芽汁添加量分別為10.0%、12.0%、14.0%、16.0%、18.0%時(shí)對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官品質(zhì)的影響,結(jié)果如圖1.可以看出,花生芽汁添加量為10.0%~18.0%范圍內(nèi),花生芽紅棗復(fù)合飲料隨著花生芽汁添加量的增加,感官評(píng)分先增大后減小.花生芽汁添加量為14%左右為宜.隨著添加量的增加,飲料的花生芳香氣味逐漸變濃,從而掩蓋紅棗香氣[8].
2.2.2 紅棗汁添加量的影響
在花生芽汁、蔗糖、復(fù)合酸味劑、復(fù)合穩(wěn)定劑的添加量分別為14.0%、5.0%、0.12%、0.5%條件下,考查紅棗汁添加量分別為15.0%、20.0%、25.0%、30.0%、35.0%時(shí)對(duì)感官品質(zhì)的影響,結(jié)果如圖2.可以看出,在紅棗汁添加量為15.0%~35.0%范圍內(nèi),感官評(píng)分先增大后減小,紅棗汁添加量為25.0%左右為宜.紅棗汁添加量過(guò)高也會(huì)導(dǎo)致因紅棗香味過(guò)重而掩蓋花生香氣.同時(shí),紅棗汁中糖含量較高,也會(huì)使飲料口感偏甜,從而降低感官評(píng)分[9].
圖1 花生芽汁添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響 圖2 紅棗汁添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
2.2.3 蔗糖添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
在花生芽汁、紅棗汁、復(fù)合酸味劑、復(fù)合穩(wěn)定劑的添加量分別為14.0%、25.0%、0.12%、0.5%條件下,考查蔗糖添加量分別為4.0%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%時(shí)對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官品質(zhì)的影響,結(jié)果如圖3.可以看出,在蔗糖添加量為4.0%~8.0%范圍內(nèi),隨著蔗糖添加量的增加,感官評(píng)分先增大后減小,蔗糖添加量為6.0%左右為宜.糖添加量過(guò)高會(huì)導(dǎo)致飲料口感偏甜[10],從而降低花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官評(píng)分.
2.2.4 復(fù)合酸味劑添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
在花生芽汁、紅棗汁、蔗糖、復(fù)合穩(wěn)定劑的添加量分別為14.0%、25.0%、5.0%、0.5%條件下,考查復(fù)合酸味劑添加量分別為0.04%、0.08%、0.12%、0.16%、0.20%時(shí)對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官品質(zhì)的影響,結(jié)果如圖4.可以看出,在復(fù)合酸味劑添加量為0.04%~0.20%范圍內(nèi),感官評(píng)分先增大后減小,復(fù)合酸味劑添加量為0.12%左右為宜,其中檸檬酸、蘋(píng)果酸和檸檬酸鈉的比例為3∶2∶3.適宜的酸甜比可以提高花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官評(píng)分,添加量過(guò)高或者過(guò)低都會(huì)影響感官品質(zhì).
圖3 蔗糖添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響 圖4 復(fù)合酸味劑添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
圖5 復(fù)合穩(wěn)定劑添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
2.2.5 復(fù)合穩(wěn)定劑添加量對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
在制備花生芽紅棗復(fù)合飲料的過(guò)程中,添加復(fù)合穩(wěn)定劑會(huì)提高飲料的黏度[4].在花生芽汁添加量為14.0%、紅棗汁添加量為25.0%、蔗糖添加量為5.0%、復(fù)合酸味劑添加量為0.12%條件下,考查復(fù)合穩(wěn)定劑的添加量分別為0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官品質(zhì)的影響,結(jié)果如圖5.可以看出,在復(fù)合穩(wěn)定劑添加量為0.3%~0.7%范圍內(nèi),感官評(píng)分先增大后減小,復(fù)合穩(wěn)定劑添加量為0.5%左右為宜,其中CMC-Na和黃原膠的比例為1∶1.
2.3.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果
以花生芽紅棗復(fù)合飲料感官評(píng)分為指標(biāo)設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn),設(shè)置花生芽汁添加量(A)、紅棗汁添加量(B)、蔗糖添加量(C)、復(fù)合酸味劑添加量(D)為影響因素進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn),研究花生芽紅棗復(fù)合飲料最佳配方.響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3.
表3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果
續(xù)表3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果
2.3.2 響應(yīng)面試驗(yàn)回歸模型及方差分析
對(duì)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn),分析結(jié)果見(jiàn)表4.花生芽紅棗復(fù)合飲料預(yù)測(cè)模型為:R1=92.96+0.80A+ 0.69B-1.33C-8.333E-003D+0.30AB+0.20AC-0.60AD+0.33BC-0.050BD-0.075CD-2.17A2-1.11B2-3.92C2-2.03D2.對(duì)復(fù)合飲料預(yù)測(cè)模型進(jìn)行方差分析,結(jié)果顯示F值為11.34,且模型為極顯著(P<0.000 1).對(duì)比分析四個(gè)因素F值,發(fā)現(xiàn)四個(gè)因素對(duì)感官評(píng)價(jià)的影響順序?yàn)镃>A>B>D.由試驗(yàn)結(jié)果可知R2=0.918 9,P=0.873 7(P>0.05),說(shuō)明預(yù)測(cè)值與真實(shí)值擬合較好.感官評(píng)價(jià)預(yù)測(cè)模型可以對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料的制備進(jìn)行分析.
表4 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析
續(xù)表4 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析
2.3.3 響應(yīng)面分析討論
由表4可知,A花生芽汁添加量、B紅棗汁添加量、C蔗糖添加量、D復(fù)合酸味劑添加量四個(gè)因素之間的交互作用都對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官品質(zhì)有一定影響,其中因素A和因素D交互作用對(duì)感官品質(zhì)影響最大.使用DesignExpert12.0 軟件進(jìn)行擬合,以三維響應(yīng)面曲線圖直觀表現(xiàn)出花生芽汁添加量和復(fù)合酸味劑添加量?jī)蓚€(gè)因素的交互作用對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料感官評(píng)分的影響,結(jié)果見(jiàn)圖6.在花生芽汁添加量10.0%~18.0%范圍內(nèi),復(fù)合酸味劑添加量由0.04%升高到0.20%,花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官評(píng)分先增加后降低.
圖6 AD因子交互作用對(duì)飲料感官品質(zhì)的影響
2.3.4 驗(yàn)證試驗(yàn)
通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)回歸方程預(yù)測(cè)得到,花生芽紅棗復(fù)合飲料的加工配方為:花生芽汁添加量14.4%、紅棗汁添加量26.6%、蔗糖添加量4.9%、復(fù)合酸味劑添加量0.12%、復(fù)合穩(wěn)定劑添加量0.5%,經(jīng)預(yù)測(cè)花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官評(píng)分為93.3.經(jīng)校正后,花生芽紅棗復(fù)合飲料的加工配方為:花生芽汁添加量14.0%、紅棗汁添加量27.0%、蔗糖添加量5.0%、復(fù)合酸味劑添加量0.12%、復(fù)合穩(wěn)定劑添加量0.5%,經(jīng)檢測(cè)花生芽紅棗復(fù)合飲料的感官評(píng)分為92.5.結(jié)果顯示,花生芽紅棗復(fù)合飲料感官評(píng)分的預(yù)測(cè)值和測(cè)定值基本一致.
花生芽紅棗復(fù)合飲料中可溶性固形物的含量經(jīng)測(cè)定和溫度校正,結(jié)果為6.7%;花生芽紅棗復(fù)合飲料中懸浮物的含量為3.5%.
經(jīng)檢測(cè),花生芽紅棗復(fù)合飲料中細(xì)菌總數(shù)≤100CFU/mL,大腸桿菌和致病菌未檢出.
花生種子在功率280W下超聲處理15min后進(jìn)行發(fā)芽,發(fā)芽7d后的新鮮花生芽中黃酮的含量為588.3mg/100g,花生芽中白藜蘆醇含量40.4μg/g.以新鮮花生芽和紅棗為原料,以感官評(píng)分為指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn),對(duì)花生芽紅棗復(fù)合飲料的配方和加工工藝進(jìn)行研究.結(jié)果顯示,花生芽紅棗復(fù)合飲料的最佳配方為:花生芽汁添加量14.0%、紅棗汁添加量27.0%、蔗糖添加量5.0%、復(fù)合酸味劑添加量0.12%、復(fù)合穩(wěn)定劑添加量0.5%.制備的花生芽紅棗復(fù)合飲料呈現(xiàn)淡黃色,色澤光亮均勻,香氣自然、濃郁,口感細(xì)膩,酸甜適中,具有花生和紅棗特有的滋味,花生芽紅棗復(fù)合飲料感官評(píng)分為92.5.研究結(jié)果為花生芽功能食品和復(fù)合功能飲料的開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ).