泛癌組織中T-box轉(zhuǎn)錄因子19基因水平與患者預(yù)后和腫瘤免疫微環(huán)境的相關(guān)性

何夢婷，劉宏勁，任宏生

1 山東中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南 250001；2 山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院東院重癥醫(yī)學(xué)科

癌癥危害全球人類健康，是導(dǎo)致死亡的首要原因，也是影響生活質(zhì)量的主要障礙［1］。免疫靶向治療為癌癥新的治療方法，療效好、不良作用少［2］。腫瘤免疫微環(huán)境（TIME）主要是腫瘤中的免疫成分，包括先天性免疫細(xì)胞、適應(yīng)性免疫細(xì)胞、細(xì)胞外免疫因子和細(xì)胞的表面分子等，與腫瘤的發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［3］，不僅能預(yù)測腫瘤患者的預(yù)后，也能預(yù)測腫瘤免疫治療效果。免疫浸潤細(xì)胞與腫瘤之間的相互作用可以影響腫瘤的進(jìn)展。腫瘤突變負(fù)荷（TMB）和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）高的腫瘤對免疫治療更加敏感，療效也更佳［4-5］。因此尋找與TIME 相關(guān)的腫瘤生物標(biāo)志物對于腫瘤的預(yù)后及治療具有重要意義。TBX 基因家族包括T、Tbx1、Tbx2、Tbx6 和Tbr1 5 個亞家族，主要參與胚胎和器官發(fā)育。研究［6］表明，TBX 基因家族中基因的失調(diào)參與了癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。作為T-box 轉(zhuǎn)錄因子基因家族的成員之一，T-box 轉(zhuǎn)錄因子19（TBX19）主要在垂體和腹側(cè)間腦表達(dá)［7］，其突變可造成促腎上腺皮質(zhì)激素缺乏、腎上腺功能不全［8］。研究［9］表明，TBX19 參與無功能垂體腺瘤（NFPA）的復(fù)發(fā)，靶向TBX19 治療可能會阻止NFPA 的再生。NIU 等［10］認(rèn)為在結(jié)直腸癌（COADREAD）和肝細(xì)胞癌（LIHC）中，TBX19 可作為致癌基因促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。泛癌分析即利用數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)實(shí)現(xiàn)跨腫瘤類型的綜合分析，旨在確定特定基因在不同癌癥類型之間表觀和機(jī)制的相似性和差異性。近年，隨著癌癥基因組圖譜（TCGA）等公共數(shù)據(jù)庫的發(fā)展和一些在線數(shù)據(jù)庫的建立，涌現(xiàn)了大量可用于腫瘤分析的數(shù)據(jù)以及整合數(shù)據(jù)的工具，為泛癌分析提供了支持［11］。雖有文獻(xiàn)［10］報道TBX19 在癌癥中發(fā)揮重要作用，但其在泛癌中的預(yù)后價值及其與腫瘤免疫微環(huán)境的關(guān)系仍有待探討。本研究利用數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)對TBX19 與腫瘤預(yù)后及腫瘤免疫微環(huán)境之間的關(guān)系進(jìn)行了泛癌分析，觀察了TBX19 在不同腫瘤中的表達(dá)，分析了其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，以預(yù)測TBX19 是否可作為腫瘤預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物；并探討了TBX19 與免疫浸潤、免疫檢查點(diǎn)、TMB 以及MSI 之間的關(guān)系，為TBX19 在腫瘤免疫方向的研究提供新的線索。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)及其來源 UCSC 數(shù)據(jù)庫（http：//xenabrowser.net/）中經(jīng)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化的TCGA泛癌數(shù)據(jù)，包括60 499例癌組織樣本和10 535例正常組織樣本。

1.2 癌組織中TBX19 表達(dá)與患者臨床病理特征、預(yù)后關(guān)系的泛癌分析 使用Sanger box 數(shù)據(jù)分析平臺（http：//www.sangerbox.com/），在“泛癌分析”模塊，分別選擇“基因表達(dá)差異”、“臨床分期與基因表達(dá)”、“基因表達(dá)預(yù)后”，設(shè)置基因名稱為“TBX19”，選擇數(shù)據(jù)參數(shù)變換為“l(fā)og2（x + 0.001）”，進(jìn)而觀察TBX19 在泛癌組織中的表達(dá)變化，分析TBX19 表達(dá)與腫瘤患者臨床病理特征、預(yù)后之間的相關(guān)性。

1.3 癌組織中TBX19 相關(guān)基因富集分析 通過STRING 網(wǎng)站（http：//string-db.org/）獲得50 個已實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證可用于分析的TBX19 結(jié)合蛋白。設(shè)置基因名稱為“TBX19”，生物名稱為“Homo sapiens”，主要參數(shù) 為：Minimum required interaction score［“Low confidence（0.150）”］，Meaning of network edges［“evidence”］，Max number of interactors to show［“no more than 50 inter-actors”］和Active interaction sources［experiments］。使 用 GEPIA2（http：//gepia2.cancerpku.cn/）的“Similar Gene Detection”模塊，基于TCGA 中所有癌組織和癌旁組織的數(shù)據(jù)，獲得前100個與TBX19 相關(guān)的靶向基因。利用韋恩網(wǎng)站（http：//bioinfogp.cnb.es/tools/venny/）對TBX19 結(jié)合蛋白和TBX19 相關(guān)的靶向基因進(jìn)行交叉分析，以去除重復(fù)基因。使用 Sanger Box 在線網(wǎng)站的“GO、KEGG 富集分析模塊”，聯(lián)合TBX19 結(jié)合蛋白和TBX19 相關(guān)的靶向基因進(jìn)行GO 和 KEGG 路徑分析。顯著富集參數(shù)設(shè)置為錯誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）和校正P<0.05。

1.4 泛癌組織中TBX19 表達(dá)與腫瘤免疫微環(huán)境關(guān)系分析

1.4.1 癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤的相關(guān)性分析 使用TIMER2.0 網(wǎng)站（http： //timer.cistrome.org）分析TBX19 表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤的相關(guān)性，在“Immune”模塊，設(shè)置基因?yàn)椤癟BX19”，在“Immune Infiltrates”處選擇“調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）”、“腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAF）”，利用網(wǎng)站中的QUANTISEQ、CIBERSORT、MCPCOUNTER、XCELL 等方法進(jìn)行評估。

1.4.2 癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫檢查點(diǎn)基因的相關(guān)性分析 利用臨床生信之家（https//www.aclbi.com/static/index.html#/）數(shù)據(jù)庫的 “泛癌模塊”，選擇“免疫檢查點(diǎn)”，輸入基因“TBX19”，分析TBX19表達(dá)與癌組織免疫檢查點(diǎn)基因的相關(guān)性。

1.4.3 癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫評分、TMB、MSI 的關(guān)系分析 使用Sanger box 數(shù)據(jù)分析平臺（http：//www.sangerbox.com/），在“泛癌分析”模塊，分別選擇“免疫浸潤分析Estimate”、“基因組異質(zhì)性與基因表達(dá)”，設(shè)置基因名稱為“TBX19”，選擇數(shù)據(jù)參數(shù)變換為“l(fā)og2（x + 0.001）”，分析TBX19表達(dá)與癌組織免疫評分、TMB 以及MSI 之間的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用R 軟件（3.6.4 版本）進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用非配對t檢驗(yàn)評估TBX19 在正常組織和癌組織中的表達(dá)；使用Log rank 檢驗(yàn)評估TBX19 表達(dá)與腫瘤患者生存預(yù)后的關(guān)系；使用Pearson 相關(guān)性分析泛癌組織中TBX19 與免疫細(xì)胞浸潤、免疫評分、TMB 以及MSI 之間的關(guān)系；TBX19表達(dá)與臨床病理特征分析，兩組樣本之間的差異使用非配對t檢驗(yàn)，多組樣本間的差異使用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用 Spearman 相關(guān)性檢驗(yàn)分析泛癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫檢查點(diǎn)基因的相關(guān)性。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織中TBX19 表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 與正常組織相比，TBX19 在膀胱尿路上皮癌（BLCA）、膽管癌（CHOL）、結(jié)腸癌（COAD）、COADREAD、食管癌（ESCA）、頭頸鱗狀細(xì)胞癌（HNSC）、腎透明細(xì)胞癌（KIRC）、腎乳頭狀細(xì)胞癌（KIRP）、混合腎癌（KIPAN）、LIHC、肺腺癌（LUAD）、肺鱗癌（LUSC）、嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤（PCPG）、直腸腺癌（READ）、胃癌（STAD）、胃和食管癌（STES）等16 種癌組織中高表達(dá)，在乳腺浸潤癌（BRCA）、腎嫌色細(xì)胞癌（KICH）、前列腺癌（PRAD）、子宮內(nèi)膜癌（UCEC）等4 種癌組織中低表達(dá)，見圖1。

圖1 TCGA數(shù)據(jù)庫中癌組織和癌旁組織TBX19的表達(dá)水平

TBX19 在BRCA、COAD、COADREAD、KICH、KIRC、KIPAN、甲狀腺癌（THCA）的不同WHO 分級癌組織中差異性表達(dá)，見圖2；在COAD、COADREAD、KIRC、KIPAN、READ、LUAD、PRAD、STAD的不同T 分期癌組織中差異性表達(dá)，見圖3；在BRCA、COAD、COADREAD、HNSC、PRAD、STES、THCA 的不同淋巴轉(zhuǎn)移癌組織中差異性表達(dá)，見圖4；在腎上腺皮質(zhì)癌（ACC）、COAD、COADREAD、KIRC、KIPAN、皮膚黑色素瘤（SKCM）的不同遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移癌組織中差異性表達(dá)，見圖5。

圖2 TCGA數(shù)據(jù)庫中TBX19在不同WHO分級（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）的泛癌組織中的表達(dá)水平

圖3 TCGA數(shù)據(jù)庫中TBX19在不同T分期（T1、T2、T3、T4）的泛癌組織中的表達(dá)水平

圖4 TCGA數(shù)據(jù)庫中TBX19在不同淋巴轉(zhuǎn)移（N0、N1、N2、N3）的泛癌組織中的表達(dá)水平

圖5 TCGA數(shù)據(jù)庫中TBX19在不同遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M0、M1）的泛癌組織中的表達(dá)水平

總體生存期（OS）結(jié)果顯示，在ACC［HR=1.78，95%CI（1.13，2.81），P=0.01］、COAD［HR=1.46，95%CI（1.00，2.13），P=0.04］、COADREAD［HR=1.51，95%CI（1.07，2.13），P=0.02］、膠 質(zhì) 瘤（GBMLGG）［HR=2.13，95%CI（1.83，2.49），P<0.001］、KICH［HR=3.28，95%CI（1.29，8.31），P=0.01］、KIRC［HR=1.34，95%CI（1.12，1.61），P<0.01］、KIPAN［HR=1.42，95%CI（1.25，1.60），P<0.001］、腦低級別膠質(zhì)瘤（LGG）［HR=1.92，95%CI（1.54，2.40），P< 0.001］、LIHC ［HR=1.47，95%CI（1.22，1.77），P< 0.001］、間皮瘤（MESO）［HR=1.41，95%CI（1.05，1.89），P=0.02］、胸 腺 癌（THYM）［HR=4.39，95%CI（1.26，15.39），P=0.02］、葡萄膜黑色素瘤（UVM）［HR=1.72，95%CI（1.13，2.62），P=0.01］癌組織中TBX19 高表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差， SKCM 癌組織中TBX19 低表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差［HR=0.78，95%CI（0.68，0.91），P<0.01］。TBX19 與疾病特異性生存期（DSS）關(guān)系分析中，ACC［HR=1.68，95%CI（1.05，2.69），P=0.03］、BRCA［HR=1.23，95%CI（1.00，1.50），P=0.04］、COAD［HR=2.22，95%CI（1.30，3.81），P< 0.01］、COADREAD［HR=2.34，95%CI（1.41，3.88），P<0.01］、GBMLGG［HR=2.13，95%CI（1.81，2.52），P<0.001］、KIRC［HR=1.40，95%CI（1.11，1.77），P<0.01］、KICH［HR=4.13，95%CI（1.48，11.52），P<0.01］、KIPAN［HR=1.39，95%CI（1.20，1.62），P<0.001］、LGG［HR=1.91，95%CI（1.50，2.41），P<0.001］、LIHC［HR=1.46，95%CI（1.16，1.84），P<0.01］、MESO［HR=1.65，95%CI（1.10，2.48），P=0.02］、STAD［HR=1.30，95%CI（1.01，1.68），P=0.04］、UVM［HR=1.74，95%CI（1.12，2.70），P=0.01］癌組織中TBX19 高表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差，SKCM 癌組織中TBX19 低表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差［HR=0.77，95%CI（0.66，0.90），P<0.001］。 在TBX19 表達(dá)與無疾病間隔期（DFI）關(guān)系分析中，宮頸 鱗癌 和腺 癌（CESC） ［HR=1.90，95%CI（1.12，3.23），P=0.02］、LIHC ［HR=1.29，95%CI（1.08，1.55），P< 0.01］、子宮肉瘤（UCS）［HR=1.82，95%CI（1.00，3.32），P=0.04］癌組織中TBX19 高表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差。在TBX19 與無進(jìn)展間隔期（PFI）關(guān)系分析中，BLCA ［HR=1.20，95%CI（1.01，1.42），P=0.04］、COAD［HR=1.67，95%CI（1.17，2.38），P<0.01］、COADREAD［HR=1.75，95%CI（1.26，2.42），P<0.001］、GBMLGG［HR=1.91，95%CI（1.65，2.20），P< 0.001］、KIRC［HR=1.30，95%CI（1.08，1.58），P< 0.01］、KIPAN［HR=1.32，95%CI（1.18，1.49），P< 0.001］、LGG［HR=1.80，95%CI（1.48，2.19），P< 0.001］、LIHC［HR=1.29，95%CI（1.09，1.52），P< 0.01］、STES［HR=1.24，95%CI（1.06，1.45），P< 0.01］、STAD［HR=1.30，95%CI（1.05，1.61），P=0.01］癌組織中TBX19 高表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差，SKCM［HR=0.84，95%CI（0.74，0.95），P<0.01］、胰 腺 癌（PAAD） ［HR=0.65，95%CI（0.50，0.83），P<0.01］癌組織中TBX19 低表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后差。

2.2 TBX19 結(jié)合蛋白及其相關(guān)基因的富集分析結(jié)果 通過STRING 數(shù)據(jù)庫共獲得實(shí)驗(yàn)已驗(yàn)證的50種TBX19 結(jié)合蛋白。利用GEPIA2 數(shù)據(jù)庫分析得出與TBX19 表達(dá)相關(guān)的前100 個基因。韋恩圖顯示TBX19 結(jié)合蛋白與TBX19 表達(dá)相關(guān)的前100 個基因相交分析無交叉基因。GO 富集分析結(jié)果顯示，TBX19 結(jié)合蛋白和TBX19 表達(dá)相關(guān)基因與DNA 合成轉(zhuǎn)錄、RNA 代謝的途徑有關(guān)，如作用于 DNA 核酸模板轉(zhuǎn)錄、DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性的調(diào)控、RNA 生物合成過程的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的調(diào)控、RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的調(diào)控、細(xì)胞大分子生物合成過程的調(diào)控等。KEGG 通路分析結(jié)果顯示，TBX19 結(jié)合蛋白和TBX19表達(dá)相關(guān)基因與肝細(xì)胞癌、前列腺癌、甲狀腺癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)直腸癌等腫瘤有關(guān)，另外還與原發(fā)性免疫缺陷、癌癥中的轉(zhuǎn)錄錯誤調(diào)控有關(guān)?！癏ippo信號通路”、“Wnt 信號通路”等可能參與了 TBX19對腫瘤發(fā)病機(jī)制的影響。

2.3 泛癌組織中TBX19 表達(dá)與腫瘤免疫微環(huán)境的關(guān)系

2.3.1 泛癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫浸潤水平的關(guān)系 基質(zhì)評分結(jié)果顯示，COAD、COADREAD、GBMLGG、KIRC、KICH、KIPAN、LGG、LUAD、PRAD、PCPG、READ、THYM、THCA、睪 丸 生 殖 細(xì) 胞 瘤（TGCT）、UVM 癌組織中TBX19 表達(dá)與基質(zhì)評分呈正相 關(guān)（R分 別為0.26、0.27、0.50、0.24、0.48、0.41、0.47、0.14、0.41、0.15、0.28、0.22、0.13、0.41、0.23，P均<0.05），最顯著相關(guān)的前3 個腫瘤為GBMLGG、KICH、LGG；STES、UCS 癌 組 織 中TBX19 表達(dá)與基質(zhì)評分呈負(fù)相關(guān)（R分別為-0.16、-0.28，P均<0.05）。免疫評分結(jié)果顯示，BRCA、COAD、COADREAD、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBC）、GBMLGG、KIRC、KICH、KIPAN、LGG、LUAD、PRAD、UVM 癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫評分呈正相關(guān)（R分別為0.19、0.14、0.14、0.60、0.52、0.34、0.46、0.44、0.55、0.18、0.38、0.40，P均<0.001），最顯著相關(guān)的前3 個腫瘤為DLBC、LGG、GBMLGG；STES、STAD、THYM、UCEC 癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫評分呈負(fù)相關(guān)（R分別為-0.23、-0.14、-0.23、-0.20，P均<0.05）。ESTIMATE 評分結(jié)果顯示，BRCA、COAD、COADREAD、DLBC、GBMLGG、KIRC、KICH、KIPAN、LGG、LUAD、PRAD、READ、TGCT、UVM 癌組織中TBX19 基因表達(dá)與ESTIMATE 評分呈正相關(guān)（R分別為0.13、0.22、0.22、0.46、0.53、0.33、0.49、0.45、0.53、0.17、0.43、0.23、0.28、0.36，P均<0.05），最 顯 著 相 關(guān) 的 前3 個 腫 瘤 為LGG、GBMLGG、KICH；STES、STAD、UCEC 癌組織中TBX19 基因表達(dá)與ESTIMATE 評分呈負(fù)相關(guān)（R分別為-0.21、-0.11、-0.16，P均<0.05）。COAD 組織中TBX19 表達(dá)與Treg 細(xì)胞浸潤豐度呈正相關(guān)（R=0.156，P<0.01），BRCA-LUMA、CESC、COAD、HNSCHPV（陰性）、LGG、PRAD、READ、TGCT、THCA 癌組織中TBX19 表達(dá)與CAF 細(xì)胞浸潤豐度呈正相關(guān)（R分別為0.29、0.24、0.36、0.25、0.27、0.40、0.34、0.32、0.30，P均<0.05）。

2.3.2 泛癌組織中TBX19 表達(dá)與免疫檢查點(diǎn)基因、TMB 和MSI 的相關(guān)性 在大部分癌組織中，TBX19 的表達(dá)與8 種免疫檢查點(diǎn)抑制基因呈正相關(guān)，在BRCA、DLBC、KIRC、LAML、LGG、LIHC、LUAD、PAAD、PRAD、SKCM、UVM 癌組織中，TBX19的表達(dá)與表面抗原分化簇274（CD274）呈正相關(guān)（R分別為0.23、0.36、0.11、0.24、0.39、0.21、0.27、0.18、0.35、0.15、0.48，P均<0.05）；在BRCA、COAD、DLBC、ESCA、GBM、HNSC、KICH、KIRC、KIRP、LAML、LGG、LIHC、LUAD、LUSC、PAAD、PRAD、READ、SKCM、STAD、UVM 癌組織中，TBX19 的表達(dá)與細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4（CTLA4） 呈正相關(guān)（R分別為0.27、0.13、0.32、0.20、0.21、0.17、0.54、0.43、0.19、0.17、0.34、0.40、0.31、0.11、0.17、0.40、0.25、0.26、0.20、0.55，P均<0.05）；在ACC、BRCA、COAD、HNSC、KICH、LAML、LGG、LIHC、LUAD、PCPG、PRAD、READ、THCA、THYM、UVM 癌組織中，TBX19 的表達(dá)與甲型肝炎病毒細(xì)胞受體 2 （HAVCR2）呈正相關(guān)（R分別為0.31、0.08、0.10、0.15、0.33、0.32、0.62、0.39、0.18、0.16、0.37、0.18、0.10、0.27、0.64，P均<0.05）；在ACC、BRCA、DLBC、GBM、HNSC、KICH、KIRC、KIRP、LGG、LIHC、LUAD、LUSC、卵巢漿液性囊腺癌（OV）、PRAD、READ、肉瘤（SARC）、UVM 癌組織中，TBX19的表達(dá)與淋巴細(xì)胞激活基因3（LAG3）呈正相關(guān)（R分別為0.22、0.22、0.37、0.22、0.12、0.49、0.32、0.25、0.34、0.26、0.17、0.11、0.16、0.43、0.19、0.16、0.44，P均<0.05）；在BRCA、DLBC、GBM、HNSC、KICH、KIRC、KIRP、LGG、LIHC、LUAD、MESO、PRAD、THCA、UVM 癌組織中，TBX19 的表達(dá)與程序性細(xì)胞死亡1 基因（PDCD1）呈正相關(guān)（R分別為0.25、0.46、0.22、0.12、0.41、0.32、0.27、0.41、0.37、0.19、0.28、0.42、0.14、0.52，P均<0.05）；在BRCA、COAD、DLBC、KICH、KIRC、LAML、LGG、LIHC、LUAD、PCPG、PRAD、READ、SKCM、UVM 癌組織中，TBX19表達(dá)與程序性細(xì)胞死亡蛋白1配體2（PDCD1LG2）呈正相關(guān)（R分別為0.31、0.11、0.38、0.57、0.18、0.18、0.60、0.14、0.14、0.19、0.45、0.18、0.14、0.44，P均<0.05）；在CESC、COAD、ESCA、GBM、HNSC、KIRP、LAML、LGG、LUAD、LUSC、OV、PAAD、PCPG、PRAD、READ、THCA、THYM、UCS 癌組織中，TBX19 的表達(dá)與唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素-15（SIGLEC15）呈正相關(guān)（R分別為0.14、0.13、0.17、0.21、0.26、0.19、0.22、0.20、0.18、0.14、0.15、0.22、0.16、0.40、0.17、0.28、0.26、0.33，P均<0.05）；在BRCA、COAD、DLBC、GBM、HNSC、KICH、KIRC、KIRP、LGG、LIHC、LUAD、PRAD、READ、SKCM、STAD、THYM、UVM 癌組織中，TBX19 的表達(dá)與T 細(xì)胞免疫球蛋白ITIM 結(jié)構(gòu)域（TIGIT）呈正相關(guān)（R分別為0.25、0.11、0.37、0.23、0.13、0.49、0.32、0.13、0.09、0.29、0.25、0.40、0.23、0.11、0.14、0.19、0.51，P均<0.05）。在UCEC 癌 組 織 中，TBX19 表 達(dá) 與CTLA4、PDCD1、TIGIT呈負(fù)相關(guān)（R分別為–0.13、–0.13、–0.09，P均<0.05）；在THYM 癌 組 織 中，TBX19 表 達(dá) 與PDCD1 呈負(fù)相關(guān)（R為–0.18，P<0.05）；在THCA、LUSC 癌 組 織 中TBX19 表 達(dá) 與CD274（R分 別 為-0.11、-0.10，P均<0.05）、PDCD1LG2 （R分 別 為-0.09、-0.15，P均<0.05）呈負(fù)相關(guān)；在MESO 癌組織中，TBX19 表達(dá)與CD274 呈負(fù)相關(guān)（R=-0.2，P<0.05）；在KIRP 癌組織中，TBX19 表達(dá)與CD274、HAVCR2 呈負(fù)相關(guān)（R分別為-0.24、-0.27，P均<0.05）；在STAD、BRCA 癌組織中，TBX19 表達(dá)與SIGLEC15 呈負(fù)相關(guān)（R分別為-0.13、-0.19，P均<0.05）。ACC、GBMLGG、KIRP、KIPAN、KIRC、OV、PCPG、THYM 癌 組 織中TBX19 與TMB 呈 正 相 關(guān)（R分別為0.34、0.12、0.12、0.16、0.13、0.12、0.23、0.31，P均<0.05）；STES、UCEC 癌組織中TBX19 與TMB 呈負(fù)相關(guān)（R分別為-0.09、-0.19，P均<0.05）。BRCA、CESC、LUAD、LUSC、PCPG、THYM、THCA 癌組織中，TBX19 與MSI 正相關(guān)（R分別為0.13、0.13、0.14、0.14、0.17、0.27、0.12，P均<0.05）；DLBC、GBMLGG、KIPAN、STES、UCEC 癌組織中，TBX19 與MSI 負(fù)相關(guān)（R分別為-0.46、-0.16、-0.29、-0.11、-0.21，P均<0.05）。

3 討論

最近研究［9-11］報道揭示了TBX19 與常見病之間關(guān)系，特別是癌癥。既往研究［12］表明，TBX19 在COADREAD 中高表達(dá)，與患者預(yù)后不良有一定聯(lián)系，并且TBX19 表達(dá)上調(diào)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。還有研究［13］發(fā)現(xiàn)，TBX19在轉(zhuǎn)移性LIHC組織中的表達(dá)高于原發(fā)性LIHC組織和癌旁非腫瘤組織，并且與腫瘤分化差、TNM 分期高呈正相關(guān)，是肝細(xì)胞癌患者復(fù)發(fā)與生存的獨(dú)立預(yù)測因子。本研究初步預(yù)測了TBX19 在多種癌組織中的表達(dá)，與腫瘤分級、分期以及患者預(yù)后之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TBX19 在大部分癌組織中高表達(dá)并且與患者預(yù)后不良有關(guān)，這與其他學(xué)者的研究結(jié)果基本一致。此外，TBX19 的表達(dá)與腫瘤的分級和分期密切相關(guān)，而且在COAD、COADREAD 中，TBX19 的表達(dá)水平隨著腫瘤的WHO 分級以及TNM 分期的升高而逐漸升高，表明TBX19高表達(dá)可能加速腫瘤的進(jìn)展。以上研究結(jié)果提示TBX19 可以作為一些腫瘤預(yù)后的生物標(biāo)志物。但TBX19 在不同類型癌組織中的表達(dá)水平存在差異，可能反映其不同的生物學(xué)功能。

為確定TBX19 在泛癌中的潛在分子機(jī)制，我們對TBX19 相關(guān)基因進(jìn)行了GO 和KEGG 通路富集分析。結(jié)果顯示TBX19 主要與LIHC、PRAD、COADREAD 等腫瘤有關(guān)，Hppio 和Wnt 通路為主要富集通路。表明 TBX19 與腫瘤密切相關(guān)，可能通過多途徑調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

為了闡明TBX19 與免疫浸潤的關(guān)系，我們利用R 軟件包中的ESTIMATE 方法評估了TCGA 中TBX19 表達(dá)與免疫評分的關(guān)系，結(jié)果顯示在COAD、COADREAD等12種腫瘤中，TBX19的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤水平呈正相關(guān)，而在STES、STAD、THYM、UCEC中，TBX19的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤水平呈負(fù)相關(guān)，表明在大多數(shù)腫瘤中，TBX19的表達(dá)水平與高免疫細(xì)胞浸潤相關(guān)。在COAD 中，TBX19 表達(dá)與Treg所占百分比呈正相關(guān)，在COAD、PRAD 等腫瘤中，TBX19 表達(dá)與CAF 細(xì)胞所占百分比呈正相關(guān)，提示TBX19 高表達(dá)可能通過募集更多Treg 和CAF 細(xì)胞發(fā)揮促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。值得注意的是，在COAD 中，我們發(fā)現(xiàn)TBX19 表達(dá)水平與免疫評分以及Treg、CAF 細(xì)胞的免疫浸潤水平均呈正相關(guān)，這可能是TBX19成為COAD預(yù)后危險因素的原因之一。

本研究還分析了TBX19 表達(dá)與免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因、TMB、MSI 之間的相關(guān)性。免疫檢查點(diǎn)是一些抑制機(jī)體免疫反應(yīng)、控制效應(yīng)細(xì)胞過度激活、避免免疫病理損傷的共抑制分子［14］，通過阻斷免疫檢查點(diǎn)的途徑可以實(shí)現(xiàn)較明顯的抗腫瘤效果［15］。本研究結(jié)果顯示，在PRAD、LUAD、LGG 中，TBX19 表達(dá)與PDCD1、CD274、CTLA4、HAVCR2、LAG3、PDCD1LG 2、SIGLEC15、TIGIT 等8 種免疫檢查點(diǎn)抑制基因均呈正相關(guān)，在UCEC 中與CTLA4、PDCD1、TIGIT 呈負(fù)相關(guān)，表明TBX19 可能通過免疫檢查點(diǎn)途徑影響機(jī)體免疫對于腫瘤細(xì)胞的監(jiān)視，靶向TBX19 治療或許可以調(diào)節(jié)腫瘤免疫。TMB和MSI與免疫治療應(yīng)答相關(guān)［16］，是免疫治療反應(yīng)的預(yù)測性生物標(biāo)志物［17-18］。本研究分析了TBX19表達(dá)與TMB、MSI的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)TBX19 表達(dá)與8 種腫瘤的TMB 呈正相關(guān)，與7 種腫瘤的MSI 呈正相關(guān)，其中與TMB 和MSI 均為正相關(guān)的是THYM。提示TBX19可能對免疫治療反應(yīng)有一定的預(yù)測作用，可以通過影響 TMB 和MSI 進(jìn)一步調(diào)節(jié)腫瘤免疫。

綜上所述，通過對TBX19的首次泛癌分析，我們發(fā)現(xiàn)TBX19 在不同腫瘤中存在差異表達(dá)，與患者預(yù)后有關(guān)，而且與癌組織中多種免疫浸潤細(xì)胞、免疫檢查點(diǎn)基因、TMB、MSI存在較強(qiáng)的相關(guān)性，這有助于了解TBX19 在泛癌中的作用，也為腫瘤的免疫治療提供了新的思路。但本研究主要是基于數(shù)據(jù)庫的生物信息學(xué)分析，TBX19 在泛癌中具體的作用機(jī)制及生物學(xué)過程，仍需更多的基礎(chǔ)以及臨床實(shí)驗(yàn)予以驗(yàn)證。