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    散紋盛蛺蝶(鱗翅目:蛺蝶科)成蟲腸道細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)與多樣性分析

    2023-10-11 02:49:22石慶會陳華蓮鄭雅婷葉藝榕
    三明學(xué)院學(xué)報(bào) 2023年3期
    關(guān)鍵詞:蛺蝶菌門宿主

    石慶會,陳華蓮,鄭雅婷,葉藝榕,孫 剛

    (1.福建省資源環(huán)境監(jiān)測與可持續(xù)經(jīng)營利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 三明 365004;2.三明學(xué)院 資源與化工學(xué)院,福建 三明 365004)

    昆蟲種類繁多、形態(tài)各異,占生物圈內(nèi)動物總數(shù)的一半以上,具有極強(qiáng)的遷徙、繁殖以及環(huán)境適應(yīng)能力,幾乎遍布自然界的每一個(gè)角落,對人類的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和身體健康影響深遠(yuǎn)[1-2]。腸道是昆蟲與外界環(huán)境連接的紐帶,且棲息著大量的微生物,影響宿主昆蟲的生長發(fā)育[3]。在長期的協(xié)同進(jìn)化過程中,腸道微生物與宿主昆蟲形成密切的共生關(guān)系,相互依賴、相互影響[4]。一方面,腸道微生物在宿主昆蟲的生命活動中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[4-5],如參與宿主的營養(yǎng)代謝[6]、幫助宿主的解毒調(diào)理[7]、影響宿主的生長發(fā)育與繁殖[8]、調(diào)控宿主對不良環(huán)境的適應(yīng)性[9]等;另一方面,腸道微生物的群落結(jié)構(gòu)、代謝活動又受到宿主昆蟲腸道微環(huán)境的影響,并通過一系列策略與之適應(yīng)[10]。昆蟲腸道微生物包括原生動物、真菌、古生菌和細(xì)菌等,其中細(xì)菌是大多數(shù)昆蟲腸道微生物的主要組成[11]。

    目前,關(guān)于昆蟲腸道細(xì)菌的研究主要集中在細(xì)菌的多樣性及其功能方面,涉及的宿主昆蟲主要包括等翅目(Lsoptera)、鱗翅目(Lepidoptera)、同翅目(Homoptera)、直翅目(Orthoptera)、半翅目(Hemiptera)、雙翅目(Diptera)和鞘翅目(Coleoptera)等,覆蓋眾多農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)害蟲以及與人類健康密切相關(guān)的衛(wèi)生害蟲[5,12-13 ]。其中,鱗翅目是昆蟲綱中僅次于鞘翅目的第二大目,包括蛾、蝶兩類昆蟲,其數(shù)量約占昆蟲總數(shù)的16%,主要作為植食者、傳粉者在生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,具有重要的研究價(jià)值[14-15]。

    散紋盛蛺蝶(Symbrenthialilaea)隸屬于鱗翅目,蛺蝶科(Nymphalidae)、蛺蝶亞科(Nymphalinae),在國內(nèi)主要分布于江西、福建、廣西、云南和臺灣等地,國外主要分布于印度北部、越南和菲律賓等地。幼蟲以蕁麻科的青苧麻、木苧麻、水麻等植物葉片為食,成蟲喜吸食花蜜。散紋盛蛺蝶幼蟲對蕁麻科植物和觀賞性植物有著巨大的危害,嚴(yán)重時(shí)僅留葉脈而使寄主植物干枯,容易造成蕁麻科植物的產(chǎn)量降低造成經(jīng)濟(jì)損失。鑒于腸道微生物與宿主昆蟲之間形成的穩(wěn)定共生關(guān)系,有必要對散紋盛蛺蝶腸道微生物開展研究。然而目前關(guān)于這一方面的研究尚未見報(bào)道。本文利用PacBio三代高通量測序平臺,測定了自然種群散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌16S rRNA基因全序列,初步分析其腸道細(xì)菌的組成與多樣性特征,以期為深入研究腸道細(xì)菌的潛在功能、探討腸道細(xì)菌與宿主的互作機(jī)制奠定基礎(chǔ),也為尋求新的生物防治途徑提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣本采集與處理

    供試散紋盛蛺蝶成蟲(以下簡稱SW)均采自于自然環(huán)境,樣本帶回實(shí)驗(yàn)室參考《中國蝴蝶志》[16]進(jìn)行鑒定后,用75%的酒精進(jìn)行體表消毒并置于-80 ℃保存?zhèn)溆?。隨機(jī)選取3個(gè)樣本(SW-1、SW-2、SW-3)作為實(shí)驗(yàn)材料,其中SW-1采自于福建省三明市梅列區(qū)瑞云山(2021年9月),SW-2、SW-3采自于福建省三明市三元區(qū)三明學(xué)院(2021年10月)。

    1.2 腸道細(xì)菌基因組DNA提取

    使用E.Z.N.A.?Soil DNA Kit 提取試劑盒(Omega Bio-tek,Norcross,GA,U.S)提取散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌基因組DNA,具體操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。完成基因組DNA抽提后,利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測抽提的基因組DNA。

    1.3 腸道細(xì)菌16S rRNA基因全序列擴(kuò)增與測序

    將提取的DNA作為模板,對16S rRNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。利用引物27F(5’-AGRGTTYGATYMTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-RGYTACCTTGTTACGACTT-3’)擴(kuò)增散紋盛蛺蝶成蟲腸道的16S rRNA基因全序列。PCR反應(yīng)體系(20 μL)為0.4 μL的FastPfu Polymerase,4 μL的5 × FastPfu Buffer,2 μL的2.5 mM dNTPs,上下游引物(5 μM)各0.8 μL,10 ng DNA模板,ddH2O補(bǔ)足至20 μL。PCR反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性2 min;95 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共27個(gè)循環(huán);72 ℃總延伸5 min。PCR儀:ABI GeneAmp?9700型。全部樣本按照正式實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行,每個(gè)樣本3個(gè)重復(fù)。

    將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測,使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(AXYGEN公司)切膠回收PCR產(chǎn)物,具體方法參照試劑盒說明書執(zhí)行?;厥债a(chǎn)物經(jīng)Tris_HCl洗脫后,進(jìn)行2%瓊脂糖電泳檢測。根據(jù)電泳初步定量結(jié)果,將PCR產(chǎn)物用QuantiFluorTM-ST藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)(Promega公司)進(jìn)行檢測定量,之后按每個(gè)樣本的測序量要求,進(jìn)行相應(yīng)比例混合?;旌虾蟮腄NA產(chǎn)物利用PacBio三代測序平臺進(jìn)行建庫和測序,由上海凌恩生物科技有限公司完成。

    1.4 測序數(shù)據(jù)處理

    使用儀器自帶的SMRTLINK(v9)處理PacBio原始序列數(shù)據(jù),設(shè)置參數(shù):最小通過數(shù)為3,最小精確度為0.99進(jìn)行一致性CCS(circular consensus sequencing,CCS)序列的獲得。再利用SMRT Portal進(jìn)行序列的長度(800-2500 bp)和質(zhì)量篩選。通過去除barcode、引物序列、chirmas以及含有10個(gè)連續(xù)相同堿基的序列,進(jìn)一步對序列進(jìn)行篩選。

    1.5 腸道細(xì)菌群落組成及多樣性分析

    利用USEARCH(v10)軟件,按照98.65%相似度對非重復(fù)序列(不含單序列)進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic unit,OTU)聚類,在聚類過程中去除嵌合體,得到OTU的代表序列。將所有優(yōu)化序列map至OTU代表序列,選出與OTU代表序列相似性在98.65%以上的序列,從而生成樣本的OTUs結(jié)果。為了得到每個(gè)OTU對應(yīng)的物種分類信息,采用uclust algorithm(v1.2.22.q)方法與Silva數(shù)據(jù)庫(http://www.arb-silva.de)進(jìn)行物種注釋分析(設(shè)定置信閾值為0.8),并分別在各個(gè)分類水平:門(Phylum),綱(Class),目(Order),科(Family),屬(Genus),種(Species)統(tǒng)計(jì)各樣本的群落組成。利用MOTHUR(v.1.35.1)軟件進(jìn)行Alpha多樣性指數(shù)分析和繪制Shannon-Wiener曲線,利用QIIME(v1.9.0)繪制Rank-Abundance曲線。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌16S rRNA基因全序列測序結(jié)果

    基于PacBio三代測序平臺,完成了散紋盛蛺蝶成蟲3個(gè)樣本腸道細(xì)菌的16S rRNA全序列高通量測序,共獲得48 458條CCS序列,總長度為69 573 368 bp。經(jīng)過優(yōu)化后共獲得35 586條reads,在98.65%的相似度下被聚類為2 547個(gè)OTUs(表1)。

    表1 散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌測序的基本信息

    2.2 散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌組成及其豐度

    基于OTUs的分類結(jié)果,3個(gè)樣本共注釋到9個(gè)門,15個(gè)綱,25個(gè)目,48個(gè)科,71個(gè)屬,217個(gè)種(表1)。

    在門分類階元水平,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌共注釋到了放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、藍(lán)藻門(Cyanobacteria)、異常球菌-棲熱菌門(Deinococcus-Thermus)、厚壁菌門(Firmicutes)、浮霉菌門(Planctomycetes)、變形菌門(Proteobacteria)、軟壁菌門(Tenericutes)、疣微菌門(Verrucomicrobia)等9個(gè)門,其中變形菌門為優(yōu)勢菌門,平均相對豐度為55.89%,擬桿菌門為次優(yōu)勢菌門,占比27.66%(圖1A)。

    注:基于OTUs的分類結(jié)果,將平均相對豐度低于0.01%的部分合并為“Others”在圖中顯示。

    在綱分類階元水平,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌平均相對豐度前10位的依次是α-變形桿菌綱(Alphaproteobacteria)、噬幾丁質(zhì)菌綱(Chitinophagia)、γ-變形桿菌綱(Gammaproteobacteria)、柔膜菌綱(Mollicutes)、β-變形桿菌綱(Betaproteobacteria)、放線菌綱(Actinomycetia)、異常球菌綱(Deinococci)、芽孢桿菌綱(Bacilli)、梭菌綱(Clostridia)、擬桿菌綱(Bacteroidia),其中α-變形桿菌綱為優(yōu)勢菌綱,占比40.23%,噬幾丁質(zhì)菌綱為次優(yōu)勢菌綱,占比25.61%(圖1B)。

    在目分類階元水平,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌平均相對豐度前10位的依次為生絲微菌目(Hyphomicrobiales)、噬幾丁質(zhì)目(Chitinophagales)、黃單胞菌目(Xanthomonadales)、蟲原體目(Entomoplasmatales)、紅螺菌目(Rhodospirillales)、棒狀菌目(Corynebacteriales)、伯克氏菌目(Burkholderiales)、立克次式體目(Rickettsiales)、腸桿菌目(Enterobacterales)、棲熱菌目(Thermales),其中生絲微菌目和噬幾丁質(zhì)目分別為優(yōu)勢菌目和次優(yōu)勢菌目,占比分別為27.88%和27.61%(圖1C)。

    在科分類階元水平,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌平均相對豐度前10位的依次為噬幾丁質(zhì)菌科(Chitinophagaceae)、紅細(xì)菌科(Rhodanobacteraceae)、慢生根瘤菌科(Bradyrhizobiaceae)、螺原體科(Spiroplasmataceae)、拜葉林克式菌科(Beijerinckiaceae)、葉桿菌科(Phyllobacteriaceae)、分枝桿菌科(Mycobacteriaceae)、伯克氏菌科(Burkholderiaceae)、無形體科(Anaplasmataceae)、棲熱菌科(Thermaceae),其中噬幾丁質(zhì)菌科為優(yōu)勢菌科,占比27.61%(圖1D)。

    在屬分類階元水平,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌平均相對豐度前10位的依次為沉積物桿狀菌屬(Sediminibacterium)、羅河桿菌屬(Rhodanobacter)、慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)、螺原體屬(Spiroplasma)、Methylovirgula、噬幾丁質(zhì)菌屬(Chitinophaga)、中慢生根瘤菌屬(Mesorhizobium)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)、葉桿菌屬(Phyllobacterium)、沃爾巴克氏體屬(Wolbachia),其中沉積物桿狀菌屬為優(yōu)勢菌屬,占比21.24%(圖1E)。

    在種分類階元水平,平均相對豐度前10位的依次為木蘭景天桿菌(Sediminibacteriummagnilacihabitans)、柑橘僵化病螺原體(Spiroplasmacitri)、Methylovirgulaligni、Bradyrhizobiumsp011516665、亞西亞羊蹄甲菌(Asaiabogorensis)、Chitinophagavietnamensis、副伯克霍爾德菌(Paraburkholderiafungorum)、Asaialannensis、Mesorhizobiumterrae、Bradyrhizobiumottawaense_A,其中木蘭景天桿菌為優(yōu)勢菌種,占比20.78%(圖1F)。

    2.3 散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌Alpha多樣性

    Alpha多樣性是指對單個(gè)樣品物種多樣性分析,是菌群結(jié)構(gòu)的重要特征。本文分析了Chao指數(shù)、Ace指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)等Alpha多樣性指數(shù),其中Chao指數(shù)、Ace指數(shù)反映樣品中群落的豐富度(species richness)即指群落中物種的數(shù)量,而不考慮群落中每個(gè)物種的豐度情況,而Shannon指數(shù)反映群落多樣性,Simpson指數(shù)反映群落中優(yōu)勢種的集中程度。Chao指數(shù)、Ace指數(shù)和Shannon指數(shù)越大,Simpson指數(shù)越小,說明樣品中群落多樣性越高、物種越豐富。從Alpha多樣性統(tǒng)計(jì)結(jié)果(表2)可以看出,3個(gè)樣本的Chao指數(shù)在1 737.141 0~2 095.629 2,Ace指數(shù)在1 943.055 1~2 321.301 3,Shannon指數(shù)在6.778 2~7.592 1,Simpson指數(shù)在0.02 46~0.054 0,表明散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌群落有較高的豐富度和多樣性。

    表2 散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌的Alpha多樣性指數(shù)

    Shannon-Wiener曲線是利用各樣本的測序量在不同測序深度時(shí)的微生物多樣性指數(shù)構(gòu)建的,以此反映各樣本在不同測序數(shù)量時(shí)的微生物多樣性。當(dāng)曲線趨向平坦時(shí),說明測序數(shù)據(jù)量足夠大,可以反映樣本中絕大多數(shù)的微生物信息。從本研究構(gòu)建的曲線(圖2)可以看出,3個(gè)樣本均趨向平坦,說明測序數(shù)據(jù)已經(jīng)足夠大,更多的測序量不會引起物種多樣性的顯著增長,可以反映樣本中絕大多數(shù)的微生物信息,基于現(xiàn)有數(shù)據(jù)量的分析結(jié)果較為精確可靠。

    圖2 散紋盛蛺蝶3個(gè)樣本腸道細(xì)菌的Shannon-Wiener曲線圖

    Rank-abundance曲線是一種分析多樣性的方式??捎脕碚f明多樣性的兩個(gè)方面,即物種豐度和物種均勻度。曲線橫軸反映的是樣本物種豐富程度,曲線越寬,樣本中物種組成越豐富;曲線縱軸反映的是物種的均勻度,曲線越平滑,樣本中的物種分布越均勻。從分析結(jié)果(圖3)可以看出,3個(gè)樣本曲線與橫軸的交點(diǎn)距離都較遠(yuǎn),同時(shí)三條曲線的整體走向較為平滑,表明散紋盛蛺蝶成蟲腸道中的細(xì)菌具有較高的物種豐度和物種均勻度。

    圖3 散紋盛蛺蝶3個(gè)樣本腸道細(xì)菌的Rank-abundance曲線圖

    3 討論

    基于16S rRNA基因全序列和PacBio三代測序平臺,本研究首次完成了散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)與多樣性分析,共注釋到9個(gè)門,15個(gè)綱,25個(gè)目,48個(gè)科,71個(gè)屬,217個(gè)種。

    相關(guān)研究表明,盡管不同種類的昆蟲腸道菌群優(yōu)勢菌門有所差別,但均以變形菌門為最主要的腸道菌群之一[17]。本研究結(jié)果顯示,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌的優(yōu)勢菌門也是變形菌門,且在腸道細(xì)菌中平均相對豐度最高(55.89%)。此外,擬桿菌門也是散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌的次優(yōu)勢菌門,其平均相對豐度為27.66%,此結(jié)果與半翅目的褐飛虱(Nilaparvatalugens)[18]、大青葉蟬(Cicadellaviridis)[19],鞘翅目的光肩星天牛(Anoplophoraglabripennis)[20]、棲北散白蟻(Reticulitermessperatus)[21]腸道優(yōu)勢菌門類似。有些昆蟲腸道中的優(yōu)勢菌門則相對簡單,僅為變形菌門,如鱗翅目的茶尺蠖(Ectropisobliqua)[22]和稻縱卷葉螟(Cnaphalocrocismedinalis)[23],雙翅目的柑橘大實(shí)蠅(Bactroceraminax)[24]、長須白蛉(Lutzomyialongipalpis)[25]、澤蘭實(shí)蠅(Procecidocharesutilis)[26],鞘翅目的椴六點(diǎn)楔天牛(Saperdavestita)[20],半翅目的小貫小綠葉蟬(Empoascaonukii)[27]以及脈翅目的中華通草蛉(Chrysoperlasinica)[28]等。值得一提的是,即便是同一個(gè)目分類階元的昆蟲腸道的優(yōu)勢菌門也會有所不同,如鞘翅目天??频墓饧缧翘炫:吞炫?天牛腸道的優(yōu)勢菌門僅有變形菌門,而光肩星天牛腸道優(yōu)勢菌門則有變形菌門、擬桿菌門、厚壁菌門、放線菌門[20];半翅目葉蟬科的大青葉蟬和小貫小綠葉蟬,大青葉蟬的優(yōu)勢菌門除了變形菌門外還包括擬桿菌門[19],而小貫小綠葉蟬的優(yōu)勢菌門僅為變形菌門[27]。因此,昆蟲腸道細(xì)菌的組成與結(jié)構(gòu)受多種因素的影響,尤其是昆蟲種類、食性以及環(huán)境條件等。

    在屬分類階元水平,散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌共注釋到71個(gè)屬,其中沉積物桿狀菌屬為優(yōu)勢菌屬,占21.24%。該結(jié)果與已報(bào)道的其他昆蟲腸道中的優(yōu)勢菌屬有所差異,如澤蘭實(shí)蠅以沃爾巴克氏體屬為優(yōu)勢菌屬[26];以木材為食的白蟻(Nasutitermesarborum)腸道內(nèi)則以能降解木質(zhì)纖維素的密螺旋體屬(Treponema)為優(yōu)勢菌屬[29];不同食性的美國白蛾腸道菌群優(yōu)勢菌屬也不相同,以人工飼料喂養(yǎng)的美國白蛾優(yōu)勢菌屬為希瓦氏菌屬(Shewanella),以桑樹飼養(yǎng)的美國白蛾優(yōu)勢菌屬是能產(chǎn)蛋白酶且有助于昆蟲對蛋白消化吸收的葡萄球菌屬(Staphylococcus),以柳樹為食料的美國白蛾優(yōu)勢菌屬是能產(chǎn)酶、纖維素、蛋白酶和脂肪酶且對昆蟲的消化吸收起了重要作用的芽孢桿菌屬(Bacillus)[30]。沉積物桿狀菌屬是革蘭氏陰性菌,目前已從富營養(yǎng)化水庫的沉積物[31]、人參田的土壤[32]、淡水水庫[33]、魚缸的沉積物[34]等分離出8種該屬細(xì)菌。最新研究表明從南加州地區(qū)淡水流藍(lán)藻中發(fā)現(xiàn)一種新的沉積物桿狀菌屬物種,它與相關(guān)藍(lán)藻宿主存在一定的共生關(guān)系,可通過產(chǎn)生細(xì)菌素和毒黃菌素抵御致病菌在宿主體內(nèi)定殖,宿主則為其提供營養(yǎng)和穩(wěn)定的微生境[35]。因此,沉積物桿狀菌屬在散紋盛蛺蝶腸道中的功能以及與宿主之間的互作機(jī)制都有待于進(jìn)一步研究。

    沃爾巴克氏體屬是一類在節(jié)肢動物體內(nèi)廣泛分布的共生細(xì)菌,能夠通過誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)不親和、誘導(dǎo)孤雌生殖、雌性化和殺雄作用等多種方式調(diào)控寄主生殖行為,此外還能增強(qiáng)宿主的抗逆性[23]。本研究結(jié)果顯示,在散紋盛蛺蝶成蟲腸道中同樣注釋到了沃爾巴克氏體屬,但其平均相對豐度較低(2.5%)。除沃爾巴克氏體屬外,螺原體屬也在散紋盛蛺蝶成蟲腸道中得到注釋,而且其平均相對豐度較高(10.55%)。螺原體屬是一類革蘭氏陽性菌,除了在植物上有發(fā)現(xiàn)外,還分布于鞘翅目的蜜蜂、鱗翅目的蝴蝶和蛾、半翅目的葉蟬、木虱等昆蟲體內(nèi)[36]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),螺原體屬影響宿主的機(jī)制與沃爾巴克氏體屬相似,除了能夠經(jīng)卵傳播殺死受感染的雌果蠅和雌性金斑蝶(Danauschrysippus)的雄性后代以及縮短宿主豌豆蚜(Acyrthosiphonpisum)的壽命并抑制其繁殖外,還能為宿主帶來更好的適合度[37-38]。植食性昆蟲僅通過取食植物汁液難以滿足其自身生長發(fā)育的需求,但其體內(nèi)細(xì)菌的存在能彌補(bǔ)這種飲食不平衡,有研究表明蚜蟲體內(nèi)的螺原體屬為其提供了汁液中沒有的多種必需氨基酸[37]。其次,還能增強(qiáng)宿主的抗逆性。如玉米矮縮螺原體(Spiroplasmakunkelii)能增強(qiáng)感染葉蟬在沒有植物宿主的寒冷冬季的生存能力[36];一些螺原體屬能增強(qiáng)受感染的果蠅和蚜蟲宿主抵御寄生線蟲、寄生蜂和真菌病原體的能力[39-40]。大多數(shù)昆蟲體內(nèi)的螺原體屬不致病,但也有例外,如蜜蜂螺原體(Spiroplasmamelliferum)和蜜蜂五月病螺原體(Spiroplasmaapis)可在蜜蜂的血淋巴中大量繁殖而致其死亡[36-40]。散紋盛蛺蝶成蟲喜食花蜜和植物汁液,其腸道內(nèi)螺原體屬的存在,是否有益于散紋盛蛺蝶的營養(yǎng)代謝,增強(qiáng)其抗逆性,或是引起雌雄比例不協(xié)調(diào),有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

    4 結(jié)論

    本研究基于16S rRNA全序列的高通量測序技術(shù),首次分析了采自于自然環(huán)境下的散紋盛蛺蝶成蟲樣本的腸道細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性,豐富了散紋盛蛺蝶成蟲腸道細(xì)菌的相關(guān)信息,有利于今后進(jìn)一步研究和利用腸道微生物的功能。昆蟲腸道細(xì)菌的多樣性不僅受到昆蟲種類的影響,同時(shí)也與昆蟲的食性以及棲息環(huán)境相關(guān)。因此,下一步將重點(diǎn)研究不同發(fā)育階段和不同地理?xiàng)l件的散紋盛蛺蝶腸道細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及其多樣性,采用宏基因組技術(shù)更全面地獲取散紋盛蛺蝶腸道細(xì)菌多樣性特征以及相關(guān)功能,為闡明腸道微生物與宿主昆蟲之間的互作機(jī)制提供更有力依據(jù)。

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