廣西產(chǎn)毛果算盤子不同部位HPLC指紋圖譜研究*

劉芙芙，黃浩原，袁渙媛，陳金鳳，吳文斌，黃紅泓

(廣西中醫(yī)藥大學賽恩斯新醫(yī)藥學院藥學系，廣西 南寧 530001)

毛果算盤子(GlochidioneriocarpumChamp.)是大戟科植物，別名毛七公、漆大伯、兩面毛、漆大姑。味苦、澀；性平，全年可采收。具有驅(qū)風利濕，散瘀，止血，消腫的功效，用于治急性胃腸炎，痢疾，風濕關(guān)節(jié)痛，跌打損傷，創(chuàng)傷出血，濕疹，漆瘡，皮炎[1]。其含有酚類、鞣質(zhì)類等成分和三萜類化合物以及微量元素[1-3]。近年來劉布鳴等[4-5]從廣西毛果算盤子中分離出沒食子酸類化合物并進行薄層色譜鑒定。覃日宏等[6-7]研究發(fā)現(xiàn)毛果算盤子具有抗炎鎮(zhèn)痛的作用。黃紅泓等[8]對廣西產(chǎn)毛果算盤子的沒食子酸含量進行了測定。目前尚未發(fā)現(xiàn)有文獻報道有關(guān)毛果算盤子根、莖、葉3個部位的化學成分對比以及藥理作用比較研究。本課題研究毛果算盤子藥材根、莖、葉3個部位的指紋圖譜，對比3個部位的化學成分信息，為今后研究毛果算盤子的譜效關(guān)系提供科學的參考依據(jù)。

1 實 驗

1.1 儀器與試藥

安捷倫Agilent1200高效液相色譜儀；LG16-W高速微量離心機，北京醫(yī)用離心機廠；SB3200T超聲波清洗儀，上海能信超聲有限公司；Millipore Simplicity-185超純水儀，美國密里博公司；BP211D電子分析天平，德國賽多利斯。

香草酸(批號：7447，HPLC純度≥99.80%)，上海詩丹德標準技術(shù)服務有限公司；甲醇、乙腈為色譜純；其余試劑為分析純。毛果算盤子藥材于2020年春季采自廣西5個地區(qū)，曬干，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學賽恩斯新醫(yī)藥學院生藥教研室苑敏副教授鑒定均為大戟科植物毛果算盤子(GlochidioneriocarpumChamp.)的全株(表1)。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件

用X-Peonyx C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇(B)-0.1%磷酸(A)，梯度洗脫0～7 min，8%B；7～15 min，8%B→20%B；15～20 min，20%B→28%B；20～30 min，28%B→35%B；30～45 min，35%B→45%B。檢測波長270 nm，柱溫20 ℃，流速1.0 mL·min-1，進樣量10 μL；記錄時間60 min[9-10]。

1.2.2 對照品溶液的制備

取香草酸對照品1 mg，精密稱量，置25 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀。

1.2.3 供試品溶液的制備

取毛果算盤子根莖葉3個部位各1 g，精密稱定，精密加入20 mL甲醇，稱重，靜置30 min，超聲提取40 min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液于離心管，12000 r/min離心10 min，取上清液10 μL，注入液相色譜儀測定，即得[7]。

1.2.4 精密度試驗

取S1莖部位供試品溶液，按“1.2.1”項條件連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，分別對共有峰的相對保留時間和相對峰面積進行考察。結(jié)果表明，各共有峰的相對保留時間RSD為0.44%～0.73%，相對峰面積RSD為0.89%～1.56%。符合指紋圖譜分析要求。

1.2.5 重復性試驗

取S1莖部位供試品溶液，分別制備6份供試品溶液，按“1.2.1”項條件進樣，記錄色譜圖，分別對共有峰的相對保留時間和相對峰面積進行考察。結(jié)果表明，各共有峰相對保留時間RSD為0.67%～0.97%，相對峰面積RSD為1.34%～1.73%，符合指紋圖譜分析要求。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗

取S1莖部位供試品溶液，按“1.2.1”項色譜條件分別于0，2，4，6，12，24 h時進樣，記錄色譜圖，考察其共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結(jié)果表明，各共有峰相對保留時間RSD為0.34%～1.25%，相對峰面積RSD為1.17%～1.92%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.7 指紋圖譜與共有峰的確定

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(2012版)計算機軟件，以S1色譜圖作為對照色譜，時間窗寬度為0.1，經(jīng)多點校正后進行自動匹配，以平均數(shù)方法生成毛果算盤子根莖葉3個部位的對照圖譜和疊加圖譜(圖1～圖6)。經(jīng)與對照品對照，考察對照品保留時間，指認了根部位的5號峰、莖部位的7號峰、葉部位的4號峰為香草酸。以香草酸成分的峰為參照計算其他共有峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果見表2～表7。5批毛果算盤子根、莖、葉3個部位的相似度均大于0.9，表明相似度良好。

圖1 毛果算盤子藥材根部位的對照圖譜(5.香草酸)Fig.1 Comparison map of root position [Vanillic acid(5)]

圖2 毛果算盤子藥材莖部位的對照圖譜(7.香草酸)Fig.2 Comparison map of stem parts [Vanillic acid(7)]

圖3 毛果算盤子藥材葉部位的對照圖譜(4.香草酸)Fig.3 Comparison map of leaf parts (Vanillic acid(4))

圖4 毛果算盤子藥材根部位的指紋圖譜疊加圖Fig.4 Fingerprint overlay of root position

圖5 毛果算盤子藥材莖部位的指紋圖譜疊加圖Fig.5 Fingerprint overlay of stem

圖6 毛果算盤子藥材葉部位的指紋圖譜疊加圖Fig.6 Fingerprint overlay of leaf parts

表2 毛果算盤子藥材根部位指紋圖譜共有峰的相對保留時間Table 2 The relative retention time of a total peak of root site in samples

表3 毛果算盤子藥材莖部位指紋圖譜共有峰的相對保留時間Table 3 The relative retention time of a total peak of stem part in samples

表4 毛果算盤子藥材葉部位指紋圖譜共有峰的相對保留時間Table 4 The relative retention time of a total peak of leaf position in samples

表5 毛果算盤子藥材根部位指紋圖譜共有峰的相對峰面積Table 5 The relative peak area of a total peak of root site in samples

表6 毛果算盤子藥材莖部位指紋圖譜共有峰的相對峰面積Table 6 The relative peak area of a total peak of stem part in samples

表7 毛果算盤子藥材葉部位指紋圖譜共有峰的相對峰面積Table 7 The relative peak area of a total peak of leaf position in samples

2 結(jié) 論

通過對比毛果算盤子根、莖、葉3個部位的指紋圖譜得知，3個部位的化學成分信息基本相似，但成分含量多少存在差異，其中莖部位的化學成分最多且含量較高，其次是葉部位，最低的是根部位。5批毛果算盤子3個部位的HPLC指紋圖譜相似度大于0.9，表明廣西各產(chǎn)地的毛果算盤子基本相似，而根莖葉3個部位化學成分的峰面積RSD為0.73%～70.76%，表明其化學成分含量存在較大差異。研究毛果算盤子各部位的指紋圖譜信息，可為毛果算盤子藥材的質(zhì)量控制和研究其譜效關(guān)系提供可靠的科學依據(jù)。