CENPK、IFI16表達(dá)與中晚期宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系

吳凱華，葛麗麗，熊愛為，陳姝，余敏敏

1 南京市第二醫(yī)院（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京醫(yī)院）婦科，南京210003；2 南京市婦幼保健院婦瘤科

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)病例達(dá)60.4萬例，死亡約34.2萬例［1］。早期宮頸癌患者無明顯癥狀，難以早期發(fā)現(xiàn)，明確診斷時(shí)已為中晚期階段。雖然目前中晚期宮頸癌以同步放化療為主，但由于腫瘤異質(zhì)性，不同患者臨床預(yù)后差異較大［2］。著絲粒蛋白K（CENPK）屬于著絲粒蛋白家族成員，在細(xì)胞有絲分裂過程中募集到著絲粒，參與著絲粒的組裝，調(diào)控有絲分裂過程中染色體分離［3］。近年發(fā)現(xiàn)，肝癌［4］、胃癌［5］等惡性腫瘤中CENPK表達(dá)上調(diào)能促進(jìn)腫瘤惡性增殖及轉(zhuǎn)移，是新的腫瘤促進(jìn)因子。干擾素誘導(dǎo)核蛋白16（IFI16）是一種干擾素誘導(dǎo)蛋白，廣泛參與細(xì)胞增殖、凋亡及激動(dòng)機(jī)體固有免疫等生物學(xué)過程［6］。近年發(fā)現(xiàn)，IFI16能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中成纖維細(xì)胞生長因子1的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖及轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展［7］。目前，關(guān)于CENPK、IFI16在中晚期宮頸癌組織表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系研究較少。2015年1月—2018年1月，我們利用免疫組化法檢測中晚期宮頸癌組織中CENPK、IFI16表達(dá)，探討與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月—2018年1月南京市第二醫(yī)院（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京醫(yī)院）診治的106例中晚期宮頸癌患者，取其宮頸癌組織，均接受同步放化療為主的綜合治療方案。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查明確診斷為宮頸癌；②參考2009年國際婦產(chǎn)聯(lián)盟（FIGO）分期為ⅡB~Ⅳ期；③初次診治，既往無抗癌治療病史；④一般狀況良好，生存質(zhì)量卡氏評分≥90分；⑤患者和家屬對本研究知情并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并急性感染性疾病、自身免疫性疾病及精神障礙性疾??；③同步放化療期間死亡?；颊吣挲g34～78（63.47 ± 5.27）歲；FIGO分期：ⅡB期36例，ⅢA～ⅢB期50例，Ⅳ期20例；病理類型：鱗癌64例，腺癌28例，腺鱗癌14例；腫瘤最大徑：<4 cm 30例，≥4 cm 76例。分化程度：低、未分化49例，高、中分化57例；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例。所有患者同步放化療結(jié)束后定期門診或電話復(fù)查，2年內(nèi)每3個(gè)月復(fù)查1次，第2～5年每半年隨訪1次。隨訪內(nèi)容包括患者生存狀態(tài)及血清腫瘤標(biāo)志物、常規(guī)婦科檢查、超聲、CT等。隨訪時(shí)間截至2023年2月1日。以同期診治的40例因子宮脫垂或子宮肌瘤行全子宮切除的正常宮頸組織為對照，患者年齡32～77（63.11 ± 4.85）歲。宮頸癌組和對照組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過（2015-LS-ky025）。

1.2 宮頸癌組織中CENPK、IFI16表達(dá)檢測 采用免疫組化法檢測組織中CENPK、IFI16表達(dá)。留取宮頸癌患者活檢術(shù)中獲取的部分宮頸癌組織及對照組正常宮頸組織。常規(guī)組織固定包埋，切片后二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，檸檬酸緩沖液抗原熱修復(fù)，100 ℃水浴10 min，3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶15 min，3%羊血清室溫封閉2 h。CENPK、IFI16一抗4 ℃過夜（購自Abcam，貨號ab236739、ab169788，稀釋比1∶200）。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號PV6000。鏡下觀察進(jìn)行半定量染色評分，染色強(qiáng)度分為三個(gè)等級，無染色0分，淺黃色為1分，棕褐色為2分。染色面積評分三個(gè)等級，面積≤25%0分，1分面積為>25%～50%，面積≥50%2分。將染色強(qiáng)度和染色面積評分相乘為免疫組化染色評分，<2為陰性，≥2為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。繪制Kaplan-Meier曲線，采用Log-Rank檢驗(yàn)分析不同CENPK、IFI16表達(dá)患者生存差異。單因素和多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響中晚期宮頸癌患者預(yù)后的因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌、正常宮頸組織中CENPK、IFI16表達(dá)比較 宮頸癌組織中CENPK蛋白棕黃色陽性染色位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，IFI16蛋白棕黃色陽性染色位于細(xì)胞核。見圖1。宮頸癌組織中CENPK、IFI16蛋白陽性表達(dá)率分別為70.75%（75/106）、67.92%（72/106），高于正常宮頸組織的10.00%（4/40）、15.00%（6/40），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2分別為43.170，32.691，P均<0.05）。

圖1 宮頸癌組織及正常宮頸組織中CENPK、IFI16表達(dá)（免疫組化，×200）

2.2 CENPK、IFI16表達(dá)與中晚期宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 不同腫瘤最大徑、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中晚期宮頸癌患者癌組織中CENPK、IFI16表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）。見表1。

表1 CENPK、IFI16表達(dá)與中晚期宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系［例（%）］

2.3 CENPK、IFI16表達(dá)對中晚期宮頸癌患者生存預(yù)后的影響 106例中晚期宮頸癌患者隨訪過程中死亡68例，5年總體生存率為35.85%（38/106）。CENPK陽性者和陰性者5年累計(jì)生存率分別為26.67%（20/75）、58.06%（18/31）。CENPK陽性者5年累積生存率明顯低于CENPK陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-Rankχ2=13.471，P<0.05）。IFI16陽性者和陰性者5年累計(jì)生存率分別為25.00%（18/72）、60.61%（20/33）。IFI16陽性者5年累積生存率明顯低于CENPK陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-Rankχ2=22.721，P<0.05）。見圖2。

圖2 CENPK、IFI16表達(dá)對中晚期宮頸癌患者生存預(yù)后的影響

2.4 影響中晚期宮頸癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析結(jié)果 106例中晚期宮頸癌患者隨訪5年，生存68例，為預(yù)后良好；死亡38例，為預(yù)后不良。以預(yù)后為因變量（1=死亡，0=存活），以年齡、分化程度、病理類型、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期、CENPK、IFI16為自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析。結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CENPK陽性、IFI16陽性是影響中晚期宮頸癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P均<0.05）。見表2。

表2 多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析影響中晚期宮頸癌患者預(yù)后的因素

3 討論

CENPK蛋白相對分子質(zhì)量為31 kD，參與構(gòu)成著絲粒，在真核生物染色體分離過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近年研究表明，CENPK的功能失調(diào)與膀胱癌、肝細(xì)胞肝癌等惡性腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，是潛在的預(yù)后相關(guān)腫瘤標(biāo)志物［8］。本研究癌組織中CENPK表達(dá)明顯升高，與腫瘤最大徑、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示CENPK促進(jìn)中晚期宮頸癌的進(jìn)展。有研究報(bào)道，甲基化轉(zhuǎn)移酶ZC3H13能促進(jìn)CENPK mRNA N6甲基腺苷修飾，增強(qiáng)CENPK mRNA的穩(wěn)定性，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)CENPK表達(dá)［9］。此外，腫瘤中CENPK能磷酸化激活磷脂酰肌醇3-激酶，促進(jìn)下游AKT通路的激活，導(dǎo)致腫瘤過度增殖，而敲除CENPK表達(dá)后導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞G1期阻滯，細(xì)胞凋亡增加［10］。因此，中晚期宮頸癌中CENPK表達(dá)上調(diào)作為一種促癌基因，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，是潛在預(yù)測預(yù)后的標(biāo)志物。本研究證實(shí)，CENPK陽性中晚期宮頸癌患者預(yù)后較差。其原因一方面是CENPK陽性表達(dá)的中晚期宮頸癌惡性程度高，腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲能力較強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤容易發(fā)生復(fù)發(fā)，導(dǎo)致患者預(yù)后不良［11］。另一方面，CENPK表達(dá)上調(diào)能與X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白5相互作用，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)途徑的激活，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對放療的抵抗性［5］。此外，CENPK表達(dá)升高能與干性轉(zhuǎn)錄因子SOX6直接結(jié)合，促進(jìn)β-連環(huán)蛋白的表達(dá)和核轉(zhuǎn)位，導(dǎo)致Wnt/β-連環(huán)蛋白信號傳導(dǎo)的激活，促進(jìn)p53的泛素化，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞干性及對順鉑或卡鉑化療藥物的耐藥性［9］。因此，CENPK可作為評估中晚期宮頸癌患者預(yù)后的相關(guān)腫瘤標(biāo)志物。

IFI16是PYHIN家族成員，結(jié)構(gòu)上包括一個(gè)pyrin結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控的DNA結(jié)合HIN結(jié)構(gòu)域。功能上，IFI16作為一種轉(zhuǎn)錄因子，是病毒免疫識別的關(guān)鍵分子，能啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，在病毒感染防御、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病中發(fā)揮重要作用［12-13］。本研究中，中晚期宮頸癌組織中IFI16表達(dá)升高，與腫瘤最大徑、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示IFI16參與促進(jìn)中晚期宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。有學(xué)者報(bào)道，HPV DNA編碼產(chǎn)生的E7蛋白能與宮頸癌細(xì)胞中IFI16相互作用，增強(qiáng)IFI16蛋白穩(wěn)定性，抑制腫瘤細(xì)胞焦亡的發(fā)生，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸［14］。此外，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，IFI16能激活干擾素基因刺激蛋白-TANK結(jié)合酶1通路，激活下游核因子κB，核因子κB與程序性死亡分子配體1啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)程序性死亡分子配體1表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展［15］。本研究中，IFI16陽性表達(dá)的中晚期宮頸癌患者預(yù)后較差。其原因可能是IFI16表達(dá)上調(diào)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性及放療抵抗的形成。研究表明，IFI16在阿霉素和紫杉醇耐藥細(xì)胞系中的表達(dá)明顯上調(diào)，其在耐藥細(xì)胞系中的表達(dá)上調(diào)促進(jìn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者不良預(yù)后［16］。此外，尚有學(xué)者在膠質(zhì)瘤中發(fā)現(xiàn)，著絲粒蛋白ARPC1B能抑制TRIM21介導(dǎo)的IFI16降解，導(dǎo)致IFI16蛋白表達(dá)升高，IFI16激活核因子κB信號通路，從而促進(jìn)間質(zhì)性表型維持和放療耐藥性的形成［17］。因此，IFI16可作為中晚期宮頸癌患者預(yù)后評估腫瘤標(biāo)志物。

綜上所述，中晚期宮頸癌組織中CENPK、IFI16表達(dá)升高，二者表達(dá)與腫瘤最大徑、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，共同參與促進(jìn)中晚期宮頸癌的腫瘤進(jìn)展。癌組織中CENPK陽性表達(dá)、IFI16陽性表達(dá)是影響中晚期宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，有助于輔助臨床醫(yī)生評估中晚期宮頸癌患者的生存預(yù)后。但本研究樣本量較小，有待今后擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步證實(shí)該結(jié)論。