精液異?；颊叨虝r兩次取精精液質(zhì)量差異性分析*

彭 潔 戚青林 趙元章 王 晶

江西省萍鄉(xiāng)市婦幼保健院生殖健康科 337000

據(jù)統(tǒng)計,我國不孕不育夫婦占比為10%～15%,而其中約有30%是由男性因素所導(dǎo)致,隨著試管嬰兒技術(shù)的不斷推廣,越來越多的不孕不育患者采用該方法進行懷孕,但男性精子問題造成的受精障礙、胚胎質(zhì)量差的情況日益增多[1]。如果男方在取卵日由于緊張或操作不當?shù)雀鞣N因素影響,極易發(fā)生取精杯掉地、精液外射等情況,導(dǎo)致精液中的精子數(shù)量或質(zhì)量不足,從而難以滿足體外受精的需求[2]。有研究指出[3],對于精液異常的患者,在其第一次射精后對其精液標本進行連續(xù)采集可以獲得更高質(zhì)量的精液標本。不同禁欲時間會在一定程度上影響精液的質(zhì)量,性交頻繁會降低精液數(shù)量,而性交頻率過長又會降低精子活力,因此,精液異?；颊咝枵莆蘸眯越活l率,確定合理的禁欲時間,便可有效提高受孕率。基于此,本文對精液異?；颊叨虝r(24h內(nèi))兩次取精精液質(zhì)量的差異性進行分析,通過比對兩次精液標本精液常規(guī)分析(精子濃度、總數(shù)、活動力)、精子畸形率以及精子DNA碎片率來評估精液質(zhì)量差異,對短時禁欲是否能提高患者精子質(zhì)量進行評估,以為試管嬰兒技術(shù)的開展提供參考,具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年1—8月來我科檢查的32例弱精癥患者為觀察對象,年齡26～42歲,平均年齡(32.50±3.70)歲。所有患者經(jīng)精液常規(guī)分析后發(fā)現(xiàn),精子總活力<40%或前向運動百分率<32%。所有患者均對本次研究的目的、意義、風(fēng)險等有所了解,并表示自愿參與研究,已簽署知情同意書,本次研究獲得我院倫理委員會審批通過。

1.2 方法 收集32例患者兩次精液標本進行檢測,其中第一次取精時間為禁欲2～7d,視為正常禁欲組;第二次取精時間為24h內(nèi),視為短時禁欲組。對兩組精液進行常規(guī)分析及精子畸形率、精子DNA碎片率的檢測。

1.2.1 精液常規(guī)分析:精液常規(guī)分析采用北昂精液分析儀進行,在精液液化后不久立即開始分析,將液化標本在原容器內(nèi)充分混勻,并禁止劇烈振動,提前將Makler 計數(shù)板放置在恒溫臺上預(yù)熱;然后將液化的10μl精液滴在清潔的計數(shù)板精液池上,覆上專用蓋玻片,將其固定在顯微鏡恒溫載物臺上,調(diào)節(jié)顯微鏡,直至界面可以清晰地看到精子或雜質(zhì),通過微調(diào)將精子調(diào)黑,以便軟件能夠?qū)⑵洳蹲?進行圖像處理時,對所捕獲圖像序列進行步距調(diào)節(jié),令視野中的精子都能被捕捉上,將被選入的雜質(zhì)數(shù)目填入指定位置后點擊“計算參數(shù)”“保存檢驗項目”,切換視野,對精子總數(shù)進行重復(fù)計算,直至其達到200個以上,保存并打印。

1.2.2 精子畸形率:使用世界衛(wèi)生組織推薦的金標準巴氏染色法進行檢測,先取5～10μl的精液滴在載玻片的一端,并立即用第二張載玻片的非磨砂端以45°角沿第一張載玻片的表面移動并接觸精液滴,沿載玻片的長軸緩慢拖回拉片,制成一張涂片;重復(fù)取樣前,再次混勻精液標本,按照上述步驟制作另外一張涂片;涂片經(jīng)空氣干燥后,按巴氏染色步驟將其浸入乙醇溶液中,自然晾干后用顯微鏡觀察精子形態(tài),每個重復(fù)樣本評估200個精子,以達到可接受的低取樣誤差。

1.2.3 精子DNA碎片率:采用安徽安科生物工程股份有限公司的精子DNA碎片染色試劑盒進行檢測,采用生理鹽水將精液標本濃度調(diào)整至500～1 000萬/ml;溶液A在90～100℃環(huán)境中溶解5min,并于37℃恒溫箱內(nèi)保存5min,隨后加入30μl精液并混勻;將20μl瓊脂糖精液加入玻片上,蓋上蓋玻片,置于4℃冰箱內(nèi)保存5min,然后分別加入溶液B、C,并采用溶液D、E染色,重復(fù)混勻后用自來水沖洗10s,自然晾干后使用400倍鏡對500個精子涂片形態(tài)進行觀察。

1.3 觀察指標 (1)精液常規(guī)分析中的觀察指標:精液量、總活力、前向運動力、精子濃度、精子總數(shù)等。(2)精子畸形率[4]:計算重復(fù)玻片正常形態(tài)精子百分率的平均值和差異,若兩個百分率之間的差異是可接受的,報告正常形態(tài)精子的平均百分率;若差異太大,重復(fù)兩次精液取樣制備兩張新鮮玻片,再次評估玻片,以最接近的整數(shù)報告正常形態(tài)精子的平均百分率。正常形態(tài)率≥4%為正常,正常形態(tài)率<4%為異常,比較精子形態(tài)正常和異?；颊咧胁煌麜r間的精子質(zhì)量。(3)精子DNA碎片率[5]:沒有碎片的精子呈大暈環(huán)、中暈環(huán),有碎片的精子呈小暈環(huán)、沒暈環(huán)。精子DNA碎片率<15%為正常,精子DNA碎片率≥15%為異常,比較精子DNA碎片率正常和異?；颊咧胁煌麜r間的精子質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 兩組精液質(zhì)量比較 短時禁欲組精液量、精子總數(shù)、DNA碎片率低于正常禁欲組,精子總活力、前向運動力、正常形態(tài)率高于正常禁欲組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組精液質(zhì)量比較

2.2 根據(jù)精子正常形態(tài)率分組患者不同禁欲時間精液質(zhì)量比較 精子形態(tài)正常患者中不同禁欲時間的精子正常形態(tài)率無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);精子形態(tài)異?；颊咧?短時禁欲組的精子正常形態(tài)率高于正常禁欲組,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 根據(jù)精子正常形態(tài)率分組患者不同禁欲時間精液質(zhì)量比較

2.3 根據(jù)精子DNA碎片率分組患者不同禁欲時間精液質(zhì)量比較 精子DNA碎片率正?；颊咧胁煌麜r間的精子DNA碎片率無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);精子DNA碎片率異?；颊咧?短時禁欲組精子DNA碎片率低于正常禁欲組,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 根據(jù)精子DNA碎片率分組患者不同禁欲時間精液質(zhì)量比較

3 討論

輔助生殖治療取卵日精液質(zhì)量的好壞會對試管嬰兒技術(shù)的結(jié)局產(chǎn)生直接影響,有研究發(fā)現(xiàn),射精頻率會影響精液標本參數(shù),因此世界衛(wèi)生組織指南中建議不孕癥患者在接受輔助生殖治療時應(yīng)在行常規(guī)精液檢查前禁欲2～7d,禁欲時間長短會在一定程度上影響精液檢查結(jié)果。精液正常的男性若射精頻率增加會使精液活力與濃度降低,而對于精液異常的男性來說,短時間內(nèi)增加射精頻率可以改善精子質(zhì)量,使其活力提高[6-7]。精子質(zhì)量是決定精卵結(jié)合效果的關(guān)鍵因素之一,為確保試管嬰兒技術(shù)的良好結(jié)局,增加不孕癥患者的受孕率,本次研究對精液異常患者短時兩次取精精液質(zhì)量的差異性進行分析,以減少輔助生殖過程中的人為干預(yù),為嬰兒試管技術(shù)的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)。

精子是從睪丸產(chǎn)生,經(jīng)附睪逐漸成熟并獲得運動能力,但受細胞凋亡、氧化應(yīng)激損傷影響,有部分精子的活力會有所降低,隨著禁欲時間的延長,雖然附睪中的精子量會有所增加,但是質(zhì)量會有明顯下降[8]。精液常規(guī)檢查中,精液量、總活力、前向動力、精子濃度、精子總數(shù)等是評估精液質(zhì)量的參考指標。本次研究中,短時禁欲組的精液量、精子總數(shù)、DNA碎片率低于正常禁欲組,精子總活力、前向運動力、正常形態(tài)率高于正常禁欲組(P<0.05),提示精液異?；颊邔⒔麜r間縮短可以提高精液標本的質(zhì)量,為試管嬰兒技術(shù)的實施提高優(yōu)質(zhì)精子,可提高受孕率。成年男性的精子有一半儲存在附睪頭部和體部,另一半儲存在尾部,在某些情況下,精液異?；颊叩谝淮紊渚赡軣o法將附睪尾部的精子完全排空,因此需要在短時間內(nèi)再次進行射精方可將附睪尾部的精子從輸精管排出,射精頻率增加會令精子通過附睪的速度增加,從而便會使精液標本中的精子濃度增加[9-11],精子通過附睪尾部的速度加快,則運動潛能便會有所增加,從而提高了精液質(zhì)量。

精液異常患者精液生產(chǎn)速度過慢,精液數(shù)量也較低,禁欲時間越長,則其精液數(shù)量、精子總數(shù)會有所增加,但是正常形態(tài)率會有所降低。本文精子形態(tài)異?；颊咧?短時禁欲組的精子正常形態(tài)率高于正常禁欲組(P<0.05),提示縮短禁欲時間能提高精子正常形態(tài)比例,有利于提高受精率。精子DNA碎片率異?；颊咧?短時禁欲組精子DNA碎片率低于正常禁欲組(P<0.05),提示短時間禁欲能降低精子DNA碎片率,有利于提高活產(chǎn)率。精子在附睪內(nèi)停留時間越長,其氧化損傷和細胞凋亡程度就會越嚴重,會直接降低精子活力,導(dǎo)致精子DNA損傷加劇,從而出現(xiàn)形態(tài)異常和DNA碎片的情況[12]。精子DNA的完整性在很大程度上會對精子的正常功能及精液常規(guī)參數(shù)造成直接影響,精子總數(shù)增高,活動精子百分比就會降低[13-14],而精液異常的患者精子濃度和存活率會隨著禁欲時間的延長而出現(xiàn)不同程度的減低,因此,精液異常者須采取較短的禁欲時間較為合理[15]。

綜上所述,精液異?；颊呖s短禁欲時間雖然會降低精液量和精子數(shù)量,但能獲取更高質(zhì)量的精液標本,提高了精子總活力、前向運動力、正常形態(tài)率,降低了精子DNA碎片率,更有利于提高受孕率和活產(chǎn)率。由此可知,在實施試管嬰兒技術(shù)時,可以通過連續(xù)射精的方法解決受孕率低或精液質(zhì)量不佳的問題,對生殖結(jié)局的改善具有非常重要的意義。