血清血小板反應(yīng)蛋白2、尿素氮及肌酐水平與增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)性研究

覃彥平 黃紅波 何建明 韓光杰 柯柳華 覃振仲

1柳州市紅十字會醫(yī)院檢驗科，柳州 545001；2柳州市紅十字會醫(yī)院眼科，柳州 545001；3柳州市紅十字會醫(yī)院內(nèi)科，柳州 545001；4柳州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，柳州 545001

糖尿病是一種常見的以高血糖為特點的代謝性疾?。?］。長期的糖尿病會引起各種并發(fā)癥，糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是其中一種以視網(wǎng)膜微血管炎性病變?yōu)樘攸c的并發(fā)癥。隨著DR病情不斷進展，患者血-視網(wǎng)膜屏障受到損傷，新血管增生導(dǎo)致增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變（proliferative diabetic retinopathy，PDR）的發(fā)生。嚴(yán)重的PDR會對患者視功能造成不可逆轉(zhuǎn)的損害。PDR的發(fā)病機制非常復(fù)雜，影響因素眾多。目前，已有許多細胞因子與PDR發(fā)病相關(guān)的文獻報告［2-3］，而血小板反應(yīng)蛋白2（thrombospondin-2，TSP-2）是一種具有抗血管生成、抗炎等功能的細胞因子［4］。本地區(qū)患者血清TSP-2水平與PDR發(fā)生是否相關(guān)尚有待證實。另外，繼發(fā)于糖尿病的全身性微血管損傷不僅會引發(fā)PDR，還會影響患者的腎臟功能。目前，腎功能的常用監(jiān)測指標(biāo)為血清尿素氮（urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cr）。本研究對血清TSP-2、BUN及Cr水平與PDR的相關(guān)性進行檢測分析，以期揭示這些指標(biāo)與PDR發(fā)病的關(guān)系，結(jié)果報道如下。

資料與方法

1.一般資料

研究對象為柳州市紅十字會醫(yī)院收治的2型糖尿?。╰ype 2 diabetes，T2DM）患者和門診正常體檢者。T2DM患者共117例，52例不伴PDR患者為觀察1組［男26例，女26例，年齡60（33，69）歲］，65例伴PDR患者為觀察2組［男31例，女34例，年齡58（37，79）歲］。T2DM診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2014年糖尿病視網(wǎng)膜病變臨床診療指南進行［5］。正常對照組（對照組）共52例，男25例，女27例，年齡56（40，87）歲，均為門診體檢健康合格的正常人，無心、肝、腎等重要臟器疾患，無糖尿病病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除1型糖尿病及其他特殊類型糖尿病患者、急慢性感染、甲狀腺等內(nèi)分泌代謝疾病及惡性腫瘤等。3組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究已獲柳州市紅十字會醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)，本研究方案及試驗標(biāo)本的獲取均符合倫理學(xué)原則。

2.方法

采取試驗者空腹靜脈血標(biāo)本，分離血清后檢測。（1）血清TSP-2測定：采用酶聯(lián)免疫分析法，試劑盒由上海聯(lián)碩生物工程有限公司提供，嚴(yán)格按說明書進行實驗操作。在檢測標(biāo)本的同時做空白對照樣品、陰性對照樣品及標(biāo)準(zhǔn)品，測量各孔的吸光度（OD值）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。（2）血清BUN、Cr水平測定：采用羅氏生化分析儀，使用其配套試劑進行檢測。

3.觀察指標(biāo)

觀察并比較3組研究對象的血清TSP-2、BUN、Cr水平。

4.統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，不符合正態(tài)分布的計量資料采用M（P25，P75）表示，采用Mann-WhitneyU檢驗。多組間比較采用單因素方差分析；計數(shù)資料采用χ2檢驗。OD值計算標(biāo)準(zhǔn)曲線采用ELISACalc軟件。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

對照組、觀察1組及觀察2組的TSP-2、BUN、Cr水平見表1。觀察2組與對照組TSP-2值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；觀察1組與觀察2組、對照組TSP-2值兩兩相比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。觀察2組與觀察1組、對照組BUN值兩兩相比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；觀察1組與對照組BUN值相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。觀察2組與觀察1組、對照組Cr值兩兩相比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；觀察1組與對照組Cr值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 3組研究對象的TSP-2、BUN、Cr水平比較[M（P25，P75）]

討論

當(dāng)前，嚴(yán)重的PDR已成為我國主要的致盲性眼疾。DR的誘發(fā)因素包括病程、年齡、高血糖、高血壓等，其發(fā)病的主要因素有山梨醇和糖基化終末產(chǎn)物的積聚、氧化應(yīng)激、蛋白激酶C的激活及炎癥［6-7］。這些因素均嚴(yán)重影響視網(wǎng)膜血管自動調(diào)節(jié)功能，導(dǎo)致血管調(diào)節(jié)功能喪失，血管基底膜增厚，細胞外基質(zhì)蛋白降解，周細胞缺失，出現(xiàn)無功能血管。而毛細血管非灌注造成視網(wǎng)膜缺血、缺氧，缺氧的視網(wǎng)膜組織釋放促血管增殖物質(zhì)，引起內(nèi)皮細胞增殖、遷移，繼而出現(xiàn)微血管芽，生成新血管［7-8］引發(fā)PDR。

TSP-2是血小板反應(yīng)蛋白家族中的重要成員之一，屬于上皮來源組織中的細胞外基質(zhì)糖蛋白［9］。TSP-2由成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、視網(wǎng)膜上膜等多類型細胞分泌。TSP-2對Ca+敏感，具有二硫鍵維系的三聚體結(jié)構(gòu)。TSP-2可結(jié)合各種配體，如纖維粘連蛋白、纖溶酶原激活劑等，參與細胞黏合、遷移和增殖等細胞行為。TSP-2具有抑制血管生成、抗炎并維持細胞外基質(zhì)完整性的作用。研究表明，TSP-2可明顯抑制促血管生成的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達，抑制VEGF的信號通路，從而抑制VEGF的生物活性，達到抑制血管化的目的［10］。TSP-2通過與CD47相互作用，激活抗炎調(diào)節(jié)性T細胞來發(fā)揮抗炎作用。TSP-2還可通過抑制降解細胞外基質(zhì)的基質(zhì)金屬蛋白酶2、9來維護細胞外基質(zhì)完整性［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察2組的TSP-2總體水平較對照組低，這兩組TSP-2值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。推測多數(shù)觀察2組患者由于病情持續(xù)進展，TSP-2分泌減少，其抗炎、維持細胞外基質(zhì)完整性等作用減弱，VEGF信號通路抑制及生物活性作用下降，導(dǎo)致VEGF促進PDR患者視網(wǎng)膜血管增生；少數(shù)患者TSP-2升高可能因病程等不同，抑制視網(wǎng)膜血管化的能力也不同。

有研究者證實隨著DR嚴(yán)重程度的增加，腎臟功能也隨之下降［11］。Wu等［12］研究發(fā)現(xiàn)血清BUN、年齡≤45歲和吸煙是中國東北地區(qū)PDR患者進行性纖維血管增殖的獨立危險因素。Zhang等［13］發(fā)現(xiàn)較高水平的收縮壓、高水平的BUN和Cr均與DR的發(fā)病有關(guān)。本研究顯示血清BUN及Cr水平在觀察2組與觀察1組、對照組兩兩相比較時，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。本結(jié)果提示隨著DR病情進一步發(fā)展到PDR時，患者血清BUN和Cr水平逐漸增加，腎臟功能受損日益嚴(yán)重。

綜上所述，在PDR患者中血清TSP-2、BUN及Cr水平的變化均與PDR的疾病進展有關(guān)。因此，臨床醫(yī)生應(yīng)注意檢測PDR患者TSP-2、BUN及Cr水平，將有助于防治PDR。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明覃彥平：設(shè)計試驗，實施研究，采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，起草文章，統(tǒng)計分析，獲取研究經(jīng)費；黃紅波：采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析，技術(shù)、材料支持；何建明：對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱，統(tǒng)計分析，行政、技術(shù)支持指導(dǎo)；韓光杰：采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析，技術(shù)、材料支持；柯柳華：分析/解釋數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析；覃振仲：實施研究，采集數(shù)據(jù)